关键词： 炎症性肠病   分子机制   结肠炎相关性结肠癌   PIAS3   肠纤维化   髓源性抑制细胞  

摘要： 炎症性肠病（Inflammatoryboweldisease，IBD）是一种慢性、反复的，且病因不清楚的肠道自身免疫性疾病，包含溃疡性结肠炎(Ulcerativecolitis，UC)和克罗恩病(Crohn''sdisease，CD)两种。近年来，IBD在我国的发病率逐年上升，其所致的恶性转化疾病如结肠炎相关性结肠癌(Colitis-associatedcolorectalcancer，CAC)和IBD反复炎症所致肠纤维化(Intestinalfibrosis)引发的肠梗阻(Intestinalobstruction)发病率也显著上升，这些疾病严重影响着人们的生活质量和生命健康，且现有的治疗手段很难将其根治。针对肠道炎症恶性转化和纤维化的研究越来越受重视，已成为当今医学的研究热点。　　IBD患者持续的慢性炎症会增加癌变的风险。与散发性结直肠癌(SporadicCRC)相比，CAC发展更迅速，其对抗癌药物的耐受性增强并导致更高的死亡率。研究表明，转录因子NF-κB和STAT3以及相关的信号通路在结肠炎-癌转化过程中异常活化，并促进结肠炎-癌转化的发生。PIAS3(ProteininhibitorsofactivatedSTATs，PIAS3)蛋白最初作为STAT家族的抑制剂而被发现的，PIAS3蛋白可以抑制STAT3的磷酸化，也可以作为类泛素蛋白修饰分子E3连接酶，与NF-κB相互作用来抑制其活性。至今为止，PIAS3在CAC中的作用和分子调控机制尚未阐明清楚。本文中，我们首先在CAC和CRC病人结肠样本以及AOM/DSS模型小鼠的结肠组织中，应用免疫组化，qRT-PCR以及westernblotting方法分别检测PIAS3、miR-18a水平以及NF-κB和STAT3转录活性，发现伴随着炎-癌转化发生，NF-κB和STAT3转录活性显著增加，PIAS3水平降低，miR-18a水平则升高。体外细胞实验发现miR-18a结合在PIAS3的3''-UTR区域抑制PIAS3的表达，PIAS3可以显著抑制NF-κB与STAT3的转录活性，而NF-κB与STAT3又是miR-18a重要的转录因子。基于这些研究结果，我们设想在结肠炎-癌转化过程中存在PIAS3介导的正反馈环路(PIAS3/NF-κB/miR-18a与PIAS3/STAT3/miR-18a)。我们进一步通过CCK-8实验证实PIAS3介导的正反馈环路的存在，并且发现该正反馈环路可调控细胞增殖。结合琼脂糖克隆侵袭实验以及裸鼠异位瘤生长模型发现PIAS3介导的环路可促进结肠肿瘤的生长。此外，在建立AOM/DSS小鼠模型过程中，我们通过PIAS3过表达慢病毒或者miR-18a低表达(anti-miR-18a)慢病毒升高结肠部位PIAS3表达，发现PIAS3过表达可以抑制结肠肿瘤生长。反之，PIAS3低表达会促进结肠肿瘤的生长。综上，我们的研究阐释了PIAS3蛋白在结肠炎-癌症转化过程中的表达情况以及生物学功能。该研究有助于进一步了解结肠慢性炎症向癌症转化新的分子机制，PIAS3/NF-κB/miR-18a与PIAS3/STAT3/miR-18a正反馈环路为CAC的临床治疗提供新的干预靶点与治疗思路。　　IBD反复炎症所致肠纤维化是其常见而严重的并发症之一，肠纤维化导致肠梗阻症状，严重影响人们的生活质量。髓源性抑制细胞(Myeloid-derivedsuppressorcells，MDSCs)在多种器官纤维化如肝纤维化，肺纤维化以及肾纤维化过程中发挥重要作用，然而MDSCs在肠纤维化中的作用和具体的分子机制尚不清楚。本文中，我们首先利用TNBS来诱导小鼠肠纤维化模型，流式检测发现MDSCs含量在肠纤维化小鼠体内明显升高。接着，在建立小鼠肠纤维化模型过程中对小鼠分别进行MDSCs体内回输与体内MDSCs敲除处理，结果发现MDSCs体内回输可以减轻肠纤维化，而MDSCs的敲除可以加重肠纤维化。通过qRT-PCR与ELISA检测发现TGF-β，TNF-α，IL-10，IL-17A，Col1a1以及Col3a1等基因表达变化明显。通过将MDSCs与肠上皮下肌成纤维细胞(Intestinalepithelialmyofibroblasts，ISEMFs)共培养，发现MDSCs分泌IL-10来抑制肌成纤维细胞增殖、活化以及胶原产生。这些结果表明MDSCs可通过分泌IL-10来抑制肌成纤维细胞的活性，从而抑制肠纤维化过程。研究MDSCs在肠纤维化过程中的作用以及分子机制，为临床治疗肠纤维化提供新的治疗靶点和策略。

关键词： 维持性血液透析   慢性微炎症   杂合式血液净化  

摘要： 目的:探讨杂合式血液净化对维持性血液透析患者β2微球蛋白水平及微炎症状态的影响.方法:对本院2015年5月～2017年5月收治的900例维持性血液透析患者为研究对象,随机分为两组,各450例.对照组患者进行单纯血液透析,治疗组患者进行杂合式血液净化,观察两组患者治疗前与治疗后半年的治疗效果.结果:治疗半年后治疗组患者的β2微球蛋白、超敏C反应蛋白以及白细胞介素水平,对比对照组有明显改善.组间对比差异具有统计学意义(P<0.05).结论:对维持性血液透析患者采用杂合式血液净化,具有良好的效果,可有效清除其血液中的分子毒素,缓解机体内的慢性微炎症情况,且治疗安全性高.因此,值得在临床上大力推广并应用.

关键词： 2型糖尿病   胰岛素抵抗   高糖损伤   间充质干细胞   外泌体  

摘要： 研究背景胰岛素抵抗是2型糖尿病（T2DM）的重要特征,高糖毒性、脂肪组织慢性炎症状态是导致胰岛素抵抗的重要原因。目前,脂肪细胞胰岛素抵抗模型以3T3-L1为主,人脂肪细胞胰岛素抵抗模型及高糖损伤现象报道不多。间充质干细胞（MSCs）是一类具有多向分化潜能的非造血干细胞,基础研究已证实MSCs通过免疫调节、组织修复等作用改善T2DM及其并发症。MSCs分泌的外泌体（exosomes）内含有大量生物活性物质,介导细胞之间的物质转运和信息传递,并模拟MSCs的功能。相较于骨髓、皮下脂肪来源的MSCs,脐带来源的MSCs（hUC-MSCs）免疫原性更低、受供体影响更少,但hUC-MSCs及其外泌体对高糖损伤、炎症状态的脂肪细胞作用尚需研究。研究目的1.比较脐带、皮下脂肪来源的MSCs的生物学特性及功能;2.比较3T3-L1与脂肪来源MSCs（hAMSCs）成脂分化及胰岛素抵抗模型的建立效果;3.探索hUC-MSCs来源的外泌体对胰岛素抵抗的脂肪细胞作用,为hUC-MSCs及其外泌体治疗T2DM提供可能的理论依据。研究方法1.生长良好的MSCs分别向成骨、成脂分化,通过流式细胞仪进行免疫表型鉴定,比较多向分化能力及细胞表面抗原表达结果。从hUC-MSCs的条件培养基中通过超速滤过法分离提取外泌体,通过透射电镜形态观察及Western Blot标志蛋白进行鉴定。2.用10ng/ml的TNF-α、35mmo1/L葡萄糖干预诱导成熟的人脂肪细胞、3T3-L1细胞,比较两种脂肪细胞的胰岛素抵抗情况。3.使用hUC-MSCs来源的外泌体干预炎症状态、高糖损伤脂肪细胞,评价4mmol/L葡萄糖组、炎症组、高糖组、炎症+高糖组及外泌体干预后各组胰岛素刺激的葡萄糖摄取、脂肪因子、炎症因子及相关信号通路分子的mRNA、蛋白表达情况。研究结果脐带来源的MSCs成骨、成脂分化能力不及脂肪来源的MSCs。加用罗格列酮后可有效促进3T3-L1细胞成脂分化,但与hAMSCs相比,3T3-L1细胞成脂分化效率不高、胰岛素抵抗模型不够稳定。高糖组、炎症组及两者联合刺激可成功诱导人脂肪细胞胰岛素抵抗模型,表现为胰岛素刺激的葡萄糖摄取下降、促炎因子及瘦素表达上调、脂联素及IRS-1下调。而外泌体干预后可显著改善胰岛素敏感性,作用机制与上调脂联素、SIRT-1表达及下调瘦素表达相关。研究结论hAMSCs成脂分化后使用高糖及TNF-α诱导可建立稳定的胰岛素抵抗模型,hUC-MSCs来源的外泌体可有效改善高糖损伤及炎症状态脂肪细胞的胰岛素敏感性。

关键词： 血液灌流   继发性甲旁亢   微炎症状态  

摘要： 目的分析血液灌流对继发性甲旁亢患者改善微炎症状态的效果评价。方法选取2017年1月至2018年1月到我院治疗慢性肾衰竭继发性甲旁亢的60例患者作为研究对象。根据随机抽签的方式将其分为两组,即:研究组、参照组,每组各30例。其中给予参照组患者实施血液透析滤过治疗;为研究组患者应用血液透析联合血液灌流的治疗方式。观察两组患者的血iPTH、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-a)、C反应蛋白(CRP)清除率及临床症状改善情况,并对其进行比较、分析。结果研究组患者的CRP、iPTH、IL-6、TNF-a的清除率明显高于参照组,差异具有统计学意义(P<0.05);研究组治疗后的临床症状改善情况明显好于参照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论为继发性甲旁亢患者应用血液灌流能够有效的清除炎性因子,改善微炎症状态,同时还可缓解临床不良症状。

关键词： 非酒精性脂肪性肝炎   参附注射液   棕榈酸   NADPH氧化酶4   线粒体功能异常   细胞因子   细胞凋亡   人肠上皮细胞-6   细胞凋亡   细胞因子   活性氧   核转录因子   参附注射液  

摘要： 第一部分参附注射液通过抑制JNK/Nox4和JNK/NFκB途径来保护棕榈酸诱导的肝AML12细胞损伤目的:非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis,NASH)包括脂肪变性、肝炎、肝细胞损伤和纤维化。在本研究中,我们拟探讨一种传统中药-参附注射液(Shen Fu preparation,SF)在体外肝脂肪变性模型中的保护作用和潜在机制。方法:建立棕榈酸(Palmitic acid,PA)诱导鼠肝细胞损伤模拟离体NASH模型,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(Terminal dexynucleotidyl transferase(Td T)-mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL)和甘油三酯比色测定法(TG Colorimetric Assay)对细胞凋亡和细胞内甘油三酯水平(Intracellular triglyceride,i TG)进行评估;分别采用DCF(Dichlorofluorescein,二氯荧光素)和JC-1(5,5‘,6,6’-四氯-1,1‘,3,3’-四乙基苯酸盐-咪唑羰基花青素)测定活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)水平;使用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)评估细胞因子水平;用免疫印迹法(Immunoblot)检测JNK(C-Jun N-terminal kinase,c-Jun氨基末端激酶)、Nox4(NADPH oxidase 4,NADPH氧化酶4)和NFκB(Nuclear factor kappa B,核因子kappa B)的表达变化。结果:参附注射液减轻了棕榈酸诱导的细胞凋亡,以及降低了IL-6(白细胞介素-6)、IL-8(白细胞介素-8)和i TG的表达。经过棕榈酸处理的细胞中,添加参附注射液,可以降低Nox4和ROS的水平,同时MMP、Mn SOD(锰超氧化物歧化酶)和过氧化氢酶的表达升高,表明线粒体功能障碍的发生。应用Nox4抑制剂-GKT137381抑制了由棕榈酸诱导产生的ROS和细胞凋亡的增加,同时降低了i TG的量,但并没有影响IL-8和IL-6的水平。参附注射液可以抑制棕榈酸诱导的磷酸化氨基末端激酶的上调。JNK抑制剂-SP600125抑制了由棕榈酸诱导的Nox4、IL-8、IL-6和i TG的增加。应用参附注射液后,可以阻断棕榈酸处理过的细胞中检测到的NFκB/p65核转位。BAY11-7082,一种IκB(Inhibitor of NF-κB)降解抑制剂,降低了由棕榈酸诱导的IL-8、IL-6以及i TG的量,而它只是轻微地降低了ROS含量,对细胞凋亡没有影响。结论:参附注射液通过减少氧化应激和细胞因子的产生以及抑制JNK/Nox4和JNK/NFκB途径,在预防肝细胞损伤过程中发挥了至关重要的作用。第二部分参附注射液能显著改善脂多糖诱导的肠道上皮细胞损伤目的:肠道上皮细胞在肠道屏障功能的维护中起着至关重要的作用,而潜在的损伤机制还没有完全阐明。本研究拟对一种传统中药-参附注射液(Shen Fu preparation,SF)在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的肠道上皮细胞损伤中的保护作用和分子机制进行系统探讨。方法:采用HIEC-6细胞(Human intestinal epithelial cell,人肠上皮细胞系),单独应用LPS或LPS与SF联合应用来进行实验。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(Terminal dexynucleotidyl transferase(Td T)-mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL)对细胞凋亡进行评估。活性氧(ROS)水平是用DCF(Dichlorofluorescein,二氯荧光素)测定法测定的。经transwell培养板培养的单层人肠上皮细胞-6,通过FITC-albumin influx assay分析其渗透性。应用即时聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)来对细胞因子IL-1β(白介素-1β)、IL-6(白介素-6)和TNF-α(肿瘤坏死因子-α)进行定量分析。蛋白质印迹法(Western blot)用于测定胞浆IκBα(核因子κB抑制因子α)和核NFκB/p65亚基的含量。结果:在脂多糖处理的细胞中发现了细胞凋亡、ROS和细胞因子的产生,以及NFκB/p65的核转位。DPI(二碘基苯)是一种特

关键词： 黄芪注射液   血脑屏障   内皮细胞   脂多糖   microRNA-155  

摘要： 背景严重的全身性炎症造成的多器官损伤中,神经系统并发症可以造成比炎症本身和其他器官损伤更为复杂的情况,而严重的病变更会导致不可逆的病残甚至死亡。黄芪广泛应用于高血压、心脑血管疾病、糖尿病及其并发症、肾病综合症等疾病治疗。研究表明黄芪注射液有增强心肌收缩力,增加冠状血流量,保护心肌细胞、以及改善心血管功能。而其对全身性炎症脑损伤的保护作用研究尚未见报道。本论文探讨了黄芪注射液对LPS诱导的C57小鼠全身性炎症脑损伤的保护作用,同时进一步研究了黄芪注射液是否基于对miR-155的调控,影响其下游信号,改变脑屏障结构部分蛋白表达,从而保护脑屏障结构与功能。研究结果可为黄芪注射液防治LPS所致的脑血管炎性相关疾病提供实验依据。本研究得到了国家自然科学基金面上项目(NSFC-8107308-4、NSFC-No.81572678)和中央高校学生项目(XDJK2017D154)的支持。目的1.观察黄芪注射液对LPS诱导产生的小鼠全身性炎症损伤的保护作用,从整体的角度明确黄芪注射液是否对LPS诱导产生的全身性炎症脑损伤有保护作用。2.观察黄芪注射液对LPS诱导产生的小鼠全身性炎症损伤6天、17天认知功能行为学的影响,从行为学角度观测黄芪注射液对全身性炎症脑损伤的保护效应。3.观测黄芪注射液对LPS诱导产生的小鼠全身性炎症脑损伤血脑屏障结构和功能的影响,基于其对miR-155及下游靶基因的调控,进一步探讨黄芪注射液保护血脑屏障的可能机制。方法1.采用LPS(2 mg/kg)连续三天腹腔注射制备小鼠全身性炎症模型,分为正常对照、模型组(LPS)、阳性对照(地塞米松,30 mg/kg)组,黄芪注射液低、中、高剂量(1、5、10 mL/kg,相当于原药材2、10、20 g/kg)组。于LPS给药前三天开始连续给药17天,每日一次。分别于第6天、第17天观测:(1)小鼠摄水摄食量、体温、体重等评价黄芪注射液对小鼠生存状态的改善;(2)小鼠脑、心、肝、脾、肺、肾重量,评价黄芪注射液对小鼠脏器指数的影响;(3)HE染色、尼氏染色观察黄芪注射液对LPS致炎小鼠脑组织病理变化的影响。2.采用旷场实验(Open-field test)、新物体识别实验(New object recognition task),评测黄芪注射液对小鼠LPS损伤后认知功能的影响。3.采用经心脏灌注Evans Blue(EB),检测脑组织EB渗漏到血管外程度;透射电镜观测血脑屏障超微结构;免疫荧光双标技术观测紧密连接蛋白Claudin-5、ZO-1、Occludin分别与血小板-内皮细胞黏附分子CD31在内皮细胞上的共表达,从形态结构上观测黄芪注射液对LPS致血脑屏障损伤的保护作用。4.采用qPCR检测Claudin-5、ZO-1、Occludin、α-actinin1、Vinculin、cateninα1、mir-155-5p及其下游基因mRNA的表达;利用WB检测紧密连接蛋白Claudin-5、ZO-1、Occludin和RhoA、ROCK2信号通路相关蛋白的表达,初步探讨黄芪注射液对脑损伤后血脑屏障保护的可能机制。结果1.黄芪注射液改善LPS致小鼠炎性综合征状态,减轻LPS造成的脑组织损伤黄芪注射液显著改善LPS造成的体重下降、摄食摄水量减少、体温下降,降低死亡率,升高存活率;减轻LPS造成的脑组织损伤,减少LPS造成的炎细胞浸润、神经元肿胀和神经元坏死;第6天时,黄芪注射液降低LPS造成的脑、心、肺脏器指数上升,第17天时各组小鼠各个脏器指数均恢复。2.黄芪注射液逆转LPS致小鼠认知行为能力下降与正常组相比,LPS连续给药3天后,模型组小鼠的爬行格数、直立次数均显著下降(P<0.01);在第17天时,模型组小鼠新物体识别系数显著降低(P<0.05),爬行格数仍显著下降(P<0.001),直立次数减少,修饰次数、粪便粒数、中央格停留时间增加。与模型组相比,黄芪注射液10 g/kg剂量组新物体识别系数显著升高(P<0.05),地塞米松能显著升高小鼠的爬行格数(P<0.01),直立次数、修饰次数增加,粪便粒数、中央格停留时间减少。3.黄芪注射液保护LPS致血脑屏障损伤模型组C57小鼠脑组织蓝染严重,皮质区红色荧光信号强,脑组织有大量EB渗漏,黄芪注射液减少脑组织EB渗漏。电镜结果显示黄芪注射液10 g/kg剂量组明显拮抗LPS所致的星形胶质细胞肿胀、内皮细胞连接开放。4.黄芪注射液拮抗LPS致脑血管内皮细胞之间紧密连接的表达qPCR结果显示:第6天时,与正常组相比,LPS组降低Claudin-5(P<0.01)、α-actinin1(P<0.01)、Vinculin(P<0.01)、cateninα1(P<0.01)、Rho(P<0.01)、ROCK2(P<0.01)、mir-155-

关键词： 人气道上皮细胞   LPS   miR-223   p120   NF-κB   炎症反应   LPS   miR-223   p120   炎症反应   RhoA   NF-κB  

摘要： 第一部分LPS诱导人气道上皮细胞炎症反应中miR-223表达变化及对NF-κB活性的调控目的 本实验借助内毒素脂多糖(LPS)刺激体外培养的人气道上皮细胞来构建炎症反应的体外模型,检测miR-223及连环素p120(p120)表达变化及其对NF-κB信号通路的影响,初步探讨LPS所致气道炎症的分子机制。方法 根据本实验室前期研究及相关文献,采用CCK8检测不同浓度LPS(0.1μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、100μg/ml及200μg/ml)对细胞活性的影响。根据CCK8结果,选取20μg/ml LPS作为刺激条件,采用Western Blot检测不同时间点p120、p-IKK、IKKα、p-IκB、IκBα、p-p65及NF-κB p65蛋白的表达变化,运用Real-time PCR检测p120 m RNA水平以及miR-223的表达情况。选取p120变化最明显的时间点6h作为LPS刺激时间,分别转染miR-223类似物、miR-223抑制物及各自阴性对照miRNA,采用ELISA或Real-time PCR检测NF-κB下游IL-1β、IL-6、IL-8以及COX-2的表达变化。采用Western Blot检测NF-κB通路中蛋白表达变化。采用核浆分离检测p65的入核情况及免疫荧光检测NF-κB p65表达及分布的改变。采用Real-time PCR检测p120 m RNA水平以及miR-223的表达情况。结果(1)CCK8结果显示,不同浓度的LPS刺激气道上皮细胞,作用不同时间均能轻微刺激细胞增殖,各组间差异无统计学意义(p>0.05)。(2)Western Blot检测发现20μg/ml LPS刺激16HBE可激活NF-κB通路,p-IKKα/β、p-IκBα及p-p65表达增高,IKKα及IκBα呈现先减少后升高的趋势。p120蛋白表达降低呈时间依赖性,Real Time PCR显示:miR-223在LPS刺激后表达上升,p120 m RNA表达下调。(3)将miR-223类似物、miR-223抑制物及各自阴性对照组转入16HBE细胞24h后给予LPS处理。RT-PCR检测发现,miR-223类似物转入细胞24h后再给予LPS刺激,NF-κB下游靶蛋白COX-2、IL-6及IL-8的胞内m RNA水平明显高于仅LPS刺激组(p<0.05),转入miR-223抑制物后与LPS单一刺激无明显差异。(4)Western Blot实验发现,与仅LPS刺激组对比,转入miR-223类似物后的细胞p-IKKα/β、p-IκBα、p-p65表达增加更加明显。核浆分离实验证实miR-223可以促进p65的入核,免疫荧光检测显示p65在核内分布更多,ELISA检测NF-κB p65的磷酸化明显增高。(5)Western Blot及RT-PCR检测p120的表达,结果显示miR-223过表达使p120的蛋白水平及m RNA水平均降低(p<0.05)。结论 在LPS刺激诱导的气道炎症反应中,miR-223可能通过调控NF-κB通路,从而对炎症反应起到调节作用。第二部分LPS诱导人气道上皮细胞炎症反应中,miR-223调控NF-κB信号通路的可能分子机制目的在体外LPS刺激的气道上皮炎症反应模型中,改变miR-223及p120水平观测LPS刺激后p120及NF-κB信号通路中各蛋白表达的相应变化,进一步探讨气道炎症反应中miR-223调控NF-κB信号通路的可能分子机制。方法人气道上皮细胞16HBE细胞转入miR-223类似物或阴性对照,以及同时转入miR-223类似物、p120质粒1A或miR-223类似物、p120质粒3A组合,给予LPS刺激。采用ELISA检测IL-8的分泌,RT-PCR检测COX-2、IL-6、IL-8、p120的m RNA水平变化。采用免疫印记实验对细胞p120蛋白表达及NF-κB通路进行检测。采用免疫荧光实验检测细胞中p65的分布情况,ELISA实验检测NF-κB p65的磷酸化情况。转染不能与Rho A结合的p120DRDD质粒后,Western Blot检测细胞内Rho A表达情况,G-LISA检测细胞Rho A活性。结果(1)ELISA结果显示,同时转染miR-223类似物及p120质粒1A或者同时转染miR-223类似物及p120质粒3A,这两组与转染miR-223类似物后LPS刺激和仅LPS刺激组比较,IL-8分泌均呈现下降趋势,RT-PCR检测IL-8 m RNA具有同样的趋势,并且m RNA表达下降更明显,差异显著(p<0.05)。COX-2、IL-6的m RNA水平在转入p120质粒后均有下降。(2)Western Blot及RT-PCR结

关键词： 乙酰胆碱酯酶   糖尿病视网膜病变   多奈哌齐   炎症小体  

摘要： 目的:探讨AChE是否调控糖尿病视网膜病变炎症反应,并探索其调控的分子机制。方法:(1)本实验通过雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病动物模型(DM)并通过标准饲料中添加AChE抑制剂多奈哌齐干预处理。实验分为Vehicle+Non-DM组、Vehicle+DM组、Donepezil+Non-DM组、Donepezil+DM组。Western Blot测定各组视网膜ICAM-1、Albumin、ZO-1的表达,免疫荧光技术检测各组中ICAM-1、GFAP、VEGF表达,刀豆凝集素灌注法检测视网膜血管白细胞粘附,视网膜染色铺片检测视网膜上紧密连接蛋白Claudin5表达情况。同时采用AChE基因缺陷小鼠建立DM动物模型,实验分为AChE+/++Non-DM组、AChE+/++DM组、AChE+/-+Non-DM组、AChE+/-+DM组,Western Blot测定各组视网膜ICAM-1、ZO-1的表达,免疫荧光技术检测各实验组视网膜上ICAM-1、GFAP、VEGF表达,伊文思蓝血管通透性分析检测各组小鼠视网膜血管渗漏程度,视网膜染色铺片检测紧密连接蛋白Claudin5表达情况。(2)建立DM动物模型,含多奈哌齐的标准饲料喂养糖尿病小鼠。Western Blot测定各组视网膜NLRP3炎症小体相关蛋白的表达,免疫荧光技术检测各实验组视网膜上Caspase-1的表达。(3)进一步,采用Caspase-1基因缺陷小鼠建立DM动物模型,Western Blot测定各组视网膜IL-1β、ICAM-1、GFAP、Albumin的表达,刀豆凝集素灌注法检测视网膜血管白细胞粘附。结果:(1)AChE明显上调糖尿病小鼠视网膜ICAM-1、Albumin、ZO-1、VEGF的表达,增加DM组视网膜白细胞粘附及血管渗漏,激活视网膜胶质细胞,并且这些能被AChE抑制剂多奈哌齐以及基因敲除AChE所逆转。(2)DM组视网膜NLRP3、Caspase1、IL-1β的表达较Non-DM组明显上调,且多奈哌齐抑制AChE表达后以上检测指标较DM组降低。(3)基因敲除Caspase-1表达可逆转DM组小鼠视网膜上IL-1β、ICAM-1、GFAP、Albumin的升高,降低视网膜白细胞粘附。结论:这些结果表明,AChE可调控糖尿病小鼠视网膜炎症反应,其机制可能是通过激活NLRP3-Caspase-1炎症小体实现的,为今后更好地治疗DR奠定新的理论基础和提供新的药物靶点。

关键词： 上颌窦后鼻孔息肉   普通鼻息肉   组织学差异   炎症状态   水肿机制  

摘要： 目的：通过比较上颌窦后鼻孔息肉和普遍鼻息肉的组织学差异，了解它们的炎症状态以及引起组织水肿的机制。　　方法：取20例正常对照组病人的下鼻甲组织，53例普通鼻息肉病人（其中26例为Eos CRSwNP，27例为NonEos CRSwNP）和25例上颌窦后鼻孔息肉病人的鼻息肉组织，通过HE和IHC的方法对各组中炎症程度，上皮状态，腺体数目，炎细胞数等进行比较。运用RT-PCR检测鼻组织中tPA，uPA，PAI-1，FXIIIA等的表达;ELISA检测鼻组织中tPA，FXIIIA，d-dimer以及其他细胞因子的蛋白表达。培养Beas-2b细胞，用刺激剂刺激其细胞系用来检测tPA的表达。应用免疫荧光染色对鼻组织中FXIIIA进行定位。　　结果：与正常组和普通鼻息肉相比，上颌窦后鼻孔息肉组织中上皮鳞状化生严重，水肿较明显，腺体较少，嗜酸性粒细胞较少。上颌窦后鼻孔息肉与普通鼻息肉不同，与Th1,2,17的炎症关系不大，而与中性粒细胞炎症更相关。tPA，d-dimer的表达在上颌窦后鼻孔息肉中最少。　　结论：和普通息肉相对，上颌窦后鼻孔息肉更水肿，且以中性粒细胞炎症为主。tPA有关的凝血过程可能参与鼻息肉的组织重塑。