关键词： Boys   Adolescent   Insulin Resistance   axl receptor tyrosine kinase   GAS6 gene  

摘要： The present study was designed to explore the effects of GAS6 and AXL gene polymorphisms on adiposity, systemic inflammation, and insulin resistance in adolescents. After multistage sampling from the data of the Taipei Children Heart Study-III, we collected 358 boys and 369 girls with an average age of 13.3 years. We genotyped the adolescents' GAS6 rs8191973, GAS6 rs8191974, AXL rs4802113, and AXL rs2304232 polymorphisms. Significantly higher body mass index (BMI), waist circumference (WC), and hsCRP levels were found in boys with the GG genotype of GAS6 rs8191974 than A allele carriers;higher IL-6 and insulin levels and increased HOMA-IR were found in boys with the GG genotype of AXL rs2304232 than the A allele carriers. There was a significant difference in hsCRP levels of boys with the TT, TC, and CC genotypes of AXL rs4802113. Boys with both the GG genotype of GAS6 rs8191973 and the GG genotype of GAS6 rs8191974 exhibited higher BMI, WC, IL-6, and hsCRP levels than the boys carrying both the C allele of the GAS6 rs8191973 and the A allele of the GAS6 rs8191974. In conclusion, GAS6 and AXL polymorphisms are associated with adiposity, systemic inflammation, and insulin resistance in adolescents, especially in boys.

关键词： 非酒精性脂肪肝病   哺乳动物雷帕霉素靶蛋白   CD36  

摘要： 目的：非酒精性脂肪肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）已经成为危害人类健康的主要代谢性疾病之一，但其发病机制尚不完全清楚。高脂及炎症状态均可以作为独立的危险因素导致NAFLD的发生发展。CD36属于B族清道夫受体，可以介导长链脂肪酸及氧化低密度脂蛋白的跨膜转运，其表达量与肝脏脂肪变性程度密切相关。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，它在调节细胞生长、增殖及蛋白质翻译中起着重要的作用。本课题旨在研究高脂及炎症状态是否可以通过激活mTOR信号通路导致CD36翻译效率升高，最终引起CD36蛋白表达量及肝细胞内脂质蓄积增加。 方法：使用软脂酸、TNF-及IL-6处理人肝癌细胞株HepG2，高脂饲料喂养及酪蛋白皮下注射C57BL/6J小鼠的方法建立体外及体内高脂及炎症模型。HepG2细胞分为：对照组1（0.2%BSA）、软脂酸处理组（0.2%BSA+0.08mmol/L软脂酸）、对照组2（0.2%BSA+0.04mmol/L软脂酸）、TNF-处理组（0.2%BSA+0.04mmol/L软脂酸+25ng/mLTNF-）、IL-6处理组（0.2%BSA+0.04mmol/L软脂酸+20ng/mLIL-6），处理时间为24小时。雄性C57BL/6J小鼠分为：正常饲料组（正常饲料）、高脂饲料组（高脂饲料）、正常饲料+酪蛋白处理组（正常饲料+0.5mL10%酪蛋白皮下注射），建模时间为14周。油红O染色观察肝细胞内脂质蓄积的情况。酶联免疫吸附试验及酶偶联比色法分别检测肝细胞内游离脂肪酸（FFA）及甘油三酯（TG）含量。Real-TimePCR检测肝细胞CD36mRNA表达。Western Blotting检测肝细胞CD36蛋白表达，mTOR及其下游翻译调控蛋白：核糖体蛋白p70S6激酶（p70ribosomal protein S6kinase，p70S6K）、eIF4E结合蛋白1（eukaryoticinitiation factor4E-binding protein1，4E-BP1）及真核翻译起始因子4E（eukaryotic initiation factor4E，eIF4E）的磷酸化水平。蛋白降解实验检测肝细胞CD36蛋白稳定性。多聚核糖体分析检测肝细胞CD36翻译效率。并应用mTOR特异性抑制剂雷帕霉素作用于高脂及炎症状态下的HepG2细胞（10ng/mL雷帕霉素）及C57BL/6J小鼠（2mg/kg体重的雷帕霉素皮下注射），观察其对上述检测指标的影响。 结果：油红O染色、FFA及TG定量检测发现高脂及炎症状态能使HepG2细胞及C57BL/6J小鼠肝脏组织脂质蓄积增加（P<0.05）。Western Blotting及Real-Time PCR检测发现高脂及炎症状态能使CD36蛋白表达量升高（P<0.05），而CD36蛋白表达量却没有明显变化（P>0.05）。蛋白降解实验发现高脂及炎症状态并没有改变HepG2细胞CD36蛋白稳定性（P>0.05）。多聚核糖体分析发现高脂及炎症状态可以使CD36翻译效率明显升高。进一步行Western Blotting检测发现高脂及炎症状态可以升高mTOR及其下游翻译调控蛋白p70S6K、4EBP-1及eIF4E的磷酸化水平（P<0.05）。加入雷帕霉素之后，相应的高脂及炎症处理组mTOR信号通路磷酸化水平降低（P<0.05），导致CD36翻译效率及蛋白表达量减少（P<0.05），最终引起HepG2细胞及C57BL/6J小鼠肝脏组织脂质蓄积减轻（P<0.05）。 结论：高脂及炎症状态可以激活HepG2细胞及C57BL/6J小鼠肝脏组织mTOR信号通路导致肝脏CD36翻译效率升高，最终引起CD36蛋白表达及脂质蓄积增加。

关键词： 高盐饮食   Th17   Treg   流式细胞术   BOLD-MRI   血流介导的血管舒张   (FMD)  

摘要： 研究目的：高盐(high salt, HS)饮食不仅是高血压的致病因素,还能独立于血压水平造成靶器官损伤。越来越多的证据显示免疫系统在高血压及其靶器官损伤发生中发挥重要作用,其中机体获得性免疫机制是引发靶器官炎症反应的关键因素之一。近来研究显示,辅助性T细胞17(T helper cell17, Th17)(生成白介素-17)和调节性T细胞(Regulatory T cell, Treg)(表达转录因子FoxP3)各自发挥促炎和抗炎效应。Th17/Treg免疫平衡的调控是目前研究的热点。由Th17/Treg免疫失衡所致炎症紊乱,即免疫-炎症轴失衡参与了靶器官炎症反应和损伤。高盐摄入是否可通过影响人类Th17/Treg平衡进而引起靶器官的炎症反应尚未见报道。本研究旨在对健康志愿者中通过慢性盐负荷试验,观察在此期间外周血Th17/Treg免疫平衡的动态变化,并探讨其可能机制,以及与靶器官炎症反应的关系。 研究内容与方法：共纳入健康男性志愿者15人。平均26.93±0.92岁。 (1)按照世界卫生组织(World Health Organization, WHO)每日低于5g食盐(即NaCl)的摄入量作为低盐饮食标准。高盐饮食的标准确定为15g/日。由研究者按以上食盐摄入标准,给所有志愿者统一提供饮食并在同一地点就餐。整个饮食干预时间共17天,分为基线期(第1-3天,志愿者依据个人口味在同一地点自由进餐,共3天),随后紧接高盐期(第4-10天,共7天),最后进入低盐期(第11-17天,共7天)。 (2)每天测量并记录收缩压、舒张压和心率。于基线期第3天(day3,D3),高盐第7天(day10,D10),低盐期第7天(day17, D17)收集24小时尿,进行常规生化等检验。 分别在基线第3天(day3, D3),高盐饮食第1天(day4, D4)、高盐饮食第2天(day5,D5)、高盐饮食第7天(day10,D10)、低盐饮食第7天(day17,D17)采集受试者外周血进行免疫细胞流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测,对CD4+和CD8+淋巴细胞亚群、B细胞(CD19),以及Th17和Treg细胞表面分子抗体(CD4、CD25、IL-17和FoxP3)进行四色流式分析。对基线第3天(day3,D3)和高盐第2天(day4, D4)采集外周血使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,通过基因芯片技术对其进行表达谱分析。使用TRIzol试剂裂解单个核细胞后,提取总RNA；采用聚合酶链反应(PCR)对表达谱分析确定的感兴趣差异基因进行mRNA水平的验证。 分别于基线第3天(day3,D3),高盐饮食第1天(day4,D4)、高盐饮食第7天(day10,D10)、低盐饮食第1天(day11, D11),低盐饮食第7天(day17,D17)采用飞利浦Intera3.0T全身磁共振系统对受试者腹部横断面T2WI扫描及冠状面高清BOLD-MRI扫描并计算肾髓质的表观-自旋弛豫率(R2*,R2*值与局部组织氧合水平呈正相关) 分别于基线第3天(day3,D3),高盐饮食第1天(day4, D4)、高盐饮食第7天(day10, D10)、低盐饮食第7天(day17,D17)通过无创超声评价肱动脉血流介导性的血管舒张(flow mediated dilation, FMD)。 结果：15名志愿者完成全部饮食干预及血液和尿液的有关检测,并根据24小时尿量、尿钠总量、尿肌酐总量以及血钠水平等指标进行质量控制并判定所得实验数据可靠。 (1)尿量、尿电解质和尿肌酐的变化：与基线期相比,高盐饮食期第7天24小时尿量(2241±615mL vs.1773±918mL)尿钠(325.6±43.3mmolvs.152.9±52.1mmol)、尿钾(38.9±8.9mmol vs.30.2±9.7mmol)均明显升高,且均有统计学差异(P均<0.05)。与高盐饮食期第7天相比,低盐饮食期第7天尿量、尿Na+、尿K+显著降低且均有统计学意义(P均<0.001)。高盐饮食期与基线期和低盐饮食期相比24小时尿肌酐显著升高(P均<0.001)。 (2)血压、心率的变化：与基线期相比,高盐期收缩压和舒张压有上升趋势,低盐期呈现下降趋势,但变化无统计学意义(P>0.05),而心率在高盐饮食期明显增快(P<0.01),心率在低盐期较高盐期减慢(P<0.05)。 (3)流式分析结果：CD3+、CD4+T细胞亚群及B淋巴细胞(CD19)均无明显变化(P>0.05)。食盐摄入变化可导致Th17/Treg细胞比例发生变化,高盐第2天Th17细胞数量较基线水平下降(P<0.05),而Treg细胞数量较基线水平升高(

关键词： Breast cancer   Biomarkers   Lifestyle   Disparities   C-reactive protein  

摘要： Background: Racial disparities in breast cancer outcomes persist, with differential adverse outcomes in African American women. Although research has examined possible genetic differences, there has been little research on potentially modifiable characteristics such as health promoting behaviors. The purpose of this article is to describe the characteristics and to compare the differences by race in lifestyle factors and inflammatory biomarkers in African American and Caucasian women with breast cancer. Methods: This is a baseline descriptive analysis from an ongoing randomized controlled trial that includes 124 women diagnosed with early stage breast cancer prior to chemotherapy. Data sources included medical records, self-report questionnaires and a blood sample for measures of inflammation. The statistical analysis included descriptive statistics and ANOVA models to determine differences between the two groups. Results: Overall, both groups had low levels of health promoting behaviors. African Americans had a significantly higher body mass index. Caucasian women consumed more alcohol. Levels of Creactive protein and MIP-1 beta were significantly higher in African Americans. Conclusion: Potentially modifiable factors such as nutrition, physical activity and levels of inflammation warrant further attention.

关键词： 肺挫伤   缺血再灌注损伤   急性呼吸窘迫综合征   体外膜氧合   免疫炎症反应   急性呼吸窘迫综合征   肠粘膜屏障   一体化连接方式   管路   持续血液滤过   体外膜氧合   肠粘膜屏障   紧密连接蛋白   线粒体功能   线粒体膜电位   线粒体复合物   持续肾替代治疗   体外膜氧合  

摘要： 体外膜氧合技术(extracorporeal membrane oxygenation,ECMO)具有完全肺功能和部分心功能的替代作用,因此被认为是目前急性呼吸窘迫综合征(Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS)最有效的支持性治疗之一。但由于ECMO技术是非生物材料的侵入性支持治疗,诸多的证据表明ECMO可导致诸如全身及局部的免疫炎症反应、氧化应激损伤、溶血、凝血功能障碍、肾功能、肺功能、心功能损伤等一系列的并发症。这使得ECMO治疗受到极大限制,导致其目前仅使用于严重ARDS晚期的治疗。因此如何避免ECMO相关并发症的发生,是提高其疗效和适应范围的关键所在。随着材料技术的进步,ECMO治疗过程中诸如溶血反应、凝血功能障碍等并发症在逐渐减少,但全身免疫炎症反应和导管感染的发生率仍然较高。而在危重病人中,胃肠道是感染和炎症反应发生的主要来源。我们在前期在正常的动物模型研究中已经发现,ECMO治疗可导致肠道氧化应激损伤。我们前期及KurundkarAR等人的研究进一步发现,ECMO治疗能导致正常猪肠粘膜屏障的损伤。这就表明ECMO治疗技术本身可导致机体肠粘膜屏障的发生。但这些研究均只是在正常状态下进行。在严重ARDS状态下,由于机体本身的缺氧和免疫炎症反应等病理生理可导致肠粘膜损伤,理论上ECMO治疗可能通过增加机体氧供保护肠粘膜屏障。因此,ECMO治疗存在两方面矛盾的问题,第一方面:ECMO治疗可通过改善严重ARDS组织低氧从而保护胃肠粘膜屏障;第二方面:ECMO治疗本身又可导致胃肠粘膜屏障的损伤。一旦发生肠粘膜的损伤又如何进行及早的干预目前国内外尚无相关研究。在ECMO治疗过程中,约80%的病人需要进行持续肾替代治疗(Continuous Renal Replacement Therapy CRRT)。近期研究发现,CRRT能改善ECMO所致的全身免疫炎症反应、心功能、肺功能以及肾功能。此外,CRRT治疗能增加肠道紧密连接蛋白的表达,保持肠粘膜紧密连接的完整性,降低细菌易位的发生。同样,我们前期在正常动物模型实验中证实,CRRT能缓解ECMO治疗所致的肠粘膜损伤。因此,我们推测CRRT治疗可能对ECMO治疗所致的ARDS机体肠粘膜屏障产生保护效应。但ECMO和CRRT又通过何种途径影响ARDS机体肠粘膜屏障仍需进一步探讨。线粒体是氧代谢的主要细胞器,它的损伤可导致细胞的坏死和凋亡。我们在前期研究中发现,ECMO治疗能导致心肌线粒体超微结构和功能的损伤。此外,我们还发现,ECMO治疗能导致肠道氧化应激的损伤。这些证据表明ECMO治疗可影响组织线粒体功能。另有研究显示CRRT联合ECMO治疗较单一 ECMO治疗氧利用增加。我们前期研究发现CRRT联合ECMO治疗组,心肌线粒体结构的破坏、线粒体功能及氧化应激损伤较ECMO明显改善。这表明CRRT能改善ECMO导致的线粒体功能损伤,增加其功能,降低氧化应激损伤。因此,我们推测,ECMO可能通过损伤线粒体功能损害肠粘膜屏障,而CRRT治疗能缓解ECMO所致的线粒体损伤从而保护肠粘膜屏障。因此,本研究通过建立一种稳定的并适用于更长时间的体外生命支持系统研究的ARDS动物模型。在此基础上首次探讨ECMO治疗对ARDS猪肠粘膜屏障的影响;同时我们创新建立一种CRRT与ECMO一体化的连接方式,在此基础上进一步探讨ECMO联合CRRT对ARDS猪肠粘膜屏障的影响;最后我们探讨ECMO及ECMO联合CRRT治疗影响肠粘膜屏障的机理,即其对线粒体结构及功能的影响。本研究结果以期为临床提高ECMO的治疗有效性、降低并发症的发生、以及为ECMO联合CRRT的治疗提供理论依据。第一部分:ECMO治疗对创伤性ARDS猪肠粘膜屏障的影响研究一:肺挫伤联合缺血再灌注损伤ARDS动物模型的建立目的:我们前期进行了多种ARDS动物模型制作方式的探索包括肺灌洗(生理盐水或胃液)、静脉注射油酸、枪击伤、缺血再灌注联合注射内毒素。但这些模型均不适用于长时间的体外生命支持系统的研究。本研究的目的为建立一种适用于体外生命支持系统研究的ARDS动物模型模型,从而进一步研究ECMO以及ECMO联合CRRT提供基础。方法:12只健康猪随机分为三个组:Group A-予0.2kg/kg体重的重物由1米高度落下;Group B——予0.4kg/kg体重的重物高处落下;GroupC——予0.6kg/kg体重的重物高处落下。随后三组动物均进行缺血再灌注。复苏完成后并观察24小时。记录血流动力学及呼吸参数,评价肺CT结果、组织病理学改变以及微观结构的改变。结果:三组动物间生存时间无显著差异。Group C动物死亡率高(75%),不适合后续研究使用。Group A动物均存活,氧合指数、CT评分以及病

关键词： obesity   nutrition   gut microbiota   dietary strategies   inflammation  

摘要： The role of the gut microbiota in understanding the onset and development of obesity is gaining importance. Dietary strategies are the main tool employed to counteract obesity, and nowadays they are focused on a wide range of different aspects of diet and not only on calorie restriction. Additionally, diet is known to be a major factor influencing modification of the gut microbiota. Therefore the influence of both macronutrient and micronutrient content of any dietary strategy to treat obesity on gut bacterial composition should now be taken into consideration, in addition to energy restriction. This review aims to collect the available data regarding the influence of different dietary components on gut microbiota in relation to obesity and inflammatory states in humans. Although more work is needed, specific dietary factors (carbohydrate, protein and Mediterranean foods) have been shown to have an influence on the gut microbiome composition, meaning that there is an opportunity to prevent and treat obesity based on microbiota outcomes.

关键词： 2型糖尿病   肠道菌群   慢性炎症   沙格列汀   ERIC-PCR  

摘要： 2型糖尿病已经成为当今世界重要的社会和健康问题，但其病因与发病机制至今尚未完全阐明，目前普遍认为2型糖尿病的发生与多种遗传和环境因素有关。其中作为人体内微环境，肠道菌群与2型糖尿病有着密切的关系。近年来，越来越多的数据及研究显示肠道菌群与肥胖症、2型糖尿病等多种代谢性疾病的发生与发展有着密切的关系，从而产生了许多新的研究思路和一些突破性的研究成果，为人们理解代谢性疾病的病因、发生机制和寻找新的治疗靶点提供了相当重要的线索和思路。研究表明2型糖尿病患者普遍存在肠道菌群失调现象，且肠道菌群与2型糖尿病的发生与发展有一定的相关性。正常情况下，肠道菌群与宿主、外界环境之间建立起一个动态的生态平衡，对维持人体健康起着相当重要的作用。肠道菌群可以参与宿主的能量物质代谢和非特异性免疫功能的调节，而肠道菌群失调可影响机体的免疫系统，使人体出现炎症反应。炎症过程中产生的一些炎症因子（如脂多糖LPS、C反应蛋白等）可干扰胰岛素的信号转导通路，从而引起胰岛素抵抗及糖尿病，而目前认为2型糖尿病其实就是一种慢性持续性低水平的炎症反应。因此，纠正肠道菌群失调，改善其慢性炎症状态，有可能成为治疗胰岛素抵抗及糖尿病的新的靶点。但是迄今为止，关于降糖药物对肠道菌群构成及慢性炎症状态影响和机制的研究报道还很少，本研究旨在初步探讨沙格列汀对2型糖尿病患者肠道菌群及其慢性炎症状态的影响。 目的 初步探讨沙格列汀对2型糖尿病患者肠道菌群及其慢性炎症状态的影响。 方法 1.标本收集:选取2型糖尿病患者10例，规律应用沙格列汀2周，收集用药前后新鲜粪便，并留取10例健康人新鲜粪便作为对照。 2.肠道菌群基因组DNA提取，应用ERIC-PCR进行基因扩增，进行琼脂糖凝胶电泳，电泳后凝胶置于紫外灯下成像，保存指纹图谱。 3.规律监测2型糖尿病患者空腹及早餐后2h血糖水平，抽取外周血，检测用药前后血脂、炎症因子水平的变化。 4.统计学分析 实验数据用平均数±标准差（x±s）表示，应用SPSS17.0统计学数据处理软件对数据进行分析，两样本定量资料的比较应用t检验，检验标准为α=0.05，当P＜0.05为差异具有统计学意义。 5.指纹图谱分析 使用UVP凝胶电泳分析软件统计分析用药前、用药后及健康对照组肠道菌群的相似性与多样性。 结果与健康对照组相比，药物干预2周后，2型糖尿病患者肠道菌群失调现象得到改善。血糖、炎症因子水平较用药前下降(P<0.05)，血脂水平较用药前无明显差异(P>0.05)。 结论 沙格列汀有助于改善2型糖尿病患者肠道菌群失调，改善其慢性炎症状态。

关键词： Forsythin   JAK-STAT   p38   MAPK   ROS   RAW264.7   cells  

摘要： 连翘是一种落叶灌木,广泛分布在中国、韩国、日本,在许多欧洲国家也有分布。它的果实是我国的传统中药,可以治疗发热、疼痛、急性炎症等。已有研究表明,连翘果实提取物具有抗氧化、抗菌、抗病毒、止吐、抗炎的功效,本实验所用连翘苷(Forsythin)是一种连翘果实提取物,已有报道表明连翘苷具有抗氧化和抗菌的作用。到目前为止,连翘苷的抗炎作用研究较少,其抗炎相关的机制研究尚未有人报道。 LPS为革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分,是引发脓毒症的主要元凶。本实验以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究模型,探索FOR对LPS引起的炎症反应的影响及其可能存在的机制。LPS侵入机体后可以激活单核巨噬细胞,诱导其释放大量的促炎因子和介质,如IL-1、IL-6、TNF-α、NO、PGE2等。因而,调节这些炎症分子的生成是治疗各种炎症相关疾病的重要靶点。 本实验证明了FOR可以剂量依赖性的抑制LPS引起的RAW264.7细胞IL-1、IL-6、TNF-α、NO、PGE2的释放,同时,LPS在转录水平上抑制了iNOS和COX-2的表达。在机制层面上我们发现FOR显著的抑制了LPS激活的JAK-STATs和p38MAPKs信号通路,但是对NF-κB没有影响。抑制剂的处理实验更加证明了FOR是通过抑制JAK-STATs和p38MAPKs信号通路来减少上述促炎因子和介质的释放。此外,FOR可以通过减少LPS刺激引起的RAW264.7细胞ROS的积累来抑制JAK-STATs和p38MAPKs信号通路,通过其抗氧化的作用发挥抑炎效果。

关键词： PERITONITIS   DIAGNOSIS   SHOCK (Pathology)   PERITONEUM   ANATOMY   ABDOMINAL surgery   ACADEMIC medical centers   C-reactive protein   INFECTION   INFLAMMATION   MEDICAL emergencies   SERIAL publications   STATISTICS   OPERATIVE surgery   DATA analysis   DESCRIPTIVE statistics   DISEASE complications  

摘要： Background. The aim of this study was to analyze the influence of laparotomy on the systemic inflammatory response in human patients suffering from secondary peritonitis. Study Design. A prospective study investigating the levels of white blood cells, Creactive protein, platelets, interleukin-six, and tumor necrosis factor-alpha during laparotomy in five patients who suffered from secondary peritonitis. Six venous blood samples were collected perioperatively from each patient. The data were summarized by descriptive statistics and presented in a box plot. The hypothesis was that laparotomy increases the systemic inflammatory response, as has been described in animal models in previous studies. Results. The median age of the patients in this study was 84 years, the male to female ratio was 2 : 3, and the mortality rate was 80%. The most common cause of generalized peritonitis was ischemia of the colon. Analysis of the data showed no significant changes in the level of plasma inflammatory mediators during the surgical procedure, except for the platelet count which showed a significant decrease (P = 0.001). Conclusions. In contrast to experience with animal models, laparotomy in human patients with secondary peritonitis did not significantly increase the systemic inflammatory response. Furthermore, it contributed in significantly decreasing some of the systemic inflammatory mediators.

关键词： 糖尿病肾病   倍半萜内酯   microRNA146a   巨噬细胞   核转录因子Kappa B   炎症小体   NLRP3  

摘要： 研究背景：糖尿病肾病是糖尿病的并发症之一,治疗手段有限,亟待拓展。越来越多的研究表明肾脏局部慢性炎症是糖尿病肾病发生、发展的重要因素,但其分子机制还未明确。有研究提示炎症小体(NLRP3)、microRNA等炎症相关因素可能在多个层面影响着糖尿病肾病炎症状态的发生,作为胰岛素抵抗的推手,促进糖尿病肾病的发生。我们前期实验已表明倍半萜内酯(PTN)可缓解db/db小鼠模型糖尿病肾病临床和病理,降低MCP-1、IL-6等炎症因子表达及改善局部胰岛素抵抗状态。本文旨在探讨糖尿病肾病患者及db/db鼠DKD模型肾脏局部是否存在微炎症状态,探究PTN如何从基因层面、蛋白水平,通过直接抑制NF-κB、NLRP3,抑制肾脏局部的慢性炎症发生,延缓糖尿病肾病进展提供理论依据。 研究目的：了解糖尿病肾病患者肾脏局部炎症状态,观察巨噬细胞浸润、炎症小体(NLRP3)、NF-κB在肾脏表达变化。利用db/db小鼠模型研究糖尿病肾病中NLRP3、NF-κB通路及microRNA谱变化情况,探究PTN对肾脏局部微炎症的影响,延缓糖尿病肾病的可能机制。研究方法：(1)筛选2011年1月至2014年1月北京协和医院肾内科住院经肾穿刺病理活检确认为糖尿病肾病的患者37例,其中7例糖尿病病史短,病理仅有肾小球肥大,记为DKD1组,其余记为DKD2组。收集同期微小病变(CTL1)10例及膜性肾病患者(CTL2)15例与DKD组进行比较。通过免疫组织化学方法,检测CD68、NF-κB、炎症小体(NLRP3)表达情况以确认有无慢性炎症现象。(2)利用前期动物模型,分别取实验小鼠三组[对照组(db/m+NS)、糖尿病组(db/db+NS)、PTN干预组(db/db+PTN)],T0(8周龄)、T4(12周龄)及T8(16周龄)留取肾脏标本。利用T8肾脏组织进行深度测序,查看db/db小鼠microRNA表达谱变化及PTN对其影响,并对于差异表达最大的microRNA146a-5p给与实时定量PCR验证。(3)利用实时定量PCR、蛋白质印迹、免疫组织化学方法、免疫酶联吸附法验证IRAK1蛋白、TRAF6蛋白、IK B蛋白、NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1的表达情况,初步探讨PTN干预小鼠糖尿病肾病可能的机制。 研究结果：糖尿病肾病早期的患者肾脏局部与对照组相比,可见肥大的肾小球中、肾间质、肾小管局部CD68阳性,OD值为(6.9±6.7)‰,与对照组相比,差异具有统计学意义,P<0.05;而糖尿病中晚期患者肾小球、肾小管、肾间质存在大量片状分布的CD68阳性胞浆,OD值(16.7±7.9)‰,与对照组(CTL1、CTL2)、糖尿病初期组比较,差异具有显著性统计学意义,P<0.01。与CD68结果一致,NLRP3及NF-κB表达也随着糖尿病肾病病情而加重。NF-κB在DKD1期组、DKD2组OD值分别(5.4±1.8)%、(12.7±8.0)%,分别与CTL1或CTL2组比较,差异具有统计学意义,P<0.05。NLRP3在DKD1组、DKD2组OD值分别(15.8±7.7)%、(18.6±7.7)%,DKD2组与对照组(CTL1、CTL2)及DKD1组比较,差异具有统计学意义,P<0.05。 在动物实验中,糖尿病肾病组(db/db+NS)与对照组(db/m+NS)相比,表达上调及下调的microRNA数目分别为206个和91个,糖尿病肾病组(db/db+NS)与干预组(db/db+PTN)相比表达上调及下调的microRNA分别为101个和76个。在一定表达量的前提下,同时满足在糖尿病肾病组(db/db+NS)下调而干预组(db/db+PTN)中上升的microRNA有68个,前5位依次为：microRNA146a-5p、 microRNA223-3p、microRNA16-5p、microRNA126-3p、microRNA195-5p。在一定表达量的前提下,同时满足在糖尿病组上调而干预组中下调的microRNA共72个,其中前5位的依次为：microRNA204-5p、microRNA7d-3p、microRNA2137、 microRNA5115、microRNA193b-3p。它们与炎症、肿瘤、血管生成等密切相关。microRNA146a-5p在db/db模型小鼠中表达量降低最显著,且干预组中能够恢复最明显,对其进行实时定量PCR功能验证。发现糖尿病肾病组(db/db+NS)与同周龄的对照组(db/m+NS)相比,microRNA146a-5p表达量降低,且随周龄增加而表达量减少,糖尿病肾病组(db/db+NS)vs对照组(db/m+NS)△CT值分别为：T0：0.62±0.43vs0.82±0.44;T4：0.42±0.38vs0.92±0.