关键词:
白术转腰汤
转化生长因子-β1
免疫炎症反应
黄韧带纤维化
大鼠
M2巨噬细胞
摘要:
目的 探讨白术转腰汤(《辨证录》转腰汤加鸡血藤、苏木、牛膝)对腰椎黄韧带纤维化的影响及其免疫调控机制。方法 将24只雄性SD大鼠随机分为4组,即正常组、模型组、氯磷酸盐组和白术转腰汤组,每组6只。除正常组外,其余各组均采用腰椎失稳法,通过持续微损伤建立腰椎黄韧带纤维化大鼠模型。白术转腰汤组给予白术转腰汤灌胃,其余各组给予等量生理盐水灌胃,每天1次,持续30 d。氯磷酸盐组于造模后即刻、9、18和27 d分别原切口皮下注射氯磷酸二钠脂质体(5 g/L,0.5 m L)。30 d后过量麻醉处死大鼠,采用HE染色和Masson染色对大鼠黄韧带进行组织学评估,计算胶原容积分数(CVF);采用免疫组化染色法检测黄韧带中转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,采用免疫荧光双标法检测M2巨噬细胞中CD163与TGF-β1表达情况。构建M2巨噬细胞和成纤维细胞的共培养体系,利用RTqPCR分别检测各组细胞TGF-β1、TNF-α和IL-1β的mRNA表达。结果 与正常组相比,模型组和白术转腰汤组HE染色、Masson染色可见韧带纤维致密、扭曲,免疫细胞浸润,CVF增加,模型组大鼠的黄韧带组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1β显著增加,白术转腰汤组中TGF-β1、TNF-α显著增加(P<0.01);与模型组相比,氯磷盐酸组与白术转腰汤组细胞外基质堆积情况得到改善,黄韧带CVF显著降低,黄韧带组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1β显著降低(P<0.01);与氯磷盐酸组比较,白术转腰汤组细胞外基质堆积增加,CVF显著升高,韧带组织中TGF-β1、IL-1β升高(P<0.05);免疫荧光提示,正常组与氯磷盐酸组未见CD163和TGF-β1表达,模型组CD163和TGF-β1大量表达并共定位,白术转腰汤组可见较多CD163表达,但TGF-β1表达极少。在细胞RT-qPCR结果中,与正常组比较,共培养体系显著增加了M2巨噬细胞中TGF-β1、IL-1β,成纤维细胞中TNF-α、IL-1β的mRNA表达;与共培养对照组比较,中药预处理M2巨噬细胞的共培养组中,M2巨噬细胞中TGF-β1、IL-1β和成纤维细胞中TNF-α、IL-1β的mRNA表达降低(P<0.05)。结论 白术转腰汤能对大鼠腰椎黄韧带纤维化进程产生显著的抑制作用,降低M2巨噬细胞中TGF-β1和IL-1β的表达,并影响成纤维细胞TNF-α和IL-1β的表达,抑制M2巨噬细胞TGF-β1介导的免疫炎症反应,发挥抑制黄韧带炎症-纤维化正反馈的作用。