关键词： 牙周膜干细胞   基质细胞衍生因子-1α   趋化因子受体   4   肿瘤坏死因子-α   内皮向分化   炎症微环境  

摘要： 牙周炎是常见的慢性炎症性疾病，它可以导致牙周组织不可逆性的破坏，同时炎症可以刺激血管形成，破坏的牙周组织处有大量的炎性肉芽组织形成。牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs）定植在牙周膜中并具有多向分化能力。有研究证实间充质干细胞（mesenchymal stem cells， MSCs）的分化是受组织微环境调节的。同样牙周膜干细胞的分化也受组织微环境的调控。有报道显示，由于炎症微环境中存在大量的血管形成因子，这些因子有利于干细胞向内皮细胞分化。那么牙周炎症微环境是否促进牙周膜干细胞的内皮向分化以及调节其内皮向分化的机制还不清楚。基质细胞衍生因子-1α（stromal cell derived factor-1α，SDF-1α）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是存在于牙周炎症微环境中与牙周炎发展密切相关的重要因子。SDF-1α是重要的血管形成因子，它可以诱导趋化因子受体4[chemokine(c-x-c motif) receptor4，CXCR4]阳性表达的间充质干细胞分化为内皮样细胞。促炎因子TNF-α是SDF-1α/CXCR4轴的关键调节者，TNF-α可以通过上调SDF-1α或CXCR4的表达促进SDF-1α/CXCR4轴介导的反应。在本研究中将初步观察TNF-α和SDF-1α/CXCR4轴在牙周膜干细胞内皮向分化中的作用及二者之间的调控关系。 研究目的： 初步探讨炎症微环境下牙周膜干细胞内皮向分化能力及其分子机制。 研究方法： 1.采用酶消化联合组织块法培养正常及炎症牙周组织来源的牙周膜干细胞；克隆形成实验观察两种干细胞的克隆形成能力；流式细胞仪检测两种干细胞表面分子标志物的表达；成骨诱导后茜素红染色并进行定量分析比较两种干细胞的成骨分化能力。 ***-time PCR检测两种干细胞中SDF-1α、CXCR4表达的差异；SDF-1α诱导两种干细胞，Real-time PCR检测血管内皮相关基因CD31、vWF的表达差异；Matrigel基质胶管腔形成实验观察两种干细胞管腔形成情况，倒置显微镜下拍照，统计管腔形成数量并进行比较。 ***-8法检测TNF-α对牙周膜干细胞生长的影响；Real-time PCR检测TNF-α对牙周膜干细胞SDF-1α、CXCR4表达的影响。 4.利用Real-time PCR和Western Blot比较单纯SDF-1α诱导组、TNF-α预处理后SDF-1α诱导组、TNF-α预处理后AMD3100阻断再加SDF-1α诱导组的血管内皮相关基因CD31、vWF、KDR和蛋白vWF、VE-cadherin的表达情况；Matrigel基质胶管腔形成实验观察TNF-α预处理后SDF-1α诱导组和TNF-α预处理后AMD3100阻断再加SDF-1α诱导组的管腔形成情况。 研究结果： 1.原代培养的两种牙周膜干细胞细胞形态为长梭形并呈漩涡状或放射状排列，具有间充质干细胞的形态特征及克隆形成能力；流式细胞仪结果显示两种干细胞均阳性表达CD105、CD90、CD29、CD146，阴性表达CD34、CD45、CD31；茜素红染色显示经诱导后的两种干细胞均可见矿化结节形成，定量分析结果显示炎症牙周组织来源的牙周膜干细胞成骨能力较弱。 ***-time PCR结果显示炎症牙周组织来源的牙周膜干细胞低表达SDF-1α、高表达CXCR4；两种干细胞经SDF-1α诱导后，血管内皮相关基因CD31、vWF表达水平和管腔形成能力均明显高于未经SDF-1α诱导的对照组，两种细胞间相比，经SDF-1α诱导后的炎症牙周组织来源的牙周膜干细胞中的CD31mRNA、vWF mRNA的表达水平和管腔形成能力均明显高于正常牙周组织来源的牙周膜干细胞。 ***-8法结果显示1ng/mL TNF-α和10ng/mL TNF-α对牙周膜干细胞生长无明显影响，100ng/mL TNF-α明显抑制牙周膜干细胞的生长；Real-time PCR结果显示10ng/mL TNF-α抑制牙周膜干细胞表达SDF-1α，促进牙周膜干细胞表达CXCR4。 ***-time PCR和Western Blot显示牙周膜干细胞经TNF-α预处理后加SDF-1α诱导组其血管内皮相关基因和蛋白表达水平均明显高于单纯SDF-1α诱导组；同时经TNF-α预处理后加入CXCR4抑制剂AMD3100再加SDF-1α诱导的实验组，血管内皮相关基因和蛋白表达水平以及管腔形成能力均明显降低。 结论: 炎症微环境可以促进牙周膜干细胞的内皮向分化能力，其分子机制为TNF-α通过上调牙周

关键词： 动物模型   变应性鼻炎   最轻持续炎症状态   嗜酸性粒细胞   细胞间黏附分子-l  

摘要： 目的:通过制作稳定的小鼠变应性鼻炎最轻持续炎症状态(MPI)的模型,对变应性鼻炎MPI期有初步的了解,为进一步对MPI期的深入研究提供实验基础。方法:选用BALB/c系小鼠60只,SPF级,雌性,随机分为4组,每组15只。A组为阳性对照组,B组为实验组即MPI组,C组为阴性对照组,D组为空白对照组。A,B,C组小鼠分别于第1天,第8天,第15天腹腔注射以含OVA、Al(OH)3的PBS致敏液进行致敏;第22天起A,B,C组小鼠给予OVA鼻腔激发,连续l周;成功建立AR模型后,从第29天起,对A、B、C组小鼠分别以40mg/ml OVA,4mg/ml OVA及PBS液进行长期滴鼻刺激,持续三周,D组小鼠始终以PBS溶液代替OVA进行致敏及滴鼻。然后对小鼠鼻腔激发后进行症状学评估,检测鼻中隔黏膜嗜酸粒细胞浸润的程度,观察上皮细胞内细胞间黏附分子ICAM-1表达的情况。结果:鼻腔激发后,A、B、C三组小鼠均成功建立AR模型,三组小鼠间症状学评分差异无统计学意义(P>0.05);MPI模型组(B组)小鼠在改为4mg/ml OVA溶液滴鼻后,喷嚏、流涕、抓鼻等症状渐消失,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01),与C、D组比较差异无统计学意义(P>0.05),但MPI模型组鼻中隔黏膜仍有少量嗜酸性粒细胞浸润,上皮细胞轻度表达ICAM-1,与C、D组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:以OVA致敏和激发BALB/c系小鼠,可成功建立小鼠变应性鼻炎模型;在建立稳定的小鼠AR模型基础上,通过给予长期低浓度OVA鼻腔刺激,可以成功制作小鼠变应性鼻炎最轻持续炎症状态模型,此方法具有操作简单、成功率高、重复性好的优点,为进一步对变应性鼻炎MPI期进行深入研究及针对MPI期的治疗提供了良好的实验基础。

关键词： 亚砷酸钠   细胞恶性转化   炎症反应   上皮-间质转化   肿瘤干细胞特性   缺氧诱导因子  

摘要： 砷化物是人类确定致癌物,亚砷酸钠(NaAsO2)是砷元素在环境中存在的主要形式。长期摄入砷化物可引起多种癌症,其中主要是皮肤癌、肺癌和膀胱癌等,砷化物已被国际癌症研究机构(IARC)确认为人类确定(I类)致癌物。但由于砷化物致癌实验动物模型一直未能成功建立,导致其致癌机制研究长期滞后。近年来砷化物所致细胞恶性转化和DNA损伤及细胞凋亡的体外模型已被应用于其致癌机制研究。炎症微环境是肿瘤的一个重要形成要素,炎症微环境中的细胞因子能够诱导抑癌基因突变和表观遗传学改变从而引起细胞内环境紊乱最终导致肿瘤的发生和演进。肿瘤是在各种致瘤因素作用下,细胞本身遗传学或表观遗传学的内在改变和炎症微环境中的细胞因子的外在作用共同诱发和促进的。因此,研究砷对于炎症微环境调控的分子机制对于阐明其致癌机制具有重要意义。上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)和肿瘤干细胞(Cancer stem cells,CSCs)样特性获得参与了多种疾病,特别与恶性肿瘤的发生和发展有关。近年,虽然EMT和CSCs特性获得与肿瘤细胞恶性程度和转移关系及其分子机制的研究已成为热点,但对于EMT和CSCs特性获得在环境致癌物所致细胞恶性转化及致癌过程中的作用和分子机制的研究报道甚少。因此深入研究调控砷化物诱导EMT过程中CSCs特性获得在恶性转化过程中的作用及其分子机制对于寻找砷化物致癌的早期生物学标志及发现新的防治措施具有重要理论意义和实用价值。第一部分HIFs在亚砷酸钠所致细胞恶性转化和DNA损伤中的作用及分子机制目的:研究在正常氧浓度下,NaAsO2对缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factors,HIFs)的调控机制,探索HIFs在NaAs02所致细胞增殖和恶性转化及DNA损伤和凋亡中的作用。方法:本研究选取人支气管上皮(HBE)细胞进行研究,建立NaAsO2所致HBE细胞增殖和恶性转化及DNA损伤和细胞凋亡模型;软琼脂集落形成实验和裸鼠致瘤实验检测细胞恶性程度,碱性彗星实验和Hochest染色实验检测细胞DNA损伤和凋亡;western blot和RT-PCR技术检测丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路及 HIFs 的表达情况;应用蛋白酶体抑制剂MG132联合NaAsO2处理,免疫共沉淀实验检测HIFs的蛋白泛素化情况;应用抑制剂,siRNA干涉和质粒转染技术探讨HIFs在NaAsO2所致细胞增殖和恶性转化及DNA损伤和凋亡中的作用。结果:1.亚砷酸钠对HBE细胞恶性转化和DNA损伤的影响用 0.0、1.0、5.0 和 10.0μM NaAsO2 处理 HBE 细胞 24 h,结果显示 1.0μM NaAsO2引起HBE细胞增殖明显升高,而10.0 μM NaAsO2引起HBE细胞增殖降低,且表现出明显DNA拖尾和细胞凋亡现象;选取0.0和1.0 NaAsO2慢性处理HBE细胞30代(约15周)。结果发现1.0μM NaAsO2慢性处理的HBE细胞能在软琼脂上形成集落,裸鼠皮下形成肿瘤,肿瘤组织病理学切片显示为低分化上皮样癌细胞。提示NaAsO2在低水平引起HBE细胞增殖和恶性转化;而在高水平则引起HBE细胞DNA损伤和凋亡。2.亚砷酸钠对HBE细胞MAPKs和HIFs的影响用 0.0、1.0、5.0 和 10.0 μM NaAsO2 处理 HBE 细胞 24 h,结果发现 1.0 μM NaAsO2 引起 HBE 细胞胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)和 HIF-2α 水平升高;10.0 NaAsO2 引起 HBE 细胞 c-Jun N-端激酶(c-Jun N-terminal kinases,p-JNK)和HIF-lα水平升高。结果说明低水平NaAsO2主要激活ERK信号通路和诱导HIF-2α水平升高,而高水平NaAsO2主要激活JNK信号通路和诱导HIF-1α水平升高。***调控HIF-2α在低水平亚砷酸钠所致HBE细胞p53功能抑制中的作用分别用0.0和10.0 μM ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125预处理HBE细胞3h后,再分别用0.0和1.0μM NaAsO2处理HBE细胞24 h,结果发现阻滞ERK激活能逆转1.0μM NaAsO2对HBE细胞HIF-2α蛋白的泛素化降解的抑制作用,从而使HIF-2α的水平降低;分别用0.0和1.0 μM NaAsO2慢性处理HBE细胞30代(约15周),结果发现p-p53水平在恶性转化HBE细胞中明显降低;进一步用0.0和1.0 μM NaAsO2处理HBE细胞3、6、12

关键词： 气道上皮细胞   LPS   p120   NF-κB   炎症反应   p120   炎症反应   RhoA   NF-κB  

摘要： 一、目的 本实验采用脂多糖(LPS)刺激体外培养的人气道上皮细胞建立气道上皮炎症反应模型,检测连环素p120(简称p120)蛋白的表达变化、NF-kB信号通路的活化及其下游靶基因IL-8的表达变化,初步探讨人体气道炎症发生的分子机制。 二、方法 根据MTT结果及本实验室前期研究,选取20μg/ml LPS作为致炎因子处理培养的人气道上皮细胞；运用免疫荧光、细胞核浆分离提取蛋白及Western blot技术检测刺激前后p120、抑制蛋白IkBa及NF-kB亚基p65蛋白表达的改变及p65是否发生核内转位；运用ELISA和荧光实时定量PCR技术分别检测IL-8表达量的改变；运用瞬时转染及特异性siRNA技术以增强或敲低细胞中p120的表达,进一步验证p120与NF-kB信号通路之间的关系。 三、结果 Ⅰ.Western blot、荧光实时定量PCR及免疫荧光染色证实p120存在于人气道上皮细胞中,而且,与对照组比较,LPS刺激后p120蛋白表达下调。 Ⅱ.细胞核浆分离提蛋白及Western blot技术检测发现LPS刺激人气道上皮细胞后,NF-κB信号通路活化——NF-κB p65总蛋白表达增多,而且转位入核,其抑制蛋白IκBα表达逐渐减少。同时,荧光实时定量PCR和ELISA显示NF-κB下游的靶基因IL-8的表达量较未给予LPS刺激的对照组明显增多,差异具有显著性。 Ⅲ.外源性高表达p120及siRNA技术使细胞中p120低表达后,进一步验证p120与NF-kB信号通路之间的关系。实验结果表明,外源性p120过表达后,NF-kB p65总蛋白量几乎无改变,p65未发生核转位,IL-8的表达水平变化不大。然而,LPS刺激后,过表达组IL-8表达较对照组明显降低(P<0.001)。p120敲低后NF-kB信号通路显著活化——NF-kB p65总蛋白表达增多,p65转位入核,IL-8表达水平增加(P<0.001)。进一步证明LPS诱导的气道炎症反应中,p120可能通过负性调控NF-kB信号通路抑制炎症反应。四、结论 LPS诱导的气道炎症反应中,p120蛋白表达下调,NF-kB信号通路活化；过表达p120可抑制NF-kB信号通路,敲低p120后NF-kB信号通路显著活化。我们推测,LPS刺激可能通过下调p120进而活化NF-kB信号通路引起气道上皮的炎症反应。 一、目的 本实验通过LPS刺激及机械划伤建立体外培养的人气道上皮细胞炎症反应模型,检测RhoGTP酶家族蛋白RhoA活性变化及其与p120、NF-kB之间的关系,探讨气道炎症中p120调控NF-kB信号通路活化的可能分子机制。 二、方法 运用免疫共沉淀及Western blot方法检测刺激前后RhoA总蛋白表达改变及其与p120的结合情况：运用G-LISA方法检测RhoA活性变化；采用RhoA下游ROCK抑制剂Y26732抑制RhoA活性后,通过细胞核浆分离提取蛋白及Western blot检测NF-kB的活性变化；使用瞬时转染外源性p120质粒及特异性siRNA技术干预p120表达,进一步观测气道上皮细胞中RhoA活性变化及其与p120、NF-κB之间的关系。 三、结果 Ⅰ.免疫共沉淀结果首次显示气道上皮细胞中RhoA与p120相互作用并存在于同一复合物中。 ***刺激和机械划伤方法处理气道上皮细胞后,Western blot及免疫共沉淀结果显示RhoA总蛋白以及与p120结合的RhoA蛋白改变不明显,但G-LISA检测发现RhoA活性显著上升。 Ⅲ.运用抑制剂Y27632抑制RhoA活性后,细胞核浆分离提取蛋白及Western blot结果显示气道炎症反应中NF-kB p65亚基的入核被部分抑制。 Ⅳ.p120过表达后,与对照组相比,尽管RhoA活性无变化,但LPS刺激后,p120过表达组RhoA活性明显下降(P<0.001)；同样,机械划伤刺激后,p120AN过表达组RhoA活性明显下降(P<0.05),同时,IL-8表达下调。 ***敲低p120后,RhoA总蛋白无变化,与p120结合的RhoA随着p120表达缺失而无法检测。G-LISA检测发现RhoA活性显著上升,LPS刺激和机械划伤后,RhoA活性升高更为显著(P<0.001及P<0.05)。同时,机械划伤后IL-8表达增加,差异具有显著性。 四、结论 Ⅰ.气道上皮细胞中,RhoA与p120存在于同一复合物中。气道炎症反应中,虽然RhoA总蛋白以及和p120结合的RhoA蛋白无变化,但RhoA活化。 Ⅱ.抑制剂Y27632抑制RhoA活性后,NF-kB活化被部分抑制。 Ⅲ

关键词： 自发性高血压大鼠   养肝益水颗粒   高血压早期肾损害   大鼠尾动脉收缩压   尿mALB   ICAM-1   PPARγ   eNOS  

摘要： 目的：观察养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat，SHR)早期肾损害炎症的抑制作用。 方法：以12周龄同源同系雄性SHR(n=16)为研究对象，同周龄WKY(Wstar-Kyoto，WKY)大鼠8只做为正常对照。大鼠适应性饲养一周后，将SHR随机分为SHR模型组、养肝益水颗粒大剂量组、养肝益水颗粒中剂量组，西药组四组。所有大鼠给予标准大鼠饲料喂养，每周另喂2次鸡蛋白，1/4个/只/次，实验各组在12周龄开始，分别给予饮用水、养肝益水颗粒大、中剂量、贝那普利干预；于实验前(12周龄)、实验第6周、第12周时(给药第18周，28周龄)分别用尾套法测量SHR大鼠尾动脉收缩压，放射免疫法测定尿微量白蛋白(尿mALB)浓度；RT-PCR检测各组肾组织ICAM-1mRNA、PPARγmRNA表达；western-blot检测肾脏组织ICAM-1、eNOS蛋白表达。 结果：与模型组比较，养肝益水颗粒大、中剂量组、西药组可以明显降低SHR尾动脉血压水平(P<0.05或P<0.01)；而且能明显降低尿中的Malb（P<0.05或P<0.01），养肝益水颗粒大、中剂量组小鼠肾组织中ICAM-1mRNA、PPARγmRNA、ICAM-1、eNOS表达水平下降(P<0.05或P<0.01)。养肝益水颗粒可以进行性降低大鼠血压，并能减少SHR大鼠的尿微量白蛋白、能够降低肾组织ICAM-1mRNA、PPARγmRNA、ICAM-1及eNOS蛋白表达，改善高血压肾损害大鼠病情。 结论：养肝益水颗粒可以抑制SHR炎症因子表达，从而减轻肾脏组织的损害、达到对肾脏的保护作用。

关键词： 骨化三醇   维生素D   血液透析   炎症   心肌病,肥厚性  

摘要： 目的探讨活性维生素D3对维持性血液透析患者微炎症状态及左心室肥厚的影响。方法选取2011年4月—2013年12月在我院接受维持性血液透析治疗的患者32例,根据血清全段甲状旁腺激素(iPTH)水平给予不同剂量活性维生素D3口服。活性维生素D3在透析后当晚服用,12周为1个疗程。检测所有患者治疗前后血清IL-6、hs-CRP水平,并进行超声心动图检查,记录左室后壁厚度(PWT)、左房内径(LAD)、左室收缩末期内径(LVDs)、室间隔厚度(IVST)及左室舒张末期内径(LVDd)。结果本组患者治疗前血清IL-6水平为(21.1±5.7)ng/L,治疗后为(14.3±4.7)ng/L;治疗前血清hs-CRP水平为(14.9±3.1)mg/L,治疗后为(10.1±2.7)mg/L;治疗后血清IL-6、hs-CRP水平均低于治疗前(P<0.05)。本组患者治疗后PWT、LAD、LVDs、IVST、LVDd分别为(11.6±0.8)cm、(30.2±1.7)cm、(30.8±2.1)cm、(12.9±0.9)cm、(55±5)cm,均低于治疗前的(13.5±1.9)cm、(33.6±1.8)cm、(36.1±2.7)cm、(14.8±1.1)cm、(57±5)cm(P<0.05)。结论活性维生素D3有助于改善维持性血液透析患者微炎症状态及左心室肥厚,提高血液透析治疗效果。

关键词： Procalcitonin   Systemic inflammatory response syndrome   Cardiac surgery   Infection   C-reactive protein  

摘要： Background: This study was performed to assess the value of procalcitonin (PCT) for the differential diagnosis between infectious and non-infectious systemic inflammatory response syndrome (SIRS) after cardiac surgery. Methods: Patients diagnosed with SIRS after cardiac surgery between April 1, 2011 and March 31, 2013 were retrospectively studied. A total of 142 patients with SIRS, infectious (n = 47) or non-infectious (n = 95), were included. The patients with infectious SIRS included 11 with sepsis, 12 with severe sepsis without shock, and 24 with septic shock. Results: PCT, C-reactive protein (CRP), and the white blood cell (WBC) count were significantly higher in the infectious SIRS group than in the non-infectious SIRS group. PCT had the highest sensitivity and specificity for differential diagnosis, with a cut-off value for infectious SIRS of 0.47 ng/mL. PCT was more reliable than CRP in diagnosing severe sepsis without shock, but it was not useful for diagnosing septic shock. The PCT cut-off value for diagnosing severe sepsis without shock was 2.28 ng/mL. Conclusions: PCT was a useful marker for the diagnosis of infectious SIRS after cardiac surgery. The optimal PCT cut-off value for diagnosing infectious SIRS was 0.47 ng/mL.

关键词： Menopause   HDL functions   homocystein   malondialdehyde  

摘要： Objective: Obesity and age related vascular changes coupled with the effect of estrogen withdrawal increases predisposition to atherosclerosis in postmenopausal women. But the functions of high density lipoprotein (HDL) were not well established in postmenopausal women. In the present study, we mainly aimed to evaluate the changes in the functions of HDL and aimed to measure, lipid peroxidation, lipid profile and homocysteine levels as a supporting evidence in pre and postmenopausal obese women as a result of estrogen depletion. Material and Methods: This study included 20 premenopausal, 22 postmenopausal 42 obese (BMI>30 kg/m2) and 26 premenopausal non-obese. These twenty six premenopausal women with normal BMI (20

关键词： 慢性肾脏病   微炎症状态   超敏C反应蛋白  

摘要： 背景： 近年来，随着对慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)发病机制及其并发症研究的深入,微炎症状态引起了人们的重视。微炎症状态(microinflammatory state)，是指非微生物感染引起的血液循环中细胞因子及正性时相反应蛋白轻度持续升高，并能够促进患者肾功能恶化及并发症发生的慢性非显性炎症状态[1]。C反应蛋白(CRP)是正性时相反应蛋白之一,CRP低水平持续升高，但不超过10-15mg/L是微炎症状态的标志。随着实验方法学的不断改进，超敏C-反应蛋白(hs-CRP)可以检测出低水平的CRP浓度，更早、更好反应CKD患者的微炎症状态反应微炎症状态，健康人的hs-CRP小于3mg/L,当其超过3mg/L，即使的临床感染症状不明显，也代表机体存在感染时相的病理反应过程。CKD患者体内普遍存在微炎症状态，微炎症程度在一定程度上提示CKD患者的预后。因此，明确CKD患者微炎症状态发生机制，对其做到早期检测和干预，有助于提高患者的生存质量，降低病死率。 目的： 研究慢性肾脏病患者微炎症状态相关影响因素 方法： 该研究选择2012年1月013年1月吉林大学第一医院肾病科住院患者199例，根据其血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)值分为微炎症状态组(hs-CRP＞3mg/L)和正常组(hs-CRP≤3mg/L)，其中微炎症状态组100人，正常组99人。分别对两组中患者的年龄、性别、原发病、血压(BP)、血肌酐(Scr)、血红蛋白(Hb)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血白蛋白(Alb)等一般临床资料和生化指标以及左室射血分数(EF)、左室舒张末期内径(LVDd)、室间隔厚度(IVST)进行比较分析。采用SPSS19.0软件进行资料数据统计。正态或近似正态分布的计量资料以(x±s)表示，两样本均数比较采用独立样本的t检验;偏态分布的计量资料采用中位数(下四分位数-上四分位数)表示，采用秩和检验进行组间比较;计数资料进行χ2检验。采用直线相关分析(Pearson相关分析)对各资料相关性进行分析，P<0.05有统计学意义。 结果： 1.一般临床资料：199例CKD患者中，男性112例，女性87例。原发病中以原发性肾小球疾病为主，共97例(45.73%)，其次为糖尿病肾病55例(27.64%)、高血压肾病37例(18.59%)、多囊肾8例(4.02%)、慢性间质性肾炎6例(3.02%)、梗阻性肾病1例(0.5%)、其他1例(0.5%)。微炎症状态组100例(50.25%)，正常组99例(49.75%)。微炎症状态组患者透析龄大于正常组，差异有统计学意义(P＜0.05)。各组原发病比较、收缩压及舒张压比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。 2.生化指标以及心脏结构和功能指标：与正常组比较，微炎症状态组Scr、LVDd升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。Hb、Hct、TP、Alb、TC、LDL-C、EF降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。两组间血pr-Alb、TG、HDL-C、ApoA水平差异无统计学意义(P＞0.05)。两组间IVST比较差异无统计学意义(P＞0.05)。 3.相关关系：hs-CRP与Scr、BUN，LVSd之间呈正相关(P＜0.05)。与Hb、Hct、TP、Alb、EF呈负相关。 结论： 1、CKD患者中并发微炎症状态的占50.25%，随着肾功能的减退微炎症状态加重，微炎症状态可以促进肾功能恶化。 2、微炎症状态可能促进贫血、营养不良、心功能不全等并发症的发生、发展。

关键词： 慢性缺氧   15-脂氧合酶   NF-κB   锌脂蛋白A20   肺动脉高压   血管新生  

摘要： 第一部分:锌脂蛋白A20在缺氧肺血管新生中的作用及机制　　目的:肺动脉高压是我国临床常见的恶性疾病。慢性缺氧是肺动脉高压的重要诱导因素之一。慢性缺氧诱导的内皮功能障碍和血管新生紊乱失调被视为肺动脉高压发病的重要组成部分。新近研究显示NF-κB调控的锌指蛋白A20可能与缺氧相关。然而，在不同细胞类型中呈现一定的差异。据我们所知，目前A20在缺氧肺动脉血管新生中所发挥的重要作用目前尚不清楚。　　方法:本课题通过western blot、免疫组化、免疫荧光和RT-PCR方法检测缺氧大鼠的肺组织及体外培养的肺动脉内皮细胞中A20的表达情况。继而利用小干扰RNA转染方法特异性干扰A20表达后，进行MTT实验、BrdU实验、流式细胞仪和western blot检测细胞增殖情况。应用Boyden小室迁移实验、小管形成实验和western blot分析内皮细胞的迁移、官腔形成和粘附能力。最后，采用NF-κB抑制剂BAY11-7082以及A20小干扰RNA，验证A20与NF-κB之间的相互作用关系。　　结果:在缺氧动物模型的肺组织中A20分布在血管内皮中并且呈短暂性增加。与对照组细胞相比，A20沉默后的肺动脉内皮细胞在早期缺氧条件下增殖能力加强。同时，细胞迁移、管腔形成和粘附分子表达情况在A20表达干扰后也明显增加。此外，孵育BAY11-7082后抑制了内皮细胞中缺氧诱导的A20表达，而A20缺乏后导致NF-κB活力进一步提高。　　结论:综上，本研究证实了缺氧肺动脉内皮细胞中A20短暂增加。并且抑制A20可导致缺氧早期血管新生作用加强。其作用机制与NF-κB和A20之间的密切的相互调控作用相关。暗示持续缺氧条件下肺动脉内皮细胞中A20增加可能有助于抵制血管新生。这些新的证据为揭示缺氧性肺动脉高压的病理机制提供了重要的理论基础，有利于提出新的治疗方案。　　第二部分:15-HETE通过与NF-κB相互作用促进肺动脉炎症反应　　目的:本实验室前期研究成果证明15-脂氧合酶(15-LO)/15-羟化二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)是肺动脉高压疾病发生发展过程中缺氧性肺动脉血管收缩和重构的中心介导因子。慢性缺氧诱导的血管周炎症细胞浸润与促炎症因子增加，在肺动脉高压的临床病例中已有报道，被视为肺动脉高压疾病的重要病理阶段。然而其病理机制十分复杂，目前尚未明确。本研究的目的在于探索15-HETE在缺氧性肺动脉血管炎症反应中的作用及机制。　　方法:首先，15-LO抑制剂，NDGA和CDC，以及15-LO1/2小干扰RNA用于抑制内源性15-HETE。我们采用免疫组化实验，对单核巨噬细胞的浸润情况进行分析。通过免疫组化实验，western blot分析和RT-PCR检测缺氧大鼠模型以及培养的肺动脉内皮细胞中，细胞间粘附分子和血管细胞粘附分子的表达水平。应用western blot，免疫荧光化学和荧光素酶报告基因测定NF-κB的活性。最后，不同浓度梯度的BAY11-7082和PDTC，NF-κB阻断剂，用于明确细胞NF-κB的活性对15-LO蛋白表达的影响。　　结果:我们发现缺氧条件下肺动脉血管周单核巨噬细胞的浸润，以及细胞黏附分子的表达，被15-HETE阻断剂或者15-LO1/2小干扰RNA显著抑制。并且，外源性15-HETE可以时间依赖性方式促进两种细胞粘附分子在肺动脉内皮细胞中的表达水平。15-LO1/2代谢产物，15-HETE可促进NF-κB的活性。同时，NF-κB的阻断剂可明显抑制缺氧肺动脉内皮细胞中15-LO1/2的表达。　　结论:我们的实验结果表明慢性缺氧促进单核巨噬细胞向血管系统浸润，以及肺动脉内皮细胞中细胞粘附分子表达增加，其作用机制是通过15-LO/15-HETE与NF-κB之间的正性相互作用。　　本研究揭示了缺氧诱导的肺动脉炎症反应的新机制，为治疗肺动脉高压这一高危性疾病提供了以15-LO/15-HETE与NF-κB为靶点的新的治疗策略。