关键词： 痛风性关节炎   线粒体自噬   PRDX3  

摘要： 目的:过氧化物还原酶3(Peroxiredoxin-3,PRDX3)作为唯一定位于线粒体的过氧化物还原酶(Peroxiredoxins,PRDXs)家族的成员,通过调节线粒体活性氧(Mitochondrial Reactive Oxygen Species,mt ROS)从而影响线粒体内的氧化还原过程。基于本课题组前期的研究数据发现,PRDX3在急性痛风性关节炎患者的外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中表达增高,PRDX3调节单钠尿酸盐(Monosodium urate monohydrate,MSU)晶体所诱发的炎症反应的具体分子机制仍不清楚,以此为切入点我们展开进一步验证和研究,分析了PRDX3在急性痛风患者中的表达,并探索了PRDX3在MSU晶体所介导的痛风炎症反应中的作用及分子机制,同时探索了与线粒体自噬的关系,旨在为治疗痛风性关节炎寻求新的潜在治疗靶点。 方法:1.通过收集健康人和痛风患者临床血标本,分离外周血单个核细胞(PBMCs),检测PRDX3的表达。2.使用小鼠来源骨髓单核巨噬细胞(BMDMs),通过si RNA抑制PRDX3和质粒pc DNA3.1过表达PRDX3,经脂肪酸(FAs,C16)辅助刺激加MSU晶体刺激后,RT-q PCR检测IL-1β、COX-2、i NOS炎症因子m RNA水平,Western Blot检测细胞中COX-2、i NOS、NLRP3炎症因子的蛋白水平,流式细胞术检测线粒体活性氧及线粒体膜电位;通过透射电镜观察线粒体内部结构情况。*** RNA抑制PRDX3后,用FAs+MSU晶体刺激BMDMs细胞后,提取蛋白进行生物信息学分析及蛋白组学检测。4.通过Western Blot、RT-q PCR及免疫荧光实验,探究了CD36和IRGM1的表达。5.使用si RNA抑制BMDMs细胞的IRGM1,经FAs+MSU晶体刺激,通过Western Blot实验检测P62、LC3的蛋白水平;通过溶酶体绿色荧光探针检测溶酶体活性和透射电镜检测自噬体的形成;通过免疫荧光检测LAMP1的表达。 结果:PRDX3在急性痛风患者的PBMCs中表达高于健康人。抑制PRDX3后,经FAs+MSU晶体刺激,相关炎症因子及IRGM1、CD36的表达降低,线粒体活性氧下降,线粒体膜电位水平上升,细胞内线粒体嵴较对照组清晰,且线粒体电子致密度较对照组降低。抑制IRGM1后,经FAs+MSU晶体刺激,LC3、P62的表达降低,溶酶体内PH值降低,LAMP1的表达上升,自噬体生成较对照组减少。 结论:PRDX3可能通过调节IRGM1的表达,影响线粒体的功能、自噬体的形成和溶酶体降解系统,进而调节MSU晶体所诱导的炎症反应。

关键词： 颅内动脉粥样硬化性疾病   急性缺血性卒中   高分辨率磁共振血管壁成像   全身炎症反应指数  

摘要： 目的:本研究旨在探讨全身炎症反应指数(Systemic inflammatory response index,SIRI)与颅内斑块特征的相关性,以及与急性脑缺血事件严重程度和复发相关的危险因素。 方法:本研究共纳入170例由颅内动脉粥样硬化(intracranial atherosclerosis disease,ICAD)所致的急性脑缺血事件患者,并完成所有研究对象的基线人口统计学特征和实验室指标等的收集。所有患者均通过高分辨率磁共振血管壁成像(High-resolution magnetic resonance vessel wall imaging,HR-MR-VWI)评估犯罪斑块特征和ICAD整体负担,并采用血常规计算SIRI。基线时根据所有受试者SIRI水平的三分位数将患者分为低、中、高SIRI水平三组;然后,基于入院时美国国立卫生研究院卒中量表(The National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分和弥散加权成像(Diffusion weighted imaging,DWI)将患者分为三组,包括短暂性脑缺血发作组(Transient ischemic attack,TIA)、轻度卒中组(NIHSS score≤3分)、中重度卒中组(NIHSS score≥4分);最后,根据患者有无复发分为复发组和非复发组。Spearman相关性分析及多样本方差分析被用于评估SIRI水平与犯罪斑块特征、ICAD整体负担之间的相关性。TIA、轻度卒中组、中重度卒中组的临床指标与影像特征之间的差异通过多元有序逻辑回归完成,被筛选的变量进一步与NIHSS评分进行线性逻辑回归分析。最后,多因素Cox回归分析被用于探索与缺血性卒中复发相关的独立危险因素。 结果:SIRI水平与增强的斑块数量(r=0.205,p=0.007)、斑块狭窄总评分(r=0.178,p=0.020)、斑块增强总评分(r=0.222,p=0.004)、斑块内出血(intraplaque hemorrhage,IPH),(F=5.630,p=0.004)和斑块表面不规则度(F=3.986,p=0.021)显著相关。较高的SIRI水平(OR=1.892)、斑块增强总分(OR=1.392)、IPH(OR=3.370)和斑块表面不规则(OR=2.846)是中重度卒中的独立危险因素,且与NIHSS评分呈显著正相关(P均<0.05)。此外,较高的年龄(HR=1.063,P=0.015)、较高的SIRI水平(HR=2.003,P<0.001)和IPH(HR=4.482,P=0.008)与卒中复发独立相关。 结论:较高的SIRI水平可能对颅内斑块的易损性和负荷产生不利影响,并与急性脑缺血事件的严重程度和复发相关。因此,SIRI可能为评估颅内斑块稳定性和患者危险分层提供重要的补充信息。

关键词： lncRNA NEAT1   miR-22-3p   NF-κB信号通路   棕榈酸   肝细胞损伤  

摘要： 目的:非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的发病率在全球范围内呈上升趋势,与肥胖和代谢综合征的流行密切相关。它的发病机制复杂,主要涉及肝细胞脂质蓄积、脂质代谢紊乱、脂质过氧化增加、炎症级联反应、脂毒性肝细胞损伤和表观遗传因素等,其中脂毒性诱导的肝细胞损伤和炎症反应是其发病机制中最为重要的驱动因素,因此深入研究其调控机制具有重要意义。研究发现长链非编码RNA(lncRNA)在调控炎症反应、物质代谢和免疫损伤等过程中具有重要功能,通过调节基因转录、信号通路转导等途径发挥作用。核旁富集转录本1(NEAT1)是lncRNA的一种,已被证实在多种炎症性疾病中异常表达促进疾病进展。然而,lncRNA NEAT1是否参与NASH中由脂毒性诱导的肝细胞损伤与炎症反应及其调控的具体分子机制值得进一步探索。因此,本研究旨在确定lncRNA NEAT1如何调节脂毒性诱导的肝细胞损伤与炎症反应,并了解其潜在分子机制。 方法:1.以人正常肝细胞系(LO2细胞)为研究对象,使用终浓度为0.32mmol/L的棕榈酸(PA)处理LO2细胞24 h构建脂毒性肝细胞损伤模型。采用油红O检测细胞内脂质积累情况;甘油三酯(TG)酶法检测细胞内TG含量;CCK-8法检测细胞存活率的变化;生化试剂盒检测肝细胞损伤指标ALT、AST含量;定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测细胞内和培养液上清中炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)mRNA转录和蛋白分泌水平,确立脂毒性肝细胞损伤模型建立成功; 2.采用qRT-PCR检测PA处理后LO2细胞中lncRNA NEAT1基因的表达情况; 3.采用过表达质粒(pcDNA-NEAT1)或小干扰RNA(si-NAET1)瞬时转染LO2细胞实现过表达或抑制lncRNA NEAT1,检测其表达水平变化对PA诱导的LO2细胞损伤与炎症反应的影响,并检测对NF-κB信号通路关键蛋白(p-NF-κB p65、IκBα、NF-κB p65入核)的影响。采用qRT-PCR验证转染效率;CCK-8、ALT/AST生化试剂盒、qRT-PCR和ELISA检测细胞活力、肝细胞损伤指标及炎症因子的变化;蛋白质印迹和免疫荧光检测NF-κB信号通路关键蛋白表达变化; 4.通过LncBook网站预测lncRNA NEAT1下游的靶分子miRNA,转染lncRNA NEAT1过表达质粒或小干扰RNA检测其水平变化对该靶分子的影响; 5.采用qRT-PCR检测PA处理后LO2细胞中miR-22-3p基因的表达情况; 6.采用模拟物(mimics-miR-22-3p)或抑制剂(inhibitor-miR-22-3p)瞬时转染LO2细胞实现过表达或敲低miR-22-3p,检测其表达水平变化对PA诱导的LO2细胞损伤与炎症反应的影响,并检测对NF-κB信号通路关键蛋白表达的影响; 7.转染lncRNA NEAT1的小干扰RNA(si-NEAT1)或共转染miR-22-3p的抑制剂(inhibitor-miR-22-3p),检测抑制lncRNA NEAT1及在抑制其基础上敲低miR-22-3p对PA诱导的LO2细胞损伤及炎症反应的影响,并检测对NF-κB信号通路关键蛋白表达的影响; 结果:***处理后LO2细胞内出现脂滴沉积,甘油三酯(TG)含量增加,细胞活力降低,肝细胞损伤指标ALT、AST含量增加,炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β在mRNA和蛋白水平表达均显著上调(P<0.05),提示脂毒性肝细胞损伤模型建立成功; ***处理后LO2细胞中lncRNA NEAT1基因的表达显著增加(P<0.05); 3.过表达lncRNA NEAT1后,进一步促进PA诱导的LO2细胞活力下降,肝细胞损伤加重,炎症因子升高并促进NF-κB信号通路的激活(P<0.05);抑制lncRNA NEAT1后,细胞活力有所升高,肝细胞损伤恢复,炎症因子降低,并抑制NF-κB信号通路的活化(P<0.05); 4.利用LncBook网站预测lncRNA NEAT1与miR-22-3p具有潜在结合位点,qRT-PCR检测发现lncRNA NEAT1负向调控miR-22-3p的表达(P<0.05); ***处理后LO2细胞中miR-22-3p基因的表达显著下调(P<0.05); 6.过表达miR-22-3p缓解PA诱导的LO2细胞活力降低,细胞损伤及炎症因子表达和NF-κB信号通路的激活。敲低miR-22-3p后细胞活力进一步降低,肝细胞损伤加重,炎症因子升高并促进NF-κB信号通路的活化(P<0.05)。 7.抑制lncRNA NEAT1后miR-22-3p基

关键词： 免疫营养   结直肠癌   免疫炎症反应   预后  

摘要： 目的:结直肠癌患者的营养支持是围手术期治疗和管理的重要组成部分,目前研究表明术前口服营养制剂对于改善结直肠癌患者围手术期的营养状况有着积极作用,其中营养制剂多为整蛋白等要素制剂,有利于患者肠道吸收,提高机体蛋白水平及手术耐受性,但结直肠癌患者术前营养不良也伴随着免疫功能低下、抗炎反应弱等问题,现有传统营养制剂中大多缺乏人体相关免疫营养素,对于患者免疫功能、抗炎能力的调节作用有限,本文通过探讨术前使用免疫型营养制剂对结直肠癌患者术后营养状况、免疫炎症反应及预后的影响,旨在为临床制定结直肠癌患者术前营养支持的方案提供更多样、更优化的选择依据。 方法:纳入2023年5月至2023年10月期间于重庆医科大学附属第一医院胃肠外科就诊的符合条件的结直肠癌患者105例,按随机数字表法分为研究组及对照组,研究组54例(术前3天流质饮食及口服免疫营养制剂),对照组51例(术前3天仅流质饮食)。采集患者年龄、性别、BMI、NRS-2002评分、基础疾病、原发肿瘤部位、分化程度及分期等基本信息;统计患者干预前总蛋白、前白蛋白、白蛋白、淋巴细胞总数等营养指标水平,IgG、IgM、IgA、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞等免疫指标水平,CRP、IL、TNF、IFN等炎症指标水平,在行腹腔镜下结直肠癌根治术后第3天复查上述指标,同时收集患者手术时长、术中出血量、是否输血等术中信息,以及反映患者术后预后的指标,如有无腹腔感染、肺部感染、尿路感染、切口感染、消化道出血、肠梗阻等并发症及是否入住ICU、白蛋白使用量、抗生素使用时间、住院时长等信息,将所得数据经SPSS27.0统计学软件进行处理,比较两组病人术后营养指标、免疫指标、炎症指标较术前变化的差异及结直肠癌术后并发症的发生率、临床疗效情况。 结果:两组患者干预前各营养指标、免疫指标、炎症指标水平差异无统计学意义,具有可比性(P>0.05)。两组患者术后总蛋白、前白蛋白、白蛋白、淋巴细胞总数平均水平低于术前,但研究组术后总蛋白、白蛋白、淋巴细胞总数平均水平高于对照组(P<0.05),前白蛋白平均水平无显著性差异(P>0.05)。两组患者术后IgG、IgM、IgA等体液免疫指标和CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞等细胞免疫指标平均水平下降,但研究组平均水平优于对照组(P<0.05)。两组患者术后CRP、IL、TNF、IFN等炎症因子平均水平较干预前均增加,但研究组CRP及IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-α、IFN-γ等促炎性细胞因子平均水平低于对照组(P<0.05),而两组IL-4、IL-10、IL-12等抗炎性细胞因子平均水平无显著性差异(P>0.05)。研究组术后感染性并发症发生率、白蛋白使用量、应用抗生素时间、住院时长均低于对照组(P<0.05),而非感染性并发症发生率、手术时长、术中出血量、术后入住ICU率两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论:术前应用免疫营养制剂有利于改善结直肠癌患者术后营养状况,提高机体免疫水平、减轻炎症反应,以降低术后并发症发生风险,减少临床抗生素、白蛋白等昂贵药物使用,并且加快术后康复。

关键词： 全身炎症总指数GRACE评分   非ST段抬高型心肌梗死   经皮冠状动脉   介入治疗   主要不良心血管事件  

摘要： 目的: 探讨非ST段抬高型心肌梗死(Non-ST-segment elevation myocardial infarction,NSTEMI)患者入院当天的全身炎症总指数(Aggregate Index of Systemic inflammation,AISI)和全球急性冠状动脉事件登记(Global Registry of Acute Coronary Events,GRACE)评分与接受经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)后在院期间及出院后6个月内预后的关系,进一步比较GRACE评分、AISI以及两者联合对近期预后的预测价值,为AISI及GRACE评分在预测NSTEMI患者PCI术后的预后方面提供相关理论依据。 方法: 本研究选取246例于2019年01月01日至2021年12月31日在我院首次诊断为NSTEMI并接受PCI治疗的住院患者。采集并记录所有入组患者入院当日的临床基线资料,对所有患者入院当天进行GRACE评分和的AISI的计算。随访的终点事件为患者住院期间及出院后6个月内出现主要不良心血管事件(Major adverse cardiovascular events,MACE),以是否发生MACE作为观察终点,将研究患者分为事件组(n=68例)和非事件组(n=178例)。根据AISI中位数(358.06),将研究人群划分为低AISI组(AISI≤358.06,n=123)和高AISI组(AISI>358.06,n=123)。以GRACE 140分为界,将患者分为两大组:低GRACE组(GRACE评分≤140分,n=94)和高GRACE组(GRACE评分>140分,n=152)。应用SPSS 25.0统计软件,组间进行临床资料、基线情况的比较与分析。用Spearman对AISI与GRACE风险评分进行相关性分析。应用单因素、多因素logistic回归模型来进一步探讨GRACE评分和AISI与NSTEMI患者PCI术后近期发生MACE的关系,明确入院当天GRACE评分和AISI与患者近期发生MACE的潜在关系。应用受试者工作曲线分析法(receiver oPerating curve,ROC)来比较AISI与GRACE评分,以及两者联合对NSTEMI患者PCI术后近期发生MACE的预测价值。检验水准α=0.05。 结果: 1.与非MACE组比较,MACE组患者的AISI和GRACE评分均显著升高(P<0.001),同时在WBC(P=0.005)、PLT(P=0.001)、NC(P=0.011)、MO(P=0.001)、Ln NT-proBNP(P<0.001)、Cr(P=0.009)方面数值都较大;而MACE组患者较非MACE组收缩压(P=0.041)、LC(P<0.001)、LVEF(P<0.001)均较低,两组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。 2.与低AISI组比较,高AISI组患者的MACE发生率和GRACE评分均明显上升(P<0.05),同时心率(P=0.017)、WBC(P<0.001)、PLT(P<0.001)、NC(P<0.001)、MO(P<0.001)、NT-pro BNP(P<0.001)的数值都显著增加;而高AISI组患者较低AISI组LC(P=0.001)、LVEF(P<0.001)均较低,两组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。 3.通过散点图及斯皮尔曼相关(Spearman)分析结果得,AISI与GRACE风险评分之间存在显著的相关性,且两者的相关关系为正向的弱相关(r=0.305,P<0.001)。 4.对随访期内研究对象发生MACE的单因素Logistic回归分析,发现与NSTEMI患者PCI术后近期发生MACE显著性相关的因素有(P<0.05):糖尿病史(OR=2.328,95%CI 1.316-4.116,P=0.004)、收缩压(OR=0.985,95%CI0.971-0.999,P=0.042)、Ln NT-pro BNP(OR=2.721,95%CI 1.893-3.912,P<0.001)、AISI(OR=1.217,95%CI 1.140-1.299,P<0.001)、GRACE评分(OR=1.042,95%CI 1.028-1.056,P<0.001)和LVEF(OR=0.869,95%CI0.832-0.908,P<0.001)。将单因素分析中具有统计学意义的因素纳入多因素Logistic回归分析中,结果提示:AISI(OR=1.142,95%CI 1.062-1.229,P<0.001)、GRACE评分(OR=1.021,95%CI 1.005-1.038,P=0.011

关键词： 急性ST段抬高型心肌梗死   经皮冠状动脉介入治疗   全身免疫炎症指数   纤维蛋白原和白蛋白比值   预后  

摘要： 目的:探讨全身免疫炎症指数(systemic immune inflammation index,SII)、血清纤维蛋白原与白蛋白比值(fibrinogen to albumin ratio,FAR)单独及两者联合与急性ST段抬高型心肌梗死(acute ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI)的相关性分析,及两者对STEMI患者接受直接经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术后3年全因死亡的预测价值。 方法:本研究为回顾性研究了泰州市第二人民医院心内科于2019年1月至2019年12月期间,224例ACS并行冠脉造影检查的患者,其中STEMI患者155例,NSTEACS(non-ST elevation acute coronary syndrome,非ST段抬高急性冠脉综合征)患者69例。详细记录入选患者的人口学特征、临床资料及随访信息。计算所有患者的SII及FAR值,采用多因素logistic回归模型分析经混杂因素调整后的SII、FAR与STEMI的发生有无相关性。患者随访截至2022年12月,应用logistic回归和ROC曲线分析SII、FAR对于STEMI患者接受直接PCI术后发生死亡的预测价值。 结果: ***组和NSTEACS组患者SII和FAR水平及检验结果比较 STEMI组和NSTEACS组SII和FAR水平存在显著差异(p<0.05),白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、糖化血红蛋白、纤维蛋白原、肌酐、尿酸水平,以及心衰和吸烟者比例的组间差异也有统计学意义(p<0.05)。 ***患者的高危因素 多因素二元logistic回归分析结果显示,吸烟、肌酐、SII、FAR与STEMI的发生相关。在调整了其他潜在混杂因素后,SII与FAR与STEMI对应的比值比(95%置信区间,p值)分别为1.002(1.001-1.003,p<0.001)和1.364(1.128-1.650,p=0.001)。 ***患者中,死亡与非死亡患者的基本资料分析 在155例STEMI患者中,根据随访至2022年12月,其中存活134例(存活组,n=134例)、死亡21例(死亡组,n=21例),两组患者间比较,死亡组基线年龄更高,中性粒细胞计数、淋巴细胞计数更低,肌酐及SII更高,差异有统计学意义;而FAR评分在两组间无显著差异。 ***患者死亡的高危因素 多因素二元logistic回归分析结果显示,基线年龄、SII及Gensini积分与STEMI患者的死亡风险有关(p<0.05)。 ***及Gensini积分预测STEMI患者死亡的ROC曲线 应用ROC曲线评估SII及Gensini积分对于STEMI患者死亡的预测效能,以SII作为独立指标变量,结果显示SII的AUC为0.784(95%CI 0.677-0.892),p<0.001,灵敏度、特异度及约登指数分别为85.7%,64.2%,0.499。Gensini积分AUC为0.654(95%CI 0.525-0.782),p<0.05。灵敏度、特异度及约登指数分别为38.1%,93%,0.311。 结论:1、SII、FAR与STEMI的发病相关。2、与单独的SII或FAR相比,SII联合FAR对患者发生急性ST段抬高型心肌梗死的发生具有更好的临床相关性。3、SII和Gensini积分是STEMI患者直接PCI术后3年全因死亡发生的独立预测因素,为临床早期识别高危患者、预测患者短期不良预后提供参考。

关键词： 腹膜纤维化   HPMC转分化   PDL1   sPD1   GSK3β   snail   PDL1-MSA  

摘要： 长期暴露于高糖腹膜透析液,易导致腹膜透析患者腹膜结构和功能发生改变,超滤失败和腹膜纤维化,是腹膜透析技术失败和退出腹膜透析的重要原因,腹膜固有免疫环境的改变在这一过程中发挥重要作用。本课题通过观察腹膜纤维化患者的免疫环境改变,发现人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cell,HPMC)的程序死亡配体1(programmed death ligand 1,PDL1)在长期腹膜透析患者呈现高表达,并与腹膜功能改变密切相关。然而,目前尚未有关于它们是否参与腹膜纤维化的相关研究报道。 PDL1作为免疫检查点分子,主要通过调节T细胞等免疫细胞的活性或组织细胞的蛋白表达进而发挥生物学作用。早期PDL1被认为是PD1通路的一部分环节,本身对细胞无实质性功能,而近期研究发现PDL1可诱导肿瘤细胞发生转分化,促进免疫逃逸。这一发现对于了解其在胚胎发育、组织纤维化、细胞增殖、凋亡以及肿瘤发生发展中的作用提供了新的视角。 PDL1不仅在多种肿瘤组织中表达升高,与侵袭和转移相关,新近的研究发现PDL1还与肺脏、肝脏的慢性炎症及纤维化发生相关,可通过参与细胞转分化,在纤维化过程中具有重要的调节作用。然而PDL1在其他组织纤维化,尤其是腹膜纤维化中的作用尚未见报道。我们的前期实验结果显示,在高糖刺激后的HPMC中,PDL1表达明显增加,但其参与HPMC转分化的分子机制尚不清楚。 糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)被认为是HPMC转分化的关键分子,通过调节转录因子snail的表达影响腹膜纤维化。生物信息学预测分析显示,GSK3β可能是PDL1的下游靶分子,二者在细胞系中的表达呈负相关关系。PDL1通过激活丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路促进GSK3β磷酸化,从而促进磷酸糖原合成酶激酶3β(phosphorylated glycogen synthetase kinase 3β,P-GSK3β)的产生,这一过程减少GSK3β对snail的泛素化。那么,PDL1是否通过GSK3β参与了HPMC转分化?在腹膜纤维化过程中炎症因子是否影响着HPMC的PDL1的表达?这些问题将是本课题的研究重点,通过收集不同腹透时间的腹透患者研究对象样本以及体内外实验,本研究将对慢性微炎症作用下,PDL1通路介导的HPMC转分化,最终导致腹膜纤维化的分子机制提供新的视角。 【目的】 1.通过研究对象样本中检测PDL1在长程腹膜透析患者中的表达情况; 2.通过体外实验探讨高糖刺激下发生转分化的HPMC中PDL1的表达及作用机制; 3.通过小鼠模型,细胞共培养等探讨外源性PDL1融合蛋白PDL1-MSA减轻腹膜纤维化的作用。 【方法】 研究对象样本检测 1.收集腹膜透析患者的外周血淋巴细胞、血浆、腹透流出液离心细胞及腹透上清液,ELISA技术检测患者血浆及腹透液中s PD1表达;PCR及q PCR技术检测外周血淋巴细胞中PD1的可变剪接; 2.通过腹膜透析置管或拔管术,获得腹膜组织;流式细胞术及免疫组化技术检测不同透析时间的腹膜透析患者中腹膜组织的免疫检查点PDL1表达情况; HPMC体外实验 1.高糖刺激永生化的HPMC,使其发生细胞转分化,Western blotting和免疫荧光技术检测PDL1及间质标志分子α-SMA、snail的表达情况; 2.利用PDL1-短发夹RNA(PDL1-short hairpin RNA,PDL1-sh RNA)慢病毒转染HPMC,Western blotting和免疫荧光技术检测下调PDL1的HPMC中,间质标志分子α-SMA、snail的表达情况; ***3β抑制剂SB216763作用于PDL1抑制的HPMC,Western blotting和免疫荧光技术检测抑制GSK3β活性的HPMC中PDL1及间质标志分子α-SMA、snail的表达情况; PDL1-MSA干预实验 1.采用Transwell共培养干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)刺激的人白血病T细胞(human leukemia T lymphocytes,Jurkat)和HPMC,ELISA技术检测上清液中s PD1的表达水平。在Transwell共培养的体系中加入PDL1-MSA,进而中和上清液s PD1,Western blotting和免疫荧光技术检测HPMC中PDL1及间质标志分子α-SMA、snail的表达情况; 2.利用4.25%的腹膜透析液建立小鼠腹膜纤维化模型,在腹腔中注射PDL1-MSA,Masson、HE及免疫组化技术检测小鼠腹膜形态变化、腹膜组织中PDL1