关键词： 骨髓间充质干细胞   基质细胞衍生因子-1   类风湿关节炎   干细胞治疗   CXCR4   趋化因子   自身免疫性疾病   对称性多关节炎  

摘要： RA是以对称性多关节炎为主的自身免疫性疾病，基本病理改变为滑膜炎、血管翳形成，并逐渐出现关节软骨和骨破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells，BMSCs）是一种多能干细胞，不仅可以迁移到损伤和炎症部位参与组织重建和修复，而且具有免疫调节作用。近年来国内外多项研究证实，BMSC。

关键词： 脊髓损伤   骨髓间充质干细胞   干细胞移植  

摘要： 脊髓损伤(SCI)显著降低了患者的生存率和生活质量,对患者及社会造成严重的影响,并且传统的药物及手术减压等治疗疗效甚微。随着干细胞治疗研究的深入及再生医学的发展,干细胞移植成为治疗SCI研究的焦点。骨髓间充质干细胞(BMSCs)因其良好的增殖和多向分化能力、取材方便、易于分离培养和自体移植无免疫源性等生物学特性而成为干细胞移植修复SCI的重点研究对象。近年来,随着动物实验及临床试验研究的深入,学者们对BMSCs治疗SCI有了广泛的认识,这为SCI患者带来了新的希望。BMSCs恢复脊髓功能的作用是确切的,但仍有许多难题亟待解决。

关键词： GVHD   全身性疾病   多系统损害   graft   versus   自身免疫   骨髓穿刺针   血药浓度   生活质量   固定器  

摘要： 慢性移植物抗宿主病（chronic graft versus host disease,c GVHD）是发生于异基因造血干细胞移植100 d后重要并发症,发生率为30%~60%。c GVHD是表现为类似自身免疫及其他免疫疾病的多系统损害的一种全身性疾病,可累及皮肤、肝脏、肾脏、周围神经等多脏器,造成患者生活质量严重下降,是移植晚期导致死亡的主要原因[1-3]。

关键词： 骨髓间充质干细胞   缺血性脑卒中  

摘要： 骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗缺血性脑卒中已得到动物实验和临床研究的证实,但其复杂的作用机制尚待进一步研究。本文就BMSCs治疗缺血性脑卒中的移植途径,向脑缺血区域的定向迁移、免疫调制功能、抑制细胞凋亡、增强脑缺血区的血管发生、神经营养因子的分泌、分化替代及重建神经环路等多个方面进行文献综述。1 BMSCs移植途径BMSCs可通过颅内和血管内两种移植途径接种〔1〕。

关键词： 心肌病,扩张型   干细胞   细胞移植   Meta分析   组织工程   骨髓干细胞   扩张型心肌病   安全性   有效性  

摘要： 背景:自体骨髓间充质干细胞已被用于扩张性心肌病的临床治疗,但其安全性和有效性存在争议。目的:运用Meta分析方法评价自体骨髓间充质干细胞移植治疗扩张性心肌病的安全性和有效性。方法:系统检索Pub Med、Cochrane Library(2016年第2期)、Embase、CNKI、CBM、维普、万方数据库中,有关自体骨髓间充质干细胞移植与常规药物治疗扩张性心肌病的临床随机对照试验。运用R3.1.0软件对两种治疗后的左室射血分数、左室舒张末期内径、6 min步行距离、心肌灌注缺损面积百分比、治疗及随访过程中患者死亡率、恶性心律失常发生率及心脏移植率进行Meta分析。结果与结论:纳入7个随机对照试验,合计341例扩张性心肌病患者。Meta分析结果显示:与常规药物疗法相比,自体骨髓间充质干细胞移植能增加扩张性心肌病患者左心室射血分数[1个月:MD=3.02,95%CI(1.55,4.49);3个月:MD=4.38,95%CI(3.55,5.52);6个月:MD=6.47,95%CI(4.78,8.15);≥12个月:MD=8.23,95%CI(5.15,9.19)],降低治疗3个月后的左室舒张末期内径[3个月:MD=-0.65,95%CI(-0.72,-0.59);6个月:MD=-0.12,95%CI(-0.21,-0.03);≥12个月:MD=-0.19,95%CI(-0.24,-0.13)],增加治疗6个月后6 min步行距离[6个月:MD=87.70,95%CI(51.55,123.85);≥12个月:MD=143.83,95%CI(122.73,164.93)],降低治疗3个月的心肌灌注缺血面积百分比[MD=-3.56,95%CI(-5.57,-1.55)],降低治疗及随访期间死亡率[RR=0.46,95%CI(0.24,0.89)];两种治疗在降低恶性心律失常及心脏移植率上无明显差异。研究结果提示,自体骨髓间充质干细胞移植治疗扩张性心肌病疗效优于常规药物疗法,且安全性良好。

关键词： 骨不连   骨髓间充质干细胞   细胞移植   治疗机制  

摘要： 骨髓间充质干细胞(BMSC)不仅具有成骨分化潜能,而且可以分泌多种生物活性分子及细胞外膜泡以调节损伤区域的微环境,从而促进骨组织再生,为治疗骨不连的研究热点。该文结合BMSC应用于骨不连治疗的研究,分析了其在骨不连治疗中的可行性,主要从BMSC募集、迁徙到损伤区域及成骨分化等直接作用和由分泌作用介导的血管生成、抗纤维化、抗凋亡及成骨分化调节等间接作用方面对BMSC治疗骨不连机制研究进展作一综述。

关键词： 骨髓间充质干细胞   ALF   Bcl-2基因   细胞示踪  

摘要： 目的构建Bcl-2基因修饰慢病毒质粒,建立稳定表达Bcl-2基因的骨髓间充质干细胞系,探讨Bcl-2基因修饰的骨髓闸充质干细胞治疗ALF的可行性。方法 PCR合成Bcl-2基因片段并插入GV287空载体后扩增进行慢病毒包装,使用Bcl-2慢病毒液转染大鼠骨髓间充质干细胞,使用单纯未处理骨髓间充质干细胞,移植急性肝损伤模型大鼠,观察移植后大鼠存活情况及其肝脏病理改变。结果得到纯化的骨髓间充质干细胞细胞株;成功分离Bcl-2基因DNA片段并构建Bcl-2基因重组慢病毒质粒,并成功转染到骨髓间充质干细胞中,经荧光显微镜检测GFP荧光及免疫印迹蛋白检测,转染后细胞可高表达Bcl-2基因,转染后细胞状态较好,可进行移植实验;模型鼠经过尾静脉移植骨髓间充质于细胞后,共聚焦显微镜下观察肝脏冰冻切片病理,骨髓间充质干细胞,可以定植到损伤肝脏组织。结论初步证实,骨髓间充质干细胞能够在急性肝损伤大鼠肝脏归巢,并且能发挥一定程度治疗作用。

关键词： 大鼠   类风湿性关节炎   IL-1β   SiRNA   BMSCs   基因联合细胞治疗  

摘要： 类风湿性关节炎(RA)是一种系统性的自身免疫性疾病,关节炎发病在家禽家畜中均有存在,尤其对鸡、猪、牛的危害较为严重。该病虽然致死率不高,但其一旦发病便难以痊愈,导致畜禽行动不便,出现发育迟缓,经济价值降低甚至淘汰,由此给养殖场带来严重损失。已有研究发现将白细胞介素1受体(IL-1R)基因转染进大鼠,抑制了白细胞介素β(IL-1β)的作用,大鼠RA症状可得到明显改善。骨髓间充质干细胞(BMSCs)生物学特性独特并且参与多环节的免疫调节,具有促进损伤的修复的作用,因而被广泛应用于免疫性疾病的细胞治疗。本实验利用Ⅱ型胶原蛋白诱导方法制备RA模型大鼠,初步探讨RA发病的免疫机制。研究RA的发病与IL-1β表达量变化的关系,并用IL-1β小干扰RNA(SiRNA)体内转染结合BMSCs移植治疗RA模型大鼠,研究BMSCs联合基因治疗对RA的治疗效果。1关节炎大鼠模型的制备及部分机制的研究采用尾根部散点注射鸡Ⅱ型胶原和完全复氏佐剂乳化液的方法制备类风湿性关节炎大鼠模型,实验组分为CIA、AA和正常组,造模后以大鼠足趾肿胀、强迫游泳、DR-X线成像、脏器指数、关节病理切片等进行检测,筛选出成功RA大鼠模型。通过对成功大鼠模型的血清中IL-1β、脾脏组织Treg的特异性标志物Foxp3及Treg细胞表面的TGF-β1以及凋亡相关分子PD-1的研究,探讨调节性T细胞在RA发生发展中的意义。结果显示,AA模型组和CIA模型组的大鼠体重增长速度下降,CIA模型鼠减缓更明显,CIA造模组14天内关节肿胀明显,21天后大鼠左右关节肿胀达到病程的最高峰,30天后部分大鼠关节僵直、畸形、表面出现皮肤出现结节。CIA组和AA组大鼠脾脏、胸腺占体重指数极显著高于正常对照组(p<0.01);两模型组大鼠强迫游泳不动时间从造模后1周、2周、3周、4周均极显著高于正常组(p<0.01),挣扎时间均极显著低于正常对照组(p<0.01);关节滑膜组织切片显示,大鼠模型关节软骨有明显的糜烂或溃疡,滑膜、关节软骨及关节腔内有重度的混合型炎性细胞浸润,另外还可见有多核巨细胞即肉芽肿的形成。AA模型组和CIA模型组大鼠造模后2周血清中IL-1β含量极显著高于正常对照组(18.49±1.70pg/mL、36.98±0.97pg/mLvs16.23±0.44pg/mL;p<0.01),两模型大鼠 PD-1、TGF-β1、Foxp3的相对表达量极显著低于对照组(p<0.01),同时CIA模型大鼠脾脏中PD-1、TGF-β1、Foxp3的表达量极显著低于AA模型大鼠(p<0.01)。提示采用尾根部散点注射鸡Ⅱ型胶原和完全复氏佐剂乳化液成功建立RA大鼠模型,且模型大鼠血清内IL-1β的表达量随RA病程而上升。RA的发生可能与调节性T细胞数量的减少或者功能缺陷有关。2 IL-1β-siRNA干扰BMSCs中IL-1β表达的实验研究针对RA模型大鼠血清中IL-1β的含量显著高于正常大鼠的实验结果,利用降低动物机体IL-1β分泌技术,阻止炎症反应进程,本实验利用LPS体外刺激BMSCs高表达IL-1β,模拟RA体内炎症反应,采用siRNA干扰技术体外干扰BMSCs表达IL-1β,通过ELISA法和Westernblot对IL-1β蛋白水平表达变化进行检测,Q-PCR对IL-1β基因水平的表达变化进行检测,筛选出最佳IL-1β SiRNA抑制基因。LPS刺激后,LPS-BMSCs组与BMSCs组细胞上清以和裂解物中的IL-1β量存在极显著差异(p<0.01),通过荧光强度筛选siRNA的最佳转染条件为1OOnMsiRNA与0.5ul转染试剂的组合;siRNA干扰后,BMSCs培养上清中LPS-BMSCs组的IL-1β表达量极显著高于对照组(347.84±6.17pg/mL vs 119.38±2.92pg/mL;p<0.01);LPS+SiRNA157、LPS+SiRNA238、LPS+SiRNA788 的表达量分别为 126.21±2.25pg/mL、52.66±1.72pg/mL、101.83±3.65 pg/mL均极显著低于LPS-BMSCs组(p<0.01)。三条siRNA序列均可沉默IL-1β的蛋白表达,其中SiRNA238组的IL-1β表达极显著低于对照组(P<0.01)。LPS+BMSCs+siRNA157、LPS+BMSCs+siRNA238、LPS+BMSCs+siRNA788 的 mRNA 相对表达量极显著低于 LPS+BMSCs(0.92±0.079、0.28±0.015、0.97±0.174vs2.74±0.15;p<0.01),LPS+BMSCs+siRNA238同时也极显著低于正常对照组(p<0.01)。提示LPS刺激BMSCs后成功模拟了体内炎性反应促进了 IL-β

关键词： 矽肺   正电子发射计算机断层显像   计算机体层扫描   骨髓间充质干细胞   肺纤维化  

摘要： 目的:探讨小动物PET-CT和CT动态观察活体大鼠矽肺模型的可行性及骨髓间充质干细胞（BMMSCs）对染矽尘大鼠肺纤维化的作用。方法:1、无特定病原体级健康SD大鼠分为模型组和对照组,模型组一次性气管内注入质量浓度为30 g/L的矽尘混悬液建立大鼠矽肺模型,对照组与等体积的0.9%氯化钠溶液。2组大鼠均于于造模后第1、2、3、4、6、8和12周分别随机选取6只,以小动物正电子发射计算机断层显像（PET）/计算机体层扫描（CT）进行肺部CT扫描并检测CT值,同时进行PET-CT扫描并检测18F-氟代脱氧葡萄糖标准化摄取值（SUV）。扫描后处死大鼠,检测肺脏脏器系数,进行肺脏病理组织学观察,检测血清转化生长因子β1（TGF-β1）、白细胞介素1（IL-1）和肺组织羟脯氨酸（HYP）水平。2、将SPF级SD大鼠随机分为2周组、4周组、模型组、正常组,每组6只,雌雄各半。前三组每只大鼠均通过气管注射0.5ml质量浓度为40mg/ml的无菌二氧化硅（SiO2）悬液,正常组注射无菌生理氯化钠溶液0.5ml,同时用全骨髓贴壁法分离培养供体大鼠BMMSCs,再分别在染尘第2周和第4周,对2周组和4周组每只大鼠经尾静脉输注0.5ml浓度为5×10～6/ml的BMMSCs悬液。在第12周对大鼠进行肺部CT扫描,测肺系数,观察大鼠肺部病理切片,检测肺组织羟脯氨酸（HYP）含量及血清转化生长因子β1（TGF-β1）浓度,比较不同组大鼠上述检测指标。结果:1、模型组大鼠肺脏病理组织学改变在早期表现为肺组织炎症性渗出,随着时间延长,炎症反应逐渐减轻,而肺间质纤维化逐渐明显;PET-CT和CT影像学表现与病理组织学改变基本一致。模型组大鼠肺部SUV在第1～4周4个时间点均高于同时间点对照组（P<0.05）,且呈现随染尘时间的增加而下降（P<0.05）。模型组大鼠肺部CT值在7个时间点均高于同时间点对照组（P<0.05）,且在第1～6周呈现随染尘时间的增加而下降（P<0.05）,在第6～12周呈现随染尘时间的增加而升高（P<0.05）。模型组大鼠肺脏脏器系数在7个时间点均高于同时间点对照组（P<0.05）,且在第1～4周呈现随染尘时间的增加而下降（P<0.05）。除第3和4周外,模型组大鼠血清TGF-β1水平在其余5个时间点均高于同时间点对照组（P<0.05）,且在第1～4周随染尘时间的增加而下降（P<0.05）,在第4～8周随染尘时间的增加而升高（P<0.05）。模型组大鼠血清IL-1水平在第1～4周4个时间点均高于同时间点对照组（P<0.05）,且随染尘时间的增加而下降（P<0.05）。模型组大鼠肺组织HYP水平在7个时间点均高于同时间点对照组（P<0.05）,且在第6～12周随染尘时间的增加而升高（P<0.05）。2、肺部CT显示正常组大鼠肺野清透,肺纹理清晰,模型组大鼠肺部见弥漫分布、大小不一的颗粒状高密度影,及条索状或网状纤维影,4周组肺部可见散在的颗粒状高密度影及网状阴影,颗粒大小及分布面积均小于模型组,2周组大鼠肺部可见散在分布的细小颗粒状阴影。模型组、4周组、2周组、正常组肺部平均CT值依次递减,模型组高于正常组,4周组高于2周组[（-177.883±7.610）vs（-210.217±6.406）vs（-259.400±7.599）vs（-367.233±9.887）,P<0.05]。模型组、2周组、正常组肺系数依次递减,模型组高于正常组,4周组高于2周组[（0.544±0.020）vs（0.451±0.022）vs（0.311±0.010）,P<0.05],而4周组和模型组无显著性差异（P>0.05）。肺组织病理切片显示正常对照组大鼠肺泡结构完整,无炎症细胞浸润、渗出及纤维增生;模型组可见大片矽结节融合成片,血管壁增厚,肺泡结构明显减少;4周组矽结节范围较模型组小,肺泡间隔明显增厚;2周组大鼠肺部矽结节又明显少于4周组,部分肺泡间隔增厚。模型组、4周组、2周组、正常组肺组织HYP含量依次递减,模型组高于正常组,4周组高于2周组[（0.923±0.039）vs（1.811±0.115）vs（2.681±0.433）μg/mg肺湿重,P<0.05];血清TGF-β1浓度也按照模型组、4周组、2周组、正常组的顺序依次递减,模型组高于正常组,4周组高于2周组[（41.664±1.207）vs（46.807±1.645）vs（49.947±1.840）μg/L,P<0.05]。结论:小动物PET-CT/CT可有效观察活体矽肺模型大鼠早期炎症和晚期纤维化,可作为动态追踪矽肺大鼠模型肺部损伤的检测方法,并在进一步研究中用小动物CT观察到BMMSCs可减轻矽尘引起的肺纤维化,在早期应用效果更佳。

关键词： 间充质干细胞   缺血再灌注损伤   HO-1   自噬   中性粒细胞  

摘要： 研究目的:缺血再灌注是部分肝切除或肝移植术后肝脏损伤的主要原因。因此,寻找治疗缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤的有效方法是亟待解决的临床问题。目前,有研究结果显示间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可能具有治疗肝脏I/R损伤的作用。本研究旨在探究MSCs对肝脏I/R损伤的治疗作用及机制,为临床使用MSCs治疗肝脏I/R损伤提供理论依据。研究方法:研究第一部分:实验大鼠随机分为Sham组:麻醉后开腹,不行肝脏血流阻断;I/R组:采用70%肝脏I/R损伤模型;I/R+MSCs组:经阴茎背静脉输注1ml含1 × 1 06/ml个MSCs悬液,其余操作同I/R组;ZnPP组:腹腔注射ZnPP(10mg/kg),其余操作同I/R+MSCs组。再灌注6小时后收集大鼠外周血及肝脏组织。通过观察谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的水平及肝组织病理切片判断MSCs移植对I/R损伤的治疗效果。通过蛋白质免疫印迹及免疫组化法检测肝内HO-1在此治疗过程中的变化,探究HO-1在MSCs减轻肝脏I/R损伤中的作用。研究第二部分:(1)实验大鼠随机分为Sham组:麻醉后开腹,不行肝脏血流阻断;I/R组:采用70%肝脏I/R损伤模型;I/R+MSCs组:经阴茎背静脉输注1ml含1×106/ml个MSCs悬液,其余操作同I/R组;ZnPP组:腹腔注射ZnPP(10mg/kg),其余操作同 I/R+MSCs 组;3-MA 组:腹腔注射 3-MA(30mg/kg),其余操作同I/R+MSCs组。通过蛋白质免疫印迹检测不同组别肝内LC3B(自噬特异性指标)表达水平,阐释自噬在MSCs减轻肝脏I/R损伤中的作用。(2)实验大鼠随机分为Sham组:麻醉后开腹,不行血流阻断;I/R组:采用70%肝脏I/R损伤模型;I/R+MSCs组:经阴茎背静脉输注lml含1 ×106/ml个MSCs悬液,其余操作同I/R组;ZnPP组:腹腔注射ZnPP(10mg/kg),其余操作同I/R+MSCs组;anti-PMN组:经阴茎背静脉输注0.8 ml抗中性粒细胞血清,其余操作同I/R组。通过观察肝组织MPO及MDA的变化,探究中性粒细胞在MSCs减轻肝脏I/R损伤中的作用。研究结果:研究第一部分:MSCs移植可以减轻肝脏I/R损伤,表现为ALT、AST水平的显著下降(p<0.05);肝脏病理切片上肝小叶结构紊乱范围缩小,肝细胞空泡化、点状坏死数目减少;损伤评分的降低(p<0.05)。蛋白质免疫印迹及免疫组化结果显示MSCs移植可以上调肝内HO-1的表达水平(p<0.05)。通过使用HO-1特异性抑制剂ZnPP处理大鼠可以抑制MSCs减轻肝脏I/R损伤的作用。研究第二部分:(1)蛋白质免疫印迹结果显示MSCs移植可以在HO-1介导下促进肝内自噬水平的上调(p<0.05);应用自噬特异性抑制剂3-MA发现MSCs移植治疗肝脏I/R损伤的作用依赖于肝内自噬水平的上调(p<0.05)。(2)通过使用抗中性粒细胞血清发现中性粒细胞参与肝脏I/R损伤过程;免疫组化及MDA结果显示MSCs在HO-1介导下通过抑制肝内中性粒细胞的募集及氧化应激水平减轻肝脏I/R损伤(p<0.05)。研究结论:(1)MSCs移植可在HO-1的介导下减轻肝脏I/R损伤;(2)MSCs移植减轻肝脏I/R损伤的作用依赖于肝内自噬的水平的上调;(3)MSCs移植通过抑制肝内中性粒细胞的募集及氧化应激水平减轻肝脏I/R损伤。