关键词：
肺纤维化
燥胜则干
养阴润燥法
单个核细胞
Notch信号通路
摘要：
肺纤维化是呼吸道疾病中难治性疾病之一,其特征性病理改变表现为慢性间质性炎症,可分为弥漫性肺泡炎、肺泡单位结构紊乱和肺纤维化三个病理阶段,是一种慢性隐匿性疾病。因其病因复杂,病理机制未明,病变过程缓慢而持续,最终以肺部组织细胞纤维化不可逆的病理结果导致呼吸衰竭而死亡,是目前多种肺损伤性疾病的共同病理结局。因而,延缓肺损伤向肺纤维化的发展,预判转归,及时截断,扭转病势,早发现、早预防、早治疗,因势利导,逆转病情,对肺纤维化的防治具有重要意义。根据肺的生理特点和常见病理变化,本研究认为,从中医传统理论分析,肺纤维化的过程与机体津液损耗、输布代谢失常所致的“内燥”密切相关,临床可见一系列气虚、阴虚、血虚、血瘀以及相关脏腑的病证表现,因此,谨守其主要病机,施以养阴益气化瘀之法,以养肺活血方为代表方,是肺纤维化中医治疗的重要方法。本研究通过系统梳理中西医文献、归纳分析“燥胜则干”理论,在复制大鼠肺纤维化动物模型的基础上,以大鼠外周血单个核细胞为研究对象,着重研究养肺活血方干预肺纤维化单个核细胞Notch信号通路及免疫炎症效应的作用,从实验研究的角度,探讨了养肺活血润燥法防治肺纤维化的作用机制。论文主要分为三部分:第一部分:文献研究。该部分从中西医两方面对最新相关文献进行了系统梳理。首先,围绕外周血单个核细胞在肺纤维化中的作用及多种信号通路尤其是Notch信号通路的相关内容作了归纳分析。单个核细胞是免疫炎症反应过程中的重要组成部分,参与肺损伤早期的炎症反应,释放炎症因子,保护机体的免疫功能;而在后期,单个核细胞参与细胞的免疫监视的逃避过程,激活过度免疫应答,释放免疫分子,以逃避免疫监视,从而免于免疫清除,在此进程中,巨噬细胞、淋巴细胞、树突状细胞(DC)等具有抗原提呈功能的免疫细胞,在信号通路的转导作用下,促进免疫分子及炎症因子的表达,激活更多免疫细胞或转化为成熟抗原提呈细胞,达到逃避免疫监视的目的。肺纤维化过程中的上皮间质转化以及纤维细胞的增殖过程,在某种程度上也是逃避了免疫监视的过程,因此肺纤维化具有隐匿性和长期性的演变过程,而此过程离不开炎症的刺激和免疫的激活。目前越来越多的证据显示Notch信号通路在多器官发育、肿瘤疾病及内稳态的平衡方面发挥着至关重要的作用,尤其肺部及其免疫系统。其次,在肺纤维化的中医和中西医治疗方面,文献众多,本文以中医对肺纤维化的新认识为基点进行了归纳,并对近年来中医及中西医结合治疗肺纤维化的临床经验及实验成果作了综述。第二部分:理论研究。《素问·阴阳应象大论》中有“年四十而阴气自半也,起居衰矣”。中医理论认为,肺纤维化的基本病机为“肺叶不用”,虽其病因多样,但总以津液敷布失常为主。论文从“燥胜则干”之病机观点入手,深入阐述了肺纤维化的病机及“内燥”之因,探讨了行“润之”之法加以治疗的基本要点,为中医认识肺纤维化的病机及“养阴润燥化瘀法”在肺纤维化中的应用提供了理论依据。第三部分:实验研究。以气管注入博莱霉素法复制大鼠肺纤维化模型,治疗组造模后第二天予以养肺活血方灌胃给药,于7天、14天、28天分别采集大鼠外周血,提取单个核细胞,用Westernblot检测单个核细胞特异性指标CD14、NF-Kb、TLR4和TGF-β及Notch相关指标Notch1/Jagged1/CSL/DLL1,用ELISA检测血浆中炎症指标VEGF、IL-1β及Notch信号通路过程中的三步酶切Furin蛋白酶、ADAM17和γ-分泌酶。结果观察到,养肺活血方对外周血单个核细胞具有干预和调节作用,尤其在早期对炎症的调节作用更明显;而在后期,该方可影响单个核细胞Notch信号通路Notch1/Jagged1/CSL的表达,表明在肺纤维化早期,养肺活血方具有调节炎症反应的作用,可以阻抑和减轻纤维化的形成;在后期,该方对纤维化的治疗作用可以与干预细胞间质转化及免疫调控密切相关。总之,本文围绕肺纤维化的中西医病机,以动物实验为认识方法,从中医药尤其是以养肺活血润燥法为主的养肺活血方干预肺纤维化动物模型入手,从文献研究、理论研究、实验研究三方面探讨了“燥胜则干”病机与肺纤维化病变的关系,观察了养肺活血方对肺纤维化外周血单个核细胞免疫炎症反应的干预作用,为中医验方的临床应用提供了重要的实验室依据。
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