关键词:
多囊卵巢综合征
炎症因子
氧化应激
维生素D
摘要:
目的 探讨维生素D辅助二甲双胍+达英35对多囊卵巢综合征大鼠炎症状态及氧化应激的影响,并初步探讨NF-κB信号通路在其中的作用。
方法 1选取48只3周龄雌性SD大鼠随机分为对照组(n=9,普通饲料喂养)和造模组(n=39,来曲唑溶液灌胃、高脂饲料喂养),持续28天。采取以下方法进行模型鉴定:阴道细胞学观察动情周期;ELISA法测定血清T、FSH、LH、FINS,罗氏血糖仪测定FPG,计算HOMA-IR指数;随机选取对照组和造模组大鼠各3只,取卵巢,行HE染色,观察卵巢形态学变化。2随机选取36只造模成功的PCOS大鼠,分为:模型组(未治疗)、VD治疗组(VD)、常规治疗组(二甲双胍+达英35)、辅助治疗组(二甲双胍+达英35+VD)、抑制剂组(BAY11-7082)、激动剂组(二甲双胍+达英35+VD+PMA),普通饲料喂养,每组6只,连续治疗21天。3实验Ⅰ:维生素D辅助二甲双胍+达英35对PCOS大鼠炎症状态及氧化应激的影响,选择对照组、模型组、VD治疗组、常规治疗组和辅助治疗组进行以下指标检测:阴道细胞学检测各组动情周期变化;HE染色观察各组大鼠卵巢形态学变化;测定血清FPG、FINS、T、FSH、LH、TC、TG、HDL-C、LDL-C;ROS、MDA、T-SOD、GSH测定各组大鼠氧化应激水平;免疫荧光检测卵巢组织中巨噬细胞标记物F4/80,免疫组织化学法检测卵巢组织中M1和M2型巨噬细胞标记物i NOS、CD206,Western blot检测卵巢组织中炎症因子IL-6、IL-17、TNF-α、CRP、IL-10和NF-κB信号通路p-NF-κB p65、NF-κB P65、p-IκBα、IκBα蛋白。4实验Ⅱ:探讨维生素D辅助二甲双胍+达英35是否通过NF-κB信号通路发挥作用,选择对照组、模型组、抑制剂组、辅助治疗组和激动剂组进行指标检测,检测内容同实验Ⅰ。
结果 1模型鉴定:造模组体质量增加,动情周期紊乱,血清中T、LH、FINS、FPG升高,FSH降低,LH/FSH和HOMA-IR指数均高于对照组(P<0.05);造模组卵巢呈多囊样改变,颗粒细胞层变薄,黄体数量减少。2实验Ⅰ:(1)经21天药物治疗,各治疗组大鼠体质量降低,动情周期改善,卵巢囊状卵泡减少,颗粒细胞排列整齐、层数增多,各级卵泡及黄体数量增多(P<0.05);与常规治疗组比较,辅助治疗组囊状卵泡数量减少,动情期延长(P<0.05),动情周期恢复。(2)与模型组比较,各治疗组血清FPG、FINS、HOMA-IR指数降低(P<0.05),FSH升高、T、LH、LH/FSH降低(P<0.05),TC、TG降低(P<0.05),常规治疗组和辅助治疗组LDL-C降低,HDL-C升高(P<0.05);与常规治疗组比较,辅助治疗组FINS、T、LH/FSH、TC、TG降低,FSH升高(P<0.05)。(3)与对照组比较,模型组卵巢组织F4/80、i NOS表达增强,CD206表达减弱(P<0.05);与模型组比较,各治疗组F4/80、i NOS表达减弱,CD206表达增强(P<0.05);与常规治疗组比较,辅助治疗组F4/80表达减弱,CD206表达增强(P<0.05)。(4)与对照组比较,模型组卵巢组织IL-6、IL-17、TNF-α和CRP升高,IL-10降低(P<0.05);与模型组比较,各治疗组IL-6、IL-17、TNF-α和CRP降低,IL-10升高(P<0.05);与常规治疗组比较,辅助治疗组TNF-α和CRP降低,IL-10升高(P<0.05);(5)与对照组比较,模型组大鼠ROS和MDA升高,GSH及TSOD降低(P<0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠ROS和MDA降低,GSH和T-SOD升高(P<0.05);与常规治疗组比较,辅助治疗组ROS降低,GSH升高(P<0.05)。(6)模型组总蛋白p-NF-κB p65、p-IκBα及核内NF-κB p65蛋白水平高于对照组(P<0.05);辅助治疗组总蛋白p-NF-κB p65、p-IκBα、及核内NF-κB p65蛋白水平低于模型组和常规治疗组(P<0.05)。3实验Ⅱ:(1)抑制剂组大鼠体质量小于模型组(P<0.05),动情周期恢复正常,卵泡多囊样改变减轻;激动剂组大鼠体质量大于辅助治疗组(P<0.05),动情周期紊乱,卵巢呈多囊样变化。(2)与模型组比较,抑制剂组血清FPG、FINS、T、LH、TC、TG、LDL-C降低(P<0.05),FSH、HDL-C升高(P<0.05),LH/FSH和HOMA-IR均降低(P<0.05);与辅助治疗组比较,激动剂组血清FPG、FINS、T、LH、TC、TG、LDL-C升高(P<0.05),FSH、HDL-C降低(P<0.05),LH/F