关键词： 刀豆蛋白A   青藤碱   间充质干细胞   免疫性肝损伤  

摘要： 目的:本实验研究了青藤碱与骨髓间充质干细胞合用是否能治疗Con A诱导的免疫性肝损伤模型,并试图阐述其可能的机制,为青藤碱联合骨髓间充质干细胞治疗免疫性肝炎的应用提供理论依据。方法:*** A诱导急性免疫性肝损伤大鼠模型的构建Wistar雌性大鼠42只,随机分为6组,N组为正常对照组,A、B、C、D、E尾静脉分别注射4mg/kg、8mg/kg、16mg/kg,30mg/kg、40mg/kg刀豆蛋白A,第8小时腹主动脉血,全自动生化仪检测检测ALT、AST、ALB,ELISA检测IL-2、IL-10、IFN-γ、TNF-α,肝组织留取行HE染色;Wistar大鼠21只,随机分为正常对照组,腹腔注射组,尾静脉注射组,每组7只,尾静脉注射组和腹腔注射组分别尾静脉和腹腔注射最佳Con A,比较大鼠血清ALT、AST、ALB。2.青藤碱通过免疫调节保护Con A诱导的大鼠急性免疫性肝损伤疗效观察雌性wistar大鼠49只,随机分为6组,模型组、正常组、SIN组(A 60mg/kg、B 90mg/kg、C 120mg/kg、D 150mg/kg)组,每组7只,除正常组外,其余各组均尾静脉注射最佳剂量Con A建立肝损伤模型。SIN不同剂量组分别于Con A注射前1h给药1次,SIN在Con A注射3h后另再给药1次。Con A注射8h后,腹主动脉取血,摘取肝脏组织。检测大鼠ALT、AST、ALB、IL-2、IL-10。3.青藤碱合骨髓间充质干细胞治疗刀Con A诱导的大鼠免疫性肝炎的实验研究雌性wistar大鼠42只,随机分为6组,正常组,模型组,青藤碱,间充质干细胞组,青藤碱+间充质干细胞组,地塞米松磷酸钠组,地塞米松磷酸钠、间充质干细胞在尾静脉注射Con A前1h给药1次,SIN给药方式同前。Con A注射8h后,腹主动脉取血,摘取肝脏组织,检测ALT、AST、ALB、TBIL、IL-2、IL-10、IL-10、IFN-γ水平,流式检测CD4/CD8比值。结果:1.各组实验结束时非正常死亡数:A、B、C组0只,D组2只,E组7只。HE染色显示A、B组可见少量点状坏死,炎性细胞浸润,小叶结构基本完整。C、D组可见明显的桥接样坏死;腹腔注射大鼠ALT、AST、ALB与正常组相比未见明显异常。2.与模型组比较,SIN不同剂量组ALT、AST、IL-2均明显降低,ALB、IL-10升高,差异具有统计学意义(P<0.05),且组织病理学分析表明肝细胞坏死及炎细胞浸润程度明显减轻;SIN 60mg/kg组、SIN 90mg/kg组与SIN 120mg/kg组分别比较,ALT、AST、IL-2均明显降低,ALB、IL-10升高,差异具有统计学意义;SIN120mg/kg与SIN150mg/kg组比较,ALT、AST、ALB、IL-2、IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05)。3.传代培养第3代大鼠BMSCs,细胞呈长梭形,具有MSCs的典型形态;与SIN组、BMSCs组相比SIN+BMSCs组ALT、AST、TBIL、IFN-γ、CD4+/CD8+下降(P<0.05),IL-10、IL-4上升。结论:1.尾静脉注射16mg/kg刀豆蛋白A成功诱导了大鼠急性肝损伤模型。***对ConA诱导大鼠急性免疫性肝损伤具有保护作用,抑制T淋巴细胞活化和调节IL-2、IL-10的分泌可能是其作用机制之一。3.青藤碱与间充质干细胞合用,有免疫协同作用。可能的机制为抑制Th1细胞因子的分泌,调节Th1/Th2的比例,并使免疫状态趋向于抑制细胞免疫。

关键词： 阿托伐他汀   间充质干细胞   细胞培养   预处理   糖尿病视网膜病变   动物实验  

摘要： 目的:应用阿托伐他汀(atorvastatin,ATV)预处理大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs),将其注射至糖尿病大鼠体的玻璃体腔,观察预处理的BMSCs能否改善糖尿病大鼠的视网膜微血管病变,并探讨BMSCs对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的治疗机制。方法:1.原代提取BMSCs、培养、传代,鉴定获取BMSCs的免疫表型。2.利用不同浓度的ATV处理BMSCs,通过免疫荧光法、免疫印迹法(western-blotting)、实时定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测 BMSCs 中 CXC 趋化因子 4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)基因表达的情况;利用MTS细胞增殖法检测ATV预处理后BMSCs的增殖能力,观察其增殖情况。利用transwell小室法,在基质细胞衍生因子-l(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)的诱导下,对ATV预处理后BMSCs迁移能力进行检测,观察其迁移情况。利用流式细胞仪对ATV预处理后BMSCs凋亡程度进行检测,观察其凋亡情况。3.将普拉格-杜勒(Srague Daawley,SD)大鼠腹腔注射链尿佐菌素(stptpozocin,STZ)诱导其建立糖尿病模型。4周后,将ATV预处理的BMSCs(5μl,3×104cells)一次性注射到糖尿病大鼠玻璃体腔体内,检测各组大鼠玻璃体腔注射前3周及后3周的血糖、体重等全身情况。动物实验分组:1.正常对照组(正常组);2.糖尿病大鼠对照组(Blank组);3.未经预处理的BMSCs移植组(MSC组);4.经ATV处理的BMSCs移植组(ATV-MSC组)。造模成功后进行干预治疗。MSC组:玻璃体腔注射未处理的MSCs、ATV-MSC组:玻璃体腔注射ATV处理的MSCs、正常对照组和Blank组:不做特殊处理。玻璃体腔注射后1周、2周、3周分别对各组进行实验检测:视网膜石蜡切片HE染色,western-blotting、免疫组织化学法。观察各组大鼠视网膜病理组织变化,视网膜中视紫红质酶(Rhodopsin)、神经元特异性烯醇化酶(neuronspecificenolase,NSE)及白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α 蛋白表达变化,将各组数据统计并进行对比得出结论。结果:1.成功分离、提取、培养、鉴定SD大鼠BMSCs。***通过ATV预处理后,免疫荧光法、western-blotting法、RT-PCR法均显示其可过表达CXCR4基因。利用MTS细胞增殖法检测,各组BMSCs细胞增殖能力没有统计学差异(p>0.05)。利用transwell小室法检测检测,ATV-MSCs组较其他组BMSCs迁移能力有所提高,结果具有统计学差异(p<0.05)。利用流式细胞仪对细胞凋亡程度的检测,发现各组BMSCs的凋亡程度无统计学差异(p>0.05)。3.视网膜石蜡切片HE染色显示ATV-MSCs组视网膜炎症情况较其他组程度减轻。western-blotting和免疫组织化学法显示,ATV-MSCs组视网膜中Rhodopsin、NSE蛋白表达较其他组升高,有统计学差异(p<0.05),炎症因子IL-6、TNF-α蛋白表达较其他组降低,有统计学差异(p<0.05)。结论:1、本研究利用ATV预处理的BMSCs,发现在体外环境下,BMSCs经过ATV处理,可通过提高CXCR4的表达来显著增加迁移、归巢能力,为经特殊处理MSCs治疗DR提供理论基础。2、本研究首次利用ATV预处理的BMSCs进行糖尿病大鼠玻璃体腔注射,发现ATV预处理的BMSCs可更有效的减轻其视网膜炎症程度,并且可通过调控相关因子的表达,起到对DR中视网膜的保护作用,为MSCs治疗DR开辟崭新思路。

关键词： 骨髓间充质干细胞   肺动脉高压   内皮-间质转化  

摘要： 【研究背景】肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)是一种致命的进行性疾病,其主要病理特征为肺血管阻力和肺动脉压力的进行性升高,从而发展为右心室肥厚,右心衰竭甚至死亡。目前国际上认可的肺动脉高压的诊断标准为:在海平面海拔高度、静息状态下,右心导管检测平均肺动脉压(mean pulmonary arterial pressure,mPAP)≥20mm Hg。肺动脉高压发病机制复杂,致死致残率高。血管周围的炎症细胞浸润、肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC)的异常增殖、血管内皮功能障碍是PH的主要病理学基础。尽管目前对其发病机制及治疗已有一定研究进展,也有许多治疗方式可供选择以改善患者的症状,但目前的治疗药物及方法无法改善疾病的危害及延长患者生存时间。间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)存在于体内多种组织细胞中,包括骨髓、脐带血和脂肪组织等。因其在伤口愈合、组织修复、血管生成和免疫调节等方面发挥特异性作用,成为许多疾病的理想治疗靶点。近年来干细胞治疗在心梗、脑缺血、肿瘤等疾病治疗实现了突破性进展。根据国内外研究,干细胞疗法已被证实在野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导的大鼠PH模型中是有效的,提示MSC有可能成为临床上治疗肺动脉高压的新策略,但其具体的作用机制目前仍不明确,有待进一步研究。【研究目的】本研究在体内实验采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)追踪标记的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)移植后在肺组织内的定位、分布及分化情况,并评估BMSC对慢性低氧致肺动脉高压(chronic hypoxia induced-PH,CHPH)和Sugen+低氧致肺动脉高压(sugen-hypoxia induced-PH,SuHx-PH)两种模型的治疗作用,检测BMSC是否影响了血管周围胶原沉积及内皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndoMT)的过程。在体外实验中,我们将BMSC与PASMC进行共培养,观测它对缺氧诱导的PASMC增殖及凋亡的影响,我们还用BMSC条件培养基(conditioned medium,CM)对肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC)进行处理,以研究BMSC-CM是否可以通过保护内皮细胞的功能对PH起治疗作用。【研究方法】1.建立CHPH及SuHx-PH动物模型,(1)利用慢病毒转染GFP对BMSC进行标记,通过免疫荧光染色观测BMSC移植后在肺组织内的分布及分化情况;(2)通过观察大鼠的血流动力学及病理学指标,评价BMSC对肺动脉高压的治疗作用;(3)通过Masson染色检测血管周围胶原沉积情况、实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测大鼠肺组织Col I、Col III的mRNA表达变化、免疫组化染色和蛋白质免疫印迹(western blot,WB)法检测大鼠肺组织基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)MMP2和MMP9的蛋白表达变化;(4)通过免疫荧光双染和WB检测内皮及间质细胞标志物蛋白表达水平的变化;2.原代培养PAMSC和PMVEC,与BMSC或BMSC-CM共培养,(1)应用Edu染色法和Annexin V-FITC/PI染色法检测PASMC的增殖与凋亡情况;(2)应用光学显微镜观测PMVEC的细胞形态;(3)通过WB检测PMVEC中内皮及间质细胞标志物蛋白表达水平的变化;(4)通过细胞划痕实验检测BMSC-CM对PMVEC迁移的影响。【实验结果】***移植后可在正常大鼠的肺组织内停留,并在缺氧模型组大鼠的肺组织内归巢。***治疗明显改善CHPH及SuHx-PH模型大鼠的右心室收缩压、右心肥厚指数以及肺血管重塑。***治疗降低CHPH及SuHx-PH模型大鼠肺血管周围胶原沉积以及Col I、ColⅢ、MMP2、MMP9的表达。***治疗降低CHPH及SuHx-PH模型大鼠肺组织中间质细胞标志物的表达,升高内皮细胞标志物的表达,抑制CHPH及SuHx-PH模型大鼠肺血管的Endo MT。***共培养对低氧诱导的大鼠PASMC的增殖与凋亡情况无明显影响。***-CM处理减轻低氧诱导的大鼠PMVEC的EndoMT及迁移。【实验结论】BMSC对CHPH及SuHx-PH模型大鼠具有治疗作用,且这种治疗作用可能

关键词： 股骨头坏死   骨髓间充质细胞   髓芯减压  

摘要： 目的:股骨头坏死(Osteonecrosis of fenmoral head,ONFH)可导致髋关节疼痛,逐渐进展为会出现股骨头塌陷,最终导致髋关节骨关节炎,需行全髋关节置换术。年龄40岁及以下的患者进行髋关节置换的10年生存率为85%,15年生存率为54%。鉴于股骨头坏死经常发生于较为年轻的患者中,在过去的几十年对保髋治疗方式进行了深入的研究,而且在未来也是骨科研究的热点。股骨头髓芯减压术时目前治疗早期股骨头坏死的应用最广泛的手术方式,它可通过外侧皮质将股骨头坏死区域骨质去除,主要是通过降低股骨头内压力方式达到治疗目的。早期股骨头坏死应用干细胞的治疗是较为有效的治疗方式。人类间充质干细胞具有多向分化潜能,存在于成人骨髓当中,被认为是未分化的细胞,能够分化成为骨、软骨、脂肪、肌肉、肌腱、骨髓基质等间叶组织。骨髓间充质干细胞来它容易获得,可通过体外培养的方式获得增殖并且保持其多项分化潜能。体外试验证实应用志愿者捐献的骨髓间充质干细胞可具有成骨及成血管可能。股骨头坏死是由于股骨头内血液供应不足造成的,因此将骨髓间充质干细胞植入股骨头髓芯减压通道内为股骨头坏死的治疗提供了一种有效的治疗措施,植入的间充质细胞可提高坏死区的骨、血管的生成。本研究主要目的为股骨头髓芯减压联合自体骨髓间充质干细胞移植治疗股骨头坏死的短期的疗效。方法:选取2015年1月至2015年8月之间就诊于我院骨科第二病区的股骨头骨坏死(ONFH)患者6名,其中男4例,女2例,年龄自31-58岁,平均年龄为45±10.1岁,其中酒精性股骨头坏死2例,其余无明显诱因导致股骨头坏死,其中双侧股骨头坏死2例,其余均为单侧股骨头坏死,共8侧股骨头坏死接受股骨头髓芯减压+骨髓间充质细胞移植治疗。术前采用Ficat分期系统进行分期属于Ficat Ⅰ期4例、Ⅱ期4例。骨髓间充质干细胞术前于病房内采集,患者俯卧后于双侧髂后上棘穿刺获得自体骨髓血100-250ml,离心后获得自体骨髓间充质干细胞。然后患者仰卧位,患侧股骨头行髓芯减压后植入自体骨髓间充质干细胞。根据手术前后Harris髋关节功能评分、VAS疼痛评分及Ficat分期改变进行临床评价和影像评价;并以改行人工髋关节置换术为中点采用Kaplan-Meier进行生存分析。所有统计学资料均采用SPSS 16.0软件包分析处理。结果:所有患者均获得随访,随访时间28月-35月,平均31.3±2.7个月。患者Harris髋关节功能评分有术前71.4±3.1分提高至末次随访时间的85.4±10.9分(P小于0.05),差异有统计学意义。总体疼痛缓解率及功能改善率为87.5%(7/8),VAS疼痛评分由术前4.6±0.7将至1.4±2.0(P小于0.05)。截止随访终止2017年12月,影像学表现有5髋进展,其中1髋行全髋关节置换术。结论:在早期股骨头坏死患者,应用股骨头髓芯减压联合自体间充质干细胞进行治疗,能够缓解疼痛,改善关节功能,延缓病情发展,取得良好临床效果。尽管通过研究发现股骨头髓芯减压联合自体间充质干细胞治疗股骨头坏死的疗效满意,但本研究因其样本量较小、随访周期较短,有一定局限性。还需更进一步的研究来证明其效果。

关键词： 脊髓损伤   Bcl-2   骨髓间充质干细胞   凋亡  

摘要： 目的:脊髓损伤是严重的脊柱疾病并发症,常导致损伤节段以下肢体的严重功能障碍,其发病率逐年上升。外源干细胞的移植为脊髓损伤的治疗提供了崭新思路。骨髓间充质干细胞(BMSCs)的自我更新和增值能力较强、来源广泛、分离培养简单,但是由于移植后的BMSCs在宿主体内成活率及转化率较低,因此限制了其广泛应用。B cell lymphoma/leukemia gene 2(Bcl-2)被认为是能够抑制细胞凋亡发生的抗凋亡基因,是调节细胞凋亡的基本成员,能对抗多种原因引起的细胞凋亡,。本实验通过构建大鼠Bcl-2基因过表达载体,转染BMSCs,将其移植入脊髓损伤大鼠的损伤部位,观察疗效。方法:1、培养和传代大鼠BMSCs,使用倒置显微镜进行形态学观察,用流式细胞术检测细胞表面标志性抗原CD44、CD45和CD90。构建及鉴定Bcl-2基因慢表达载体,转染BMSCs,以获得Bcl-2过表达的BMSCs,使用RT-PCR和westernblot技术检测Bcl-2的表达量,使用MTT检测细胞的增值效率。2、健康雄性8周龄SD大鼠20只,随机分为4组,每组5只大鼠,采用分点注射的方法,在大鼠脊髓损伤建模手术完成后进行MSCs移植。分组情况为:A:假手术组(Sham组,n=5);B:损伤对照组(SCI组,n=5);C:空载体BMSCs治疗组(BMSCs组,n=5):在损伤部位注射空载体BMSCs;D:Bcl-2过表达BMSCs治疗组(Bcl-2+BMSCs组,n=5):在损伤部位注射Bcl-2过表达BMSCs。所有的大鼠连续观察6周,每周记录Basso,Beattie和Bresnahan(BBB)评分,以评价大鼠四肢功能。在第六周评分结束后选取大鼠损伤阶段或与损伤对应得阶段进行切片,TUNEL法观察神经凋亡情况。结果:1、第三代细胞培养第十二天时,用倒置显微镜观察细胞形态,细胞胞体向胞核收缩,细胞呈双极或多极状,胞体缩小,细胞质少,折光性强,突起细长且相互连接交叉,为典型的神经元细胞形态。流式细胞仪检测BMSCs表面标记物结果显示:CD44和CD90表达阳性,阳性率分为97.8%和99.9%,CD45表达阴性,阳性率为0.9%。2、Bcl-2过表达载体组的Bcl-2表达量明显高于另外两组。3、在培养第4、5、6天时,Bcl-2过表达载体组的BMSCs增值效率明显高于空载体对照组(P<0.05)。4、SCI组、BMSCs组、Bcl-2+MBSCs组大鼠BBB评分在六周内逐渐改善,在第5、6周时,BMSCs组和Bcl-2+MBSCs组大鼠的评分均高于SCI组(P<0.05),但是在第六周时Bcl-2+BMSCs组大鼠评分较MBSCs组高(P<0.05)。5、第六周时,SCI组少见TUNEL阳性细胞,Sham组、BMSCs组、Bcl-2+MBSCs组均可见TUNEL阳性细胞,分布于脊髓灰质和白质内,以白质为主。Bcl-2+MBSCs组阳性细胞数为17.09±3.87个/HP,BMSCs组为8.23±1.09个/HP,统计分析发现,Bcl-2+MBSCs组阳性细胞数高于BMSCs组,差异有统计学意义(P<0.01)。6、SCI组损伤平面以下BDA阳性神经纤维最少,Bcl-2+BMSCs组BDA阳性神经纤维通过损伤平面数量最多。定量分析显示,SCI组、Sham组、BMSCs组、Bcl-2+BMSCs组为4.37±1.12%、18.76±1.98%、38.65±3.01%、61.09±4.08%。统计分析发现,SCI组均较Sham组、BMSCs组、Bcl-2+BMSCs组低(P均<0.05),并且Bcl-2+MBSCs组明显较BMSCs组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1、BMSCs移植治疗脊髓损伤大鼠有效。2、Bcl-2过表达的BMSCs移植治疗脊髓损伤大鼠的疗效优于单纯移植BSMCs,具体表现在双下肢运动功能的恢复较好,有效减少神经细胞凋亡。

关键词： 骨髓间充质干细胞   肾动脉   尾静脉   腹腔注射   阿霉素   肾病  

摘要： [目的]1、培养、提纯与标记SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),用于后续进行同种异体输注治疗。2、建立类似于人类慢性肾脏病的阿霉素肾病大鼠模型。3、通过不同途径移植标记后的BMSCs,并通过观察移植后大鼠的肾功能改善、肾脏组织中BMSCs的分布从而分析疗效最优通道。继而对临床上对于慢性肾脏病的治疗工作提供借鉴意义。[方法]1、选择2只雄性12周龄清洁级SD大鼠,取骨髓作供体细胞来源。将其处死后,在无菌条件下取出股骨及胫腓骨,从其骨髓腔内提取BMSCs进行分离、提纯,由流式细胞学鉴定,确定为目标所需细胞后,传代培养至P4-P6,用Ad5/F35腺病毒载体(带绿色荧光)转染液标记。2、随机选择60只雄性14周龄清洁级SD大鼠,切除左肾并于手术当天、1周后、2周后,通过尾静脉以3mg/kg剂量输注阿霉素建立慢性肾病模型。同时选择12只大鼠作为空白对照。末次输注阿霉素后第4周,对造模后大鼠的尿蛋白、血生化进行分析。3、选择成功造模的48只大鼠,随机分为4组,每组12只:A组:经动脉介入途径输注BMSCs并在两周后于同一路径输注等量BMSCs;V组:经尾静脉途径输注BMSCs并在两周后于同一路径输注等量BMSCs;IP组:经腹腔注射途径输注BMSCs并在两周后于同一路径输注等量BMSCs;骨髓间充质干细胞的量为1X 106个/ml混悬液2.5ml。ADR组:不输注BMCSs,仅在其他组输注BMSCs时通过尾静脉输注等量生理盐水。12只健康大鼠作为空白组N组,同样在其他组输注BMSCs时经尾静脉输注2.5ml生理盐水。分别于末次移植后0周(当周)、1周、2周取血。检测大鼠血液中血红蛋白和血肌酐,收集24h尿液检测24h尿蛋白。并在此三个时间点每组取4只大鼠(A组前两次分别只取3只)处死取出右肾组织观测BMCSs在肾内的分布情况。[结果]1、最初的骨髓间充质干细胞呈典型的贴壁生长特性(24-48小时),传代1周后,细胞呈圆形、不规则多角形,仅有少数呈长梭形。传至P4代时,BMSCs生长速度加快,细胞形态规则,呈长梭形。取传代至P4至P6的BMSCs做流式细胞仪表型鉴定,其中CD45、CD11b、CD29及CD44表面标志阳性表达分别为2.2%、1.9%、97.1%、和97.9%。AD5/F35腺病毒转染后6小时,换培养液培养一天后观察绿色荧光的表达率为75%。2、造模时死亡5只,造模失败3只,成功造模52只,取2只处死进行肾脏病理切片,取2只作为后续实验A组插管失败导致死亡的补充。末次输注阿霉素后第4周,造模后大鼠检测血肌酐及血尿素氮明显上升,24h尿蛋白升高,血清白蛋白下降。观察病理切片:肾脏形态呈硬化、萎缩状,部分肾小球出现局灶性硬化,肾小管管腔扩张,肾间质有炎症、纤维化表现。通过实验室检查与病理改变,说明大鼠造模成功。3、A组进行第一次BMSCs移植时,术后失血过多死亡1只,补充1只造模成功大鼠;第二次骨髓间充质干细胞移植术中死亡1例,术后死亡1例。V组和IP组无死亡病例。移植后A组、V组、IP组和ADR组在0、1、2周时,血肌酐、血尿素氮、24小时尿蛋白指数均明显高于N组(P<0.01)。0周时,A组、V组、IP组与ADR组比较,血肌酐、血尿素氮、24小时尿蛋白均无明显改变。1周时A组血清肌酐明显低于ADR组(P<0.01),而V组和ADR组血清肌酐无明显改善;一周时与ADR组比较,A组和V组的24小时尿蛋白均有降低,且A组24小时尿蛋白明显低于V组(P<0.01)。2周时,血肌酐数值A组低于V组和阿霉素组(P<0.01),但V组与ADR组无显著性差异;A组和V组24小时尿蛋白低于ADR组(P<0.01),A组与V组无显著性差异。各个时间节点上IP组与ADR组比较,各项指标无明显差异。病理学检查显示,ADR组和IP组出现局灶性肾小球硬化硬化,基底膜和系膜细胞增生,间质部分有大量炎性细胞;V组的肾小球基膜及系膜细胞出现不同程度增生,间质部分少量炎性细胞浸润;A组大部分肾小球出现毛细血管襻扩张,间质部分极少量炎性细胞浸润;N组病理显示与正常大鼠肾脏病理一致。检测绿色荧光显示:N组、ADR组、IP组基本没有显示绿色荧光;V组、A组于移植后第一天起即出现绿色荧光,并随时间推移逐渐增强,于14天时为最强;V组绿色荧光主要表达于肾小管部分,而A组不仅分布于肾小管,同时在肾小球部分也可看见少量分布。[结论]1、通过细胞特征检测,获得细胞为高纯度的骨髓间充质干细胞,是实验所需的目标细胞,使用腺病毒转染后可成功使其带有绿色荧光。2、单侧肾切除和3次经尾静脉输注阿霉素可引起大鼠慢性肾脏病。此方法较为安全,是一种可重复、稳定、有效的造模方法。3、移植同种异体的BMSCs因输注途径不同可对慢性肾脏病大鼠产生不同情况的治疗效果:腹腔注射不能改善肾功能,动

关键词： 骨髓间充质干细胞   矽肺   肺纤维化   Th17细胞   Treg细胞   Th17/Treg平衡   羟铺氨酸   转化生长因子-β  

摘要： 目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)改善矽肺小鼠肺纤维化的效果。方法取无特定病原体级健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、矽肺组和治疗组,每组10只。采用气管暴露法,对照组小鼠予一次性注射0.90%氯化钠溶液20.0μL,矽肺组和治疗组小鼠均一次性注射质量浓度为250 g/L的矽尘混悬液20.0μL;于造模第4周,治疗组小鼠经鼠尾静脉一次性输注细胞密度为2×10~9/L的BMSCs混悬液250.0μL,矽肺组小鼠输注0.90%氯化钠溶液250.0μL,每周1次,连续治疗4周;对照组小鼠不予任何处理。末次治疗后2周,处死小鼠。观察肺组织病理学改变,进行肺纤维化评分(Aschcroft评分);检测肺脏脏器系数、肺组织中羟脯氨酸(HYP)和血清中转化生长因子-β(TGF-β)水平,检测脾脏和肺门淋巴结(HLN)中辅助性T细胞17(Th17细胞)和调节性T细胞(Treg细胞)比率。结果肺组织病理学检查结果显示:BMSCs移植疗程结束后,矽肺组小鼠肺部严重纤维化,见大量胶原纤维,且出现大量矽结节;治疗组小鼠肺部见轻度纤维化,见少量胶原纤维,矽结节数量明显减少。矽肺组小鼠肺脏器系数、Aschcroft评分、肺组织中HYP水平、血清中TGF-β水平以及脾脏和HLN中Th17细胞比率均高于对照组(P<0.05),治疗组小鼠上述指标均低于矽肺组(P<0.01)。矽肺组小鼠脾脏和HLN中Treg细胞比率均低于对照组(P<0.05);治疗组小鼠上述指标均高于矽肺组(P<0.01)。结论 BMSCs可有效改善矽肺小鼠的肺纤维化,且可纠正矽肺小鼠体内Th17/Treg失衡。

关键词： 干细胞   治疗   股骨头坏死   研究进展  

摘要： 近年来,BMMSCs移植对ONFH的治疗已取得重大进展[1]。治疗成人股骨头坏死的效果得到明显提高,本文就目前BMMSCs治疗ONFH的主要研究进展做一综述。

关键词： 无射喷射   骨髓间充质干细胞   缺血性心脏病  

摘要： 目的探讨无针注射移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗缺血性心脏病的可行性。方法健康杂种犬32只建立急性心梗(MI)模型并随机分为4组为单纯建模组(MI组),无针注射生理盐水组(NS组),有针注射移植干细胞组(N+MSCs组),无针注射移植干细胞组(NF+MSCs组)。术后6周检测血流动力学,处死动物后分离心脏行大体及组织学观察,计算MI面积并行新生血管计数。结果 N+MSCs组及NF+MSCs组梗死区心肌被纤维结缔组织替代,其间可见新生小血管;分别与MI组,NS组及N+MSCs组比较,NF+MSCs组左室舒张末压(9.00±3.2)mm Hg(1 mm Hg=0.133 k Pa)下降、左室内压最大上升(841.86±72.85)mm Hg/s和下降速率(-787.29±45.08)mm Hg/s升高、梗死面积(18.59±3.58)%缩小、新生小血管数量(9.57±2.23)增多(P<0.05)。结论无针注射移植干细胞治疗缺血性心脏病是安全,有效的。

关键词： 自体骨髓间充质干细胞   治疗   股骨头坏死   研究进展  

摘要： 近年来,BMMSCs移植对ONFH的治疗已取得重大进展[1]。治疗成人股骨头坏死的效果得到明显提高,本文就目前BMMSCs治疗ONFH的主要研究进展做一综述。