关键词： 实验性自身免疫性重症肌无力   骨髓间充质干细胞   基质金属蛋白酶9  

摘要： 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的作用机制。方法将Lewis大鼠随机分为移植组、模型组和正常对照组,每组各10只。移植组、模型组大鼠腹腔注射单克隆抗体35(m Ab35)建立EAMG模型,正常对照组大鼠腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。分离培养BMSCs并作鉴定后,调整密度至1.5x106/600μl PBS,移植组尾静脉注射细胞悬液600μl,模型组和正常对照组均予600μl PBS。采用双盲法、免疫荧光检测、ELISA和real-time RT-PCR分别测定3组大鼠Lennon临床评分、腓肠肌乙酰胆碱受体(AChR)数量变化、血清乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)含量和腓肠肌AChR、基质金属蛋白酶9(MMP-9)m RNA表达。结果移植组Lennon临床评分、血清AChR-Ab含量、腓肠肌AChR m RNA表达均低于模型组(P<0.05)。正常对照组大鼠神经肌肉接头处可见明显红色荧光,移植组可见断断续续、较为微弱的荧光,模型组未见红色荧光。模型组大鼠腓肠肌MMP-9 mRNA表达量明显高于移植组(P<0.05)。结论 BMSCs能缓解EAMG大鼠的临床症状,抑制MMP-9 mRNA表达可能是其作用机制。

关键词： 肝功能衰竭   急性   间充质干细胞   中性粒细胞  

摘要： 目的 观察骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对D-氨基半乳糖（D—GalN）诱导SD大鼠急性肝衰竭模型的治疗作用并探索中性粒细胞在其中的机制关联。方法将39只雄性SD大鼠分为4组：对照组（／7=8，腹腔注射等渗盐水）、模型组n=10，腹腔注射D—GaIN）、溶剂组n=9，腹腔注射D-GalN后2h尾静脉注射等渗盐水）及治疗组（n=12，腹腔注射D—GaIN后2h尾静脉注射MSCs）。建立D-GaIN诱导急性肝衰竭模型后24h处死大鼠，分别收集血液及肝脏组织，检测血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和总胆红素，血液分析大鼠外周血中性粒细胞数量及比率，免疫荧光检测肝脏中性粒细胞标志物Ly6g表达水平，髓过氧化物酶（MPO）试剂盒检测肝脏MPO活性，RT—PCR检测肝脏组织炎性因子及趋化因子肿瘤坏死因子。a、白细胞介素1β、干扰素Y、白细胞介素10、CXC趋化因子配体1、CXC趋化因子配体2的mRNA水平；另将64只雄性SD大鼠随机分组后连续7d观察各组大鼠生存率。两两组间比较应用独立样本t检验（经Levene方差齐性检验，当JD〈0．05时，采用校正f检验）；大鼠生存分析采用两两比较的Logrank检验。结果D-GaIN诱导的急性肝衰竭SD大鼠24h后反映肝功能的生物化学指标显著升高[丙氨酸氨基转移酶：（2884．1±541．0）U／L与（45．4±11．0）U／L，P〈0．001；天冬氨酸氨基转移酶：（3634．9±755．9）U／L与（143．9±23．7）U／L，P〈0．001；总胆红素：（44．4±8．4）μmmol／L与（0．9±0．2）ummol／L，P〈0．001]外周血中性粒细胞数量与比率大幅上升[数量：（4．7±1．1）×10^9与（1．4±0．4）×10^9，P〈0．001；比率：44．9％±8．0％与18．3％±4．4％，P〈0．001）；肝脏组织中性粒细胞大量聚集，MPO活性[（4．72±1．09）U／g与（1．13±0．24）U／g，P〈0．001]、炎性因子及趋化因子均明显增多。MSCs移植较模型组可有效改善急性肝衰竭大鼠肝功能[丙氨酸氨基转移酶：（1823．9±389．2）U／L与（2884．1±541．0）U／L，P〈0．001；天冬氨酸氨基转移酶：（2173．0±567．3）U／L与（3634．9±755．9）U／L，P〈0．001；总胆红素：（30．9±6．5）μmmol／L与（44．4±8．4）μmmol／L，P〈0．001]并提高其生存率（50．0％与12．5％，尸=0．023）。同时，外周血中性粒细胞数量与比率明显降低[数量：（3．5±1．0）×10’与（4．7±1．1）×10’，尸=0．012；比率：35．9％±8．9％与44．9％±8．0％，P=0．021】，肝脏内中性粒细胞数量显著减少，MPO活性下降[（3．52±1．03）与（4．72±1．09）U／g，P=0．040】，且炎性因子及趋化因子表达受到抑制（肿瘤坏死因子a：2．458±0．762与3．778±1．046，P=0．005；白细胞介素1D：2．498±0．547与4．065±0．953，P=0．002；干扰素Y：3．977±1．039与5．418±1．255，P=0．025；白细胞介素10：6．056±1．542与3．368±0．952，P=0．001；CXC趋化因子配体1：7．988±1．911与10．366±1．239，P=0．010；CXC趋化因子配体2：3．441±1．005与4．847±1．113，P=0．019）。结论MSCs移植对D—GalN诱导的急性肝衰竭大鼠有治疗作用，该过程伴随外周血及肝脏中性粒细胞的聚集减少与活性降低，炎性因子与趋化因子可能参与调控两者的机制联系。

关键词： 骨髓间充质干细胞   白毒伞   急性肝衰竭   疗效   输注途径  

摘要： 目的比较经腹腔注射与经尾静脉注射骨髓间充质干细胞治疗大鼠白毒伞中毒致急性肝衰竭的疗效。方法选取10只体重约80 g的雄性清洁级SD大鼠用于骨髓间充质干细胞（BMSCs）培养。另选取体重220~250 g的成年大鼠60只作为研究对象,用于肝衰竭模型制备以及BMSCs输注治疗。将其中15只大鼠作为空白对照组,剩下的45只均给予白毒伞粗毒素灌胃制备肝衰竭模型,将造模成功的大鼠随机均分为3组,即肝衰竭模型组、经腹腔注射治疗组及经尾静脉注射治疗组。对两治疗组予BMSCs经两种途径输注治疗,对比各组大鼠7 d生存率及肝功能、凝血功能、炎症因子等指标情况。结果与肝衰竭模型组相比,两治疗组SD大鼠体重减轻明显更少（P〈0.05）,7 d生存率要明显更高[73.3%、80.0%VS 20.0%]（P〈0.05）,两治疗组上述指标比较差异无统计学意义（P〉0.05）。治疗后两治疗组大鼠肝功能、凝血功能、炎症因子等指标均较肝衰竭模型组显著改善（P〈0.05）,两治疗组上述指标比较差异无统计学意义（P〉0.05）,空白对照组大鼠肝功能、凝血功能、炎症因子等指标与其他三组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论经腹腔注射和经尾静脉注射两种输注途径骨髓间充质干细胞对白毒伞中毒致急性肝衰竭大鼠具有十分明显的治疗作用,能显著改善大鼠肝功能衰竭,且效果相当。

关键词： 骨髓间充质干细胞   白毒伞   急性肝衰竭   疗效  

摘要： 目的 探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗大鼠白毒伞中毒致急性肝衰竭的疗效及机制。方法选取10只体重约80 g的雄性清洁级SD大鼠用于BMSCs的培养。另选取体重在220~250 g的成年大鼠45只作为研究对象,用于肝衰竭模型制备以及BMSCs输注治疗。在45只大鼠中随机抽取15只作为空白对照组,剩下的30只均给予白毒伞粗毒素灌胃制备肝衰竭模型,将造模成功的大鼠随机均分为两组,肝衰竭模型组和治疗组（实验BMSCs输注治疗）。对比各组大鼠7 d生存率及肝功能、凝血功能、炎症因子、肝脏病理等指标情况。结果 与肝衰竭模型组相比,治疗组SD大鼠体重减轻明显更少,7 d生存率明显更高。移植结束后治疗组大鼠肝功能、凝血功能、炎症因子等指标及肝脏病理均较肝衰竭模型组显著改善（P〈0.05）。结论 BMSCs输注对白毒伞中毒致急性肝衰竭大鼠具有十分明显的治疗作用,能显著改善大鼠肝功能衰竭。

关键词： 胰腺炎   骨髓间充质干细胞   移植途径  

摘要： 目的:探讨不同途径移植Pkh26标记的大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSCs)治疗胰腺炎的最佳移植途径.方法:取3周龄健康SD♀小鼠的股骨及胫骨骨髓,进行分离纯化BMSCs.取体质量250-300 g♀SD大鼠160只,分模型组及治疗组,并在不同时间测大鼠的血清淀粉酶及血脂肪酶.将治疗组分为尾静脉组、胰腺局部注射组、肠系膜上静脉组,各实验组均移植红色荧光染料Pkh26标记的BMSCs.细胞移植术后12、24、48、72 h、1 wk测血清淀粉酶、血脂肪酶,3 wk观察Pkh26标记的BMSCs的定位及HE染色观察胰腺组织病理学变化.结果:细胞移植术后12、24、48、72 h、1 wk尾静脉注射组血清淀粉酶和血脂肪酶水平与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),肠系膜上静脉组、胰腺局部注射组与相应的模型组比较显著下降(P<0.05),胰腺局部注射组与肠系膜上静脉组比较显著下降(P<0.05),但是仍高于对照组.尾静脉组各时间点胰腺内可见极少量Pkh26标记的BMSCs,肠系膜上静脉组2 wk时胰腺内可见散在亮红色荧光的细胞,数量少,3 wk时数量稍多,胰腺局部注射组2 wk及3 wk胰腺内均可见较多红色荧光的细胞,对照组各时间点均未见Pkh26标记细胞.结论:BMSCs经尾静脉、肠系膜上静脉、胰腺局部注射移植于胰腺炎大鼠模型体内,明显改善了受损胰腺的功能,对胰腺炎损伤具有修复作用,胰腺局部注射移植途径优于其他移植途径.

关键词： 骨髓间充质干细胞   急性心肌梗死   移植   大鼠  

摘要： 目的：比较经不同途径移植骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗大鼠急性心肌梗死（AMI）的疗效,探求更为适合的移植途径.方法：采集大鼠BMSCs,并进行培养及鉴定.以5-氮胞苷（5-aza） 10 μmol/L,诱导BMSCs为心肌样细胞并鉴定.建立大鼠急性心肌梗死模型并鉴定.对照组不予处理,静脉移植组和心外膜移植组分别经尾静脉和心外膜移植心肌样细胞悬液200 μl（心肌样细胞5×10^6）,联合移植组同时经尾静脉和心外膜分别移植心肌样细胞悬液各200μl.4周后观察SD大鼠心肌组织形态及蛋白表达情况.结果：静脉移植组、心外膜移植组、联合移植组的心肌梗死区域均可见有DAPI标记阳性的移植细胞,其中联合移植组较静脉移植组、心外膜移植组数量明显增多;H-E染色可见后三组较对照组梗死区域心肌细胞排列整齐,细胞核较完整,联合移植组梗死改善程度明显;后三组较对照组血管紧张素转换酶2（ACE2）表达水平升高,联合移植组较静脉移植组、心外膜移植组升高水平更显著.结论：经静脉、心外膜和两者联合移植诱导后的BMSCs均能促进梗死部位的组织修复,抑制心室重构,其中联合移植途径治疗效果更明显.

关键词： 骨髓间充质干细胞   椎间盘退变  

摘要： 骨髓间充质干细胞(BMSC)是一种有多向分化潜能的细胞,其具有免疫原性低,免疫调节性和获取容易等特点。已有很多研究报道了BMSC特性并进行了大量诱导BMSC在体内外向椎间盘样细胞分化的实验,并获得成功。有大量的研究证实了BMSC用于治疗椎间盘退变疾病是可行的。近年有一些临床报道称将BMSC移植入患有椎间盘退变疾病的患者,可以延缓椎间盘的退变。本文总结了BMSC对椎间盘退变的修复机制,就BMSC治疗椎间盘退变的研究进展作一综述。

关键词： 大黄素   骨髓间充质干细胞   肝功能衰竭   Bcl-2   Bax  

摘要： 目的探讨大黄素联合骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠的治疗作用。方法选择SD大鼠51只,随机分4组:健康对照组6只,急性肝衰竭(ALF)模型组15只,骨髓间充质干细胞(BMSCs)组15只,大黄素联合骨髓间充质干细胞(EMD+BMSCs)组15只。D-氨基半乳糖(D-Gal N)诱导大鼠急性肝衰竭模型;BMSCs组及EMD+BMSCs组于造模后12 h尾静脉注射BMSCs悬液1.5 m L(约含BMSCs1.0×106 cells/m L),共1次;EMD+BMSCs组于造模后12 h开始腹腔注射大黄素10 mg/kg,每天2次,共3 d。ALF模型组于造模后12 h尾静脉注射等体积无菌PBS。各组大鼠均在造模后72 h,以10%的水合氯醛腹腔注射麻醉,取门静脉血及肝组织标本。测血清ALT、AST、TBil,免疫组化测肝组织Bcl-2、Bax及PCNA蛋白表达。结果造模后72 h,ALF模型组大鼠血清ALT、AST和TBil指标显著升高,与健康对照组相比,差异有统计学意义(t=7.191、6.796、6.835,P均<0.05)。与ALF模型组比较,BMSCs组及EMD+BMSCs组血清ALT、AST、TBil均有不同程度下降,以EMD+BMSCs组为著。EMD+BMSCs组中Bcl-2、PCNA表达明显高于健康对照组及ALF模型组,而Bax表达则显著低于ALF模型组,差异有统计学意义(t=5.557,P<0.05)。结论大黄素联合骨髓间充质干细胞治疗对急性肝衰竭大鼠肝功能的改善及促进肝细胞再生作用更佳,此种作用可能部分与Bcl-2/Bax的调节有关。

关键词： 骨髓间充质干细胞   碱性成纤维生长因子   血管新生   基因转染   肢体缺血  

摘要： 目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植联合人碱性成纤维生长因子（hbFGF）基因治疗对大鼠缺血后肢血管新生的影响.方法 12只SD大鼠均切除右侧股动脉及其分支,形成后肢缺血模型鼠.成模后随机分为2组（每组6只）：碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）-BMSCs组,缺血后肢肌内多点注射经过bFGF基因修饰的BMSCs;绿色荧光蛋白（GFP）-BMSCs组,缺血后肢肌内多点注射携带GFP空载病毒转染的BMSCs.术后2周,取内收肌和腓肠肌组织,一部分用于冰冻切片,计数微血管密度并观察移植细胞的改变;另一部分用于Western blot,检测bFGF、血管内皮生长因子（VEGF）等在大鼠体内的表达.结果接受基因转染的细胞高强度表达GFP.细胞移植2周后,受体大鼠体内可见绿色荧光阳性细胞,其中GFP-BMSCs组,GFP＋细胞数（15.40±3.85）个/视野低于bFGF-BMSCs组（26.60±3.51）个/视野（t=4.811,P＜ 0.01）.干细胞在体内分化为血管内皮细胞,但是GFP-BMSCs组的GFP＋CD31＋细胞数[（7.00±2.12）个/视野]低于bFGF-BMSCs组（14.00±1.53）个/视野（t=5.916,P＜ 0.01）.微血管密度bFGF-BMSCs组[（55.0±16.5）个/视野]高于GFP-BMSCs组[（28.6±4.2）个/视野,t=5.4,P＜ 0.01].结论 bFGF能够提高BMSCs在体内的存活率和分化率,过表达bFGF的BMSCs能更有效地促进缺血后肢的血管新生.

关键词： 自体骨髓间充质干细胞   视神经脊髓炎   治疗   护理  

摘要： 视神经脊髓炎（neuromyelitits optica,NMO）又称Devic病,是视神经和脊髓同时或相继受累的急性或亚急性脱髓鞘病变,与多发硬化同属中枢神经系统脱髓鞘疾病[1]。病程多呈进行性或缓解与复发的过程,目前尚无有效的治疗方法,因此预防复发、延缓和阻止病情发展是临床治疗的关键。