关键词： 视网膜新生血管   血管内皮因子   干细胞移植   早产儿视网膜病变   糖尿病性视网膜病变  

摘要： 视网膜新生血管性疾病并非独立的一种眼病,常见于许多眼病中,如早产儿视网膜病变、糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、视网膜中央静脉阻塞和视网膜静脉周围炎等都会形成新生血管,是严重损害视力的病变。此类疾病丧失正常血管的结构和功能,引起病理性出血、渗出、水肿和视网膜脱离等病理性改变,是视力丧失的主要原因,已经成为世界范围的致盲性疾病。目前主要的治疗方法为针对病因进行激光封闭,或行玻璃体切除术,或是反复、多次玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子,虽然短期效果好,但不能防止复发,目前仍没有长期有效的治疗方法。干细胞治疗的出现为此提供了潜在的替代疗法。本文将对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在视网膜新生血管疾病中的最新应用进展作一综述,展示其移植优势和良好的临床应用前景。

关键词： 心肌梗死   骨髓间充质干细胞   中药   Meta分析   大鼠   心功能  

摘要： 目的对中药干预骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死(MI)大鼠疗效进行系统评价。方法用计算机检索中国知网、万方数据库、维普数据库、Pubmed、Embase及其他中医药相关期刊中有关中药干预骨髓干细胞治疗心血管疾病的大鼠实验研究。采用Cochrane协作组提供的Revman5.3软件对纳入的8篇实验性研究进行Meta分析。结果中药干预骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死大鼠心功能左心室射血分数疗效优于对照组[MD=16.70,95%CI(10.46,22.95),P<0.000 01],中药干预骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死大鼠心功能左心室短轴缩短率疗效优于对照组[MD=15.39,95%CI(11.26,19.52),P<0.000 01]。结论中药干预骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死大鼠心功能有明显疗效,且安全性较高。

关键词： 氟骨症   家兔   骨髓间充质干细胞   移植  

摘要： 目的观察耳缘静脉移植自体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对家兔氟骨症治疗的有效性和可行性。方法取家兔54只,雌雄各半,随机分为空白对照组(12只)和氟骨症模型组(42只),分别饮用含氟化钠0、300 mg/L的自来水。90 d后将42只模型组家兔随机分为示踪组(单次/多次耳缘静脉注射、示踪溶剂对照组,6只家兔/组)和治疗组(单次/多次耳缘静脉注射、自然恢复组、治疗溶剂对照组,6只家兔/组),雌雄各半。分离、培养、鉴定治疗组氟骨症家兔BMSCs,分别以单次及多次耳缘静脉移植回氟中毒家兔体内。示踪组中,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)标记BMSCs移植入家兔体内,免疫组化检测示踪BMSCs。治疗组中,60 d后,观察治疗前后骨骼X线影像学变化,以定量CT(QCT)测定家兔活体股骨骨密度,以酶联免疫吸附法(ELISA)测定家兔血清碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素(BGP),以氟离子选择电极法测定家兔股骨骨氟含量,以HE染色观察股骨组织病理学改变并计算骨小梁面积。结果免疫组化结果显示多次耳缘静脉移植示踪组呈Brd U阳性表达,成骨细胞胞核呈淡黄色,而单次耳缘静脉移植示踪组、示踪溶剂对照组、示踪空白对照组、自然恢复组未见Brd U表达。多次耳缘静脉移植组治疗后X线影像显示股骨斑片状高密度影消失,紊乱骨小梁有所恢复;骨密度[(562.42±15.69)g/cm3]、ALP活力[(24.88±3.82)U/L]、BGP浓度[(1247.12±291.52)μg/L]、骨氟含量[(1699.16±528.69)mg/kg]、骨小梁面积[(28.71±1.88)***]均较自然恢复组下降[(635.11±93.42)g/cm3、(43.08±2.82)U/L、(3207.73±788.80)μg/L、(2557.65±173.90)g/kg、(38.52±2.81)***,P均<0.05],差异具有统计学意义;多次耳缘静脉移植组HE染色显示骨髓腔间隙增大,骨小梁数目减少,同时伴有部分新生成的粗细不均、排列整齐、骨髓间隙较均匀的正常骨小梁。而单次耳缘静脉移植组BMSCs未观察到有治疗效果。结论多次耳缘静脉自体BMSCs移植可有效修复氟骨症家兔受损骨组织,改善硬化型氟骨症病理损害,为BMSCs移植在氟骨症患者中的应用奠定了科学基础。

关键词： 骨关节炎   骨髓   间质干细胞   软骨,关节   补肾活血汤   大鼠   动物实验  

摘要： 目的:观察补肾活血汤含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cell,BMSC)成软骨分化的作用,及补肾活血汤联合BMSC治疗大鼠膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用。方法:从4周龄SD大鼠股骨中分离培养BMSC,以8周龄SD大鼠制备补肾活血汤含药血清和空白血清。选择体外培养的第3代BMSC,分为3组,分别加入含10%空白血清的DMEM培养液(空白组)、含10%空白血清的DMEM培养液及基础诱导液(诱导组)、含10%补肾活血汤含药血清的DMEM培养液及基础诱导液(含药血清组),干预后分别进行甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色,并以Real-time PCR法检测各组细胞中Ⅱ型胶原mRNA、聚集蛋白聚糖mRNA的水平。取18只8周龄SD大鼠,随机分为模型组、BMSC组及联合组,每组6只。通过切断右前交叉韧带对各组大鼠进行KOA造模。造模术后1周,向BMSC组与联合组大鼠右侧膝关节腔内注射5×10~6个·m L^(-1)BMSC-PBS溶液(每次0.1 m L,每周1次),向模型组大鼠右侧膝关节腔注射等量PBS溶液;联合组在关节腔注射的基础上每天以补肾活血汤灌胃(每次4 m L,每天1次)。干预8周后处死大鼠,取右侧膝关节软骨及软骨下骨组织,HE染色后在光学显微镜下观察。结果:干预7 d后,含药血清组细胞甲苯胺蓝染色呈阳性,细胞质呈蓝紫色;空白组和诱导组染色均为阴性。干预14 d后,含药血清组染色进一步加深,染色面积增大,呈明显的紫蓝色;空白组染色为阴性,诱导组可见少量蓝紫色染色。干预7 d、14 d后,Ⅱ型胶原免疫组化染色结果显示,空白组细胞均未见明显阳性染色,诱导组及含药血清组细胞胞浆和细胞间质内呈棕黄色或棕褐色染色,其中干预14 d后含药血清组细胞内染色深于诱导组。干预7 d后,3组大鼠BMSC中Ⅱ型胶原mRNA水平、聚集蛋白聚糖mRNA水平比较,组间差异均有统计学意义(1.02±0.23,1.33±0.11,2.11±0.23,F=47.181,P=0.000;1.03±0.32,1.36±0.16,1.93±0.10,F=26.508,P=0.000)。含药血清组的Ⅱ型胶原mRNA水平、聚集蛋白聚糖mRNA水平均高于空白组和诱导组(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000),诱导组的Ⅱ型胶原mRNA水平、聚集蛋白聚糖mRNA水平均高于空白组(P=0.017;P=0.029)。药物干预8周后,模型组大鼠膝关节软骨表面粗糙,破坏严重,可见明显纤维增生;BMSC组软骨可见部分修复,表面仍较粗糙,细胞纤维化不明显;联合组关节软骨面光滑,软骨表面磨损不明显,无软骨表面纤维化。结论:补肾活血汤含药血清能有效促进体外培养的大鼠BMSC向软骨细胞分化;补肾活血汤灌胃联合BMSC膝关节腔内注射能有效防治KOA大鼠膝关节软骨破坏。

关键词： 脑性瘫痪   骨髓   间质干细胞   细胞移植   组织工程  

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞和骨髓单个核细胞都可以治疗脑性瘫痪。然而,这两者的疗效差异仍不清楚。目的:对比骨髓间充质干细胞以及骨髓单个核细胞对于脑性瘫痪患儿粗大及精细运动功能的治疗作用。方法:招募105例脑性瘫痪患儿并随机分配成3组:骨髓间充质干细胞组、骨髓单个核细胞组以及对照组。th骨髓间充质干细胞组和骨髓单个核细胞组患儿均接受4次腰椎穿刺细胞移植,对照组采用Boba法进行治疗,2 d治疗1次,持续3周。在治疗3,6,12个月后使用粗大运动量表和精细运动量表对各组患儿的粗大运动和精细运动功能进行量化评价。结果与结论:(1)移植治疗后3个月,骨髓间充质干细胞组GMFM评分A功能区和FMFM评分A、C功能区得分均优于骨髓单个核细胞组和对照组(P<0.05);(2)移植治疗后6个月,骨髓间充质干细胞组GMFM评分A、B功能区得分及总分,FMFM评分A、B、C、D、E功能区得分及总分均优于骨髓单个核细胞组和对照组(P<0.05);(3)移植治疗后12个月,骨髓间充质干细胞组GMFM评分A、B、C功能区得分及总分,FMFM评分A、B、C、D、E功能区得分及总分均优于其他两组(P<0.05);(4)骨髓单个核细胞组和骨髓间充质干细胞组患儿分别有6例出现低颅压性头痛、6例出现低热;(5)结果表明,骨髓间充质干细胞和骨髓单个核细胞移植治疗小儿脑性瘫痪安全、有效、可行,骨髓间充质干细胞相较骨髓单个核细胞及康复治疗,无论在粗大运动还是精细运动功能方面都有显著优势。

关键词： 新生儿   缺氧缺血性脑损伤   骨髓间充质干细胞治疗   磁敏感加权成像   临床疗效  

摘要： 缺氧缺血性脑损伤(HIBD)可定义为由于脑血流量（缺血）和氧供应（缺氧血症）的减少或停止而导致的胎儿或新生儿脑损伤，也称围产期缺氧引起的缺氧缺血性脑损伤(HIBI)因此，HIBD和HIBI术语可互换使用来描述血流受损对大脑的影响。尽管新生儿和母婴护理都有所改善，但由于仍造成严重的神经系统损害，HIBD现被认为是一个严重的临床问题，仍然是新生儿急性死亡和严重神经损伤的重要原因。研究表明，子宫内或出生时的窒息是HIBD的主要原因，其导致脑血流减少，细胞损伤，血管调节受损和代谢紊乱。窒息事件在婴儿和儿童中更常见，使他们面临缺氧和低氧血症的风险增加。　　HIBD的作用表现为中枢神经系统(CNS)并发症，包括癫痫，脑瘫，精神发育迟滞和学习障碍，并且它们形成系列性生理和生化改变。长时间的低氧血症可导致心脏缺氧，这与心输出量减少有关，并最终导致脑血流量减少。　　骨髓间充质干细胞(BMSCs)已被证实为干细胞治疗法治疗HIBD和其他疾病的关键有效组成部分。间充质干细胞(MSCs)是多能成体干细胞，作为壁细胞或外周细胞存在于血细胞的外侧而几乎存在于所有组织中。这些细胞具有再生和分化成不同类型组织的固有能力，例如分化成骨细胞，软骨细胞和脂肪细胞和叽腱细胞。因此，他们已经发现干细胞疗法的广泛用途，该疗法涉及组织再生，例如骨，软骨或脂肪细胞中的结缔组织的再生。干细胞治疗的一个突破是使用MSCs治疗再生能力有限的脑疾病，例如HIBD。　　磁敏感加权成像(SWI)是用于获得铁，血液和其他组织的高对比度图像的磁共振序列的新成像技术。SWI已被广泛用作临床成像中的辅助工具，使由各种病理性神经病症（如创伤性脑损伤和脑梗塞）引起的组织结构变化可视化。同样，Namestnikova等人在另一项研究中证实了SWI在新生儿脑内追踪SPIO标记MSCs中的重要临床应用。　　目的：　　本研究的主要目的是确定SWI在评估新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的可靠性，更具体地说:　　1.观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤SWI图像和相位值的早期变化　　2.研究SWI期值与BMSCs在新生大鼠HIBD治疗中的相关性　　3.评估治疗效果并确定干细胞的准确施用途径。　　方法：　　第一部分:将新生大鼠随机分为2组:对照组进行假手术(10)和HIBD组(40)，后者经过Rice等人描述的正常手术，而假手术组有经过手术，但左侧颈动脉仅在没有缝合（无结扎）和无缺氧治疗的情况下被隔离。在HIBD和假手术期间没有老鼠死亡。手术后，在缺血和缺氧后分别在OH，24H，1W和2W评估新生SD大鼠在HIBD模型中的神经行为。该评分基于改善的神经损伤评分（修正的神经严重程度评分，MNSS）。　　神经功能评分完成后，在HIBD模型和假手术绍进行外科手术后，在准确的时间点（0小时，24小时，1周和2周）用MRI检查大鼠。扫描序列包括T1，T2，T2-flair和脑的SWI，并测量侧脑室后角的相应相位值。实验的最后一步是对大脑标本进行组织病理学检查　　第二部分:将新生大鼠随机分为5组:对照组(10)，HIBD组(10)侧脑室组(10)，直接注入侧脑室治疗，尾静脉组(1())接受大鼠尾静脉和磁化组治疗(10)。HIBD模型新生SD大鼠的神经行为分别在缺血和缺氧后OH，24H，1W和2W进行评估。该评分是基于改善的神经损伤评分（改良神经严重程度评分，MNSS），包括反射，步行试验，感觉试验，平衡试验，反射丧失和异常运动，最高得分为12分。　　神经功能评分完成后，在HIBD模型和假手术组进行外科手术后，在准确的时间点（0小时，24小时，1周和2周）用MRI检查大鼠。扫描序列包括T1，T2，T2-flair和SWI。扫描序列包括脑的T1，T2，T2-天赋和SWI，并测量每组的侧脑室后角的相应相值并相互比较。在每组中随机划伤2只动物用于组织病理学检查以关联MRI发现。　　第一部分:HIBD手术后，评估两组神经行为评分，结果显示HIBD组明显低于对照组(p＜0.05)。因此，HIBD程序是成功的。对照组和HIBD组均未显示缺氧和缺血OH后T1，T2，T2-flair和SWI图像的MRI信号无明显变化。在24小时后，HIBD组显示出侧脑室周围的低信号的非常微小的标点，随着时间的推移而延长。HIBD的相位值在24H后增加并且随时间迅速减小。对照组在不同时间点没有显示相位值和SWI图像的变化。两组显着不同。(P＜0.05)。在组织病理学结果上，对照组随着时间的推移表现出轻微的脑水肿。在HIBD组中，它们是许多神经元变性和坏死，神经元的身体溶解，轴突消失，组织轻微肿胀。1至2周后，神经元数量显着下降。　　第二部分:对照组未显示SWI和相位图像随时间的明显变化，HIBD和尾静脉组随着时间的推移在24H时显示相位值的增加模式，值得注意的是HIBD的

关键词： 骨髓间充质干细胞   单纯疱疹病毒胸苷激酶   旁观者效应   胶质瘤  

摘要： 目的:恶性胶质瘤是人脑最常见的恶性肿瘤,但目前无论手术治疗还是放化疗,治疗效果都不是很理想,因此基因治疗方案越来越受学者们关注。单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSVtk/GCV,herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir)肿瘤自杀基因治疗系统具有显著的杀伤肿瘤作用,但由于单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVtk)基因在体转导效率很低,而利用体外导入HSVtk基因又一直没有找到合适的载体细胞,因此直接阻碍了该治疗方案在临床上的进一步应用。近年来,有研究表明骨髓间充质干细胞具有在基因治疗中携带和运送治疗基因的能力,而且已经发现了携带了HSVtk基因的骨髓间充质干细胞(BMSC-tk)与不同种系的胶质瘤细胞之间存在着较好的旁观者效应。本研究旨在进一步探讨TK骨髓间充质干细胞(BMSC-tk)的体外抗肿瘤作用。方法:C6(大鼠胶质瘤细胞)的培养。原代BMSC(大鼠骨髓间充质干细胞)的提取,形态学鉴定及培养。Transwell小室迁移实验来验证BMSC向C6的定向迁移能力。pEX-4-herpesvirus进行外源性HSVtk基因对C6和BMSC细胞转染,并观察两种细胞的转染效率。细胞增殖测试实验(Cell counting kit-8,CCK-8)法检测C6-tk(TK大鼠胶质瘤细胞)及BMSC-tk细胞对GCV的体外敏感性。C6与BMSC-tk共培养在不同浓度(0～100ug/ml)GCV(更昔洛韦)的条件培养液,用CCK-8分析法检测存活的细胞数量来评价其抗肿瘤活性。结果:培养过C6细胞的条件培养基组的穿膜细胞数显著高于Control(新鲜培养基)组(P<0.001)。C6的转染效率超过20%,而BMSC的转染效率还不到10%,且荧光强度较弱。C6-tk及BMSC-tk的细胞存活率随GCV浓度增大均出现明显的下降趋势;与Control组相比,GCV浓度大于0.1ug/ml时C6-tk的细胞存活率开始下降,而BMSC-tk细胞是当GCV浓度大于0.3ug/ml时开始下降;当GCV浓度增至10ug/ml时C6-tk和BMSC-tk细胞的存活率下降均最为显著(P<0.001),而继续增大GCV浓度,细胞存活率都再无显著下降(P>0.05)。GCV浓度为1、3、10、30、100ug/ml时BMSC-tk+C6的细胞存活率均有显著下降(P<0.05、P<0.01、P<0.001、P<0.001、P<0.001)。其中10ug/ml组BMSC-tk+C6的细胞存活率下降最为显著,而继续提高GCV的浓度后BMSC-tk+C6的细胞存活率较10ug/ml组不再明显下降。在GCV浓度为10ug/ml时BMSC-tk细胞与BMSC-NC细胞相比下降的OD值显著低于BMSC-tk+C6细胞与BMSC-NC+C6细胞相比下降的OD值(P<0.001)。结论:***对胶质瘤细胞具有明显的定向迁移能力。2.C6-tk细胞在体外条件下对GCV有显著的敏感性,且敏感性最为显著时的最低GCV浓度为10ug/ml;***-tk细胞在体外条件下对GCV有显著的敏感性,且敏感性最为显著时的最低GCV浓度为10ug/ml;***-tk在体外条件下对C6细胞存在明显的杀伤作用,且杀伤作用达到最大时的最低GCV浓度为10ug/ml;

关键词： 自身免疫性肝炎   骨髓间充质干细胞   miR-223-3p   炎症小体   动物实验  

摘要： 背景和目的：　　自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis, AIH）是由免疫系统紊乱引起的慢性的肝脏炎性疾病。它的主要特点有：高γ-球蛋白血症、血清自身抗体阳性和界面性肝炎。AIH的治疗主要依赖于激素和免疫抑制剂，但这种治疗方法仅能抑制免疫损伤，不能同时抗肝纤维化，并且长期治疗耐受性差、副作用大，在临床难以长期开展使用。骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）可以分化为其他种类细胞，并且可以抑制免疫、改善肝功能、减少组织损伤。最近，随着细胞生物学和科学技术的发展，干细胞治疗成为目前最有潜力的治疗领域之一。　　miRNA是非编码RNA，它通过和下游的目标基因结合，然后将其降解并抑制其生物学功能。BMSCs能表达多种miRNA，并且通过其外分泌功能，将miRNA转运至靶细胞而发挥其作用。miR-223是BMSCs内高丰度表达的miRNAs之一，且有miR-223-3p和miR-223-5p之分。它们分别是miR-223前体两个臂加工产生的产物，其中miR-223-3p表达较多，而miR-223-5p表达较少（因此又可命名为miR-223*），其下游靶基因也不同。例如miR-223-3p可显著下调Mef2C、PKnox1、CXCL2、CCL3、NLRP3等基因;而miR-223-5p可调节Sema3A、TANK、IRF4等基因。许多研究已经证明了miR-223在自身免疫性疾病及维持免疫稳态中的重要作用，但未见其在自身免疫性肝炎中的研究。　　该文在建立小鼠AIH模型的基础上，探寻并讨论BMSCs对AIH的治疗作用及其发挥作用的原理，并利用miR-223对BMSCs进行修饰，提供一种新的增强BMSCs移植疗效的方法。　　方法：　　首先，用过表达 miR-223 的慢病毒和对照空病毒感染 BMSC ，制备BMSCsmiR-223和BMSCsNC。随后在体外建立共培养体系，分为正常组、炎症组（用250ng/ml的LPS刺激BMSCs 12小时）、BMSCs组（AML12细胞与BMSCs共培养）、BMSCsmiR-223组（AML12 细胞与 BMSCsmiR-223共培养）和 BMSCsNC组（AML12细胞与BMSCsNC共培养），检测各组细胞上清中IL-1β的含量。50只4周龄的雄性C57BL/6小鼠用随机数字法随机挑选10只小鼠用于同种异体肝抗原S100提取，8只作为正常组，剩下32只小鼠用S100进行造模。前述10只小鼠的肝脏用于提取同种异体肝抗原S100，将分离好的S100于实验第1天和第7天采用腹腔注射法注射到小鼠体内（共注射2次），建立实验性自身免疫性肝炎模型。造模过程当中由于注射不当、个体差异等原因小鼠死亡3只，因此剩下的造好模的小鼠随机分为模型组（n=7，注射生理盐水作为对照）、BMSCs组（n=7，注射BMSCs）、BMSCsmiR-223组（n=8，注射转染miR-223的BMSCs）、BMSCsNC组（n=7，注射转染阴性对照慢病毒的BMSCs）。BMSCs组、BMSCsmiR-223组和BMSCsNC组分别于实验第21天、28天、35天通过尾静脉注射相应的干细胞（注射细胞量为2*106/只）。实验第42天，所有小鼠用10%水合氯醛进行全身麻醉，摘下眼球，取血并分离血清于-80℃冰箱储存，用于ALT和AST以及细胞因子的检测;取一小方块肝脏置于4%多聚甲醛中浸泡，用于制备病理切片;剩余肝脏剪碎沥干水分后置于-80℃冰箱保存，用蛋白印迹法、RT-PCR 法进行检测肝内NLRP3和Caspase-1表达;分离脾脏置于组织匀浆液中，用于制备单细胞悬液，测定 Th17 细胞比例。所有数据均为计量资料，用均数±标准差来表示，利用SPSS22.0软件，采用单因素方差分析和SNK-q检验对结果进行分析，若双侧P值小于0.05我们认为差异有统计学意义。　　结果：　　1. BMSCs成功转染miR-223前体。通过荧光显微镜与光镜比较得出转染效率约为 70%左右。RT-PCR 实验结果显示转染后 miR-223-3p 的表达量约为转染前的90倍，而miR-223-5p的表达量并无明显差异。　　2. BMSCs及BMSCsmiR-223在体外与AML12细胞共培养，显著下调由LPS引起的IL-1β升高。共培养结果显示，用BMSCs及BMSCsmiR-223干预后，AML12细胞miR-223表达量上升，其中BMSCsmiR-223组上升最为明显，说明BMSCs成功将miR-223转运至AML12细胞内;ELISA结果显示，干预后BMSCs组IL-1β分泌量显著下降，在BMSCsmiR-223组中表现的更为明显，上述差异有统计学意义。　　3. BMSCs及BMS

关键词： 急性肺损伤   骨髓问充质干细胞   还原型谷胱甘肽   氧化应激  

摘要： 背景:急性肺损伤(acute lung injury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是临床工作中常见严重呼吸系统疾病,发展快,病死率高。ARDS患者常表现为呼吸困难和顽固的低氧血症。尽管急性肺损伤在临床上日益受到重视,但是目前仍缺乏有效的治疗手段,寻找一个更加有效的新治疗方法迫在眉睫。随着人们对间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)研究的不断深入,发现其作为成体干细胞,具有强大的增殖能力、多向分化潜能以及免疫调节功能,可作为理想的种子细胞修复组织器官损伤,有研究表明其对ALI和ARDS的治疗具有一定的临床应用价值,可能是一种潜在的、有前景的新治疗方法。但是,肺损伤微环境中的高氧化应激状态很大程度上严重制约着外源MSC的修复功能。肺损伤微环境中可产生大量活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),移殖的MSC很容易暴露在高活性氧自由基环境中,从而过早的出现凋亡使定植于肺部的MSC数量减少,极大地影响了 MSC治疗急性肺损伤的疗效,因此,如何改善移植后微环境,提高移植细胞的存活率是目前MSC治疗ALI/ARDS所要面临的重要课题。还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)在线粒体氧化还原反应中扮演核心角色。GSH是细胞内的主要抗氧化物,近年来有大量研究表明GSH可以有效的治疗器官的氧化应激损伤,且已应用于临床。本课题基于MSC治疗肺损伤,但是在肺部高氧化应激状态下,MSC容易出现过早凋亡,所以研究GSH能否有效提高MSC的肺部定植率,使其在肺损伤高氧化应激微环境中发挥更好的治疗作用有重要意义。目的:探究还原型谷胱甘肽对大鼠骨髓间充质干细胞的氧化应激保护作用及其对间充质干细胞治疗急性肺损伤的影响。方法:1、大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和鉴定:分离大鼠股骨及胫骨骨髓腔内细胞,使用细胞贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并应用流式细胞术检测技术鉴定细胞表面标记物,应用成脂及成骨诱导培养基培养鉴定MSC的多项分化潜能。2、观察谷胱甘肽对高氧化应激环境中MSC的影响:利用过氧化氢(1mmol/L)制作高氧化应激损伤模型,使用还原性谷胱甘肽(5mmol/L)制作抗氧化模型。流式法观察细胞凋亡率及细胞内ROS水平,蛋白免疫印迹(Western blot)测定细胞bcl-1、p53、p-jnk蛋白表达情况。3、肺损伤模型的建立和MSCs肺内示踪:利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)经鼠尾静脉注射建立大鼠ALI模型,再经鼠尾静脉注射染色剂标记的MSCs。在MSCs注射后的15min,2h,24hand 72h几个时间点分别麻醉并处死大鼠,取出肺组织,利用小动物成像仪分析MSCs在大鼠肺内的留存情况,了解MSCs在大鼠肺内的分布。4、病理评价及肺湿/干重比:各组大鼠处理后获取全肺组织,左侧肺叶制作石蜡切片并HE染色,右侧肺叶测湿/干重。5、统计学分析:本试验数据均为计量资料,所有数据表达为X±SD,采用SPSS13.0分析软件。单组计量资料采用t检验;3组以上独立样本采用单因素方差分析(One-way ANOVA),重复测量资料采用重复测量数据的方差分析,P值小于0.05认为差异有统计学意义。结果:1、大鼠骨髓间充质干细胞在培养皿呈贴壁生长。CD29,CD44,CD90和CD105在细胞中呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达。成骨成脂诱导培养基培养后染色可见脂肪小滴及骨组织。2、过氧化氢对骨髓间充质干细胞处理后,细胞存活率下降,凋亡率升高,细胞内ROS水平升高,p53、p-jnk蛋白表达水平上升,bcl-1蛋白表达水平下降;而谷胱甘肽组的细胞存活率上升,凋亡率降低,细胞内ROS水平下降,p53、p-jnk蛋白表达水平下降且bcl-1蛋白表达水平提高。3、染色标记的MSCs经鼠尾静脉注入大鼠体内后,可观察到注射后15min时肺内有大量的MSCs存留,随后MSCs在肺内逐步减少,72h肺内依然有少量MSCs留存。GSH处理后的MSC在注射后的2h、24h两个时间点内肺部定植率明显高于对照组。4、大鼠尾静脉注射LPS后,病理结果提示肺泡内炎性细胞浸润和肺泡间隔增厚。注射MSCs后肺泡炎性渗出液减少和肺泡间隔变窄。肺组织湿/干重比在大鼠注入LPS后升高,在尾静脉注入MSCs后湿/干重下降。GSH组的湿/干重比与对照组相比虽然数值较低但无统计学差异。结论:1、过氧化氢可导致骨髓间充质干细胞氧化应激损伤,还原性谷胱甘肽能有效减少细胞内ROS水平,并且通过影响相关蛋白的表达从而起到减少细胞凋亡的作用,具有氧化应激保护机制2、GSH处理后的MSC在注射后的2h、24h两个时间点在肺部定植率明显高于

关键词： 骨髓间充质干细胞   病毒性脑炎   免疫炎症  

摘要： 目的:研究骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗对脑炎患儿免疫炎症指标的影响及临床疗效分析.方法:选取本科室收治的18例病毒性脑炎患儿作为研究对象,予MSCs治疗,观察MSCs治疗后的临床疗效及治疗前后患儿外周血淋巴细胞亚群CD19+、CD20+及炎症因子IL-1β、TNF-α的表达情况.结果:与治疗前相比,MSCs治疗后外周血B淋巴细胞CD19+、CD20+比例及炎症因子IL-1β、TNF-α的表达水平明显降低(P<0.05).18例病毒性脑炎患儿经MSCs治疗后,其中15例症状改善,3例症状无明显改善.结论:骨髓间充质干细胞能有效调节病毒性脑炎患儿外周血B淋巴细胞亚群及炎症因子水平并改善临床症状,是治疗病毒性脑炎的一种有效治疗方法.