关键词： Tau蛋白病   NLRP3炎症小体   乙酰化   小胶质细胞活化   认知功能障碍  

摘要： 背景: 微管相关蛋白Tau（microtubule-associated protein Tau,MAPT）在神经元轴突中高表达,其主要功能是促进微管的组装并维持其稳定性,对于神经元的生长发育以及功能维持等至关重要。Tau蛋白病（Tauopathies）是一类由异常Tau蛋白的聚集导致神经原纤维缠结（neurofibrillary tangles,NFTs）的形成为病理学特征的神经退行性疾病,包括阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）、额颞叶痴呆（frontotemporal dementia,FTD）、进行性核上性麻痹（progressive superanuclear palsy,PSP）、皮质基底节变性（corticobasal degeneration,CBD）以及匹克病（Pick’s disease,Pi D）等。随着人口老龄化日益加剧,Tau蛋白病患者的数量也不断增加,严重危及人类健康,给社会造成了沉重的负担,目前其发病机制尚未完全阐明,且无有效的治疗方式。除了典型的Tau病理之外,Tau蛋白病患者的易感脑区通常伴有由过度活化的小胶质细胞介导的神经炎症反应,神经炎症和Tau病理两者相互影响促进,形成恶性循环,推动疾病不断恶化。尽管既往研究已证明病理性磷酸化或聚集的Tau蛋白可导致小胶质细胞NLRP3炎症小体的组装活化,激活下游信号途径,促进细胞因子IL-1β（interleukin-1β）的释放,启动炎症反应,但其具体机制仍不明确。NLRP3炎症小体的激活受多种翻译后修饰调控,NLRP3特定位点的乙酰化会促进其组装活化。同时,Tau蛋白已被证明具有乙酰转移酶活性,能诱导包括自身在内的多种底物的乙酰化。然而,Tau蛋白是否能通过乙酰化NLRP3促进炎症小体激活,进而诱导小胶质细胞活化介导神经炎症反应的发生尚不清楚。 目的: 探讨揭示Tau蛋白通过乙酰化NLRP3导致炎症小体和小胶质细胞活化的作用与分子机制,为Tau蛋白病发病机制提供新的线索,为疾病治疗和相关药物开发提供新的靶标。 方法: （1）采用免疫沉淀（immunoprecipitation,IP）联合蛋白免疫印迹法（Western blotting,WB）检测AD患者和正常人死后尸检样本的脑海马和皮层组织以及Tau病变转基因小鼠海马组织中总Tau、磷酸化Tau（p Tau）、NLRP3、ASC、切割的Caspase-1（C-Casp1）蛋白以及NLRP3乙酰化（Ace-NLRP3）水平变化;利用Pearson相关性分析法明确Tau/p Tau、Ace-NLRP3和NLRP3炎症小体激活之间的关系; （2）用过表达Tau蛋白的HEK-293T细胞上清或细胞裂解液处理LPS预处理的BV-2小胶质细胞,或在BV-2细胞中直接过表达Tau蛋白:CCK-8法检测过表达Tau蛋白的HEK-293T细胞活力变化;WB检测HEK-293T细胞上清和细胞裂解液中Tau蛋白水平;IP联合WB检测各组BV-2细胞裂解液中NLRP3、ASC、C-Casp1以及Ace-NLRP3水平变化;采用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测各组BV-2细胞培养上清中炎症因子IL-1β水平;在细胞水平,利用Pearson相关性分析法再次明确Ace-NLRP3和NLRP3炎症小体激活之间的关系; （3）以HEK-293T细胞为研究载体,建立体外NLRP3炎症小体活性检测体系,明确比较不同Tau蛋白乙酰化NLRP3和激活NLRP3炎症小体的作用差异; （4）加入重组Tau441蛋白孵育LPS预处理的BV-2细胞,采用免疫荧光（immunofluorescence,IF）染色,显微镜下观察BV-2细胞对Tau蛋白的摄取;用LPS和重组Tau441蛋白处理BV-2细胞的同时,分别加入两种乙酰转移酶抑制剂TPOP146和L-45或过表达去乙酰化酶Sirt2后,IP联合WB检测各组BV-2细胞裂解液中NLRP3、ASC、C-Casp1以及Ace-NLRP3水平变化; （5）采用（3）中的NLRP3炎症小体活性检测体系,构建NLRP3突变体K21R NLRP3、K22R NLRP3以及K24R NLRP3质粒,在供体细胞中同时转染TauS262E和野生型NLRP3或上述突变体、同时转染TauS262E和野生型NLRP3以及Sirt2,检测指标同（3）,明确上述关键位点在Tau介导的NLRP3乙酰化及炎症小体激活中的作用; （6）在HEK-293T细胞中同时过表达EGFP-NLRP3和Flag-Tau441,采用IF观察两者共定位情况,免疫共沉淀（co-immunoprecipitation,Co-IP）检测

关键词： 维持性血液透析   C-反应蛋白与白蛋白比值   红细胞分布宽度标准差   微炎症状态   左心室结构与功能  

摘要： 背景: 近年来,我国维持性血液透析(Maintenance hemodialysis,MHD)人群飞速上升。心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)是MHD患者最严重的并发症,也是其高住院率和高死亡率的首要原因,极大地加重了社会及家庭的负担。引起心血管并发症的因素有很多,MHD的微炎症状态是不同于普通人群发生CVD的重要机制。C反应蛋白与白蛋白比值(C-reactive protein to albumin ratio,CAR)是一种新型炎症指标,与单一指标相比,可更好地反映临床的综合效应,更具可靠性和稳健性。红细胞分布宽度(Red blood cell distribution width,RDW)是反映红细胞体积变异性的指标,已被证实可以反应炎症状态,包括红细胞分布宽度变异系数(Red blood cell distribution width-coefficient of variation,RDW-CV)和红细胞分布宽度标准差(Red blood cell distribution width-standard deviation,RDW-SD)两种。RDW-SD是针对红细胞分布曲线的直接测量,相对于RDW-CV,其结果不受平均红细胞体积(Mean corpuscular volume,MCV)影响,更为可靠。目前关于二者在MHD患者中的研究极少。本研究旨在探讨其与MHD患者微炎症状态及左心室结构与功能的关系,以期为维持性血液透析患者提供新型的受干扰较小的微炎症状态标志物,为早期发现及干预治疗心血管并发症提供新的切入点。 目的: 探讨CAR、RDW-SD与MHD患者微炎症状态及左心室结构与功能的相关性,并探讨它们是否是发生左心室舒张功能障碍(Left Ventricular Diastolic Dysfunction,LVDD)及左心室肥厚(Left Ventricular Hypertrophy,LVH)的独立危险因素,以及其对MHD患者发生左心室肥厚的预测价值。 方法: 严格按照纳入及排除标准选取于河南大学淮河医院血液透析中心治疗的患者100例。收集患者的一般资料、实验室检查和心脏彩超指标。根据CAR和RDW-SD的中位数,以及是否发生舒张功能障碍、左心室肥厚分组,比较各自组间资料差异。采用相关性分析探讨CAR、RDW-SD与各临床指标间的相关性。采用logistic回归分析探索发生LVDD、LVH的独立危险因素。运用受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线评价CAR、RDW-SD对MHD患者发生LVH的预测价值。 结果: ***患者高CAR组和低CAR组间资料比较:高CAR组的WBC、PLT、Neut、RDW-SD、RDW-CV、FIB、CRP、LVDd、E/A、LVMI、LVH占比、LVFS降低占比、LVDD占比高于低CAR组,LVEF、LVFS则低于低CAR组,差异有统计学意义(P<0.05),相关性分析显示:CAR与MHD患者微炎症状态标志物CRP(r=0.986,P<0.001)呈正相关。另外CAR还与PLT、Neut、RDW-SD、RDW-CV、CRP、TG、FIB、IVST、LVDd、E/A、LVMI呈正相关,与LVEF、LVFS呈负相关。 ***患者高RDW-SD组和低RDW-SD组间资料比较:高RDW-SD组的RDW-CV、CRP、CAR、IVST、LVDd、E/A、LVMI、LVH占比、LVEF降低占比、LVFS降低占比、LVDD占比高于低RDW-SD组,高血压占比、Lym、P、LVEF、LVFS则低于低RDW-SD组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示:RDW-SD与MHD患者微炎症状态标志物CRP(r=0.319,P=0.029)呈正相关。另外,RDW-SD还与CAR、RDW-CV、IVST、LVDd、E/A、LVMI呈正相关,与HB、Lym、LVEF、LVFS呈负相关。 ***患者不同E/A水平的资料比较:E/A≥2组的RDW-SD、CRP、CAR、LVMI比E/A≤0.8组和0.8

关键词： 急性冠脉综合征   全身炎症反应指数   C2HEST   新发心房颤动  

摘要： 研究目的: 探讨全身炎症反应指数(中性粒细胞计数×单核细胞计数/淋巴细胞计数,SIRI)联合C2HEST评分对急性冠脉综合征(ACS)患者院内出现新发房颤(NOAF)的预测价值。 研究方法: 选取2023年1月至2023年10月于吉林大学第二医院心血管内科住院治疗,明确诊断为ACS的患者341例,根据是否出现新发房颤(NOAF)分为NOAF组40例和非NOAF组301例,收集两组患者的一般资料、合并疾病、实验室检查及影像学检查结果,并统计心房颤动治疗情况。对上述临床资料对比分析,应用Logistic回归分析影响ACS患者院内出现NOAF的危险因素,绘制ROC曲线评估C2HEST评分、SIRI及二者联合对ACS患者院内出现NOAF的预测价值,统计软件采用SPSS 26.0。 研究结果: 1.一般资料:NOAF组患者年龄高于非NOAF组,有统计学差异(P<0.05)。两组患者在性别、BMI、静息心率、入院时收缩压、入院时舒张压方面比较无统计学差异(P>0.05)。 2.合并疾病:NOAF组患者心力衰竭、慢性阻塞性肺疾病、C2HEST评分高于非NOAF组,有统计学差异(P<0.05)。两组患者在高血压病、糖尿病、甲状腺功能亢进方面比较无统计学差异(P>0.05)。 3.实验室检查结果:NOAF组患者NT-pro BNP、hs-ctni、MYO、WBC、N、SIRI、Cr、ALT及AST均高于非NOAF组,L低于非NOAF组患者,有统计学差异(P<0.05)。而两组在M、Hb、CRP、UA、K、e GFR、FBG、ALb、TG、TC、HDL-C、LDL-C、Hcy方面比较无统计学差异(P>0.05)。 4.影像学检查结果:NOAF组患者左心房内径高于非NOAF组,LVEF低于非NOAF组,有统计学差异(P<0.05)。而两组在病变血管方面比较无统计学差异(P>0.05)。 5.单因素Logistic回归分析结果显示年龄、C2HEST评分、NT-pro BNP、hs-ctni、MYO、WBC、L、SIRI、ALT、AST、LVEF及左心房内径与ACS患者NOAF相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示C2HEST评分、SIRI及左心房内径是ACS患者院内出现NOAF的危险因素(P<0.05)。 ***曲线分析表明,C2HEST预测ACS患者出现NOAF的截断值为2.5(即≥3),曲线下面积为0.745,敏感度为62.5%,特异度为84.7%;SIRI预测ACS患者出现NOAF的截断值为2.776,曲线下面积为0.764,敏感度为60.0%,特异度为84.1%;SIRI及C2HEST评分联合预测的曲线下面积为0.841,敏感度为75.0%,特异度为85.4%,二者联合预测的曲线下面积较单独预测最大。 研究结论: ***患者院内NOAF的发生率为11.7%,不同ACS亚型患者之间NOAF的发生率未见明显差异。 ***、C2HEST评分及左心房内径为ACS患者院内NOAF的危险因素。 ***及C2HEST评分联合预测ACS患者院内NOAF的发生优于单一指标,能够帮助临床医师发现NOAF高危患者,对预防NOAF提供重要参考。

关键词： 缺血性脑卒中   肉苁蓉苯乙醇苷   血脑屏障   小胶质细胞   神经炎症  

摘要： 目的:基于网络药理学技术筛选肉苁蓉抗脑血管疾病的潜在作用靶点;探究肉苁蓉苯乙醇苷改善缺血性脑卒中的药效作用;基于转录组学和分子对接技术研究肉苁蓉苯乙醇苷对缺血再灌注损伤大鼠差异基因表达的影响;基于特异性基因敲除/敲入技术考察肉苁蓉苯乙醇苷对小胶质细胞介导神经炎症的影响;揭示肉苁蓉苯乙醇苷改善缺血性脑卒中后血脑屏障损伤的潜在作用机制。方法:体内采用大鼠大脑中动脉阻闭(MCAO)模型,体外采用BV2小胶质细胞糖氧剥夺(OGD)模型,验证肉苁蓉苯乙醇苷的脑保护作用。(1)采用网络药理学技术预测可能作用的靶点和通路以寻找肉苁蓉的潜在作用机制。(2)观察各组大鼠的行为活动表现、体毛光泽及精神状态等一般情况,每天监测大鼠体重的动态变化。(3)采用Zea Longa单盲法评估神经功能学评分,Eliot干湿重法计算脑组织含水量,TTC染色检测各组大鼠的脑梗死面积。(4)采用H&E染色观察各组大鼠大脑组织结构的变化,Nissl染色检测大鼠尼氏小体改变情况,TUNEL染色观察缺血半暗带神经元死亡。(5)采用Western blot和免疫荧光技术检测各组大鼠脑组织ZO-1,Occludin、MMP-9蛋白的表达水平,检测各组大鼠脑组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、TGF-β、BDNF的表达含量。(6)采用Western blot和免疫荧光技术检测肉苁蓉苯乙醇苷对小胶质细胞M1-M2极化的影响。(7)采用RNA-seq测序技术考察肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠缺血/再灌注损伤的影响。(8)采用免疫共沉淀技术考察肉苁蓉苯乙醇苷对HMGB1赖氨酸乙酰化的影响。(9)采用Western blot和免疫荧光技术检测肉苁蓉苯乙醇苷对HMGB1细胞核/质转移的影响。(10)采用Western blot和免疫荧光技术检测肉苁蓉苯乙醇苷对小胶质细胞HMGB1/TLR4/NLRP3信号通路蛋白表达的影响。(11)采用ELISA法检测小胶质细胞上清液中IL-1β和IL-18的表达含量。(12)采用HMGB1特异性激动剂/抑制剂验证小胶质细胞介导神经炎症在肉苁蓉苯乙醇苷改善缺血性脑卒中血脑屏障损伤中的作用。结果:(1)肉苁蓉与脑血管疾病筛选得到85个共同靶点,对85个共同靶点进行富集分析发现炎症相关信号通路与脑血管疾病具有密切关系。(2)与模型对照组大鼠相比,肉苁蓉苯乙醇苷显著改善大鼠神经功能评分、减少脑梗死面积、减轻脑水肿。(3)与模型对照组大鼠相比,肉苁蓉苯乙醇苷显著抑制缺血半暗带组织神经细胞死亡。(4)肉苁蓉苯乙醇苷处理抑制了MCAO大鼠脑组织Iba-1的表达,促进了小胶质细胞M1-M2极化过程,显著降低了促炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达,同时增加了抗炎症因子IL-10、TGF-β、BDNF的表达含量。(5)肉苁蓉苯乙醇苷干预增加了MCAO大鼠血脑屏障结构和紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin)的表达水平,同时降低了MMP-9的含量。(6)RNA-seq分析结果显示,肉苁蓉苯乙醇苷治疗与56个关键基因的表达变化有关,其对炎症相关脑缺血损伤的治疗作用主要与NOD样受体信号通路有关。(7)分子对接结果显示,HMGB1、TLR4和NLRP3可能是肉苁蓉苯乙醇苷能够治疗缺血性脑卒中相关损伤的主要靶点。(8)免疫共沉淀结果显示,肉苁蓉苯乙醇苷显著抑制了BV2细胞中HMGB1赖氨酸乙酰化水平。(9)肉苁蓉苯乙醇苷处理不仅降低了BV2细胞中HMGB1的总蛋白表达,而且抑制了HMGB1的易位和释放。(10)肉苁蓉苯乙醇苷降低了体内和体外模型中HMGB1、TLR4、My D88、p-P65和NLRP3的蛋白表达水平,强调了通过调节HMGB1/TLR4/NLRP3信号轴发挥作用的能力。(11)观察到肉苁蓉苯乙醇苷影响小胶质细胞的炎症和焦亡反应,抑制焦亡相关蛋白(Caspase-1和GSDMD)和炎症相关蛋白(IL-1β和IL-18)的表达水平,可能在介导肉苁蓉苯乙醇苷改善缺血性脑卒中血脑屏障损伤中扮演关键作用。(12)联合特异性激动剂/抑制剂后,进一步明确了肉苁蓉苯乙醇苷可通过HMGB1促进小胶质细胞极化介导神经炎症的能力。结论:本研究的结果表明小胶质细胞介导神经炎症参与了缺血性脑卒中的发生发展,肉苁蓉苯乙醇苷能通过HMGB1/TLR4/NLRP3信号通路调节神经炎症因子的表达,促进小胶质细胞极化过程,重塑血脑屏障的结构和功能,抑制因调节HMGB1赖氨酸乙酰化引起的炎症、焦亡等不良效应。有效的改善了缺血性脑卒中诱发的血脑屏障损伤。为肉苁蓉的临床评价和新药开发提供了新的实验依据和研究思路。

关键词： 胶质瘤   全身免疫炎症指数   高级别胶质瘤   Nomogram模型   logistic回归分析  

摘要： 背景和目的: 胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤之一,是成人最常见的原发性恶性脑肿瘤,脑胶质瘤五年相对生存率为35.6%。目前,脑胶质瘤的标准治疗方案通常包括最大程度安全手术切除、术后放疗和替莫唑胺化疗的联合应用。尽管采用了多模式治疗策略,但高级别胶质瘤(High grade glioma,HGG)患者的预后仍然不容乐观,其中位总生存期不足16个月。因此,迫切需要能够评估胶质瘤高低级别的相关标志物,从而尽早对患者进行干预。有研究发现,免疫微环境与肿瘤有密切关联,相关慢性炎症支持免疫抑制,炎症过程可增加肿瘤细胞的增殖和存活。全身免疫炎症指数(Systemic immunoinflammatory index,SII)是炎症反应的标志物,现已被证明与多种肿瘤相关。这就引起思考,即SII和其他临床变量是否在预测胶质瘤等级中具有价值。本研究回顾性分析了我院的123例胶质瘤患者的临床资料,分析各变量与胶质瘤等级的相关性,从而评估发生HGG的独立危险因素,构建并评估列线图模型,为临床早期诊治胶质瘤做出贡献。 方法: 回顾性分析2022年9月到2023年12月吉林大学第一医院神经外科行手术治疗经病理学确诊为胶质瘤的患者的临床资料。采用SPSS 20.0统计学软件和R语言软件进行数据分析和统计可视化。对于连续性变量,根据ROC曲线确定各变量的最佳截断值,并将其二分类化。对于分类变量,使用频数和构成比进行描述,然后通过卡方检验或Fisher确切概率法进行组间差异比较。将各变量纳入单因素Logistic回归分析,随后将影响指标纳入多因素Logistic回归分析筛选患者发生HGG的独立危险因素。然后,利用R 4.3.2软件构建Nomogram模型,并绘制ROC曲线、校准曲线、DCA和CIC,以评估模型的性能和临床效用。双尾P值<0.05被认为具有统计学意义。 结果: 在根据纳入和排除标准筛选后,共纳入120例患者进行分析。绘制各项变量的ROC曲线,以确定各变量的最佳截断值,从而对变量赋值处理。按照胶质瘤高低级别分为两组,组间比较结果显示:患者在年龄、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、血小板计数、SII、Ki-67、肿瘤最大径方面存在显著差异(P<0.05),在性别、BMI之间无显著差异(P>0.05)。按照高SII与低SII分为两组,组间比较结果显示:患者在中性粒细胞计数、血小板计数、Ki-67、胶质瘤等级方面存在显著差异,在性别、年龄、BMI、淋巴细胞计数、肿瘤最大径未表现出显著差异(P>0.05)。 单因素分析结果显示:胶质瘤的高低级别与年龄、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、血小板计数、SII、Ki-67、肿瘤最大径相关(P<0.05),而入组患者的性别和BMI与胶质瘤的高低级别无显著关联(P>0.05)。排除了混杂因素后的多因素分析结果显示:淋巴细胞计数>2.095×10^9/L(OR:0.82,95%CI:0.73-0.91,P<0.001)、SII>398.2×10^9/L(OR:1.15,95%CI:1.02-1.31,P=0.027)、Ki-67>12.5%(OR:1.63,95%CI:1.43-1.85,P<0.001)、肿瘤最大径>3.6cm(OR:1.13,95%CI:1.02-1.26,P=0.024)是预测HGG独立风险因素。 模型构建及评估:我们基于独立危险因素构建发生HGG的预测模型,发现模型在本数据集中的ROC曲线下面积(AUROC)为0.918,校准曲线展示该模型的预测状况较好。在DCA和CIC中,发现在较大阈值范围内,本模型展现出较强的临床预测性。 结论: 1.淋巴细胞计数>2.095×10～9/L、SII>398.2×10～9/L、Ki-67>12.5%、肿瘤最大径>3.6cm是发生HGG的独立风险因素。 ***是HGG的独立预测因素,高SII与HGG有显著相关性。SII在区分胶质瘤等级具有一定的诊断准确性,仍需要更多的研究来证实这些结果。 3.我们基于4个独立危险因素构建了临床预测模型,模型的区分度、校准度和临床决策能力均较好,具有较高的预测准确性。