关键词： 脓毒症   发病机理   炎症反应   大肠埃希菌   动物模型  

摘要： 脓毒症是指由严重感染、创伤、烧伤和急危重病等引起的全身性炎症反应综合征（SIRS），进一步可发展成为严重脓毒症、脓毒性休克及多器官功能障碍综合征(MODS)，甚至死亡。而临床上约有95％脓毒症病人与细菌感染有关，其中约有60％以上的脓毒症病人因G-细菌感染所致。目前，由脓毒症引起的脓毒症休克和多器官功能障碍已成为重症监护病房(ICU)的最常见死因。由于脓毒症的发病机制相当繁杂，即即使在转化医学高度发展的今天，临床治疗依然收效甚微，死亡率高居不下。因此，进一步探讨脓毒症的发生机制、寻找到新的预防、治疗手段已成为亟需解决的重要科学问题。　　一氧化碳(carbon oxide，CO)曾被认为是破坏细胞呼吸作用的有害气体。最新研究发现CO是一种气体信号分子的，在损伤诱导的各种机体应激中具有保护组织、细胞，抗炎、抗凋亡、抑制排斥反应等作用。由于CO气体不易控制性，近来新合成一种新型的羰基化合物——外源性一氧化碳(tricarbonyldichlororuthenium(Ⅱ) dimer, CORM-2)被二甲基亚砜(DMSO)溶解后可以体内生理溶解缓慢释放出CO，具有潜在的药用价值。　　当前，因革兰氏阴性细菌感染导致脓毒症的具体机制研究成果并不多，影响临床治疗效果。本研究系统阐述了脓毒症时各重要脏器的炎症发应及一氧化碳的干预机制并以大肠埃希菌(Escherichia coli，***)为研究对象，通过CORM-2干预后，深入地研究了CORM-2对大肠埃希菌活力和毒力（致病性）的抑制作用，探讨了该对炎症反应抑制作用的分子机制，为临床脓毒症的救治提供了新的思路。　　第一部分外源性一氧化碳（CO releasing molecules-2）对脓毒症小鼠重要脏器炎症反应的抑制作用及分子机制的研究　　目的:为了研究脓毒症时机体的炎症反应，通过经典的盲肠结扎穿刺法(cecal ligation and puncture，CLP)小鼠的脓毒症模型，探讨外源性一氧化碳（CORM-2）对脓毒症时机体炎症反应的抑制作用及其分子机制。　　方法:6-8w大小的C57BL/6小鼠，雄性。常规饲养1 w后实验。28只随机数字表法分为四组，分别为对照组(n=7)，CLP组(n=7)，CLP+CORM-2组(n=7)和CLP+iCORM-2组(n=7)。CLP组常规行盲肠结扎与穿孔，建立脓毒症小鼠模型，CLP+CORM-2组在CLP后立即静脉注射CORM-2(8.0mg/kg)，对照组为假手术组。测定CLP24 h后肝、肺、凝血系统等重要器官的炎症反应指标，如:组织病理切片、肺泡灌洗液、器官功能和ICAM-1表达等，以及NF-κB和JAK/STAT等重要信号通路的动态变化。　　结果:CLP术后24h小鼠重要脏器（肝、肺、凝血系统）功能明显受损，细胞因子TNF-α、IL-1β表达明显增加，髓过氧化物酶(MPO)活性增高，ICAM-1等粘附分子的表达明显上调。重要的信号分子NF-KB活性明显提高、核转移增加;信号通路JAK/STAT中重要的信号分子磷酸化水平明显提高，外源性一氧化碳(CORM-2)干预后上述相应的指标显著降低，小鼠脏器炎症反应得到明显抑制，重要信号分子磷酸化水平明显下降。　　结论:CLP脓毒症小鼠个脏器炎症较重，器官和功能明显受损。CORM-2可以有效的抑制炎症反应，其机制可能是通过调控重要的信号通路NF-κB和JAK/STAT实现。　　第二部分外源性一氧化碳(CO releasing molecules-2)对大肠埃希菌活力抑制作用的实验研究　　目的:既往研究证实，临床脓毒症病人95％与细菌感染有关，其中约有60％以上的脓毒症病人因G-细菌感染所致。而革兰氏阴性细菌感染导致脓毒症的具体机制研究甚少，采取相应的临床治疗对策与手段相当缺乏。本研究以大肠埃希菌(Escherichia coli，***)为研究对象，通过CORM-2干预后，系统的研究了CORM-2对大肠埃希菌活力的抑制作用，深入探讨了该抑制作用的分子机制。　　方法:采用大肠埃希菌的标准菌株(ATCC25922)，应用CORM-2进行干预。按随机数字表法分为五组:***组(n=6)，***+1.2mM CORM-2组(n=6)，***+1.2mM iCORM-2组(n=6),***+1.6mM CORM-2组(n=6)和***+1.6mM iCORM-2组(n=6)。检测大肠埃希菌的生长曲线、菌落计数、细菌负染及扫描电镜(SEM)超微结构，同时应用细菌基因芯片技术筛选了三个有明显差异的目的基因，进一步施行PCR验证。　　结果:研究证实:大肠埃希菌在CORM-2干预下，生长明显受到抑制，菌落计数显著降低;细菌负染及扫描电镜结果显示:经过CORM-2干预后的细

关键词： FLUID therapy   BURNS & scalds complications   DIAGNOSIS of edema   INFLAMMATION treatment   KIDNEY disease risk factors   LUNG disease diagnosis   NONSTEROIDAL anti-inflammatory agents   ADULT respiratory distress syndrome treatment   SHOCK (Pathology)   CYCLOOXYGENASE 2   ANIMAL experimentation   GENE expression   INFLAMMATION   RATS   SERIAL publications   ALANINE aminotransferase   THERAPEUTIC use   TREATMENT  

摘要： Burn injuries result in the release of proinflammatory mediators causing both local and systemic inflammation. Multiple organ dysfunctions secondary to systemic inflammation after severe burn contribute to adverse outcome, with the lungs being the first organ to fail. In this study, we evaluate the anti-inflammatory effects of Parecoxib, a parenteral COX-2 inhibitor, in a delayed fluid resuscitation burned rat model. Anaesthetized Sprague Dawley rats were inflicted with 45% total body surface area full-thickness scald burns and subsequently subjected to delayed resuscitation with Hartmann's solution. Parecoxib (0.1, 1.0, and 10 mg/kg) was delivered intramuscularly 20 min after injury followed by 12 h interval and the rats were sacrificed at 6 h, 24 h, and 48 h. Burn rats developed elevated blood cytokines, transaminase, creatinine, and increased lung MPO levels. Animals treated with 1 mg/kg Parecoxib showed significantly reduced plasma level of CINC-1, IL-6, PGEM, and lung MPO. Treatment of 1 mg/kg Parecoxib is shown to mitigate systemic and lung inflammation without significantly affecting other organs. At present, no specific therapeutic agent is available to attenuate the systemic inflammatory response secondary to burn injury. The results suggest that Parecoxib may have the potential to be used both as an analgesic and ameliorate the effects of lung injury following burn.

关键词： 妊娠期糖尿病   炎症因子   妊娠结局  

摘要： 目的研究妊娠期糖尿病微炎症状态对妊娠母婴结局的影响。方法选择48例确诊为妊娠期糖尿病合并炎症因子异常患者为观察组,同时选取36例妊娠期糖尿病无炎症因子异常患者为对照组。采用回顾性分析方法,对比两组孕妇一般情况、妊娠母婴结局进行比较。结果观察组患者高血压、胎膜早破、早产儿、胎儿宫内窘迫、巨大儿发生率、剖宫术率较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论尽早对产妇进行糖耐量筛查,及时干预,对于合并微炎症状态患者积极祛除危险因素,有利于改善母婴结局。

关键词： 非体外循环冠状动脉旁路移植术   磷酸肌酸   心肌损伤认知功能   全身炎症  

摘要： 目的研究磷酸肌酸钠预处理对非体外循环冠状动脉旁路移植术（off-pumpcoronary artery bypass grafting, OPCABG）患者短期认知功能的影响。 方法拟择期行OPCABG术患者40例,按随机数字表法分为2组：磷酸肌酸钠组（L组，n=20）和对照组（C组，n=20）。患者入室前30min肌肉注射吗啡10mg和东莨菪碱0.3mg。开通右上肢外周静脉，在局麻下行左桡动脉穿刺置管测压。连接心电监护（ECG）、脉搏氧饱和度（SPO2）、有创动脉血压（ABP），中心静脉压（CVP）和脑电双频指数（BIS）监测生命体征变化。麻醉诱导采取静脉注射咪达唑仑0.1mg/kg，舒芬太尼0.8μg/kg，依托咪酯0.3mg/kg和罗库溴铵0.8mg/kg。气管插管后行机械通气，使PETCO2维持在正常范围35～45mmHg。麻醉维持采用全凭静脉，异丙酚血浆靶浓度控制在1.0～2.0μg/ml；微量输液泵推注舒芬太尼(1.0μg·kg-1·h-1)，分别于切皮时和劈胸骨时推注舒芬太尼(0.5μg/kg)，维持BIS值在40～60,间断推注哌库溴铵(2mg)维持肌肉松弛。L组麻醉诱导后通过中心静脉输注磷酸肌酸钠15mg/kg（溶于100ml生理盐水）、C组静脉输注等容量生理盐水，均要求在30min内输注完毕。术中经右侧颈内静脉泵入多巴胺（2～5μg·kg-1·min-1）、硝酸甘油（0.1～0.5μg·kg-1·min-1）和去甲肾上腺素（0.01～0.05μg·kg-1·min-1）维持血流动力学指标稳定。术毕带气管导管送回ICU。所有患者均在以下时间点从左侧桡动脉通路采集血样：麻醉诱导前(T0),手术开始时(T1),主动脉侧壁阻断后(T2),主动脉侧壁开放后(T3),术毕即刻(T4)，术后24小时(T5)和术后48小时(T6)。分别于麻醉诱导前(T0),手术开始时(T1),主动脉侧壁阻断后(T2),主动脉侧壁开放后(T3),术毕即刻(T4)五个时间点行动脉血气分析检测，记录血乳酸和血糖浓度。并且于麻醉诱导前（T0）,术毕即刻(T4),术后24小时(T5)和术后48小时(T6)行血C-反应蛋白（CRP）、血清肌钙蛋白T(cTnT)、N‐末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)检测。于术前1天、术后7天由同一位经过专业培训的医师进行认知功能测试。 数据统计分析采用SPSS12.0版软件包进行资料分析，P<0.05认为差异有统计学意义。计量资料若符合正态分布数据时，以均数±标准差（x±s）表示，若不符合，以中位数（第25百分位数，第75百分位数）表示。组间比较采用成组t检验，组内比较采取配对t检验；若不符合正态分布，采用非参数检验。计数资料比较采用Fisher确切概率法。 结果 1.两组患者基本资料（年龄，身高，体重，性别，受教育年限），术前左室射血分数（EF值）和心功能分级比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 2.两组患者围术期资料（手术时间，主动脉侧壁阻断时间，搭桥支数，术中输液量，术中输血量，拔管时间，ICU滞留时间和术后48小时视觉模拟评分）比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 3.两组患者术中药物使用情况比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 4.两组患者术中血流动力学变化比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 5.两组患者术中血乳酸浓度的比较：L组血乳酸浓度于T2,T3,T4时间点显著低于C组（0.93±0.02mmol/L vs.1.47±0.03mmol/L,0.98±0.09mmol/L vs.1.48±0.08mmol/L,1.05±0.02mmol/L vs.1.48±0.05mmol/L，P<0.05）。 6.两组患者术中血糖浓度的比较：L组血糖浓度于T2,T3,T4时间点显著低于C组（7.03±1.56mmol/L vs.8.00±1.80mmol/L,7.45±1.32mmol/L vs.8.39±1.77mmol/L,8.05±2.54mmol/L vs.9.17±2.30mmol/L，P<0.05）。 7.两组患者CRP浓度于T4时开始上升。L组CRP浓度在T5、T6时间点显著低于同时间点的C组[56.53mg/L（50.24-112.32）vs.90.52mg/L（49.51-152.20）,125.30mg/L（90.25-155.20）vs.161.00mg/L（105.6-256.60），P<0.05]。 8.两组患者cTnT浓度于T4时开始上升。L组cTnT浓度在T5、T6时间点显著低于同时间点的C组[0.12ng/ml（0.10-0.52）vs.0.32ng/ml（0.11-0.85）,0.11ng/ml（

关键词： 高通量血液透析   低通量血液透析   微炎症状态   营养状态  

摘要： 目的：探讨常规血液透析和高通量血液透析两种不同治疗析方式对维持性血液透析患者微炎症状态和营养状况的影响。方法：选取2011年7月至2012年11月在自治区人民医院血净中心长期固定的50例维持性血液透析患者,将入选患者随机分成两组,分别使用低通和高通两种不同的透析器进行透析。以3个月为观察周期,分别测定两组患者入组后首次透析(透析前)和治疗3个月后(透析前)的血浆白蛋白(Alb)、血红蛋白(HB)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、β2微球蛋白(p2-GM)、甲状旁腺激素(PTH)的水平进行比较,同时进行主观综合性营养评估(subjective global assessment SGA),记录入组时和治疗3个月后的体重、体重指数、肱三头肌皮肤皱褶厚度(TSF)、上臂中段周径(MAC)和上臂中段肌肉周径(MAMC)。使用游标卡尺测量TSF用软尺测量MAC再计算MAMC。结果：CHD组与HFHD组首次透前各项指标比较无统计学差异(P>0.05)；CHD组治疗3个月后对Cr、BUN、PTH、IL-6、CRP清除无统计学意义(P>0.05),对Alb和Hb的影响无统计学意义(P>0.05)；HFHD组治疗3个月后对BUN、Cr青除无差异(P>0.05),对PTH、IL-6、CRP、β2-GM清除有统计学意义(P<0.05),对Alb和Hb的提升有统计学意义(P<0.05)；HFHD组与CHD组之间治疗3个月后对Cr、BUN清除无统计学意义(P>0.05),对PTH、β2-GM、IL-6、CRP清除有统计学意义(P<0.05),对Alb、Hb的提升有统计学意义(P<0.05)。HFHD组治疗3个月后肱三头肌皮褶厚度、上臂中段周径测量值升高,有统计学意义(P<0.05),两组治疗后对体重、BMI、MAMC的测量值无统计学意义。结论：高通量透析与常规低通量透析相比对PTH、β2-GM等大中分子毒素和IL-6和CRP等微炎症细胞因子的清除能力更显著,治疗效果优于常规透析。可以更有效降低长期透析病人的微炎症状态,并使营养不良状态得到一定改善,对MHD患者的预后有着重要意义。

关键词： 氧化修饰蛋白质   氧化应激   滑膜细胞   炎症反应  

摘要： 研究背景 类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是以一种以对称性多关节病变为主的慢性自身免疫性疾病。它的基本病理学改变是滑膜组织衬里层的滑膜细胞呈轻中度增生状态,炎性细胞浸润蔓延到血管周围,形成血管翳。关节滑膜炎症及血管翳的形成是其主要的病理特点,表现为侵蚀性血管翳的形成,继而破坏关节软骨、软骨下骨、骨及其周围组织。 RA全世界的发病率约为0.5%-1.0%,小于45岁的患者约占80%,其发病起始5年致残率高达30%。临床上RA主要表现为受累关节的肿胀及疼痛,继而发生关节强直及畸形改变,最终导致关节功能障碍从而使患者丧失劳动能力。RA的发生发展会对患者的生理及心理造成严重影响,影响其日常生活及社会活动,降低患者生活质量。因此,RA是一种严重威胁人类健康的疾病,探讨其真正的发病机理进而进行预防和治疗成为医务工作人员的一项重要使命。 “氧化应激”是体内氧化系统与抗氧化系统的平衡被打破所导致的一种活性氧族物质(Reactive oxygen species, ROS)增多的一种状态。ROS是生物体内有氧代谢产生的含氧自由基,主要包括超氧阴离子(O2-)、羟基(-OH)和过氧化氢(H2O2)。ROS在细胞信号级联反应中起着第二信使分子的作用。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate, NADPH)氧化酶是细胞内ROS产生的主要来源。氧化应激会造成蛋白质、脂质、DNA等多种生物大分子氧化损伤,而且蛋白质受到的氧化损伤要早于脂质过氧化及其对DNA的损伤。因此,目前普遍认为蛋白质是体内氧化应激损伤的主要原初靶。 氧化修饰蛋白质(Advanced oxidation protein products, AOPPs)是一类含双酪氨酸的蛋白质交联产物,在体内氧化应激过程中,它是由激活的中性粒细胞髓过氧化物酶产生的次氯酸(HCLO)作用于蛋白质(主要是白蛋白)而形成的,是一种蛋白质氧化应激标志物,是体内蛋白质氧化所形成的终末产物的总称。1996年由Witko-Sarsat等人首先从慢性肾衰竭(Chronic renal failure, CRF)患者血浆中分离出来。在体外试验中,用正常人血浆或纯化的人血清白蛋白(Human serum albumin, HSA)与HCIO相作用,亦可得到与慢性肾衰竭病人血浆中类似的AOPPs。 体内氧化应激的状态会造成蛋白质肽链断裂、交联、碳基生成和构象变化等结构和功能改变,形成氧化修饰蛋白质AOPPs。在生理状态下,氧化修饰的蛋白质很易被蛋白水解酶水解,蛋白质氧化修饰有利于体内蛋白质的更新与代谢。但是,在氧化应激状态下,蛋白质修饰的速率会增加,体内AOPPs水平明显增加。AOPPs水平的增高与许多氧化应激相关性疾病如慢性化脓性中耳炎、慢性肾脏疾病、糖尿病、肥胖症、恶性肿瘤的发生发展有很大的关系,并与疾病的严重程度密切相关。因此,AOPPs是氧化应激的重要标志物。 AOPPs不仅是氧化应激的后果,其本身作为致病介质具有广泛的病理作用,参与人类多种重要疾病的发生发展。有研究已经证实AOPPs能够激活单核细胞,诱导呼吸链爆发,增加ROS的生成,刺激TNF-α、IL-6、IL-1等促炎症细胞因子的合成释放,诱发细胞炎症反应,参与慢性肾衰患者全身微炎症状态的发生发展。此外,AOPPs本身就是活性氧族物质ROS的来源,可作为大分子生物介质参与许多病理过程。 RA患者普遍存在以氧化还原失衡为特征的氧化应激。RA患者氧化应激水平会升高会导致体内的血液、关节液中的蛋白质尤其是白蛋白的氧化损伤明显增加,进而增加RA患者体内AOPPs的含量,提升ROS水平。近年来,许多研究证实ROS可激活下游的多条细胞信号转导通路,如促分裂素原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases, MAPK)、核因子-κB (Nuclear factor-kappa B,NF-κB)等信号通路。有研究证实ROS敏感的NF-κB信号途径在滑膜细胞炎症反应过程中起着重要的调节作用。 人类关节滑膜为疏松结缔组织,可分为两层：滑膜衬里层和滑膜衬里下层。滑膜衬里层是由成纤维细胞样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)和巨噬样细胞组成,而衬里下层是由疏松结缔组织基质构成。FLS与其深层的纤维细胞并无基底膜相隔,直接与纤维结缔组织或脂肪组织相连接,故在关节发生炎症时易蔓延到周围组织,是介导RA患者发生滑膜炎症的重要细胞。 由于AOPPs与氧化应激和炎症反应密切相关,所以本研究认为AOPPs(?)可能通过激活FLS内NADPH氧化酶

关键词： 强直性脊柱炎   IL-23/Th17炎症轴   IL-17   STAT3   清热活血法  

摘要： 强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)是种慢性进行性的炎性疾病,炎症、骨破坏和新骨形成是其发展过程中三个典型的病理改变。AS的炎症主要累及脊柱、骶髂关节及其附近的肌腱、韧带等组织。随着疾病的发展,炎症所造成的侵蚀破坏逐渐影响了骨皮质,引起了骨的破坏,骨破坏后又继发了新骨形成。这一过程累积性发作,最终导致了骶髂关节的融合,椎体的方形变,脊柱周围肌腱韧带的钙化及骨桥形成,引发脊柱“竹节样”变,从而引起残疾。因此,炎症是导致AS残疾的首要环节,控制炎症是廷缓骨破坏,延缓AS病情进展的关键。IL-17可通过与不同的细胞上的IL-17受体结合,从而开启多种致炎途径,是介导AS炎症的关键因子。IL-23/IL-17炎症轴则是Th17增殖分化和IL-17合成分泌的一个重要途径。IL-23可通过与已分化的Thl7表面的IL-23受体结合后,通过JAK2/STAT3途径活化STAT3,同源STAT3二聚体化进入细胞核后一方面可以与Th17的特异性转录因子RORc结合,开启了Th17的分化,一方面可以与IL-17的启动子结合,开启的IL-17的合成和分泌。因此,IL-23／Th17在导致AS炎症中发挥了重要作用,是临床治疗AS炎症的一个靶方向。 AS的活动期往往处于AS的早中期,此时炎症因子活跃,AS炎症处于爆发阶段,AS病情进展迅速,是治疗AS,保护患者关节功能的关键阶段。活动期的AS临床症状往往较为严重,常表现为湿热痹阻证,其病因病机为肾气亏虚为本,湿热痹阻为标,血瘀作祟而为痹,贯穿疾病始终。急则治其标,此时AS的治疗以清热利湿活血为主。我们在前期研究中发现,清热活血法治疗活动期AS的疗效显著,特别是在控制炎症和改善关节活动度上,发挥了重要作用。但清热活血法抑制AS炎症机制尚未明确。因此,我们建立以下实验证实IL-23／Th17炎症轴是清热活血法治疗的靶目标,清热活血法是通过降低IL-23的水平,封闭JAK2／STAT3信号通路的活化,抑制RORc的表达,从而抑制Th17的增殖分化和IL-17的表达水平,达到控制AS炎症的目的。实验一、外周单个核细胞的分离和冻存细胞的复苏目的：实验对象为PBMC和外周血清,通过分离外周静脉血获取实验样本,通过复苏冻存细胞获取实验所需PBMC.方法：30例AS患者均来自广安门医院门诊或住院病人,符合1984年修订的AS纽约诊断标准,BASDAI≥4分。30例正常对照为健康体检者和(或)本单位健康职工。采用Ficol1-hypaque密度梯度离心法分离PBMC；采用常规细胞复苏法复苏冻存细胞。 结果：密度梯度离心法分离后,获取PBMC和血清；细胞复苏后细胞沉淀用为实验样本。 结论：密度梯度离心法为分离外周单个核细胞经典方法,是将实验所需样本从外周静脉血分离,获取外周单个核细胞的重要方法。冻存细胞是储存细胞,备用于实验的经典方法；细胞复苏即可将冻存细胞用于实验。 实验二、活动期AS患者血清水平IL-23及IL-17表达情况 目的：IL-17是介导AS炎症的重要炎性因子,而IL-23是诱导IL-17合成分泌的关键的细胞因子。本实验通过检测活动期AS患者和正常对照外周血血清IL-23及IL-17表达水平,探析IL-23、IL-17在AS患者体内表达情况。 方法：采用ELISA法检测血清IL-23及IL-17水平。 结果：活动期AS患者IL-23、IL-17表达水平较正常对照显著升高(IL-23：p<0.001；IL-17：p<0.001)。 结论：IL-17可通过多种途径介导AS炎症,在AS病理机制中发挥了重要作用,它的高表达介导了AS炎症。IL-23是诱导IL-17分泌的关键的因子,它的异常可能是导致IL-17的表达水平升高一个重要因素。 实验三、清热活血法对血清IL-23、IL-17水平的影响 目的：清热活血法在控制AS炎症,延缓病情中发挥了关键的作用。检测活动期AS患者经清热活血法治疗三个月和六个月后,血清IL-23、IL-17的表达水平,探析清热活血法对IL-23、IL-17表达的影响。 方法：采用ELISA法检测血清IL-23及IL-17水平。 结果：清热活血法治疗三个月后,IL-23、IL-17表达水平较活动期AS组,即治疗前组明显下降(IL-23：p<0.05；IL-17：p<0.05)；治疗六个月后,IL-23、IL-17表达水平同样显著下降(IL-23：p<0.01；IL-17：p<0.01)；而且治疗六个月后,IL-17表达水平较治疗三个月表达水平下降更明显(p<0.05),但IL-23较治疗三个月无统计学意义(p>0.05)。 结论：清热活血法治疗AS疗效明确,尤其是在控制AS炎症,改善患者

关键词： 副干酪乳酸杆菌   脂多糖   巨噬细胞   炎症因子表达   负调控因子   分子机制  

摘要： 背景:乳酸杆菌(lactobacillus)是肠道正常菌群中的主要成员，也是一种重要的益生菌。长期以来，人们一直认为乳酸杆菌最重要的功能是维持肠道微生态平衡，然而越来越多的证据表明，乳酸杆菌更重要的作用是调节机体免疫应答。在炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)以及肠外疾病动物模型中，包括乳酸杆菌在内的益生菌均有一定程度菌株依赖的免疫调节能力。乳酸杆菌主要菌体成分如脂磷壁酸脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)和肽聚糖(peptidoglycan，PGN)等与机体免疫细胞之间的相互作用是其发挥免疫调节能力最重要的过程之一，而Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)等固有免疫细胞相关识别受体在这个过程中发挥了至关重要的作用。已经有研究证实，乳酸杆菌可以抑制细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的单核巨噬细胞炎症性细胞因子的产生。然而其分子机制并不明了。进一步探讨乳酸杆菌与机体免疫系统之间的识别应答机制显得十分重要。\n 目的:探讨副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracacei，***)预刺激抑制LPS诱导THP-1细胞释放炎性细胞因子的机制。\n 方法:用PMA诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞样细胞;以***预刺激为实验组，小剂量LPS（10 ng/ml）预刺激和TLR2激动剂Pam3CSK4预刺激为对照组，预刺激24小时后，再用大剂量LPS（1 ug/ml）刺激经分化的THP-1细胞;检测预刺激对TLR信号通路负调控分子的表达水平、对TLR4和CD14的膜表达水平以及mRNA水平以及对大剂量LPS诱导的炎性细胞因子IL1-β、TNF-α水平的影响。各目的蛋白mRNA水平检测采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法，TLR4和CD14的膜表达检测采用流式细胞法。\n 结果:***及小剂量LPS、Pam3CSK4等预刺激能够降低大剂量LPS诱导的IL-1β、TNF-α表达水平;并能够上调细胞TLR信号途径负调控分子A20、SOCS1、SOCS3、IRAK3的mRNA水平，但不影响细胞膜TLR4和CD14阳性百分率; IRAK1/4抑制剂和TLR2封闭抗体能够减弱预刺激诱导的负调控分子表达水平，并减弱预刺激抑制LPS诱导炎症因子释放的效应。\n 结论:副干酪乳酸杆菌预刺激能够通过上调TLR信号通路负调控分子A20、SOCS1、SOCS3、IRAK3等的表达抑制单核巨噬细胞对LPS刺激的炎性细胞因子应答。

关键词： 肠黏膜损伤   全身炎症反应   致炎通路   评估指标   动物模型  

摘要： 目的:以急性DSS诱导结肠炎组、慢性DSS诱导结肠炎组和对照组小鼠各10例为研究对象，通过对DAI、肠屏障通透性以及炎性指标的评估，明确结肠炎模型小鼠肠道通透性改变和肠黏膜受损情况。通过测定小鼠结肠长度、脾脏重量以及通过蛋白质芯片技术寻找差异性血浆炎性蛋白，获得肠源性感染全身炎症反应的途径。　　方法:选取17周龄雌性小鼠30只，随机分为急性组、慢性组和对照组三组，每组10只。实验期间，每天对小鼠进行称重，粪便性状评估以及测便隐血数值。小鼠处死后，分离结肠和脾脏，测量记录结肠长度和脾脏重量。观察结肠标本HE染色（及透射电镜下）肠黏膜病理组织学变化。采用紫外分光光度法检测血清DAO水平，比色法检测DLAC浓度，AAM-INF-G1芯片选取差异蛋白，测定蛋白为BLC，CD30L, Eotaxin, Eotaxin-2, FasLigand, Fractalkine, GCSF, GM-CSF, IFNγ,IL-1α, IL-1β,IL-2,IL-3,IL-4,IL-6,IL-9,IL-10,IL-12p40p70,IL-12p70,IL-13,IL-17, I-TAC, KC, leptin, LIX, lymphotactin, MCP-1, MCSF, MIG, MIP-1α,MIP-1γ, RANTES, SDF-1, TCA-3, TECK, TIMP-1, TIMP-2, TNFα, sTNFRⅠ,sTNFRⅡ。　　结果:与阴性对照组相比，急性组(P=0.0013)、慢性组(P=0.0000)小鼠体重指数均下降，具有统计学意义，急慢性组体重指数差异无统计学意义（P=0.8720）;急性组（P=0.0114）、慢性组（P=0.0001）小鼠DAI增加具有统计学意义，急慢性组DAI差异无统计学意义（P=0.5061）;急性组（P=0.6125）、慢性组(P=0.2898)小鼠DAO水平与对照组均无明显差异;急性组（P=0.1221）较对照组DLAC浓度较高，无统计学意义，慢性组（P=0.0412）较对照组DLAC浓度明显升高，有统计学意义，慢性组较急性组DLAC浓度较高(P=0.3198)，无统计学意义;急性组(P=0.0002)、慢性组（P=0.0001）小鼠肠黏膜病理评分升高具有统计学意义，急慢性组病理评分未见明显差异（P=0.4711）;急性组(P=0.0004)、慢性组（P=0.0002）小鼠结肠长度减少具有统计学意义，急慢性组结肠长度减少无明显差异（P=0.0765）;急性组(P=0.3087)、慢性组(P=0.8605)小鼠脾脏重量指数（脾脏重量/处死前体重）均与对照组无明显差异;与阴性对照组相比，急性组sTNFRⅡ（P=0.0425）、KC（P=0.0372）、MIG（P=0.0340）明显升高，sTNFRⅠ(P=0.0511)、TIMP-2(P=0.0721)非显著性升高，慢性组sTNFRⅡ明显升高(P=0.0433)，sTNFRⅠ（P=0.1734）、KC(P=0.7715)、MIG(P=0.0833)非显著性升高。与慢性组相比，急性组TIMP-2明显升高(P=0.0228)。　　结论:成功构建DSS诱导急慢性肠黏膜损伤小鼠模型，并通过血浆细胞因子抗体芯片筛查炎症通路技术筛选得出包括sTNFRⅡ，KC，MIG和TIMP-2在内共4种炎症差异蛋白。初步阐明了各炎症蛋白在肠源性感染中的作用与机制，为下一步的深入研究提供了依据。

关键词： 全身炎症反应综合症（SIRS）   重复性力竭运动   Ghrelin   大鼠  

摘要： 目的：研究Ghrelin在重复性力竭运动诱导大鼠全身炎症反应中的抗炎作用。 方法：43只健康雄性Wistar大鼠，体重300±10g，随机分为四组：正常对照组（R，n=6），重复性力竭运动组（E，n=18），Ghrelin正常干预组（G，n=6），重复性力竭运动Ghrelin干预组（GE, n=13），E组和GE组均每天分别于电动跑台上以12m/min、10%的坡度开始运动，每5min速度增加3m/min，最大增加至27m/min，直至力竭，记录力竭时间，休息2min，继续进行力竭运动，重复力竭三次。G和GE组以8nmol/kg的剂量给予Ghrelin腹腔注射，每天两次，注射十天。所有大鼠在第十天力竭运动后24小时取材。用ELISA试剂盒分析血清中LPS、D乳酸、TNF-α、IL-10、IL-6和HMGB1的含量，用Westernbloting法测定心脏、肝脏、肺脏、肾脏、小肠、骨骼肌中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10、HMGB1的蛋白表达情况。 结果： 1、LPS和D-乳酸：Ghrelin与重复性力竭运动有显著的交互作用（P<0.01），其中E组血清LPS和D-乳酸含量与R组相比显著升高（P<0.01），G组血清LPS和D-乳酸含量与R组相比无显著性差异，GE组血清LPS和D-乳酸含量与E组相比显著下降（P<0.01）。 2、血清中TNF-α、IL-6和各组织中IL-1β、TNF-α：Ghrelin与重复性力竭运动有显著交互作用（P<0.01），其中E组血清中TNF-α、IL-6和各组织中IL-1β、TNF-α含量与R组相比显著升高（P<0.01），G组血清中TNF-α、IL-6和各组织中IL-1β、TNF-α含量与R组相比无显著性差异，GE组血清中TNF-α、IL-6和各组织中IL-1β、TNF-α含量与E组相比显著下降（P<0.01）。 3、血清中IL-10和各组织中IL-4、IL-10：血清中IL-10的Ghrelin与重复性力竭运动有显著交互作用（P<0.01），其中E组血清中IL-10含量与R组相比显著升高（P<0.01），G组血清中IL-10含量与R组相比无显著性差异，GE组血清中IL-10含量与E组相比显著下降（P<0.01）。各组织中IL-4、IL-10的除肺组织IL-4外Ghrelin与重复性力竭运动无显著交互作用。肺组织IL-4的Ghrelin与重复性力竭运动有显著交互作用（P=0.044<0.05），其中E组肺组织IL-4含量与R组相比显著升高（P<0.01），G组肺组织IL-4含量与R组相比无显著性差异，GE组肺组织IL-4含量与E组相比无显著差异。 4、HMGB1：血清中和各组织中HMGB1的Ghrelin与重复性力竭运动有显著交互作用（P<0.01），其中E组HMGB1含量与R组相比显著升高（P<0.01），G组HMGB1含量与R组相比无显著性差异，GE组HMGB1含量与E组相比显著下降（P<0.01）。 结论： 1.重复性力竭运动导致大鼠肠黏膜损伤，也导致了大鼠全身炎症反应。 2. Ghrelin对重复性力竭运动导致的大鼠肠黏膜损伤有保护作用。 3. Ghrelin对大鼠全身炎症反应中的早期炎症因子有抑制作用。 4. Ghrelin对大鼠全身炎症反应中的晚期炎症因子HMGB1有抑制作用。