关键词： 自身免疫性甲状腺炎   前体细胞   骨髓间充质干细胞治疗   细胞分化  

摘要： 目的:桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyro iditis，HT)是Th1型自身免疫性疾病，其主要的特点是甲状腺内淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞等炎性细胞浸润，聚集在生发中心引起甲状腺组织肿大、甲状腺细胞的进行性破坏及引起抗甲状腺球蛋白(Thymglobulin，TG)抗体和抗甲状腺过氧化物酶(Thyroid、peroxidase，TPO)抗体水平的升高，最终导致甲状腺功能减退。桥本氏甲状腺炎已经成为最常见的自身免疫疾病，于40-60岁女性群体中高发，人群总的发病率可高达5％，因其渐进性的甲状腺功能损害和与甲状腺乳头状癌的发生的密切关系、以及日益上升的发病率越来越受到人们的重视。桥本氏甲状腺炎的致病因素有很多，包括易感基因因素、环境因素和个人生理状态等;1996年我国全民食盐碘化后，桥本氏甲状腺炎的发病率逐渐增加，因而在我国碘摄入是桥本氏甲状腺炎发病的重要环境因素。而目前，对于桥本氏甲状腺炎仍然没有有效治疗的方法。间充质干细胞(Mesenchyrnal stem cell，MSC)来源于胚胎中胚层，是一种具有自我再生和多向分化潜能的细胞，在一定的环境下它可以分化成为脂肪细胞，成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、胰岛细胞、神经细胞等。据报道间充质干细胞具有显著的免疫调节和组织修复作用，MSC发挥免疫调节和抗炎作用的机制主要是MSC通过分泌调节性细胞因子和细胞间接触作用，抑制T、B细胞的增殖、提高Treg细胞的数量和功能，抑制抗原呈递细胞的成熟、活化和抗原呈递、抑制NK细胞增殖及细胞杀伤效应而实现的，其分泌的调节性细胞因子主要有:TGF-β、PGE2、IDO、IL-10等。成体干细胞(Adult stem cell，ASC)是指存在于一种少量的已经分化组织中的未分化细胞，这种细胞能够自我更新并且能够特化形成组成该类型组织的细胞，成年个体组织中的成体干细胞在正常情况下大多处于休眠状态，在病理状态或在外因诱导下可以表现出不同程度的再生和更新能力。成体干细胞几乎存在于各个组织器官。目前还国内鲜有关于甲状腺组织中的前体/成体干细胞的检测及在疾病中所发挥作用的相关报道。同时在间充质干细胞治疗时，间充质干细胞是否分化成为组织细胞发挥替代作用，目前相关的研究和报道仍较少。本研究通过应用骨髓间充质干细胞注射移植治疗碘致NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎，探讨骨髓间充质干细胞对自身免疫性甲状腺的治疗作用和相关机制。　　研究方法:本研究第一部分回顾性分析2014-2016年的甲状腺微小乳头癌469例病例，采集性别、年龄、单多发、单双侧、侵及包膜、桥本氏甲状腺炎、癌组织纤维化等临床资料，分析桥本氏甲状腺炎对甲状腺微小乳头状癌颈部淋巴结转移的关系。建立自身免疫性炎甲状腺炎的动物模型，选择6-8周龄SPF级饲养NOD.H-2h4小鼠40只，按喂养碘水的周数随机分为健康对照组（正常饮水12周），碘8周组、碘12周组、碘16周组，每组10只，建立自身免疫性甲状腺炎模型，HE染色观察每组小鼠甲状腺炎症浸润程度，ELISA检测血清TgAb水平及甲功水平，评估不同碘摄入时间对炎症程度、TgAb水平和甲功的影响。第二部分选择6-8周龄NOD.H-2h4小鼠36只，随机分为健康对照组(n=12)，PBS注射组(n=12），BMSC移植组(n=12);PBS注射组及BMSC移植组予0.05％NaI无菌水喂养12周建立自身免疫性甲状腺炎模型，健康对照组予正常饮水饲养12周;12周后，健康对照组及PBS注射组予无菌PBS原位注射在小鼠甲状腺内，BMSC移植组予同种异体骨髓间充质干细胞原位注射移植在小鼠甲状腺内，3组小鼠注射后正常饲养10天处死，留取各组NOD.H-2h4小鼠甲状腺、血清及脾脏分别进行HE染色、免疫组化、EHSA、流式细胞术、Real time-PCR等检测，对比观察BMSC移植后小鼠甲状腺炎症的缓解情况。第三部分应用免疫组化染色及免疫荧光双重染色检测甲状腺内前体或干细胞相关指标的表达情况，对比观察BMSC移植后甲状腺内前体/干细胞的变化情况，观察注射后间充质干细胞的分化情况。应用Image proplus6.0统计分析免疫组化结果;应用SPSS20.0软件进行数据处理和分析。　　结果:桥本氏甲状腺炎是甲状腺微小乳头状癌颈部淋巴结转移的危险因素之一，但不是独立危险因素，受到年龄、生长位置、纤维化等因素影响。随着碘水喂养时间的延长，小鼠模型的炎性细胞浸润程度增强，血清TgAb抗体水平升高(P＜0.05)，小鼠的甲状腺炎炎症程度和碘摄入持续时间呈正相关，各组间甲状腺功能无明显差异。　　经过BMSC移植干预治疗后，小鼠炎症浸润程度评分在PBS注射组与BMSC移植组间无明显差异;免疫组化染色凋亡质保Caspase3结果提示，BMSC移植组较PBS注射组Caspa

关键词： 骨癌痛   前强啡肽基因   脊髓鞘内注射   骨髓间充质干细胞   镇痛效应  

摘要： 研究目的：　　1、强啡肽镇痛效应强、安全性好、无呼吸抑制和成瘾性等优势，是目前生物镇痛研究的重点。探讨慢病毒介导的大鼠前强啡肽(PDYN)基因在骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)中的表达，为后续研究大鼠癌痛模型的生物镇痛提供条件。　　2、探讨脊髓鞘内注射前强啡肽基因（PDYN）修饰骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)治疗骨癌痛大鼠的镇痛效应。　　研究方法：　　1、采用贴壁筛选法分离和扩增BM-MSCs，流式细胞学和体外成脂、成骨细胞诱导分化实验鉴定。构建大鼠PDYN慢病毒载体并感染BM-MSCs，倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达和 Western blot法筛选最适感染复数(MOI);实验分为空白组(BM-MSCs)、实验组（PCDH-CMV-PDYN-EF1-copGFP）、空载体(PCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP)，采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot检测PDYN表达变化，采用免疫细胞化学染色法检测强啡肽(DYN)蛋白表达。　　2、将含5×106/ml MADB-106大鼠乳腺癌细胞注射到SD大鼠胫骨靠近干骺端骨髓腔，制作骨癌痛模型（B组），同时设对照组（C组，n=8）。所有大鼠于术前1天、术后3、5、7、10、14天测定热刺激缩足潜伏期（paw withdrawal thermal latency,PWL）、自由行走痛评分、机械刺激缩足阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWT）疼痛行为学指标。骨癌痛模型制备成功的B组（n=24）采用随机数字法均分为3组，分别鞘内注射无菌生理盐水20μl(B1组)、鞘内注射BMSCs-VESTOR细胞悬液20μl(B2组)、注射BMSCs-PDYN细胞悬液20μl(B3组)。鞘内注射后3、5、7、10、14天检测疼痛行为学指标，最后一次行为学检测后处死大鼠并取L4-6节段脊髓组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)测定PDYN mRNA 表达，Western Blot和石蜡切片免疫组化测定脊髓背角强啡肽(DYN)蛋白表达。另采用裸鼠致瘤实验检验该细胞系的安全性。　　研究结果：　　1、BM-MSCs呈长梭形纤维细胞样贴壁生长，多数表达CD29、CD44、CD90，少数表达CD45。成脂诱导培养后油红O染色为阳性;成骨诱导培养后出现矿化结节，经茜素红染色呈橘红色。流式细胞仪检测示BM-MSCs细胞中CD29、CD90、CD44、CD45阳性率分别为（99.80±0.19）％、（99.62±0.24）%、（96.86±1.27）%、（0.82±0.06）%，转染PDYN基因后BM-MSCs表面标记CD29、CD90、CD44、CD45阳性率分别为（99.59±0.34）%、（98.06±1.51）%、（95.23±0.71）%、（10.23±0.59）%。转染前后BM-MSCs干细胞特性差异无统计学意义（P>0.05）。经PCR扩增克隆测序鉴定慢病毒载体PCDH-CMV-PDYN-EF1-copGFP构建成功，重组慢病毒滴度为5×106IU/mL。绿色荧光蛋白的表达和Western blot结果示慢病毒MOI=100为最佳病毒感染复数。qPCR、Western blot检测到经慢病毒载体感染后的BM-MSCs中PDYN基因表达均上调（P<0.05），免疫细胞化学染色检测显示DYN蛋白表达显著增强。　　2、与C组和术前基础值相比，B组大鼠在造模术后5天PWL逐渐缩短（P<0.05），PWT显著降低(P<0.05)，自由行走痛评分逐渐升高（P<0.05），术后14天差异尤为明显（P<0.05）;B组间经鞘内注射处理后，B3组PWL逐渐延长（P<0.05），自由行走痛评分降低（P<0.05），PWT逐渐升高(P<0.05)，而B1组和B2组在鞘内注射前后无显著变化(P>0.05)。B组大鼠脊髓组织的PDYN mRNA表达均高于C组(P<0.05)，且B3组较B1组、B2组PDYN mRNA表达显著上调(P<0.05)。Western Blot和石蜡切片免疫组化结果显示B组与C组比较DYN蛋白表达显著增强(P<0.05)，B3组较B1组、B2组DYN蛋白表达显著增强(P<0.05)，B1组和B2组比较无统计学差异(P>0.05)。裸鼠致瘤实验表明注入BMSCs-PDYN细胞系未发现致瘤性。　　研究结论：　　1、成功培养BM-MSCs和构建大鼠PDYN基因过表达慢病毒载体，在BM-MSCs中能高效稳定表达PDYN基因和分泌DYN蛋白。　　2、鞘内注射前强啡肽基因修饰骨髓间充质干细胞能上调骨癌痛大鼠脊髓PDYN mRNA表达，脊髓背角强啡肽蛋白表达显著增加，从而有效改善骨癌痛大鼠的

关键词： 猕猴   间充质干细胞   肝纤维化   骨关节炎   细胞标记   细胞移植   玻璃化冻存  

摘要： 肝脏疾病是对人类健康和社会经济造成巨大危害的重大疾病之一。目前,该病在基础研究和临床应用上面临着亟待关注和解决的问题,一是缺乏能真实重现人类肝病病理和代谢特征的动物模型,二是严重肝病所需肝脏移植供体的紧缺和免疫排斥。因此,选择与人类在进化上高度近缘、在遗传上高度相似的高等灵长类动物作为人类肝病的动物实验模型,进行在再生医学领域有广阔应用前景、可以规避移植供体紧缺和免疫排斥问题的干细胞移植研究,成为生物医学领域的发展趋势和技术急需。猕猴隶属灵长目猴科猕猴属动物,又称恒河猴。作为高等非人灵长类,猕猴与人类在进化上高度近缘、在遗传上高度相似,因此较其他物种,猕猴在临床前研究的有效性倍受认可,也因此成为生物医药研究的重要实验动物。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类存在于中胚层和外胚层组织中的成体结缔组织干细胞,可从包括骨髓在内的多种组织中分离得到,易分离、易体外扩大培养,可向肝细胞等多种细胞类型分化并促进组织再生,且在临床应用上不存在伦理问题,被认为是临床细胞治疗和再生医学领域最具前景的“种子细胞”。针对肝病基础研究和临床应用中的上述两个亟待解决的问题,本研究以猕猴的MSCs作为研究对象,系统开展了以下研究:猕猴骨髓MSCs的分离鉴定,骨髓和脂肪来源MSCs的肝向分化潜能比较,绿色荧光蛋白(GFP)和新型超顺磁纳米铁(MIRB)标记对MSCs特性影响的分析,猕猴骨髓MSCs对肝纤维化模型猕猴和小鼠的移植治疗研究,猕猴骨髓MSCs对自发性骨关节炎猕猴的移植治疗研究,及玻璃化冻存对猕猴骨髓MSCs的生物学特性影响研究。希望通过上述研究工作为进一步探讨猕猴MSCs在患肝脏等疾病的动物体内的分化、定植、跟踪及相应的临床研究提供重要的理论、技术和应用参考,同时也为MSCs冻存条件的优化提供有益信息。具体研究内容如下:1、从猕猴骨髓中通过差速贴壁的方法分离得到的梭状或纤维状的细胞,通过对其表面蛋白分子及成脂、成骨和成软骨细胞分化潜能的综合鉴定,并对照国际细胞治疗协会(ISCT)对MSCs的鉴定标准,证实分离得到可靠的MSCs,为以下的MSCs一系列进一步研究奠定了细胞材料基础。2、通过形态观察、糖原染色、尿素检测、肝特异性基因表达等比较分析证明了骨髓MSCs的肝向分化潜能大于大网膜脂肪MSCs。3、分别采用绿色荧光蛋白(GFP)和新型超顺磁纳米铁(MIRB)标记猕猴骨髓MSCs,通过对标记率、增殖力和分化能力方面检测发现,标记率均可达到98%以上,而且标记后并没有影响MSCs的增殖活力和功能。MSCs的两种标记方法不仅能满足体外组织切片的荧光检测,同时可通过核磁共振跟踪输注在体内的MSCs,对了解进入体内的MSCs的迁移、归巢、定植和MSCs的命运归宿具有重要意义。4、成功建立了二甲基亚硝按(DMNA)诱导的猕猴肝纤维化模型和四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化模型。5、用稳定GFP标记的MSCs静脉移植至DMNA诱导的肝纤维化猕猴和CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型上,进行猕猴MSCs移植治疗应用研究。通过血清学、病理学、影像学等指标对MSCs移植治疗肝纤维化的有效性进行综合评价,结果显示,MSCs移植1个月后,无论猕猴还是小鼠,相关指标均有一定改善,提示猕猴骨髓MSCs对同种异体抑或异物种的肝纤维化的治疗均有一定疗效。6、作为MSCs治疗的有效性对照,我们还进行了猕猴骨髓MSCs对自发性骨关节炎猕猴的移植治疗的初步研究。将猕猴骨髓MSCs移植至自发性骨关节的猕猴关节腔内,通过3次移植后发现,关节大小、腿部伸直度、血清指标、X-ray、MRI和运动行为等指标均有一定改善,提示同种异体的骨髓MSCs对猕猴骨关节炎治疗也有一定疗效。7、为筛选和建立猕猴MSCs长期冻存的最佳条件,我们分析了两种渗透性冷冻保护剂DMSO和EG玻璃化冻存对猕猴骨髓MSCs的生物学特性的影响,结果显示:两种冷冻剂对细胞形态、表面分子和分化能力的影响没有明显差异,但是在细胞存活率和增殖活力上,EG冻存剂具有更明显的优势。进一步的转录组测序结果显示,EG冻存组与未冻存组相比有6987个差异表达基因,DMSO冻存组与未冻存组比较存在2524个差异表达基因,两组的交集基因有1886个,显示不同的玻璃化冻存剂对MSCs基因表达存在着一定程度的不同影响。改变的基因包括8个干细胞多能性相关基因、28个分化能力相关基因、44个MSCs特异性相关基因、4个MSCs免疫抑制和免疫调节基因、26个调控甲基化相关基因、21个氧化应激和脂质过氧化相关基因、6414个糖代谢、脂代谢、核酸代谢及ATP合成相关基因和88个细胞凋亡、坏死和自噬相关的基因。GO功能富集分析显示,差异表达基因主要富集在免疫反应功能、免疫系统进程和水解酶以及细胞因子的活性上。进一步的统计

关键词： 脑梗死   骨髓间充质干细胞   脑神经源性神经营养因子  

摘要： 脑梗死为临床常见疾病,是由于神经细胞的缺血耐受性和再生能力差,其致残率和死亡率高,多年来其临床治疗方法法无根本性的进展,给家庭和社会造成了沉重的负担。干细胞治疗近年来发展迅速,已涉及多种不同领域,为多种难治性疾病,如帕金森、阿尔兹海默症、糖尿病等带来了新的希望。近年来随着干细胞研究和组织工程的发展,特别是成体干细胞具有自我复制和多向分化潜能的发现,同时其具有取材方便和符合伦理学等特点,使其成为进展最迅速的一个领域。许多动物实验表明应用干细胞移植治疗脑梗死能够促进神经细胞再生和修复,明显改善实验动物的预后,已经开始进行的少量临床试验也证实了其可行性和安全性。然而,随着越来越多的研究证实移植的干细胞到达损伤脑组织的数量很少,存活的时间较短而且长期存活的比例极低,也没有充分的证据表明干细胞转化为自体神经细胞及建立神经突触联系。实验研究发现在应用干细胞治疗心肌、肝及肾脏疾病时,单纯移植干细组植干细基同样有较样的治疗效果,并且避免了细胞移植造成的一些并发症,从而提出了旁分泌假说。本研究第一部分,通过分离、培养和鉴定犬骨髓来源成体干细胞,建立稳定的犬骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)系,并鉴定它们的干细胞特性。通过缺氧预处理BMSCs与粒细胞集落刺激因子(G-CSF)共培养,增强其增殖、迁移及神经分化能力。本研究第二部分,通过慢病毒转染BMSCs,使其过表达目的基因,并研究其在超顺磁氧化铁纳米颗粒(Superparamagnetic Iron Oxide,SPIO)标记后细胞功能及级神经分化能力。在研究的第三部分,通过血栓弹力图及体外磁共振检测不同比例血液成分构成血栓,明确不同血栓成分其血栓强度与磁共振信号变化对应关系。在研究的第四部分,通过改良犬自体血栓构建犬脑梗列模型,并由颈内动脉途径注射基因修饰干细胞并对其进行影像学评估,研究基因修饰后BMSCs对脑梗死的修复作用并探讨其可能的作用机制。本研究为BMSCs在神经修复领域积累了实验研究资料,揭示了其对脑梗死治疗的可能性。―、缺氧预处理联合粒细胞集落刺激因子对犬骨髓间充质干细胞的作用研究1分离、培养和鉴定犬骨髓间充质干细胞穿刺抽取犬肱骨上段骨髓液,采用密度梯度离心法分离犬骨髓间充质干细胞(BMSCs),通过贴壁法纯化培养至P2,流式细胞分析BMSCs不表达CD34,CD45,表达CD44,CD90等间充质干细胞表面抗原。BMSCs具有多向分化潜能,经一定诱导,可在体外向中胚层细胞系,如成骨、成脂胞分化。BMSCs在体外易于扩展培养且可在不同代次冷冻保存,在液氮中冷冻12个月后复苏,对干细胞增殖能力基本无影响,可继续培养或用于进一步研究。2缺氧预处理BMSCs与粒细胞集落测激因子共培养细胞功能与神经分化能力检测取P3 BMSCs于低氧培养箱,以1%氧浓度作为缺氧处理氧浓度,以6h、12h及24h作为缺氧处理时间,通过CCK-8检测缺氧处理后细胞增殖能力,Transwell试验检测缺氧处理后细胞迁移能力,结果表明缺氧预处理12h组干细胞增殖、迁移能力高于其他组别(P<0.05)。其后以12h作为缺氧预处理时间,以常氧组作为对照组,对BMSCs进行体外神经定向诱导分化,结果表明缺氧组神经分化率高于常氧组(68.5%±5.3%v.s.54.3%±7.4%,P<0.05),real-time PCR 检测相关神经 marker MAP-2、NF-L 明显高于常氧组,细胞迁移能力HH相关细胞因子CXCR-4表达量亦明显高于常氧组(P<0.05)。粒细胞集落刺激因子可进一步促进缺氧预处理后BMSCs的增殖迁移能力。二、基因修饰、SPIO标记犬骨髓间充质干细胞后的神经分化能力检测1 慢病毒转染BMSCs构建稳定高表达目的基因细胞系采用逐孔稀释法复核病毒滴度,以不同稀释倍数稀释病毒液并转染P3BMSCs,转染后通过Guava Express analysis软件分析绿色荧光表达量,并通过cell counting kit-8(CCK-8)检测细胞活力,以明确慢病毒对犬BSMCs的亲嗜性,并确定最佳复感染指数(multiplicity of infection,MOI值),本研究明确了MOI=10时,BMSCs具有佳绿色荧光蛋白表达率及细胞活力值。通过real-time PCR检测目的基因BDNF(brain-derived neurotrophic factor)表达含量明显增高。慢病毒对BMSCs具有较优秀的亲嗜性,可构建稳定的高表达BDNF细胞系。2 BDNF-BMSCs体外SPIO标记及神经诱导分化分别以不同浓度SPIO体外标记犬BMSCs,通过结合标记效率指标普鲁士蓝染色及台盼蓝检测细胞毒性,明确SPIO浓度于20μg/mL时,BMSCs具有良好

关键词： 乳腺癌   解聚素-金属蛋白酶17   骨髓间充质干细胞   RNA干扰  

摘要： 目的利用裸鼠乳腺癌荷瘤模型,探讨慢病毒介导转染ADAM17-sh RNA的骨髓间充质干细胞裸鼠荷瘤体内的抑瘤效果及其作用机制。方法采用贴壁筛选法分离、培养、扩增3w龄雄性SD大鼠的BMSCs,传至第3代可获得高纯度、增殖能力强、数量足的BMSCs。设计和合成针对ADAM17基因的特异性ADAM17-sh RNA载体,采用慢病毒介导将ADAM17-sh RNA转染第3代培养的BMSCs。利用激光共聚焦显微镜观察慢病毒介导ADAM17-sh RNA在BMSCs中的转染率。裸鼠皮下接种MCF-7细胞,0.2 ml/只(5×107/ml)种植在裸鼠右侧鼷部皮下,构建裸鼠乳腺癌动物模型。实验随机分为:对照组(空白PBS)、小剂量BMSCs组(1×106/ml BMSCs)、大剂量BMSCs组(5×106/ml BMSCs)、小剂量转染组(1×106/ml转染ADAM17-sh RNA的BMSCs)和大剂量转染组(5×106/ml转染ADAM17-sh RNA的BMSCs),通过尾静脉注射ADAM17-sh RNA转染的BMSCs(0.1ml/次),每3d重复给药一次,共5次。观察各组荷瘤裸鼠的一般情况及肿瘤生长状况,实验结束时计算肿瘤体积和抑瘤率,HE染色法观察各组瘤体的形态结构,免疫组化法检测各组瘤体ADAM17、EGFR和Ki-67的表达。结果1倒置相差显微镜下观察分离、培养、扩增的第3代BMSCs,细胞形态较一致,以梭形、长角形居多,呈漩祸状集落分布,杂质细胞少,可获取高纯度,增殖能力强、数量足的BMSCs。2激光共聚焦显微镜观察可见慢病毒介导ADAM17-sh RNA可成功转入BMSCs,转染率高达85%以上。3裸小鼠在MCF-7细胞皮下种植第14d左右,肿瘤隆起于皮肤表面,呈分叶结节状,说明裸鼠乳腺癌荷瘤模型构建成功。4转染ADAM17-sh RNA的BMSCs行靶向治疗后,大体观察可见大剂量转染组和小剂量转染组裸鼠精神佳,一般状况良好;大剂量BMSCs组裸鼠精神一般,进食有所减少,未出现消瘦;而对照组和小剂量BMSCs组裸鼠精神差,一般状况差、消瘦严重,并出现恶病质。治疗16d后,裸鼠皮肤肿瘤表面少数出现坏死、破溃,呈多个结节状,触之较硬。大体观察大剂量转染组、小剂量转染组、大剂量BMSCs组的瘤体明显小于对照组,而小剂量BMSCs组与对照组瘤体基本无差别。5通过测量裸鼠瘤体的体积大小变化情况,随着饲养时间的延长,大剂量转染组、小剂量转染组和大剂量BMSCs组裸鼠瘤体增长缓慢,抑瘤效果显著,而对照组和小剂量BMSCs组裸鼠瘤体增长相对较快;实验结束时(第30d),比较各组裸鼠瘤体体积大小,大剂量转染组,小剂量转染组和大剂量BMSCs组相较于对照组裸鼠瘤体体积变小,差异有统计学意义(P<0.05),而对照组和小剂量BMSCs组之间裸鼠瘤体体积变化不大,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,大剂量转染组、小剂量转染组、大剂量BMSCs组、小剂量BMSCs组的抑瘤率分别为66.33%、52.13%、37.4%、2.31%。6 HE染色镜下可见,各组瘤体组织呈典型的人乳腺浸润性导管癌特征,癌细胞呈典型的腺体样排列,浸润间质,形成大量典型的乳腺癌癌巢,大剂量转染组可见瘤体组织大片坏死区域,坏死区域细胞崩解,细胞结构消失。7免疫组织化学染色结果得出,5组瘤体ADAM17、EGFR、Ki-67蛋白相比较差异均有统计学意义(F=93.970,P=0.000;F=84.684,P=0.000;F=58.024,P=0.000),相较于对照组,大剂量转染组、小剂量转染组和大剂量BMSCs组ADAM17、EGFR、Ki-67蛋白表达均降低(P均<0.05),其中均以大剂量转染组和小剂量转染组三者蛋白表达降低程度最显著;对照组和小剂量BMSCs组之间ADAM17、EGFR、Ki-67蛋白表达均无显著变化(P=0.323>0.05;P=0.240>0.05;P=0.484>0.05)。结论慢病毒介导ADAM17-sh RNA转染BMSCs具有抑制裸鼠乳腺癌ADAM17、EGFR和Ki-67的表达,发挥裸鼠体内乳腺癌抑瘤效果。

关键词： 骨髓间充质干细胞   脑出血   移植   疗效  

摘要： 目的观察自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血的近期疗效并探讨其在脑出血神经损伤修复中的作用机制。方法本课题研究共分为二部分:第一部分以2012年01月至2015年11月期间在聊城市人民医院(脑科医院)神经外科治疗的脑出血患者35例作为治疗组。根据患者出血量多少和具体病情,分别开颅血肿清除术或行钻孔引流术,并血肿腔留置引流管一根。术后通过引流管向血肿腔边缘注入3.5m L的自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)悬液。另外选择同期在院治疗的脑出血患者(未行干细胞移植术)40例作为对照组。采用NIHSS评分(神经功能评价)和Barthel评分(日常生活能力评价)对两组患者在移植前及移植后6、12个月时进行评定。同期行头部核磁、生化全项、血常规及肿瘤标记物等检查,以此来监测BMSCs移植的临床有效性和可行性。第二部分:本实验通过胶原酶诱导法制造大鼠脑出血模型,并通过立体定位仪向脑出血大鼠纹状体内注入干细胞悬液。进行骨髓间充质干细胞移植组和模型组两者之间比较,观察术后神经功能评分及两组血肿周围TrkA和P75NTR蛋白的表达。通过此探讨骨髓间充质干细胞移植是否可改变血肿周围的TrkA和P75NTR蛋白表达,而对细胞凋亡起到抑制的效果。结果1.术前治疗组和对照组患者的NIHSS评分和Barthel评分基本相近。移植6个月后与对照组相比,治疗组患者的NIHSS评分显着降低(P<0.01),而Barthel的评分显着增高(P<0.01)。干细胞治疗术后6、12个月与移植前相比,治疗组患者NIHSS的评分有显着降低(P<0.01),而Barthel评分有显着增高(P<0.01)。术后并发症:治疗组中有2例患者在BMSCs移植后出现发热反应,及时给予物理降温及药物治疗后症状缓解,余患者未出现其它不良反应及并发症。对治疗组术6、12个月观察,只有1例肺癌病人的肿瘤标记物CA-153有所升高。其余患者血常规、生化全项和头部核磁等检查均未发现不正常。2.通过胶原酶制造脑出血模型后,wistar大鼠出现相应的神经系统功能障碍。症状1天内达到高峰,持续约5天,7天后神经功能逐渐恢复。第7天及第14天时与模型组相比,BMSCs组大鼠的mNSS评分有显着降低(P<0.05)。而第14天时与模型组相比,BMSCs组大鼠血肿周围的P75NTR表达显着降低(P<0.05);TrkA表达显着升高(P<0.05)。结论:1.自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑出血患者的治疗是安全的、可行的,且其近期疗效明显。***通过立体定位注射脑出血模型大鼠内,能够存活并恢复神经功能。***移植能使脑出血模型大鼠其血肿周围P75NTR的表达减少,TrkA的表达增加,从而拮抗血肿周围细胞的凋亡,并且通过此途径来促进神经功能恢复。

关键词： 再生障碍性贫血   阵发性睡眠性血红蛋白尿综合征   治疗   骨髓间充质干细胞  

摘要： 再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿综合征（AA-PNH综合征）是一种多能造血干细胞疾病,既有一系或多系血细胞减少,又有溶血表现,病情较为凶险。目前,骨髓间充质干细胞（BMSCs）已广泛用于血液病的治疗,对于耐药且近期无法行异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）的难治性患者是有效的治疗手段之一。

关键词： 骨髓间充质干细胞   干细胞移植   胰腺疾病  

摘要： 胰腺疾病的发病率逐年增加,目前针对胰腺疾病治疗以控制临床症状为主,但胰腺细胞损伤修复及功能恢复研究进展缓慢.目前干细胞因其多向分化增殖和对损伤与疾病导致的细胞损伤有修复功能,近年在疾病治疗方面应用广泛.已有大量实验证实,胰腺干细胞在移植后能分化胰腺功能细胞,在胰腺内外分泌功能恢复及胰腺细胞损伤修复中扮演重要作用.尤其是骨髓间充质干细胞,在治疗胰腺疾病方面的体内外研究成果显著,为干细胞治疗应用于胰腺疾病的临床治疗奠定了理论和实践基础.本文概述该细胞在急慢性胰腺炎及胰腺癌的研究进展及不足,证实了干细胞有望成为治疗胰腺疾病新方法之一.

关键词： 充血性心力衰竭   骨髓间充质干细胞   心肌再生   细胞移植  

摘要： 充血性心力衰竭(congestive heart failure,CHF)是心肌梗死的并发症,严重影响人类的健康,尽管目前药物治疗CHF的效果已经有很大提高,但如何彻底使由心肌梗死所导致的损伤心肌复原仍然是个世界性问题。骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植已被证实能够修复梗死的心肌,大量证据表明MSCs可以在人和动物体内产生新的心肌细胞。本篇综述将探讨MSCs移植治疗CHF这一问题。

关键词： 慢性移植物肾病   自身骨髓间充质干细胞   安全性   可行性  

摘要： 目的分析自身骨髓间充质干细胞治疗慢性移植物肾病的安全性与可行性。方法选取26例慢性移植物肾病患者,患者均自愿接受自身骨髓间充质干细胞治疗。观察治疗后不良反应,对比治疗前、治疗后1周、4周、8周、12周时血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、内生肌酐清除率(Ccr)、24 h尿蛋白等指标的变化。结果治疗后患者不良反应发生率为30.77%。治疗后1、4、8周时患者Scr、BUN、24 h尿蛋白明显下降,Ccr明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后12周时Scr、BUN、Ccr、24 h尿蛋白与治疗前比较差异无统计学意义,其中,治疗前Scr、BUN、Ccr、24 h尿蛋白分别为(211.37±48.22)μmol/L、(14.48±4.12)mmol/L、(38.65±9.26)m L/min、(885.69±212.34)mg,治疗后12周分别为(215.45±51.62)μmol/L、(14.52±4.20)mmol/L、(38.34±8.93)m L/min、(891.24±205.58)mg。结论采用自身骨髓间充质干细胞治疗慢性移植物肾病可获得肾功能的改善,不良反应以发热、瘙痒为主,未见出血、动脉栓塞、假性动脉瘤等严重并发症。