摘要： Previous studies revealed that Asporin (ASPN) is a potential mediator in the development of various types of cancer as a secreted stroma protein, but the function of ASPN inside the cancer cells remains largely unknown. Here, we demonstrated a higher expression level of ASPN in colorectal cancer (CRC) than matched normal tissues, and 25% (2/8) CRC showed copy number variation (CNV) gain/amplification in ASPN gene. Both higher ASPN expression levels and ASPN CNV gain/amplification indicated a worse prognosis in CRC patients. ASPN can promote proliferation, migration, and invasion of CRC cells, and inhibit apoptosis by activating Akt/Erk and TGF-beta/Smad2/3 signalings. Further investigations revealed that ASPN interacts with Smad2/3, facilitates its translocation into nucleus, and up-regulates the expression of Epithelial-mesenchymal transition (EMT) related genes. Rescue assays confirmed that TGF-beta signaling is essential for the effects of ASPN on promoting CRC cell migration and invasion. In conclusion, ASPN promotes the migration and invasion of CRC cells via TGF-beta/Smad2/3 pathway and could serve as a potential prognostic biomarker in CRC patients.

关键词： 糖尿病心肌病   D-松醇   氧化应激   糖自噬   PI3K/Akt/mTOR信号通路   D-松醇   血管平滑肌细胞   Asporin   细胞外基质  

摘要： 第一部分D-松醇对STZ诱导的SAMP-8小鼠糖尿病心肌病的保护作用及机制研究背景糖尿病心肌病(DCM)是糖尿病重要并发症之一,是指不能用高血压、冠状动脉粥样硬化及其他心脏病变来解释的发生于糖尿病患者的心肌疾病。DCM被认为是引起糖尿病患者心力衰竭及死亡率升高的驱动因素。目前的研究认为DCM的病因主要包括心肌细胞代谢紊乱、心肌细胞钙转运缺陷、冠状动脉微循环障碍、心肌间质纤维化及心脏的自主神经病变等。主要表现是在代谢紊乱及微血管病变的基础上引发心肌广泛灶性坏死,出现亚临床的心功能异常,最终进展为心力衰竭、心律失常及心源性休克,重症患者甚至猝死。目前对DCM的发病机制尚未完全阐明,亦无特异性治疗药物。血糖控制不佳导致的氧化应激反应增加、自噬调节的紊乱,目前被普遍认为是DCM的发病机制之一。D-松醇是D-手性肌醇的衍生物,近年的研究发现,D-松醇能发挥胰岛素类似物的作用,调控血糖,但是它在DCM中的具体作用及机制尚未明确。因此本实验通过研究D-松醇对STZ诱导的糖尿病SAMP-8小鼠心肌氧化应激、心肌细胞凋亡、糖自噬及相关信号通路的作用,探讨D-松醇对糖尿病心肌病的作用及机制。研究目的1.研究D-松醇对SAMP-8小鼠糖尿病心肌病的作用;2.研究D-松醇对SAMP-8小鼠糖尿病心肌损伤的保护作用机制。研究方法1.糖尿病模型的建立:应用快速衰老型小鼠(SAMP-8),采用低剂量的链脲佐菌素(STZ,50mg/kg/day)连续腹腔注射5天,分别于1、2周后通过剪尾法采血测量小鼠血糖,确定建模是否成功。2.分组及灌胃治疗:20只衰老抵抗小鼠(SAMR-1)为正常对照组(SAMR-1组)。SAMP-8小鼠60只分为3组:分别为衰老对照组(SAMP-8组)(建模时腹腔注射等量STZ溶解剂,n=20);糖尿病组(DM组)(建模成功后,每日等体积双蒸水灌胃,n=20);糖尿病治疗组(DMT组)(建模成功后,D-松醇100mg/kg/day灌胃,共10周,n=20)。3.记录血糖、体重的情况:分别记录建模0周,2周,4周,8周,12周各组小鼠血糖及体重情况。4.心脏超声检查:建模后第13周,对各组小鼠麻醉后行经胸心脏超声检测,测量左室射血分数等相关指标。5.心肌氧化应激及自噬等相关指标的检测:Masson染色检测心肌胶原纤维合成情况;ELISA检测心肌组织SOD、GSH、GPx及MDA含量;TUNEL检测各组心肌细胞凋亡情况;透射电镜检测心肌超微结构及自噬体情况;PCR检测各组心肌组织BNP、ANP、α-MHC及β-MHC表达;免疫印迹法检测心肌Nrf2、bcl-2、caspase 3、caspase 9、STBD1、LC3B、Beclin-1、p62、Atg8、PI3K、Akt 及 mTOR 等蛋白表达。研究结果1.建模后第4周、8周及12周,DMT组血糖显著低于DM组;建模后第8周及12周,DMT组体重较DM组升高;2.实验结果发现,与SAMP-8组相比,DM组小鼠左室射血分数减低,心肌肥厚增加,心肌纤维排列紊乱,胶原纤维合成增多,心肌细胞凋亡增加,抗氧化因子合成减少,氧化因子合成增加,自噬体形成增多;3.与DM组相比,DMT组小鼠心脏左室射血分数增加,心肌肥厚及纤维化程度减轻,心肌细胞凋亡减少,氧化应激减轻,自噬体形成减少。PI3K/Akt/mTOR信号通路活跃度增加。结论1.D-松醇对STZ诱导的SAMP-8小鼠糖尿病心肌病具有保护作用;2.D-松醇可以通过调控血糖,改善氧化应激,抑制心肌细胞凋亡,调控糖自噬,调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,改善糖尿病SAMP-8小鼠心肌损伤。第二部分D-松醇对晚期糖基化终末产物诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的保护机制研究背景糖尿病的大血管病变是糖尿病严重的慢性并发症之一,以不断进展的动脉粥样硬化及血管重构为特征。而动脉中膜细胞外基质成分增多和平滑肌细胞增殖及其相互间的关系在糖尿病大血管病的致病过程中起着关键的作用。本实验通过研究D-松醇对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的作用及内在机制,探讨D-松醇对糖尿病大血管病变的保护作用。研究目的1.研究不同浓度D-松醇对VSMC增殖及迁移的作用;2.研究D-松醇对VSMC增殖和迁移的保护作用机制。研究方法体外分离培养小鼠主动脉VSMC,应用AGEs建立血管平滑肌细胞糖基化损伤模型,观察不同浓度的D-松醇对细胞增殖和迁移的影响,应用CCK-8测定细胞增殖,细胞划痕检测细胞迁移,并测定各组细胞中TGF-β 1、p-smad2、p-smad3、Asporin蛋白的表达。研究结果***组细胞增殖、迁移、TGF-ββ1、p-smad2、p-smad3、Asporin蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01);

关键词： Asporin   骨关节炎   细胞外基质   TGF-β1   Smad2/3  

摘要： 一、研究背景骨关节炎(Osteoarthritis，OA)是最常见的关节疾病,主要发生在膝关节,临床表现为膝关节疼痛、肿胀、僵硬和运动功能障碍。OA一直是研究的热点,但其发病机制仍不明确,目前大量研究发现构成细胞外基质蛋白重要组成部分的SLRP家族中的asporin可能与OA的发病有关,但其具体作用机制目前还不清楚。二、研究目的本研究首先明确asporin在OA关节软骨细胞中表达情况,并进一步明确软骨细胞asporin表达对OA病理改变的影响,最后明确OA病程中,关节软骨细胞asporin与TGF-β/Smad信号通路的关系,深入探讨软骨细胞asporin在骨关节炎病程中的作用及其分子机制,为防治骨关节炎提供新的潜在靶点。三、研究方法1、收集临床上OA患者关节软骨标本和因严重外伤需要截肢的正常膝关节软骨标本通过免疫组织化学方法(IHC)检测asporin在节软骨中的表达水平;同时收集骨关节炎患者与正常人血清标本,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中asporin表达情况;利用C57/BL6小鼠构建DMM骨关节炎模型,通过IHC检测asporin在OA发生后4周以及8周后关节软骨中的表达情况。2、构建关节软骨体外移植OA模型,通过IHC检测asporin在小鼠关节软骨中的表达情况。3、利用软骨前体细胞进行体外实验,通过特异性siRNA序列抑制软骨细胞asporin的表达,逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)以及免疫印迹(western blot)来检测软骨细胞外基质成分的表达情况;同时利用具有生物活性的asporin重组蛋白刺激软骨前体细胞,通过RT-qPCR以及western blot检测软骨细胞外基质成分的表达情况。4、对骨关节炎造模(DMM)小鼠进行关节腔内注射载有特异性asporin-siRNA序列的慢病毒,通过免疫荧光(IF)以及IHC检测软骨细胞外基质成分的表达情况,并通过HE染色和番红O-固绿染色来评估关节软骨退变情况。5、通过TGF-β1细胞因子刺激关节软骨前体细胞,并进一步观察asporin对TGF-β1下游信号分子Smad2/3磷酸化表达水平的影响以及其对软骨细胞基质主要组成成分Aggrecan以及COLL2的合成代谢的影响。四、研究结果***在OA患者及小鼠骨关节炎关节软骨中表达较正常组明显升高,同时在OA患者血清中的表达也明显升高。2.关节软骨体外移植OA模型中,与对照组相比,OA组软骨细胞中asporin表达明显升高。3.利用siRNA序列沉默asporin基因后,软骨前体细胞中Aggrecan、COLL2表达升高,而利用asporin重组蛋白刺激软骨前体细胞后Aggrecan、COLL2表达明显下降。4.关节腔内注射慢病毒抑制软骨细胞asporin的表达后,细胞外基质Aggrecan、COLL2的合成增多,关节软骨磨损程度减轻,软骨厚度增加,小鼠关节软骨骨关节炎病理改变得到明显改善,同时关节软骨中Smad2/3磷酸化水平表达升高。***重组蛋白可明显抑制TGF-β1下游信号分子Smad2/3磷酸化水平,同时抑制软骨细胞基质Aggrecan、COLL2的合成;五、研究结论随着骨关节炎病理进展,软骨细胞asporin表达上调;抑制asporin表达可促进细胞外基质成分的合成从而延缓关节软骨的退变;asporin通过抑制TGF-β/Smad2/3信号通路抑制软骨细胞外基质中Aggrecan、COLL2的合成从而参与OA病理进展。

关键词： 腰椎间盘退变   基因治疗   基因表达  

摘要： 腰椎间盘退变造成的腰椎疾病是影响许多人的重要问题,目前此类疾病的临床治疗主要分为保守治疗与手术治疗两种方式,但是这些方法都无法影响腰椎间盘的进一步退变。近些年来,随着临床对腰椎间盘退变的研究深入,发现基因治疗在该病的临床治疗中表现出了较好的应用效果。文章主要针对腰椎间盘退变基因治疗的研究进展展开分析。

关键词： osteoarthritis   susceptibility   asporin   polymorphism   meta-analysis  

摘要： To provide an evidence-based medical basis for the treatment of osteoarthritis, a meta-analysis was performed to assess the association between asporin (ASPN) gene polymorphism and susceptibility to osteoarthritis (OA). The current study searched the literature from January 1st, 1915 through February 1st, 2017 using the Cochrane Library, PubMed, the Excerpta Medica database (EMBASE) and three main Chinese databases (VIP, CNKI and Wan Fang). Cohort and case-control studies that explored the association between different types of ASPN alleles and OA susceptibility were evaluated. The K/L grading system, clinical and radiological diagnoses were used for OA diagnosis. A random-effects model was used in a pooled analysis to adjust for heterogeneity of the included studies, and the differences between treatment groups were reported as odds ratio (OR), 95% confidence intervals (CIs) and P-values. Begg's funnel plots and Egger's tests were used to assess publication bias in the present meta-analysis. Following document retrieval and screening, a total of 10 studies were deemed eligible, including 4,842 patients and 3,661 healthy subjects. Results of the multivariate meta-regression analysis revealed that the study sample size was a source of heterogeneity between studies. The D17 allele was a risk factor for the development of OA (OR=1.33, 95% CI: 1.02-1.73, P<0.05). The other alleles were not considered as risk factors for development of OA (P>0.05). The results of the meta-analysis verified that ASPN polymorphisms were not significantly relevant to an increased OA risk. However, the mechanisms contributing to the association between ASPN polymorphisms and OA risk still require further study.

关键词： 椎间盘退变   慢病毒   MMP3基因   Sox9基因   基因治疗  

摘要： 目的:构建兔椎间盘退变的动物模型,利用慢病毒(lentivirus vector,LV)介导MMP3-siRNA和Sox9双基因体内转染兔退变髓核细胞,探讨单基因及双基因联合转染兔退变髓核细胞的生物学效应。方法:1.4月龄新西兰大白兔使用针刺纤维环法构建兔椎间盘退变实验动物模型,手术后4周、8周行核磁共振检查及病理学检测,观察目的椎间盘的退变情况,及目的椎间盘造模成功情况。2.30只建模成功的新西兰大白兔随机分为6组,分别为(1)空白对照组,(2)PBS对照组,(3)空病毒组,(4)MMP3组,(5)Sox9组,(6)双基因组(MMP3-siRNA+Sox9),分别于造模的椎间盘髓核用微量注射器注入20μL:PBS磷酸盐缓冲液、r LVX-mCMV-mcherry、rLVX-CMV-hMMP3-sh RNA-m CMVmcherry、rLVX-CMV-h Sox9-mCMV-mcherry、rLVX-CMV-hMMP3-sh RNA-m CMVmcherry+rLVX-CMV-hSox9-m CMV-mcherry。于注射后8、12、24周行MRI检查观察椎间盘退变情况。术后24周空气栓塞法处死实验动物,取出目的椎间盘组织,行Western-Blot检查II型胶原、蛋白多糖水平的表达,行RT-PCR检查MMP3mRNA和Sox9 mRNA表达水平。结果:1.手术成功后4周、8周对实验动物行腰椎MRI检查,获得其核磁共振的T2WI像。第8周手术组椎间盘的MRI的T2WI像信号开始减弱,病理学检测结果示椎间盘呈退变改变,提示造模成功。2.将目的基因转染到实验动物体内后8、12、24周行磁共振检查:空白对照组、PBS组、空病毒组退变椎间盘MRI的T2WI像信号强度明显低于MMP3、Sox9和双基因组。空白对照组、PBS组、空病毒组两两比较MRI的T2WI像信号强度比较无统计学意义(P>0.05);MMP3组、Sox9组MRI的T2WI像信号强度比较无统计学意义(P>0.05);MMP3组、Sox9组与双基因组MRI的T2WI像分别比较显示具有统计学意义(P<0.05)。术后第24周,Western-Blot检查各组II型胶原、蛋白多糖表达,其中MMP3组、Sox9组和双基因组的II型胶原表达量有不同程度提高,双基因组II型胶原的表达均高于其他各组(P<0.05)。MMP3组和双基因组蛋白多糖的表达高于其他组(P<0.05),Sox9组与PBS组、空病毒组比较,蛋白多糖表达未见明显升高(P>0.05),双基因组II型胶原的表达均高于其他各组(P<0.05);RT-PCR检查各组MMP3、Sox9 mRNA的表达情况,其中MMP3组、双基因组与PBS组、空病毒组、Sox9组比较MMP3mRNA表达水平明显降低(P<0.05),其中双基因组MMP3 mRNA的表达水平均低于其他各组(P<0.05)。Sox9组和双基因组与PBS组、空病毒组及MMP3组比较Sox9 mRNA的表达水平明显升高(P<0.05),其中双基因组Sox9 m RNA的表达水平均高于其他各组(P<0.05)。结论:1.针刺纤维环法构建兔退变椎间盘实验动物模型方法成功有效,术后8周实验动物椎间盘影像学及病理学检查均显示造模成功。2.慢病毒介导MMP3-siRNA和Sox9双基因体内转染对兔退变髓核细胞有明显的延缓椎间盘退变的作用,明显的促进了退变椎间盘细胞外基质中II型胶原,MMP3-si RNA基因的转染促进蛋白多糖的表达,Sox9基因过表达不会促进蛋白多糖的表达。

关键词： Cardioprotection   Extracellular matrix   Fibrosis   Mitochondria   Remodeling  

摘要： Loss of extracellular matrix architecture during ischemia greatly influences the post-ischemic remodeling process. Transforming Growth Factor (TGF)β is activated in the infarcted myocardium leading to stimulation of fibroblasts to promote fibrosis. Asporin is an extracellular matrix protein from small leucine rich proteoglycans (SLRP) family known to inhibit TGFβ signaling during osteoarthritis. However, little is known concerning the role of asporin in heart in the context of ischemia/reperfusion injury. Using microarray data analysis from publicly available GEO datasets, we recently identified asporin as one of the top up-regulated candidates in heart tissues from patients with ischemic cardiomyopathy compared to control donor hearts. In paired heart biopsies taken before and after cardiopulmonary bypass surgery involving cold cardioplegia, we detected an increase in asporin protein expression post-procedure. Additionally, we found that cardiac asporin protein expression is reduced in ischemic border and scar zone of mice administered permanent coronary artery ligation, where increased TGFβ signaling is known to stimulate fibrosis. However, asporin expression in remote (normal) zone remains unchanged, suggesting its importance in regulating TGFβ signaling in the injured region. We demonstrated that recombinant human asporin (1 μM) stimulates mitophagy in a time-dependent manner in differentiated H9c2 cells. Furthermore, Seahorse respirometry analysis showed that the mitochondrial spare respiratory capacity of H9c2 cells was increased after treatment with recombinant asporin for 24 hours. Based on our preliminary data, we developed a rodent asporin peptide against TGFβ interaction site and tested its efficacy in reducing infarct size in mice subjected to 30 min ischemia and 24hr reperfusion. We found that the peptide reduced infarct size calculated as a percent of area at risk (28.23 ± 4.63 compared to vehicle control 52.18 ± 9.814; n=4) when given 5 minutes before

关键词： 椎间盘退变   慢病毒   Fas基因   Sox9基因   基因治疗  

摘要： 目的:通过慢病毒介导Fas-si RNA和Sox9体内转染兔退变髓核细胞,观察单基因转染与双基因联合转染对退变椎间盘的生物学效应。研究方法:将健康成年新西兰大白兔随机分为5组:***组,B.空病毒组,***-si RNA组,***9组,E.双基因组;针刺椎间盘建立新西兰大白兔退变椎间盘模型,使用微量注射器分别向5组实验兔椎间盘内注入20μL的PBS磷酸盐缓冲液、慢病毒、r LV-h Fas-sh RNA、r LV-h Sox9、r LV-h Fas-sh RNA+r LV-h Sox9;转染后第8周、12周、24周分别对实验动物进行MRI扫描观察其椎间盘信号变化。然后处死实验动物,取出退变椎间盘,应用Western-Blot技术检测椎间盘内II型胶原、蛋白多糖水平,应用RT-PCR技术检测Fasm RNA和Sox9 m RNA表达水平。结果:转染后第8周、12周、24周对实验动物行MRI扫描,观察椎间盘MRI T2加权像信号强度,结果显示:A、B组实验动物退变椎间盘的MRI T2加权像信号较C、D、E组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),A、B两组退变椎间盘MRI T2加权像信号强度相差不大,差异无统计学意义(P>0.05),E组退变椎间盘的MRI T2加权像信号强度高于C、D组,差异有统计学意义(P<0.05);处死实验动物,取出退变椎间盘后,应用Western-Blot技术检测各组椎间盘II型胶原水平,结果显示:C、D、E组椎间盘II型胶原水平与A、B组相比均显著提高,差异有统计学意义(P<0.05),C、D组椎间盘II型胶原水平相差不大,差异无统计学意义(P>0.05),E组椎间盘II型胶原水平均高于C、D组,差异有统计学意义(P<0.05);应用Western-Blot技术检测各组椎间盘蛋白多糖水平,结果显示:C、E组分别与D、A、B组两两比较,椎间盘内蛋白多糖水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);A、B、D组椎间盘内蛋白多糖水平相差不大,差异无统计学意义(P>0.05);E组椎间盘内蛋白多糖水平较C组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);应用RT-PCR技术检测各组椎间盘Fas m RNA和Sox9 m RNA的表达情况,结果显示:C、E组与A、B、D组比较椎间盘Fas m RNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),A、B、D组椎间盘Fas m RNA表达水平相差不多,差异无统计学意义(P>0.05),E组椎间盘Fas m RNA的表达水平低于C组,差异有统计学意义(P<0.05);C、D、E组椎间盘Sox9 m RNA的表达水平明显高于A、B组,差异有统计学意义(P<0.05),A、B组椎间盘Sox9 m RNA表达水平相差不多,差异无统计学意义(P>0.05),D组椎间盘Sox9 m RNA的表达水平高于C组,差异有统计学意义(P<0.05),E组椎间盘Sox9 m RNA的表达水平高于D组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:慢病毒介导Fas-si RNA和Sox9体内转染兔退变椎间盘可以抑制细胞外基质中II型胶原、蛋白多糖的降解,减少髓核细胞凋亡,增加细胞外基质中II型胶原、蛋白多糖含量,从而延缓椎间盘的退变。双基因联合转染较单基因转染延缓椎间盘退变的效果更好,双基因联合转染对延缓椎间盘退变具有协同作用。

关键词： 胰腺癌导管腺癌   细胞间质蛋白   肿瘤增殖   PD-L1受体   PD-1受体   组织表达   临床预后  

摘要： 本文从以下几个方面进行论述：　　第一部分 细胞间质蛋白Asporin对胰腺导管腺癌增殖和凋亡的影响　　目的：　　胰腺癌是消化系统恶性程度最高的肿瘤之一，而且由于其在体内位置隐蔽，不易觉察，大多数病人诊断时已经处于中晚期;目前，传统的治疗手段虽然不断改进，但是对胰腺癌的治疗效果并未取得明显的效果。因此深入研究胰腺癌的发生发展机制，寻找新的治疗方法成为目前非常迫切和必要的问题。本文通过研究胰腺癌微环境中细胞间质蛋白Asporin对肿瘤细胞增殖和凋亡生物行为的影响，从而寻找治疗胰腺癌的治疗途径。　　方法：　　1.细胞间质蛋白Asporin在胰腺导管腺癌组织、细胞中的表达情况　　选择胰腺导管腺癌组织、胰腺导管腺癌细胞系（PANC-1、MIA PaCa-2和AsPC-1，BxPC-3）分别进行免疫组化和免疫荧光探讨细胞间质蛋白Asporin在胰腺导管腺癌组织和细胞中定位，再用Westblot方法探讨细胞间质蛋白Asporin在细胞系PANC-2、MIA PaCa-2、AsPC-1和BxPC-3中的表达量。　　2.胰腺星形细胞来源的细胞间质蛋白Asporin与胰腺导管腺癌细胞中表达的细胞间质蛋白Asporin之间的相互作用　　收集活化星形细胞的上清处理胰腺癌细胞，利用Westblot检测胰腺癌细胞中细胞间质蛋白Asporin的表达情况;收集PANC-1和MIA PaCa-2细胞系上清处理胰腺星形细胞，利用Westblot检测星形细胞中细胞间质蛋白Asporin的表达情况。　　3.通过体外实验和体内实验探讨细胞间质蛋白Asporin对胰腺导管腺癌增殖和凋亡的影响。　　通过CCK-8实验和平板克隆实验探讨细胞间质蛋白Asporin对胰腺导管腺癌增殖的影响;通过流式细胞技术、TUNEL实验和Hoechst实验探讨细胞间质蛋白Asporin对胰腺导管腺癌凋亡的影响;通过稳转技术得到细胞间质蛋白敲低的稳转细胞系，然后通过原位种植在体内验证细胞间质蛋白 Asporin对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。　　4.探讨细胞间质蛋白Asporin对胰腺癌细胞对增殖和凋亡的影响的机制　　利用Westblot检测NFκ B/REGγ信号通路相关蛋白在敲低细胞、过表达细胞和对照细胞的表达情况。　　结果：　　1.通过免疫组化发现细胞间质蛋白既可以表达于胰腺导管腺癌的癌细胞中，又可以表达于胰腺导管腺癌的细胞间质中;通过Westblot发现在胰腺导管腺癌细胞系PANC-1和MIA PaCa-2中高表达细胞间质蛋白Asporin，在AsPC-1和BxPC-3中低表达，通过免疫荧光发现无论在胰腺癌细胞中还是星形细胞中，细胞间质蛋白都表达于细胞质中。　　2.星形细胞来源的Asporin能够促进胰腺导管细胞分泌细胞间质蛋白Asporin;而胰腺导管腺癌来源的细胞间质蛋白Asporin能够促进胰腺星形细胞分泌细胞间质蛋白Asporin。　　3.通过CCK8和平板克隆实验证明细胞间质蛋白Asporin促进胰腺导管腺癌的增殖;通过流式细胞实验、TUNEL实验和Hoechst实验证明细胞间质蛋白抑制胰腺导管细胞腺癌凋亡，通过动物实验证明细胞间质蛋白Asporin抑制胰腺导管腺癌细胞凋亡，促进增殖。　　4.细胞间质蛋白Asporin可能通过NF-κ B/REGγ信号通路调节胰腺导管腺癌的增殖和凋亡生物学行为。　　结论：　　细胞间质蛋白Asporin能够促进胰腺导管腺癌的增殖，抑制凋亡等生物行为，因此它有可能成为胰腺导管腺癌治疗的一个分子靶点。　　第二部分 PD-1/PD-L1在胰腺导管腺癌表达状况及对预后的影响　　目的：　　在许多实性肿瘤中，PD-L1(Programmed death ligand1)被确认为一个有效的治疗靶点。在胰腺导管腺癌中，PD-L1对预后的影响已经被大量研究证实。本研究目的是通过应用体外检测方法检测PD-L1在中国人中的表达情况，从而进一步研究PD-1(programmed cell death protein)作为一个治疗靶点的潜在应用价值。　　方法：　　本研究回顾性收集了373例胰腺导管腺癌的癌组织及癌旁组织的石蜡标本。通过组织芯片仪做成芯片，然后通过免疫组化评估PD-L1和PD-1的表达情况，并进一步评估PD-L1和PD-1表达于患者临床特征的关系。　　结果：　　在373例胰腺导管腺癌中，PD-L1阳性共12例，阳性率为3.2％，PD-1阳性共27例，阳性率为7.5％。同时我们还发现PD-L1主要表达与肿瘤细胞的细胞膜上，而在正常组织未观察到阳性病例。通过统计学分析发现，PD-L1表达与淋巴结转移相关。通过单因素分析发现PD-L1阳性表达与无病生存期和总生存期相关，可以作为患者的预后指标，而在多因素分析中，仅无病生存期与患者预后相关。PD-1表达于淋巴细胞，但

关键词： Osteoarthritis   Asporin   Cartilage intermediate layer protein   Genetic association   Functional variant  

摘要： Background: Osteoarthritis (OA) is the most common degenerative joint disease afflicting people in the Western world and has a strong genetic influence. The aim of this study was to examine the association of two known functional polymorphisms in the TGF-beta inhibiting genes, asporin (ASPN) and cartilage intermediate layer protein (CILP), with hand OA and potential gene-occupational hand loading interaction. Results: Statistically significant interaction of the CILP rs2073711 T and ASPN D15 alleles with hand OA was observed (OR = 2.48, 95% CI 1.27-4.85, p = 0.008) in a Finnish hand. OA cohort of 543 women (aged. 45-63). When stratified by variation in working tasks, low variation of working tasks increased the risk further (OR = 3.00, 95% CI 1.35-6.66, p = 0. 007). Based on the analysis of ASPN and CILP protein-coding regions, functional studies were performed with one observed variant, rs41278695 in the ASPN 'gene. Analyses showed that bone morphogenetic protein 2 (BMP2) mediated expression of aggrecan (Agc1) and type II collagen (Col2a1) was significantly suppressed (p = 0.011 and p = 0.023, respectively) in a murine chondrocytic cell line (ATDC5) with cells stably expressing ASPN rs41278695. Conclusions: The carriage of either ASPN D15 or CILP rs2073711 TT is associated, with increased risk of symmetrical hand. OA, particularly in individuals with low variation in work tasks. ASPN rs41278695 SNP had an effect on Agc1 and. Col2a1 gene expression when induced with BMP-2 suggesting an effect on the cartilage extracellular matrix composition.