关键词： 类风湿性关节炎   佐剂性关节炎   巨噬细胞   NLRP3炎症小体   miR-223   细胞因子  

摘要： 类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一个以关节滑膜炎症为特点的慢性自身免疫性疾病,它可以导致骨的侵蚀和关节的破坏,最后造成关节畸形,病因迄今仍未被阐明。RA的发病与炎症密切相关,异常的细胞免疫反应和体液免疫反应在疾病发病中起着重要作用。有学者研究表明巨噬细胞在RA发病中至关重要。固有免疫反应是机体防御病原体的第一道防线,炎症小体作为固有免疫的重要组成部分,主要通过模式识别受体(pattern recognization receptors, PRRs)来识别病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns, PAMPs),从而产生免疫应答。PRRs包括位于细胞膜的Toll样受体(TLRs)、位于细胞质的NOD样受体(NLRs)、C型凝集素受体(CLRs)等。NLRP3炎症小体是迄今为止研究最为广泛的由NLR家族组成的炎症小体之一,参与炎症、肿瘤的发病,也在正常生理稳态维持过程中起到重要的作用。佐剂性关节炎(AA)大鼠模型是最为经典的RA动物模型之一,本课题在前期研究中发现,AA模型大鼠血清以及腹腔巨噬细胞体外培养的细胞上清液中IL-1β、 IL-18等炎症因子分泌明显增加(P<0.01)。使用免疫组织化学方法测得AA大鼠滑膜组织中NLRP3炎症小体的三个组分NIrp3、ASC、caspase-1均明显提高(P<0.01)。提示NLRP3炎症小体可能参与AA大鼠的发病。与此同时,前期研究发现AA大鼠腹腔巨噬细胞中的NLRP3炎症小体组分表达增加的同时(P<0.01)而miR-223表达明显降低(P<0.01)。微小RNA(miRNA)是广泛存在于动植物中由21-25个核苷酸构成非编码RNA。有学者研究表明miRNA与许多病理生理过程密切相关,它可识别特定的目的RNA,使之降解或表达下调,参与基因转录后水平调控,从而影响目的基因的蛋白质合成,在细胞分化、凋亡等生理活动中发挥重要的调控作用。本课题组使用双荧光素酶鉴定NLRP3和miR-223存在靶向关系。鉴于AA模型中以及AA模型腹腔巨噬细胞中NLRP3炎症小体各组分以及下游调控的各种炎症因子分泌异常,miR-223表达下调,本课题联系三者的密切相关性,提出科学假设：AA发病中miR-223是否通过调控NLRP3炎症小体的表达从而影响下游细胞因子的分泌?miR-223能否具有缓解AA发病的靶向药物的前景?本课题鉴于Nlrp3以及miR-223的表达在大鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7、THP-1细胞上存在共性,因此,本课题利用RAW264.7巨噬细胞株为工具细胞开展课题研究。研究内容主要包括以下四个部分：***大鼠模型建立以及炎症因子检测从模型建立成功第12天开始,AA大鼠体重较Normal组明显减轻,继发性的足肿胀较Normal组明显增加,但从第28天开始,逐渐出现恢复迹象。病理组织学观察显示,AA大鼠与Normal组相比,滑膜明显增厚,由3-4层甚至更多层滑膜细胞组成,并向关节腔内伸展,骨组织及软骨组织有少量破坏,同时有大量炎性细胞浸润至关节组织,并有少量血管生成。ELISA结果显示,AA组与Normal组相比,血清中的IL-1β、IL-18、IL-22及IL-33的浓度明显升高。免疫细胞化学和免疫荧光检测发现,AA大鼠腹腔灌注提取的细胞呈CD68强阳性,表明提取的细胞为巨噬细胞。ELISA结果显示,AA组大鼠腹腔巨噬细胞上清液中IL-1β和IL-18的浓度明显高于Normal组;2. NLRP3炎症小体与miR-223在AA大鼠中的表达AA大鼠造模成功之后,取AA大鼠滑膜组织与Normal组滑膜组织用免疫组化方法检测,结果表明：AA大鼠滑膜组织中NIrp3、ASC、caspase-1阳性细胞数量明显高于Normal组,且差异具有统计学意义。real-time PCR和western bblot结果显示,AA大鼠腹腔巨噬细胞中NIrp3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白的水平明显高于Normal组,而miR-223表达则降低。提示NLRP3炎症小体与miR-223可能存在调节关联。3.巨噬细胞的筛选与NLRP3炎症小体在RAW264.7细胞株上调控炎症因子分泌本课题组使用LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7细胞、THP-1细胞,ELISA结果显示,IL-1p和IL-18的含量明显高于正常组,real-time PCR结果提示,LPS诱导可以显著降低大鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7细胞、THP-1细胞中miR-223mRNA的水平,同时Nlrp3的mRNA和蛋白水平表达明显增加,其差异具有统计学意义。LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7细胞、THP-1细胞在Nlrp3与miR

关键词： 牙周炎   先天性免疫   适应性免疫  

摘要： 在牙周炎这一慢性炎症反应过程中，涉及了一系列的免疫炎症反应。牙周炎的免疫炎症主要有两个方面：先天性免疫反应和适应性免疫反应。先天性免疫反应由不同细胞和因子组成，其中最重要的是补体、急性期蛋白、中性粒细胞；适应性免疫包括细胞介导的免疫炎症反应和体液介导的免疫炎症反应。近年来，有学者发现具有Toll样受体（TLRs）的树突状细胞介导的免疫调节在牙周炎中发挥一定作用。本文从先天性和适应性免疫反应两个角度，对目前有关免疫炎症反应与牙周炎的关系进行综述。

关键词： 急性脑卒中   免疫炎症反应   免疫干预  

摘要： (第一部分)急性脑卒中的免疫干预（Clinical trial NCT02002390）研究目的与内容:大量的动物实验研究和临床观察证明急性脑卒中后的免疫炎性反应与患者的临床表现和预后紧密相关。目前脑卒中治疗手段是非常有限,许多脑保护治疗措施都是失败的。那么干预免疫和炎症反应是否能为治疗脑卒中提供了新的手段呢,这对脑卒中的临床治疗提出了新的挑战及机遇。芬戈莫德是鞘氨醇1-磷酸受体（S1PR）调节剂,第一个通过了FDA的治疗多发性硬化的口服药物。它通过作用于淋巴细胞亚群S1P受体从而抑制淋巴细胞从次级淋巴器官释放而抑制淋巴细胞浸润脑组织,同时该药物具有降低血脑屏障通透性以及对神经元的直接保护作用,能够减小病灶体积并促进细胞再生。基于以上理论,我们在临床开始一系列脑卒中的免疫干预试验来验证免疫干预治疗的临床效果及临床实践的可行性,本临床实验属于前瞻性探究性实验,包括出血性脑卒中的和缺血性脑卒中的研究两项。研究方法:芬戈莫德治疗脑出血的临床概念性研究:共纳入符合入选标准定的脑出血患者23例,匹配临床和CT特点后把患者分成对照组,和芬戈莫德组。首次服药前和服药后对外周循环淋巴细胞亚群检测,判断药物对细胞亚群的作用。对患者进行GCS、NIHSS、m BI和m RS评分。同时在7、14天时复查患者的头部MRI,利用FLAIR序列评估水肿体积。并且记录患者服药后的不良反应和并发症。芬戈莫德治疗脑梗死临床概念性研究:纳入了符合入选标准22名急性期前循环脑梗死患者。匹配临床和MRI特点后把患者分成对照组和芬戈莫德组。首次服药前和服药后对外周循环淋巴细胞亚群检测,判断药物对细胞亚群的作用。并对患者进行NIHSS、m BI和m RS评分。同时在7天时复查患者的头部MRI,利用FLAIR序列评估病灶体积的扩大和利用T1对比增强序列计算出r T1%来评价病灶部位的血管渗出,并且记录患者服药后的不良反应和并发症。研究结果和结论:芬戈莫德治疗脑出血的临床概念性研究:服用芬戈莫德的患者与对照组比较,明显的降低外周血液中的CD4+、CD8+、CD19+淋巴细胞亚群的数量并显示出有效治疗作用。在发病7天时,服用芬戈莫德的全部患者的GCS都为15分,而对照组只有50%的患者为15分（p=0.01）,以及7天时芬戈莫德的患者与对照组比较NIHSS评分明显降低。在90天时芬戈莫德治疗组病人神经功能几乎完全恢复。芬戈莫德治疗组的7天水肿体积明显低于对照组（47ml vs 108ml,p=0.04）,7天和14天水肿体积指数明显低于对照组。在不良反应事件方面,两组并无统计学差异芬戈莫德治疗脑梗死临床概念性研究:芬戈莫德组患者在服药72小时后,CD4+、CD8+、CD19+细胞总数分别下降了67%、70%、76%,在7天的核磁扫描发现芬戈莫德组病灶体积扩增明显受到抑制（9 vs 27 cm3,p=0.05）,微血管的渗出明显受到抑制（r T1%,11.5 vs 20,p=0.005）。伴随着急性期7天内的病理损害减轻,临床的神经功能也明显改善。在对11个药物组患者安全性方面的观察,未发现药物的不良反应,未增加感染的几率及脑梗死的并发症。（第二部分）自体间充质干细胞对视神经脊髓炎谱系疾病的探究性治疗（Clinical trial NCT02249676）研究目的与内容:视神经脊髓炎是一种中枢神经系统的炎性自身免疫性疾病,病变多局限于视神经和脊髓.这个病发病率较低,但它是毁灭性的,导致积累残疾,5年死亡率约为30%。幸存者通常留下严重后遗症,包括失明,四肢瘫痪和呼吸衰竭。目前临床无有效治疗药物。骨髓间充质干细胞具有免疫调节及促进组织修复的作用,因此我们首次利用了自体骨髓间充质干细胞对视神经脊髓炎患者进行治疗。向15例难治性视神经脊髓炎谱系疾病（neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSDs）患者回输实验室处理后的自体骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cell,BMSC）,初步探讨BMSC对视神经脊髓炎谱系疾病的疗效及可行性。研究方法:招募符合入选标准的视神经脊髓炎谱系疾病的患者15人,取骨髓20ml,在GMP实验室进行体外培养间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）,在培养至3-4代,干细胞总数已经达到1.0×108个,经过细胞表型的鉴定为合格的MSC,并经过毒、微生物、细胞核的畸变率检测,达到临床应用的标准后,给与患者一次性静脉输入,输入后从疾病的发作及残疾的修复两方面从功能到结构对视神经、脑和脊髓3个部位进性1年的随访,并且记录患者治疗的不良反应和并发症。采用SPSS17.0统计软件包对数据进行统计分析。检验水准取α=0.05,P<0.05为有统计学意义。研究结果:15名患

关键词： TLR4   免疫炎症反应   继发性脑损伤   新生鼠   信号转导   hypoxic   脑组织损伤   细胞损伤   激动剂   神经发生  

摘要： 新生儿缺血缺氧性脑病(Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)的发病机理牵涉到多种复杂因素,其中免疫炎症反应是其关键因素之一。TLR4(Toll like receptor-4)通过My D88依赖性通路和TRIF依赖性通路调节免疫炎症反应。在大鼠和小鼠脑缺氧缺血后,TLR4通路被激活,增强炎症反应,并加重脑组织损伤;在新生鼠脑组织中可见TLR4的表达;用特异性TLR4激动剂活化TLR4通路可以导致发育时期大脑的白质损伤;敲除TLR4基因可增加少突胶质细胞对LPS导致的细胞损伤的耐受;TLR4对神经发生和神经轴突生长的调节起关键作用,并且调控干细胞的增殖和分化。TLR4信号通路可能参与HIE的发生发展和继发性脑损伤的免疫炎症反应过程及脑损伤后的神经修复的调控。

关键词： 经皮肾镜碎石术   全身炎症反应综合征   影响因素  

摘要： 目的:研究经皮肾镜碎石术(percutaneous nephroithotomy,PCNL)后发生全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)的影响因素以便更好的指导临床如何预防PCNL后SIRS的发生。方法:收集重庆医科大学附属第一医院2012年12月至2014年1月121例行PCNL患者,通过回顾性分析研究年龄、结石的位置、性别、肾脏积水程度、肾脏结石大小、手术时间、结石培养、肾盂尿培养、术前中段尿培养与术后是否发生SIRS的关系。单因素分析采用卡方检验,多因素分析采用logistic回归分析。结果:单因素分析结果提示性别、肾脏积水程度、肾脏结石大小、手术时间、结石培养、肾盂尿培养、术前中段尿培养与术后发生SIRS有一定关系(P<0.05),与年龄及结石位置无关系(P>0.05),多因素研究结果表明:术后SIRS的发生与手术时间、性别、结石培养及肾脏积水程度有密切关系(P<0.05)。结论:PCNL术后SIRS的发生与手术时间、性别、结石培养及肾脏积水程度有密切关系,需引起高度重视。PCNL术中应严格控制手术时间,术后需完善结石细菌培养。

关键词： 全身炎症反应综合征   C-反应蛋白   降钙素原   抗凝血酶Ⅲ   D-二聚体  

摘要： 目的观察不同程度的全身炎症反应综合征(SIRS)患儿的C-反应蛋白(CRP)、降钙素原、D-二聚体及抗AT-Ⅲ浓度水平,探讨其变化与SIRS病情的关系。方法 90例SIRS患儿按SIRS符合项数分为三组,每组30例,选择同期体检正常儿童28例为对照组,记录基本信息,并对所有入选对象进行CRP、降钙素原、D-二聚体及抗AT-Ⅲ浓度检测。结果随着SIRS符合项数的增加,CRP、降钙素原上升,差异有统计学意义(H=81.24/77.64,P均<0.01);随着SIRS符合项数的增加,D-二聚体上升,抗凝血酶Ⅲ活性减低,差异有统计学意义(F=316.61/128.03,P<0.01),两两比较差异均有统计学意义,P<0.01。结论 SIRS患儿合并有凝血功能紊乱,炎症反应越重,凝血功能紊乱越明显。

关键词： 虫草菌粉   复方α-酮酸   血液灌流   维持性血液透析   营养状况   微炎症状态  

摘要： 目的探讨虫草菌粉和复方α-酮酸(KA)联合血液灌流(HP)对维持性血液透析(HD)患者营养不良-微炎症状态的影响。方法将2011年6月至2015年5月医院收治的维持性HD患者108例随机分为3组,分别为HD+HP组(A组)、复方α-酮酸联合HD+HP组(B组)、虫草菌粉和复方α-酮酸联合HD+HP组(C组),分别在治疗前及治疗后6个月进行营养不良-炎性反应评分(MIS)、测定并分析血浆白蛋白、血红蛋白、血清肌酐、C反应蛋白(CRP)及白细胞介素(IL)-6的含量。结果两组MIS评分及血浆白蛋白、血红蛋白、血清肌酐、CRP及IL-6含量等指标比较,差异有统计学意义(P<0.05),A组与C组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论虫草菌粉和复方α-酮酸联合血液灌流可明显改善维持性血液透析患者的营养状况及微炎症状态。

关键词： 免疫炎症反应   补体   心肌梗死   心力衰竭  

摘要： 心血管疾病(动脉粥样硬化、心肌梗死、缺血/再灌注损伤、心力衰竭)是引起全球发病率和病死率的主要原因。近年来,补体介导的炎症已被证实在不同的心血管疾病中扮演重要角色。补体激活可能参与了上述心血管疾病的病理生理学机制。补体系统代表了心血管疾病的新的生物标志物,通过调节机体炎症免疫,恢复机体的免疫平衡,有可能为心血管疾病治疗提供新的靶点。

关键词： 强直性脊柱炎   记忆性T细胞   外周血  

摘要： 本研究通过分析不同组别强直性脊柱炎患者外周记忆性CD8^+T细胞比例、亚群、IFN-γ,IL-2分泌及抗原特异性记忆性T细胞比例与正常对照的差异,探讨自身免疫性炎症反应对强直性脊柱炎患者记忆性T细胞的影响;主要通过流式细胞术检测强直性脊柱炎患者外周血CD8^+记忆性T细胞分布和分泌IFN-γ、IL-2的记忆性T细胞百分比及产生IFN-γ的抗原特异性记忆性T细胞百分比。结果发现与正常对照组相比,强直性脊柱炎各组患者外周总CD8^+记忆性T细胞的比例无显著差异,但亚群比例分析显示疾病组中央型记忆性T细胞比例升高,效应型记忆性T细胞比例有所下降。进一步研究发现各组强直性脊柱炎患者分泌IFN-γ的外周CD8^+记忆性T细胞比例与正常对照相比显著下降(P<0.05),而IL-2的分泌细胞比例无统计学差异;并且疾病组抗原特异性记忆性T细胞比例较正常对照明显升高(P<0.05)。因此强直性脊柱炎患者在疾病状态下,CD8^+TM的数量虽然没有变化,但其产生IFN-γ的功能下降,且抗原特异性记忆性T细胞的比例升高,这可能与患者感染高发相关。

关键词： 维格列汀   二甲双胍   2型糖尿病   胰岛素抵抗   慢性炎症  

摘要： 目的探讨维格列汀联合二甲双胍治疗2型糖尿病的临床疗效及对慢性炎症状态的影响。方法选取2013年7月至2014年9月医院收治的2型糖尿病患者130例,随机分为观察组和对照组,各65例。对照组患者采用二甲双胍治疗,观察组在此基础上加用维格列汀,均持续治疗10周。结果治疗后,观察组患者总有效率为96.92%,高于对照组的86.15%(P<0.05);与治疗前比较,两组患者炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)水平均显著下降(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组腹部不适发生率高于对照组(P<0.05);恶心、低血糖发生率与对照组相当(P>0.05)。结论 2型糖尿病患者在接受二甲双胍治疗基础上加用维格列汀可更有效地控制血糖,减轻炎性反应,改善胰岛素抵抗,不良反应轻。