关键词： 酪蛋白糖巨肽   酶解   炎症   血红素加氧合酶-1   核转录因子-κB  

摘要： 肥胖症患者伴有的体内炎症介质水平上升,是其罹患慢性非传染性疾病的重要危险因素。为了预防和治疗肥胖相关慢性疾病,首先需要改善机体低度慢性炎症状态。酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,GMP),是一种来源于κ-酪蛋白并具有多种生理活性的C-末端亲水性糖肽,能够降低肥胖大鼠体重和血脂水平,对肥胖大鼠机体的炎症状态有一定的改善作用。本研究以RAW264.7巨噬细胞和3T3-L1前脂肪细胞作为细胞研究模型,选取碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶分别酶解GMP,筛选获得具有良好抗炎活性的GMP酶解产物,并对其抗炎机制进行深入研究,为将GMP及其酶解产物作为功能乳基料用于早期营养干预肥胖及相关慢性炎症疾病提供了理论基础和科学依据。本研究利用脂多糖(LPS)刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞建立炎症反应模型,评价GMP及其酶解产物对LPS刺激巨噬细胞炎症反应的影响。结果表明,GMP经木瓜蛋白酶作用1h后所得的酶解产物(命名为:酪蛋白糖肽)对LPS刺激巨噬细胞TNF-α mRNA表达和NO生成具有最强的抑制作用。同时,酪蛋白糖肽显著抑制LPS刺激RAW264.7巨噬细胞内TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8及iNOSmRNA表达,并呈浓度依赖效应。此外,建立H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞氧化损伤模型,评价酪蛋白糖肽的体外抗氧化活性。结果发现酪蛋白糖肽通过提高机体内源性抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性,减少细胞内ROS积累,缓解H2O2诱导RAW264.7细胞的脂质过氧化和蛋白质羰基化,降低细胞凋亡水平。本研究进一步评价了酪蛋白糖肽抑制巨噬细胞炎症反应的分子机制,研究酪蛋白糖肽对LPS刺激巨噬细胞内炎症信号通路激活的影响。结果表明,酪蛋白糖肽通过阻碍LPS与TLR4结合,下调TLR4基因和蛋白表达,抑制RAW264.7细胞表面TLR4的信号活化,进一步抑制下游IKKβ/IκBα/NF-κB的信号转导路径激活,从而缓解巨噬细胞炎症反应。此外,酪蛋白糖肽可以下调LPS刺激RAW264.7巨噬细胞内ROS水平和提高细胞内还原型GSH含量,显著降低LPS刺激RAW264.7巨噬细胞NOX2基因和蛋白表达,抑制外源ROS诱导的NF-κB活化,表明酪蛋白糖肽可通过缓解LPS刺激RAW264.7巨噬细胞内氧化还原状态失衡,抑制ROS介导的NF-κB活化发挥其抗炎效应。为了明确Nrf2/HO-1途径在酪蛋白糖肽抑制巨噬细胞炎症反应中的作用,本研究利用HO-1特异性抑制剂ZnPPIX和酪蛋白糖肽共同干预LPS刺激RAW264.7巨噬细胞炎症反应模型。结果表明,酪蛋白糖肽对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞内炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS)和NOX2基因表达、ROS生成及NF-κB核移位的抑制作用可部分被ZnPPIX处理逆转。此外,酪蛋白糖肽通过诱导RAW264.7巨噬细胞Nrf2核移位,促进细胞内HO-1表达。添加ROS清除剂NAC、P13K抑制剂LY29400、ERK抑制剂PD98059和p38抑制剂SB203580均能显著下调细胞HO-1表达和细胞核Nrf2水平,表明酪蛋白糖肽诱导RAW264.7巨噬细胞HO-1表达依赖于细胞内ROS信号以及P13K/Akt和MAPKs(ERK1/2和p38)信号通路激活。最后,建立小鼠RAW264.7巨噬细胞与成熟脂肪细胞条件培养基共培养体系,体外模拟脂肪组织微环境,初步评价酪蛋白糖肽对脂肪组织炎症的干预效果。结果表明,与GMP相比,酪蛋白糖肽对巨噬细胞条件培养基(MΦ-CM)诱导3T3-L1脂肪细胞炎症因子(TNF-α、IL-1β、iNOS、MCP-1)基因表达的抑制效果更显著。并且,酪蛋白糖肽还可显著抑制脂肪细胞条件培养基(3T3-CM)诱导的RAW264.7巨噬细胞活化,下调细胞内炎症因子(TNF-α、IL-1β、iNOS、MCP-I)基因表达。脂肪组织炎症反应与细胞内TLR4高表达有关,酪蛋白糖肽通过抑制细胞TLR4mRNA表达,有效缓解条件培养基共培养体系下脂肪细胞和巨噬细胞炎症反应。

关键词： 既病防变   加味黄芩汤   炎症性肠病癌变   IL-6/STAT3信号通路  

摘要： 目的： 根据中医“既病防变”理论,从整体、分子及细胞水平探讨加味黄芩汤对肠道炎症及肿瘤的发生、发展的影响及与IL-6/STAT3通路调控作用的关系。明确IL-6/STAT3信号通路与慢性炎症及癌变的关系,达到预防炎症性肠病癌变的目的,最终降低结直肠癌的发病率。为防治结直肠癌提供新的研究思路,探索新的防治方法。 方法： 1.实验一：将大鼠70只随机分成正常对照组、模型组、加味黄芩汤组、美沙拉嗪组、黄芩汤组、马齿苋组,每组10只,参照文献方法制作TNB S诱导的结肠炎大鼠模型。结肠组织做病理切片；放射免疫检测血清IL-6含量；免疫组化染色方法检测MPO；酶联免疫分析法检测sIL-6Rα、gp130； RT-PCR方法检测STAT3、IL-6mRNA。 2.实验二：将小鼠75只,随机分成正常对照组、模型组、黄芩汤组、加味黄芩汤组、马齿苋组,每组15只,依据文献复制小鼠结肠炎相关结肠癌(CAC)模型。组织病理学观察；细胞凋亡指数；ELISA法检测MPO、TNF-α水平。 3.实验三：将小鼠50只,随机分为正常对照组、模型组、环磷酰胺组、黄芩汤组、加味黄芩汤组,每组10只,建立S180肉瘤接种建立荷瘤小鼠模型及小鼠结肠癌细胞株(CoCon-26)培养；体内抑瘤作用观察IR；T淋巴细胞增值：体外抑瘤作用：对小鼠结肠癌细胞株CoCon-26的作用。 结果： 1.加味黄芩汤能够改善炎症性肠病大鼠进食量及排便,减轻肠粘膜水肿,与模型组、黄芩汤组、马齿苋组、美沙拉嗪组比较差异具有显著性。在血清IL-6、肠组织MPO及血清sIL-6Ra、gp130含量,STAT3、IL-6mRNA的表达水平等方面,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01),黄芩汤组、马齿苋组、美沙拉嗪组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。黄芩汤组、马齿苋组、美沙拉嗪三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 2.加味黄芩汤能减轻炎症性肠病癌变小鼠结肠粘膜水肿,减少炎症反应,与模型组、与黄芩汤组、马齿苋组比较差异具有显著性。在对细胞凋亡指数、MPO及TNF-α的影响方面,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01),与黄芩汤组、马齿苋组比较差异具有统计学意义(P<0.05),黄芩汤组与马齿苋组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 3.加味黄芩汤能够促进T淋巴细胞增殖,抑制荷瘤小鼠体内肿瘤生长,抑制小鼠结肠癌细胞CoCon-26的增殖能力,加味黄芩汤组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01),与黄芩汤组、马齿苋组比较差异具有统计学意义(P<0.05),与环磷酰胺组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论： 1.加味黄芩汤能够改善大鼠进食量及排便,进一步减轻肠粘膜水肿；通过降低大鼠血清IL-6、肠组织MPO及血清sIL-6Rα、gp130含量,进一步减轻sIL-6Rα与IL-6形成复合物而引起的炎症反应；进一步通过IL-6/STAT3信号通路,下调大鼠肠组织STAT3、IL-6mRNA的表达水平,起到抑制炎症的发生。 2.加味黄芩汤能改善结肠粘膜水肿,减少炎症反应,降低MPO、NF-α水平,抑制细胞凋亡。说明加味黄芩汤通过有效抑制炎症反应,减轻细胞水肿,抑制细胞凋亡,进一步抑制炎症发生癌变。这可能是加味黄芩汤抑制炎症性肠病癌变的机制之一。 3.加味黄芩汤能够促进T淋巴细胞增殖,促进机体细胞免疫,提高机体免疫功能,有效抑制荷瘤小鼠体内肿瘤生长。可以抑制小鼠结肠癌细胞CoCon-26的增殖能力,减少肿瘤的发生。

关键词： DIABETES complications   INFLAMMATION   DIAGNOSIS   ACADEMIC medical centers   BIOCHEMICAL markers   C-reactive protein   COGNITION disorders   CONFIDENCE intervals   CORRELATION (Statistics)   MENTAL depression   MULTIVARIATE analysis   QUESTIONNAIRES   REGRESSION analysis   FINANCING of research   STATISTICS   LOGISTIC regression analysis   DATA analysis   GERIATRIC Depression Scale   DATA analysis software   DESCRIPTIVE statistics   ODDS ratio   KRUSKAL-Wallis Test   ONE-way analysis of variance  

摘要： The aim of the study was to determine the serum levels of soluble adhesion molecules and hs-CRP in elderly diabetics with mild cognitive impairment (MCI) alone or with depressive symptoms. Methods. 219 diabetics elders were screened for psychiatric disorders and divided: group 1, MCI without depressive mood;group 2, MCI with depressive mood;group 3, controls. Data of biochemical parameters and biomarkers were collected. Results. In groups 1 and 2 levels of all biomarkers were significantly higher as compared to controls. The highest level of hs-CRP and sICAM-1 was detected in group 2. SVCAM-1 and sE-selectin levels were also the highest in group 2;however they did not significantly differ as compared to group 1. MoCA score was negatively correlated with all biomarkers in group 1. The logistic regression model showed that variables which increased the likelihood of having depressive syndrome in MCI patients were older age, stroke, neuropathy, increased number of comorbidities, and higher sICAM-1 level. Conclusions. We first demonstrated that elderly diabetic patients with MCI, particularly those with depressive mood have higher levels of soluble adhesion molecules and markers of low-grade systemic inflammation. Coexisting depressive syndrome in patients with MCI through common inflammatory pathways may result in augmentation of psychiatric disorders.

关键词： 经颈内静脉门体分流术   门奇断流术   炎症反应   肠道生物屏障  

摘要： 目的:通过观察经颈内静脉肝内门体分流术(TIPS)及门奇断流术对肝硬化门脉高压症患者炎性介质、细胞因子及肠道菌群的影响,探讨两种手术方式对于全身炎症反应及肠道生物屏障影响的差异性。方法:对22例因门脉高压症行TIPS患者和10例行门奇断流术患者,用ELISA法、硝酸氮还原法和硫代巴比妥酸法分别测定术前及术后一周的门静脉、肝静脉及下腔静脉中TNF-α,IL-1β,IL-6,NO和MDA水平。应用梯度变性凝胶电泳法测定术前及术后一月肠道菌群的变化。结果:TIPS组和断流术组术后门静脉压力均有显著降低(P<0.05)。TIPS组炎症介质及MDA在术后未见明显变化(P>0.05)。断流术组炎症介质及MDA在术后明显升高(P<0.05)。TIPS组和断流术组NO水平在门静脉和肝静脉处明显降低(P<0.05),肠道菌群量较术前也显著减少(P<0.05)。结论:TIPS术和门奇断流术均可有效降低门静脉压力,改善肠道生物屏障功能。TIPS术创伤小,不加重全身及局部炎症反应及免疫应激。而断流术,创伤较大,短期内会增加全身及局部炎症反应及免疫应激。

关键词： 全身炎症反应综合征   免疫调节   血必净注射液  

摘要： 目的:观察血必净注射液对重症监护病房(ICU)全身炎症反应综合征(SIRS)患者免疫功能的影响。方法:将2013年1月至2013年12月入住贵州省人民医院重症监护病房的SIRS患者经过初步筛查,选择符合本研究标准的患者,并且根据自愿原则并最终配合完成本实验的56名SIRS患者,按照随机原则,将其分为对照组(C组)和血必净治疗组(T组)。对照组实行常规治疗基础上加用0.9%氯化钠注射液150ml,每日两次,血必净治疗组在常规治疗基础上联合使用血必净注射液50ml+0.9氯化钠注射液100ml,每日2次;观察两组患者治疗前、治疗后4d、治疗后7d的血清中的炎性介质IL-6、TNF-α,以及免疫指标Ig G、Ig M、Ig A、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及CD14+人类白细胞相容性抗原DR(HLA-DR)水平动态变化,并同时观察相应时间点患者的APACHII评分,心率、白细胞、体温、呼吸的变化以及MODS的发生率。本实验采用双盲法,即给药者及观察检测者分开,观察者及检测者不知道分组状况及给药情况。结果:对照组与血必净组两组患者治疗前基础状态的各项指标如年龄、性别、疾病种类、APACHII评分、生命体征及免疫状态均无明显统计学差异(P>0.05);两组治疗4d后、7d后,血必净组较对照组IL-6、TNF-ɑ、Ig G、Ig M、Ig A、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及CD14+HLA-DR水平,明显改善,均有统计学意义(P<0.05)。治疗组APACHII评分,心率、白细胞、体温、呼吸的变化亦较C组改善(P<0.05),两组MODS的发生率无统计学意义(P>0.05)。结论:血必净注射液能减少全身炎症反应综合征患者炎性因子的水平,改善患者的细胞免疫、体液免疫功能状况以及全身状况。

关键词： 冠心病   高密度脂蛋白   血清淀粉样蛋白A   炎症因子   急性时相反应蛋白   冠心病   高密度脂蛋白   血管内皮细胞   血清淀粉样蛋白A   炎症  

摘要： 第一部分：冠心病患者血浆高密度脂蛋白组分与血浆炎症相关指标的相关性研究研究背景：炎症是促进冠心病(coronary artery disease, CAD)发生、发展的重要因素。已有研究表明血浆炎症指标与CAD的关系密切,尤其是在急性冠脉病变患者中,血浆中某些急性时相反应蛋白和炎症因子的水平升高意味着预后不良。然而,这些炎症相关指标与稳定性冠心病(stable coronary artery disease, sCAD)之间的关联研究甚少。而炎症促进CAD的具体机制尚不明确。血浆高密度脂蛋白(high-density lipoprotein, HDL)可通过促进组织细胞内的胆固醇外流、抗炎症及抗氧化反应,以及直接的内皮保护功能抑制动脉粥样硬化。血浆高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)水平过低是心血管疾病发生的独立危险因素。然而,最近发现高血浆HDL-C水平者仍然存在发生急性心肌梗死的风险,CAD患者血浆HDL-C水平预测心脏事件的能力下降,有可能与CAD患者血浆HDL的保护功能减弱或丧失有关。越来越多的研究证实炎症是引起血浆HDL功能及组分改变的重要因素之一,而CAD患者体内长期存在的慢性炎症有可能通过干扰HDL代谢引起HDL-C水平及HDL组分的改变,进而影响了HDL正常生理功能的发挥。血清淀粉样蛋白(serum amyloid A, SAA)是一种由肝脏合成的急性时相反应蛋白,炎症反应时,血浆SAA水平升高,且可掺入HDL颗粒中,影响HDL的功能。本课题组的前期研究已发现,CAD患者血浆HDL中的SAA水平升高。因此,为了进一步研究CAD患者体内炎症状态与HDL组分中SAA (HDL-associated SAA)水平的关系以及炎症相关指标在CAD诊断中是否具有价值,本研究拟从以下研究目的入手,进行研究。研究目的：1.比较稳定性冠心病(stable coronary artery disease, sCAD)患者、急性冠脉综合征(acute coronary syndrome, ACS)患者与非CAD对照者之间血浆炎症相关指标[急性时相反应蛋白hsCRP(高敏C反应蛋白)、AAT(α1-抗胰蛋白酶)和SAA/炎症因子IL-6(白细胞介素-6)和MCP-1(单核细胞趋化蛋白-1)]水平的差异。2.评价单独或联合检测上述血浆炎症相关指标在CAD诊断中的价值。3.分析比较CAD患者(包括sCAD及ACS患者)血浆HDL-C水平、HDL-associatedSAA水平与上述血浆急性时相反应蛋白／炎症因子水平之间的相关性。研究方法：1.临床病例收集：本研究共纳入经冠状动脉造影确诊的CAD患者116例及性别、年龄相匹配的非CAD对照患者65例。根据患者胸痛发作的特点及心肌酶学等检查结果,将CAD组进一步分为稳定性冠心病(stable coronary artery disease, sCAD, n=42)及急性冠脉综合征(acute coronary syndrome, ACS, n=74)两亚组。2.实验室指标检测：所有研究对象采集空腹静脉血,超速密度梯度离心法分离提取血浆HDL。采用BCA法检测血浆HDL样品中的蛋白含量,免疫印迹法鉴定HDL样品中载脂蛋白A-I的富集。应用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)技术检测血浆α1-抗胰蛋白酶(al-antitrypsin, AAT)水平、血浆SAA水平以及HDL组分相关的SAA水平。液相芯片技术检测血浆白细胞介素-6 (interleukine-6, IL-6)及单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemotactic protein 1, MCP-1)的水平。3.数据分析：统计学方法比较各组间上述急性时相反应蛋白/炎症因子血浆水平的差异。Logistic回归分析上述炎症指标与CAD发病之间的关系。受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评价上述指标单独或联合检测在诊断CAD方面的价值。非参数Z检验比较不同指标在CAD诊断中的价值差异。Pearson或Sperman相关性分析评价血浆HDL-C水平、HDL-associated SAA水平与上述急性时相反应蛋白/炎症因子血浆水平的相关性。研究结果：1.与非CAD对照组相比较,ACS患者血浆hsCRP、AAT、SAA、IL-6以及MCP-1的水平均明显升高[hsCRP:2.59 (1.07-5.31) mg/L vs.1.21 (0.70-2.07) mg/L, P<0.001; AAT:151.55±22.17 mg/dl vs.137.

关键词： 泛素-蛋白酶体系统   P-糖蛋白   表达下调  

摘要： 目的研究急性炎症状态下大鼠肝P-糖蛋白翻译后修饰的机制。方法 20只大鼠随机分成2组,模型组10只,对照组10只。模型组予以腹腔单次注射5 mg·kg-1脂多糖,对照组予以腹腔单次注射等体积0.9%氯化钠。24 h后,取肝组织,制备匀浆,分别用Western blot、免疫沉淀法和荧光法检测模型组和对照组的肝P-糖蛋白表达水平、P-糖蛋白泛素化水平和26S蛋白体活性的变化。结果与对照组相比,模型组肝P-糖蛋白蛋白表达水平显著降低(P<0.01),肝P-糖蛋白泛素化水平显著升高(P<0.01),26S蛋白体的活性显著升高(P<0.01)。结论泛素-蛋白酶体途径参与急性炎症状态下大鼠肝P-糖蛋白的下调。

关键词： 气道炎症   中性粒细胞   炎症小体   IL-1β   L-17A+λδT细胞  

摘要： 背景支气管哮喘是一种复杂的气炎症反应综合征,以气道阻塞、气道炎症和气道高反应性为特点。难治性哮喘以中性粒细胞气道炎症为主。臭氧暴露是诱导中性粒细胞气道炎症的方法,但是其具体机制尚未明确。此外,臭氧暴露还可以导致哮喘患者急性发作。臭氧介导的气道炎症的特点是中性粒细胞浸润、气道高反应性以及前炎症因子的释放,如TNFα、IL-6、MIP-21-4。目前的很多研究表明,T细胞在哮喘的发生和发展过程中发挥了重要的作用。T细胞可以通过产生细胞因子介导炎症细胞聚集和气道高反应性的发生。Th17细胞是近年来发现的不同于Thl和Th2细胞的另一种CD4+T细胞的新亚型,有调查发现哮喘患者体内IL-17水平升高。IL-17是一种促炎因子,可以调节中性粒细胞反应。临床研究发现,IL-17A与IL-17F的表达水平与哮喘病人的病情严重程度呈正相关,重度哮喘患者血清中IL-17的水平较轻、中度患者明显增高,激素抵抗的重症哮喘患者IL-17A的水平与气道中性粒细胞数量呈正相关。炎症小体9-11是由胞浆内多蛋白复合物,是天然免疫系统的重要组成部分。炎症小体能够识别PAMPs或者宿主来源的DAMPs,招募和激活促炎症蛋白酶Caspase-19。活化的Caspase-1切割IL-1p和IL-18的前体,产生相应的成熟细胞因子9-11。IL-1p是IL-1家族的成员之一,作为一种重要的炎症调节因子参与多种疾病的发生发展。炎症小体参与很多与IL-1β相关的疾病如cryopyrin-associated periodic综合征、肠炎以及2型糖尿病13。IL-1β在抗感染免疫与慢性炎症相关的组织损伤中都起重要作用。IL-1β联合IL-6以及IL-23可通过促进转录因子IFR4和RORyt的表达促进Th17分化¨。Caspase-1和IL-1信号通路都与臭氧介导的中性粒细胞气道炎症有关”,但其具体机制未明。γδT细胞是一种T细胞的亚群,表达TCRyδ,是区分于与αβT细胞的另一种T细胞亚型16-18。γαTδT细胞属于非MHC限制性免疫细胞,可不通过抗原识别过程直接识别抗原,但识别范围较窄。外周血的γδT细胞占总T细胞数量的5%以下。组织γδT细胞主要分部在肺、皮肤、尿道以及小肠的粘膜中。78T细胞参与了很多生物学过程如感染性疾病,自身免疫性疾病,及抗肿瘤免疫19,20。分泌IL-17的78T细胞在肿瘤生长21及肾损伤22中都起关键调节作用23。在COPD24和过敏性疾病患者25体内,γδT细胞比例增高。已有研究报道,γδT细胞参与臭氧诱导的中性粒细胞气道炎症,但其具体机制未明。由于炎症小体-IL-1信号通路及IL-17均在中性粒细胞气道炎症中起关键调节作用,本课题假设臭氧可以活化炎症小体,促进成熟型IL-1p产生。微环境中的IL-1β可以活化γδT细胞分泌IL-17,最终导致中性粒细胞气道炎症。本研究在臭氧诱导的中性粒细胞气道炎症模型中,通过整体模型、体外细胞培养等方法,阐明炎症小体在哮喘发病中对IL-17+γδT细胞/中性粒细胞炎症调控的关键分子机制,为开发研究治疗气道慢性炎症性疾病新的药物靶点提供理论依据。第一部分臭氧诱导中性粒细胞气道炎症和IL-17A+γδT细胞目的：建立臭氧诱导的中性粒细胞气道炎症模型,观察IL-17A的变化,寻找IL-17A的分泌来源。方法：C57/BL6小鼠(雌性,6-8周)随机分为2组,每组5-7只小鼠。分别予以空气(Air)和臭氧(Ozone)暴露72小时,停止暴露后24小时处死小鼠。取小鼠BALF,进行细胞总数与细胞分类计数。Elisa方法测定肺组织炎症因子的表达。BCA法测定BALF蛋白浓度。病理切片HE染色观察气道炎症细胞浸润。提取肺组织淋巴细胞流式分析IL-17A+细胞的比例及其分泌来源。Ⅱ17a-/-小鼠臭氧暴露,观察其BALF炎症细胞、炎症因子及BALF,总蛋白的表达。结果：成功地构建了中性粒细胞气道炎症模型。小鼠BALF炎症细胞浸润明显增加,肺组织炎症因子IL-1β, IL-18, IL-17A, G-CSF, IP-10表达明显增加,BALF,总蛋白水平明显增加。臭氧诱导气道炎症的同时伴随着IL-17A+淋巴细胞的增多。分泌IL-17A的淋巴细胞主要为TCRγδ+γδT细胞,而不是TCRβ+细胞。Il17a-/-小鼠阻断IL-17A可以有效地抑制臭氧诱导的中性粒细胞气道炎症和炎症因子分泌。结论：臭氧暴露可以成功地诱导中性粒细胞气道炎症,这种气道炎症是由IL-17A和IL-17A+γ8T细胞介导的。第二部分臭氧暴露活化炎症小体和IL-1R通路目的：探讨臭氧介导中性粒细胞气道炎症的分子机制。方法：C57/BL6小鼠分为Air组和Ozone组,Ozone组小鼠暴露与0.7 ppm臭氧环境中,分别在暴露中6h、12h、24h、

关键词： 大肠杆菌   脓毒症   外源性一氧化碳   NF-κB  

摘要： 背景与目的脓毒症是由感染、创伤或各种疾病引发的系统性炎性反应,是一种复杂的严重的临床综合征。尽管在危重病的诊断与救治已经高度发展的今天,其发病率及病死率仍旧居高不下。据最新的流行病学调查显示,在美国每年罹患脓毒症的病人数约为其人口总数的3%,并且其中有四分之一的病人死亡。这些脓毒症病例中由细菌感染引起的约占总数的95%,而由革兰氏阴性杆菌感染引起的病例占所有脓毒症患者的62.2%,其中大肠杆菌是重要的感染源(占总数的16%)。在脓毒症后期,患者肠道功能紊乱,肠道屏障功能降低,作为条件致病菌的大肠杆菌能发生菌群移位,从而进一步加重脓毒症患者的感染。本研究旨在探索外源性一氧化碳释放分子Ⅱ(CORM-2)对体外大肠杆菌(ATCC25922)生长的抑制作用以及CORM-2对大肠杆菌诱导的感染小鼠炎症反应的抑制作用,并分析其作用机制。方法本研究分为两部分。第一部分,观察CORM-2对体外大肠杆菌生长的抑制作用。本节研究中,将大肠杆菌在体外与CORM-2或无活性的iCORM2共同孵育培养,通过观察细菌48小时的生长曲线和对应的菌落计数来验证CORM-2对大肠杆菌的抑制作用。第二部分,小鼠腹腔注射大肠杆菌,建立大肠杆菌诱导的小鼠感染模型。再应用CORM2对大肠杆菌诱导的感染小鼠进行干预,验证CORM-2对感染小鼠的炎症反应的抑制作用及其机制。实验分组为对照组、细菌组、细菌+CORM-2组、细菌+iCORM-2组。细菌组小鼠于腹腔注射预先制备的大肠杆菌悬液0.5ml;对照组腹腔注射同等剂量的NaCl溶液;CORM-2和iCORM-2组于腹腔注射大肠杆菌悬液后分别尾静脉注射CORM-2或iCORM-2 (8mg/kg),观察各组小鼠36小时生存率。另取小鼠制作模型,于6小时后分别收集各组小鼠血清和肝肺组织,苏木精一伊红(HE)染色的方法观察肝、肺组织病理学改变;终点显色法检测血清中内毒素LPS的含量;通过测定肺组织湿干重比(W／D)来判断肺部的水肿情况;通过血清转氨酶的测定来判断肝脏功能、肝细胞的损伤情况;使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清及肝、肺组织匀浆中早期炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-1p(IL-Iβ)的表达水平;通过检测肝、肺组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)活性来反应中性粒细胞的浸润、聚集程度;使用实时定量荧光PCR的方法检测一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达;使用菌落计数检测腹腔灌洗液、血、肝肺组织中大肠杆菌的数目;使用Western-blot蛋臼质印迹法检测核因子κB (NF-κB)活性。结果1、CORM-2对体外大肠杆菌的生长有抑制作用。实验结果显示与细菌组和细菌+iCORM2组比较,细菌+CORM-2组细菌的生长明显被抑制,进入增殖活性平台期的时间明显滞后,且同期菌落计数表明,细菌数明显减少。2、CORM-2能够提高大肠杆菌引起的脓毒症小鼠的生存率,对细菌感染引起的小鼠炎症反应有抑制作用。使用CORM-2干预能降低细菌感染小鼠血清中LPS水平,减轻其肺间质水肿程度,保护肝脏的功能,减少血浆及肝肺脏中炎症因子TNF-α、IL-1β的表达水平,减少重要脏器白细胞的浸润和大肠杆菌的数量,降低iNOS mRNA表达,同时亦抑制了重要炎症信号分子NF-KB的活化,提高细菌感染小鼠36h的生存率。结论CORM-2能够直接抑制体外大肠杆菌的生长,抑制大肠杆菌诱导的感染小鼠的炎症反应,保护重要脏器,提高感染小鼠生存率,这可能与CORM-2抑制炎症信号分子NF-KB的活化有关。

关键词： miR-101   ABCA1   炎症因子  

摘要： 目的：探讨在炎症或非炎症条件下microRNA-101(miR-101)对人单核巨噬细胞(THP-1)和人肝癌细胞(HepG2)胆固醇外排的影响,为揭示miR-101在动脉粥样硬化发生中的作用机制提供实验依据。材料与方法：构建miR-101或Anti-miR-101慢病毒载体并建立高表达miR-101或Anti-miR-101细胞模型。使用双荧光素酶报告基因检测验证miR-101与三磷酸腺苷结合盒转运体Al(ABCAl) mRNA的3’非编码区(3’UTR)互补结合,分组为野生型(WT)+Con-miR组、定点突变(SDM)+miR-101组与WT+miR-101组。非炎症条件下THP-1与HepG2各分为对照组,miR-101组和Anti-miR-101组；炎症条件下各分为对照组,miR-101组,Anti-miR-101组,IL-6组(0.2%BSA+20ng/ml IL-6), TNF-a组(0.2%BSA+25ng/ml TNF-a), IL-6+miR-101/ Anti-miR-101组及TNF-a+Anti-miR-101组。各组再根据是否用LDL (0.2%BSA+25μg/ml LDL)处理,分为LDL负荷和无LDL负荷。采用oil red O染色检测细胞内脂质蓄积,酶法测定胞内胆固醇含量,荧光标记胆固醇法(BODIPY-cholesterol)检测载脂蛋白A-I(apoA-I)介导的胆固醇外排。运用实时荧光定量RT-PCR检测miR-101基因表达,Western Blotting检测ABCA1蛋白表达。结果：在结合位点2,与WT+Con-miR组和SDM+miR-101组比较,WT+miR-101组ABCA1 3'UTR活性显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。非炎症状态,THP-1和HepG2在有无LDL负荷条件下,与对照组相比,miR-101组的ABCA1蛋白表达显著降低,apoA-I介导的细胞胆固醇外排明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。Anti-miR-101组ABCA1蛋白表达明显增加,apoA-I介导的细胞胆固醇外排显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-101组或Anti-miR-101组分别可以促进或减少THP-1和HepG2胞内胆固醇聚集,差异有统计学意义(P<0.05)。在炎症状态下,与对照组比较,IL-6组与TNF-a组HepG2miR-101表达显著增加,IL-6组THP-1 miR-101表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与IL-6组和TNF-α组比较,IL-6+Anti-miR-101组与TNF-a+Anti-miR-101组THP-1和HepG2 ABCA1蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：miR-101通过与ABCA1基因3’UTR端互补结合下调细胞ABCA1蛋白表达抑制胆固醇外排；炎症可以使细胞miR-101表达增加并增强miR-101促进胆固醇聚集的作用；下调细胞miR-101表达可以减轻炎症对ABCA1蛋白抑制作用。miR-101在动脉粥样硬化的发生发展过程中起到重要作用。