关键词： 鸡毒支原体   黄芩苷   TLR2   炎性因子  

摘要： 鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是一种在全球范围内广泛存在的,可引起禽类慢性呼吸道病的一种病原微生物,属于支原体属。该病感染阳性率极高,在不继发感染的情况下死亡率较低,MG感染后,一般会引起饲料利用率降低,肉鸡的体重下降,以及造成雏鸡淘汰率上升,成年母鸡产蛋率下降等问题,给养禽业带来巨大的经济损失。临床上常见与其他疾病混合感染或由饲养管理不善、环境突变等因素引起的应激而导致MG的爆发,对禽类养殖业危害极大。由于支原体没有细胞壁结构,所以作用于细胞壁的抗生素对治疗本病无效,导致可选择的抗生素种类受限,加之抗生素的不合理使用,使得该病的药物研发尤为重要。中药组方治疗是根据MG的主要发病机制,以扶正祛邪为根本,达到标本兼治的目的,在临床实践中有很好的疗效,成为目前MG防治药物研发的热点方向。其中,黄芩苷是提取自中药黄芩根部的活性成分,国内外对该药物的研究十分重视。现代医学的大量研究表明黄芩苷具有明显的抗炎作用,能够有效抑制炎症反应的发生。对于黄芩苷作用机制的研究可以促进该药物的进一步发展及其在MG感染治疗方面的应用。本研究首先根据已有的MG感染模型的建立方法,利用被广泛认可的四种评价手段(SPA评分、格罗斯气囊病变评分、气管病变评分、气管黏膜厚度),对四种不同的感染方式(滴鼻点眼感染、气囊接种感染、混合感染、氢化可的松诱导感染)进行平行比较。结果显示以5×10～9CCU/mL的MG R株菌液用气囊接种的方法感染7日龄雏鸡,能够在感染后5 d观察到MG感染的典型临床症状,病程发展速度适中,适合用于本研究的后续治疗试验。在黄芩苷治疗试验中,用确立好的MG感染模型构建方法,根据其病程发展特点,于感染后第三天开始将黄芩苷混于水中饲喂治疗,剂量为1.5 g/只·d,持续7 d。分别于饮水饲喂治疗后1、4、7 d剖检采样,采用ELISA、透射电镜和Western Blot、Real Time-PCR等分子生物学技术,探讨黄芩苷对MG感染造成的炎症相关基因表达的影响以及在TLR2/NF-κB通路中p65蛋白扮演的角色。病理学和超微结构观察结果:通过病理学临床表现的格罗斯气囊病变评分、气管病变评分和SPA评分可见在经过黄芩苷混水饲喂治疗7 d后能够降低靶器官受到的组织损伤,病变程度明显减轻,且有统计学差异。利用透射电镜观察肺和气管细胞的超微结构时可以看到,MG感染组气管部位纤毛细胞固缩退化,脱落坏死。肺部组织中,肺泡Ⅰ型上皮细胞损伤严重,胞质破碎。黄芩苷治疗组主要表现为纤毛肿胀,顶端形成蘑菇状水肿泡,有纤毛相互融合的现象,肺泡Ⅰ型上皮细胞损伤明显减轻。由此可见黄芩苷治疗试验可以有效改善MG感染所带来的组织和细胞炎症损伤。炎症相关因子和p65蛋白的表达结果:感染后4 d,MG感染组与空白对照组相比经ELISA试剂盒检测炎性因子IL-1β、TNF-α表达量明显升高;Western Blot检测TLR2和P-p65蛋白含量同样显著升高(P<0.05)并于感染后7 d达到峰值,此时IL-1β、TNF-αmRNA的表达量也呈现出爆发性增长(P<0.01);感染后10 d,炎性因子和相关蛋白表达量有所下降。相比较于MG感染组,黄芩苷治疗组在给药1、4、7 d后,炎性因子IL-1β、TNF-α表达量显著下降(P<0.01)且相应蛋白TLR2和P-p65的表达量也明显低于MG感染组。综上,本试验在评价四种鸡毒支原体感染方式的基础上,用浓度为5×10～9 CCU/mL的MG R株菌液0.2 mL以气囊接种的方式感染7日龄雏鸡的模型进行黄芩苷抗MG感染作用及机理的研究。结果表明,黄芩苷能够通过抑制MG感染时炎性因子IL-1β、TNF-α的释放,干预MG感染造成的炎症损伤。同时,黄芩苷也能够通过抑制p65蛋白的磷酸化,干预TLR2-NFκB信号通路的活化,进而影响炎性因子的表达。

关键词： 人脐静脉内皮细胞   白藜芦醇   ox-LDL   TLR4   基质金属蛋白酶   自噬  

摘要： 血管慢性炎症是动脉粥样硬化过程中的主要病理改变,然而其发生机制尚不完全清楚。ox-LDL是动脉粥样硬化的危险因素,能够损伤内皮细胞参与动脉粥样硬化的发生进展。白藜芦醇是一种多酚类物质,具有抗氧化、抗炎症等多种作用。本课题重点观察了白藜芦醇对ox-LDL刺激内皮细胞TLR活化、MMPs表达以及自噬的影响,分析了白藜芦醇抑制炎症改善细胞功能的分子机制。本研究使用人脐静脉内皮细胞作为研究对象,用ox-LDL或LPS处理内皮细胞,用WesternBlot,免疫荧光和ELISA方法检测蛋白的表达和分泌。动物实验观察小鼠体重和血脂成分、免疫组化观察血管结构、TLR4表达,ELISA测定血浆MMPs含量。TLR4是天然免疫性受体,外来刺激以及内源性有害产物聚集均可诱导TLR4活化发生炎症反应。金属蛋白酶（Metalloproteinases）是一类依赖于锌、钙离子的蛋白水解酶,具有分解细胞外基质的作用。二者均参与动脉粥样硬化进展。结果显示,ox-LDL或LPS刺激内皮细胞均增加了 TLR4表达。并增加了金属蛋白酶MMP-3、MMP-9的表达,白藜芦醇有效地抑制了这一反应。ELSIA结果显示白藜芦醇降低了 ox-LDL和LPS刺激细胞MMP-3和MMP-9分泌。对分子机制的研究表明,白藜芦醇抑制了 ox-LDL或LPS刺激的转录因子STAT3的磷酸化;STAT3抑制剂也抑制了 MMP-3、MMP-9的表达;提示STAT3是白藜芦醇作用的重要靶点。其次,我们观察了 ox-LDL和白藜芦醇对Sirt1/AMPK通道的影响。Sirt1是参与细胞能量代谢的长寿因子。结果显示,ox-LDL或LPS刺激内皮细胞Sirt1表达下降,AMPK磷酸化水平降低,而白藜芦醇处理逆转了这一现象。第二信使分子cAMP和cGMP产生是被AMPK调控的,白藜芦醇处理也增加细胞内cAMP和cGMP含量。此外,我们进一步分析了 ox-LDL和白藜芦醇对细胞自噬功能的影响。自噬增强是细胞的保护性行为,mTOR是自噬信号的上游分子,具有抑制自噬的作用。结果表明,ox-LDL刺激内皮细胞增加了 mTOR磷酸化,白藜芦醇处理抑制了其磷酸化,并增加了自噬标志蛋白LC31I、Atg5和Atg7的表达。动物实验观察了白藜芦醇对高脂饮食小鼠血浆MMP-3、MMP-9、血管结构和TLR4表达。结果显示,与高脂饮食组相比,白藜芦醇处理降低了小鼠血浆总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）,高密度脂蛋白胆固醇（HDI-C）含量,也降低了血浆MMP-9含量,对MMP-3无显著影响。天狼星染色显示,高脂饮食组小鼠血管结构紊乱,胶原成分减少,胶原之间的空隙增多。白藜芦醇给药干预组小鼠血管胶原排列规则,与正常对照组相似。免疫组化TLR4染色发现,高脂饮食组小鼠血管壁TLR4表达明显高于对照组和白藜芦醇处理组。这些结果提示白藜芦醇对长期高脂饮食引起的血管病变具有保护作用。结论:白藜芦醇能够抑制ox-LDL刺激内皮细胞TLR4介导的MMP-3和MMP-9表达和分泌,其分子机制与抑制转录因子STAT3活化相关。白藜芦醇能够增加Sirt1/AMPK通道活化,增加细胞cAMP、cGMP水平。此外,白藜芦醇能够促进细胞自噬,对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤具有保护作用。体内实验也表明白藜芦醇能够降低高脂饮食小鼠血管TLR4表达,降低血浆MMP-9含量,对于血管结构损伤具有保护作用。

关键词： 炎症小体   巨噬细胞   miR-155   绿原酸   结肠炎  

摘要： 目的:炎症小体(inflammasome)活化是炎症反应的一条重要信号通路,在多种疾病的发生发展中可以检测到炎症小体的活化,比如结肠炎。本课题通过建立体内外炎症模型,研究miR-155在炎症小体活化中的调控作用,以及绿原酸的抗炎活性。方法:(1)RAW264.7巨噬细胞炎症小体活化细胞模型建立,利用LPS预刺激联合ATP活化炎症小体,建立RAW264.7巨噬细胞炎症细胞模型。实验包括应用MTT法、乳酸脱氢酶释放实验检测模型的细胞增殖活性,ELISA法检测IL-1β释放水平变化。免疫荧光法检测细胞中关于炎症小体信号通路相关蛋白发生的变化。(2)研究miR-155调控RAW264.7巨噬细胞炎症小体活化,包括qRT-PCR法检测RAW264.7细胞炎症小体模型miR-155的表达,将炎症小体模型细胞转染miR-155抑制物(inhibitor),qRT-PCR法检测转染后细胞miR-155和NLRP3 mRNA的变化。(3)绿原酸调控炎症小体抗炎活性。建立巨噬细胞炎症小体活化模型,加入绿原酸后,应用MTT法、乳酸脱氢酶释放水平检测细胞增殖活性,ELISA法检测IL-1β释放水平变化。Western blot法及免疫荧光法检测炎症活化信号分子p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1p45、Caspase-1 p20及细胞因子pro-IL-1β、cleaved-IL-1β、pro-IL-18、cleaved-IL-18蛋白变化。另外qRT-PCR法检测绿原酸对miR-155的调控,检测绿原酸和转染miR-155抑制物(inhibitor)对RAW264.7细胞炎症小体模型miR-155、IL-1β和NLRP3 mRNA影响,Western blot法检测转染miR-155抑制物(inhibitor)对RAW264.7细胞炎症小体模型p-NF-κB蛋白表达影响,qRT-PCR法检测转染miR-155模拟物(mimics)及绿原酸对转染miR-155模拟物(mimics)的RAW264.7细胞miR-155、IL-1βmRNA影响。ELISA法检测miR-155抑制物(inhibitor)及模拟物(mimics)对RAW264.7巨噬细胞IL-1β分泌水平的影响。(4)绿原酸通过调控炎症小体的变化改善结肠炎,将葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium salt,DSS)模型小鼠的结肠长度进行比较。HE法观察小鼠结肠的形态组织变化,免疫组化法观察小鼠结肠中巨噬细胞阳性率的多少。Western blot法检测绿原酸对DSS模型小鼠的结肠组织炎症活化信号分子p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1 p45、Caspase-1 p20及细胞因子pro-IL-1β、cleaved-IL-1β、pro-IL-18、cleaved-IL-18蛋白表达影响。qRT-PCR法检测绿原酸对DSS模型小鼠结肠组织miR-155影响。结果:(1)LPS诱导TLR4信号通路活化,加入ATP后能够使RAW264.7巨噬细胞炎症小体活化明显增加,包括MTT法及乳酸脱氢酶释放水平测定的细胞增殖活性降低,IL-1β释放量增加,IL-1β和NLRP3蛋白表达增多。(2)RAW264.7巨噬细胞炎症小体活化模型miR-155表达增加,当给炎症小体活化模型细胞转染miR-155抑制物(inhibitor),细胞miR-155和NLRP3 mRNA表达减少。(3)用绿原酸处理RAW264.7巨噬细胞炎症小体活化模型,MTT法及LDH测定发现药物使细胞增殖活性上升,IL-1β释放量降低,炎症活化信号分子p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1p45、Caspase-1p20及细胞因子IL-1β、pro-IL-1β、IL-18、pro-IL-18蛋白表达降低。绿原酸能够降低炎症小体被激活的巨噬细胞miR-155、NLRP3和IL-1βmRNA及p-NF-κB蛋白的表达,也能降低转染miR-155模拟物(mimics)的细胞miR-155、IL-1βmRNA和p-NF-κB蛋白表达。(4)动物实验发现结肠炎模型的小鼠结肠长度减短,巨噬细胞数量增加且p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1 p45、Caspase-1 p20、pro-IL-1β、cleaved-IL-1β、pro-IL-18、cleaved-IL-18蛋白表达比正常组高,绿原酸用药后可改善小鼠结肠炎,使炎症小体相关蛋白及miR-155表达降低。结论:miR-155通过上调NF-κB和IL-1β促进NLRP3炎症小体活化;绿原酸可抑制体内外炎症小体相关蛋白及炎性因子的产生,具有良好的抗炎作用,其抗炎机制可能与调控miR-155表达相关。

关键词： 超重和肥胖症   益生菌干预   效果分析  

摘要： 目的探讨多种益生菌改善肥胖症患者慢性炎症状态的临床观察。方法将2016年10月至2017年10月在我院消化内科治疗的90例超重和肥胖症患者随机分为三组,A组使用枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊(美常安)治疗,B组采用双歧杆菌三联活菌胶囊(培菲康)治疗,C组采用美常安联合培菲康治疗,比较三组患者的临床疗效、肥胖各指标改善情况、炎性因子水平变化。结果 C组治疗有效率为96.67%,明显高于A组的73.33%、B组的76.67%(P<0.05);C组治疗后FBG、2h PG、Hb A1c与A组、B组相比明显降低(P<0.05);观察组治疗后LPS、IL-6、CRP、TNF-α、MCP-1水平明显低于对照组(P<0.05)。结论益生菌干预超重和肥胖症患者的效果显著,能增强肠道代谢功能,降低机体炎性反应,重建肠道微生态系统,促进体重降低,具有积极的临床意义。

关键词： 肾衰宁胶囊   糖尿病肾病   慢性肾衰竭   微炎症  

摘要： 目的:观察肾衰宁胶囊对糖尿病肾病慢性肾衰竭患者体内微炎症状态的影响。方法:选取糖尿病肾病CKD3～4期脾胃气虚、浊瘀内阻患者共52例为研究对象,按随机数字表开放性分为治疗组和对照组各26例。对照组予严格饮食控制、控制血糖、降压、纠正贫血等基础治疗,治疗组在对照组基础上,加用肾衰宁胶囊,共观察6个月。所有患者治疗前后定期监测超敏C反应蛋白(hs-CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)、血红蛋白(Hb)、白蛋白(Alb)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24 h尿蛋白定量(24-UP),并对以上结果进行统计分析。结果:治疗后,治疗组hs-CRP、Hcy均较治疗前下降,且差异有统计学意义(P <0. 05);对照组治疗前后的hs-CRP、Hcy水平比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论:肾衰宁胶囊可改善糖尿病肾病慢性肾衰竭CKD3～4期患者的微炎症状态。

关键词： 高通量血液透析   血红蛋白变异性   微炎症状态   营养不良   C反应蛋白  

摘要： 目的:探讨高通量透析对维持性血液透析患者血红蛋白变异性、微炎症状态、营养状况及骨代谢的影响。方法:2015年9月-2018年1月在我院血透室行维持性血液透析(Maintenance hemodialysis,MHD)的患者中,按纳入和排除标准收集MHD患者透析前和透析结束时的血红蛋白(Hemoglobin,Hb),超敏C反应蛋白(High-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、β2微球蛋白(β2 microglobulin,β2-MG)、白蛋白(albumin,Alb)、钙(calcium,Ca)、磷(phosphorus,p)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP),透析15分钟Hb等指标,探讨单次高通量血液透析对MHD患者血红蛋白变异性(hemoglobin variability,Hb-Var)、微炎症状态、营养状况及骨代谢的影响。结果:(1)高通量血液透析组患者个体Hb标准差7.59±4.64 g/L,变异系数0.09±0.11。常规血液透析组患者标准差6.55±3.66 g/L,变异系数0.06±0.03。高通组和常规组变异系数进行方差分析,F=7.1591,P=0.9978,差异无统计学意义。(2)高通量透析组与常规透析组患者透前Hb、β2-MG水平相比的P值依次为0.485、0.162,差异无统计学意义;两组透前hs-CRP、Alb水平比较的P值均<0.05,差异有统计学意义。高通量透析组患者透后hs-CRP、β2-MG、Alb、Hb水平与透前相比的P值均<0.05,差异有统计学意义;常规透析组透后β2-MG水平与透析前相比的P值为0.227,差异无统计学意义,透析后hs-CRP、Alb、Hb水平与透析前相比的P值均<0.05,差异有统计学意义;高通量透析组与常规透析组透后hs-CRP、β2-MG、Alb、Hb水平相比的P值均<0.05,差异有统计学意义。(3)高通量透析组与常规透析组患者透前ALP、Ca水平相比的P值依次为0.593、0.954,差异无统计学意义;两组患者透前血清磷水平的P值=0.001,差异有统计学意义。高通量透析组和常规透析组患者透后Ca、P、ALP水平与透前相比的P值均<0.05,差异有统计学意义;高通量透析组与常规透析组透后比较组间Ca、P、ALP水平差异,P值均<0.05,差异有统计学意义。(4)将观察纳入的132例MHD患者hs-CRP与Ca、P、ALP、Hb、Alb,β2-MG指标进行相关性分析,发现血清hs-CRP与血清磷(r=0.838,P=0.00)呈正相关,与Alb(r=-0.745,P=0.00)呈负相关。结论:单次高通量血液透析较常规血液透析相比不会增加血红蛋白变异性,高通量血液透析对超敏C反应蛋白、β2微球蛋白、磷的清除能力更好,有利于改善维持性血液透析患者的炎症状态,同时超敏C反应蛋白与白蛋白呈负相关,与血清磷呈正相关,高通量血液透析比常规血液透析清除超敏C反应蛋白能力更好,从而进一步改善患者营养状况及骨代谢情况。

关键词： 阿托伐他汀   炎症   胰岛素抵抗   含START结构域蛋白3(Stard3)  

摘要： 目的:他汀类药物作为心血管疾病的一、二级预防药物,其在临床的广泛应用大大降低心血管疾病的发病率,降低心血管疾病的死亡率。然而越来越多的研究表明:他汀类药物的应用与新发2型糖尿病相关,但其致病机制尚不完全明确。炎症作为独立因素可以导致胰岛素抵抗,是否炎症可能成为他汀类药物导致糖尿病的致敏因素,即在炎症状态下他汀可能导致胰岛素抵抗,非炎症状态下他汀不会诱发胰岛素抵抗。由于肝脏胰岛素抵抗,在糖尿病形成过程中作用显著,故本研究重点研究肝脏胰岛素抵抗。炎症可能通过诱发肝脏产生过多的活性氧导致胰岛素抵抗,本研究进一步探讨他汀类药物是否可能在炎症基础上进一步增加了活性氧尤其是线粒体活性氧的生成。由于他汀类药物可以调整肝脏细胞胞内胆固醇代谢,而炎症也对细胞内胆固醇代谢平衡存在作用,胞内胆固醇特别是线粒体胆固醇的异常堆积可以导致线粒体功能失调,生成过量的线粒体活性氧,最终诱发胰岛素抵抗,而细胞内过量的胆固醇可通过START结构域蛋白3（Stard3）转运至线粒体,当线粒体无法代谢处理过量胆固醇时,胆固醇随即堆积于线粒体。本研究拟探讨他汀是否在炎症背景下通过上调的Stard3蛋白转运至肝脏细胞线粒体导致线粒体胆固醇集聚,最终诱发肝脏胰岛素抵抗。方法:第一部分,临床数据:收集内分泌科2型糖尿病患者,糖尿病诊断时间大于等于1年,且血糖控制稳定。排除慢性病毒性肝炎、自身免疫性肝脏疾病、遗传性肝脏疾病、急性感染期患者,且所有入选患者每日酒精摄入量均小于等于20g。采集患者基本资料（性别、年龄等）及肝脏超声结果、体重、身高、肝功能、血脂、空腹血糖及糖化血红蛋白。根据患者CRP值将患者分为炎症组（CRP≥10mg/L or hsCRP≥3mg/L）及非炎症组（CRP<10mg/L or hsCRP<3mg/L）,再根据患者是否服用他汀类药物将上述两组各分为两个亚组,即非炎症不服用他汀组,非炎症服用他汀组;炎症不服用他汀组,炎症服用他汀组。第二部分:动物实验:通过喂养Apo E-/-小鼠（雄性）西方饮食共8周,建立小鼠高胆固醇血症模型,酪蛋白（casein）注射模拟炎症状态,动物分组:对照组:隔日皮下注射0.9%生理盐水0.5ml;2)阿托伐他汀组:隔日皮下注射0.9%生理盐水0.5ml,阿托伐他汀10mg/kg/d口服;3)casein组:隔日皮下注射10%酪蛋白0.5ml;4)casein+阿托伐他汀组:隔日皮下注射10%酪蛋白0.5ml,阿托伐他汀10mg/kg/d口服。小鼠血清炎症坏死因子α（TNFα）及白介素-6（IL-6）测定采用酶联免疫吸附实验（ELISA）,血清自动生化仪测定小鼠血清总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（FC）、甘油三酯（TG）。肝脏组织切片HE染色观察肝脏脂肪样变程度。肝脏组织总胆固醇（TC）及游离胆固醇（FC）测定采用酶学方法检测。肝组织甘油三酯含量采用酶偶联比色法测定。Western blot测定小鼠肝脏组织胰岛素受体底物-1（IRS-1）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（Pepck）、肝脏葡萄糖6磷酸酶（G6Pase）、磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B（p-Akt/Akt）、含START结构域蛋白1（Stard1）和含START结构域蛋白3（Stard3）的蛋白表达。RT-PCR测定stard1、stard3至stard6基因表达。肝组织新鲜冰冻切片进行DHE染色了解肝脏组织中超氧阴离子生成情况。第三部分,细胞实验:将Hep G2细胞分为4组处理组:对照组（含0.5%BSA的DMEM培养基+LDL）,阿托伐他汀组（含0.5%BSA的DMEM培养基+LDL+阿托伐他汀）,TNFα组（含0.5%BSA的DMEM培养基+LDL+TNFα）,TNFα+阿托伐他汀组（含0.5%BSA的DMEM培养基+LDL+TNFα+阿托伐他汀）,以上共处理24小时。油红O细胞染色了解不同处理条件下脂质沉积情况。细胞及线粒体总胆固醇（TC）及游离胆固醇（FC）测定采用酶学方法检测。采用胆固醇类似物（TopFluor cholesterol）摄入细胞后与细胞线粒体共染,分析不同处理条件下细胞线粒体胆固醇分布情况。采用DHE染色分析细胞内ROS生成情况,采用膜电位依赖的mito tracker测定线粒体膜电位情况,采用Mito SOX测定线粒体ROS产生情况。在HepG2细胞上si RNA干扰stard3表达后再次进行线粒体胆固醇沉积、线粒体ROS产生、线粒体膜电位测定。结果:第一部分:在非炎症组（CRP<10mg/L or hsCRP<3mg/L）,他汀类药物降低患者血TC及LDL（P<0.05）,对患者糖化血红蛋白、空腹血糖及脂肪肝发病率无明显影响（P<0.05）;而在炎症组（CRP≥10mg/L or hsCRP≥3mg/L）,他汀类药物显著升高患者糖化血

关键词： 糖尿病脓毒症   全身感染   肺损伤   骨髓间充质干细胞   抗炎作用  

摘要： 研究目的：　　本研究拟建立 SD 大鼠 2 型糖尿病（type 2 diabetic rat model，T2DM）脓毒症复合动物模型，通过动态观察骨髓间充质干细胞（bonemarrow mesenchymal stem cells，BMSCs）干预对糖尿病脓毒症大鼠的全身感染状态与肺损伤修复的治疗效果，以及初步探索BMSCs如何通过调节糖尿病脓毒症大鼠全身及肺部炎症反应达到治疗效果，来探讨间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）对不同免疫状态下脓毒症大鼠生存率以及全身和局部炎症环境的影响。　　研究方法：　　高糖高脂饮食喂养联合链脲佐菌素（streptozotocin，STZ），结合盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture，CLP）制备大鼠糖尿病脓毒症模型，随机分为对照组、假手术组、脓毒症组和治疗组。治疗组用BMSCs进行干预。　　记录不同组别大鼠的生存曲线。分别在术后6h、12h、18h、24h观察肺组织病理改变，血清测中性粒细胞百分比、CRP、PCT、TNF-α、IL-6、IL-10表达水平，肺组织匀浆测TNF-α、IFN-γ、IL-10、LPS表达水平。　　研究成果：　　（1）BMSCs对糖尿病脓毒症大鼠生存状况的改善。本研究结果显示，BMSCs干预既可以延长非糖尿病脓毒症大鼠的生存时间[30 （ 23.426 ， 36.574 ）比 25 （20.617，29.383）]，也可以延长糖尿病脓毒症大鼠的生存时间[33（15.469，50.531）比27（13.852，40.148）]。　　（2）BMSCs对糖尿病脓毒症大鼠的感染状况和肺损伤的影响。本研究发现， CLP术后，BMSCs干预对肺组织的病理变化并无改善。BMSCs干预后的24小时，糖尿病脓毒症大鼠的血清 PCT 表达水平和中性粒细胞百分比降低，但非糖尿病脓毒症大鼠的血清PCT表达水平和中性粒细胞百分比无改变;BMSCs干预后的24小时，糖尿病脓毒症大鼠和非糖尿病脓毒症大鼠的血清CRP表达水平均升高。　　（3）BMSCs对糖尿病脓毒症大鼠全身及肺脏炎症状况的影响。本研究发现， BMSCs 干预对糖尿病脓毒症促炎细胞因子（TNF-α、IL-6）的表达水平起到了抑制作用，但对抗炎细胞因子（IL-10）表达水平无影响;BMSCs干预对非糖尿病基础的脓毒症状况下促炎细胞因子（TNF-α、IL-6）的表达水平起效甚微，但可促进抗炎细胞因子（IL-10）的分泌。　　研究结论：　　骨髓间充质干细胞对糖尿病脓毒症大鼠和非糖尿病大鼠的生存均有改善。骨髓间充质干细胞干预对脓毒症早期促炎阶段有炎症抑制作用。当糖尿病合并脓毒症时，骨髓间充质干细胞干预可改善感染状况。骨髓间充质干细胞具有开发为脓毒症抗炎制剂的潜能，尤其适合应用于糖尿病基础病人群。

关键词： 宫颈糜烂   微波治疗   奥硝唑   炎症反应   ICMI-1 mRNA  

摘要： 目的探讨在宫颈糜烂患者中采用微波联合奥硝唑治疗的临床效果。方法选择我院收治宫颈糜烂患者66例,随机将其分为观察组与对照组,每组各33例。两组患者均予微波治疗,在此基础上观察组采用奥硝唑治疗,对照组采用甲硝唑治疗。比较两组炎症细胞因子水平与ICMI-1 mRNA水平。结果观察组患者IL-2、IL-8、IL-13、ICMI-1 mRNA水平均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在宫颈糜烂患者中采用微波联合奥硝唑治疗能降低患者炎症水平,改善其机体免疫功能,提高患者临床疗效。

关键词： T细胞免疫球蛋白粘蛋白域分子3(Tim-3)   脑出血   小胶质细胞/巨噬细胞   肿瘤坏死因子-a   白介素-1β   T细胞免疫球蛋白粘蛋白域分子3(Tim-3)   脑出血   CD14+单核细胞   全身炎症反应  

摘要： 研究背景自发性脑出血(Spontaneous Intracerebralhemorrhage,ICH)是常见的脑血管疾病,占全部脑卒中的15-200%,每年全球发病人数超过2百万。在发病6个月内,脑出血的死亡率超过40%,而仅有20%的患者能够独立生活。但是目前临床对脑出血缺乏有效的治疗措施,这主要是因为对脑出血后继发脑损伤的机制还不了解。越来越多的研究示炎症反应在脑出血后继发性脑损伤中起重要作用。炎症反应是以炎性细胞和炎性介质在出血部位大脑中的聚集和激活为特征的。炎症细胞包括血液来源的粒细胞和巨噬细胞,以及脑固有的小胶质细胞、星性细胞和肥大细胞。这些细胞的激活释放一系列炎性介质,包括细胞因子、化学因子、蛋白激酶、前列腺素和其他的炎性活性物质。在所有的炎症细胞中,小胶质细胞是第一个对脑损伤作出反应的细胞。激活的小胶质细胞同血液来源的巨噬细胞形态相似,无法分辨,因此也被称为脑内的巨噬细胞。研究证实小胶质细胞/巨噬细胞在脑出血早期就被激活,并且释放一系列的毒性分子,包括细胞因子、化学因子、活性氧簇,环氧化酶-2、蛋白酶、血红素加氧酶-1和前列腺素,因此,小胶质细胞/巨噬细胞在脑出血后继发性脑损伤中起重要作用。T细胞免疫球蛋白粘蛋白域分子-3(T cell immunoglobulin and mucin domain3,Tim-3)是2002发现的新型免疫调节分子,特异性的表达在激活的辅助T淋巴细胞-1。研究证实Tim-3也在固有免疫细胞上表达,包括巨噬细胞、肥大细胞和树突状细胞。Tim-3在小胶质细胞/巨噬细胞上过度表达,诱导前炎症细胞因子的产生,如肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),能够加重炎症反应,诱发继发性脑损伤。但是到目前血后脑组织的炎症反应尚不清楚。因为小胶质细胞/巨噬细胞是诱发脑炎症反应和继发性脑损伤的关键细胞,并且Tim-3可以调节小胶质细胞/巨噬细胞的功能,我们推测Tim-3可能通过调节小胶质细胞/巨噬细胞功能参入脑出血后的炎症反应。这项研究为了证实此假设。第一部分:Tim-3对脑出血后血肿周围脑组织炎症反应的实验研究目的:检测Tim-3在血肿周围脑组织中的表达和细胞来源,探讨Tim-3在脑出血后脑组织炎症反应中的作用。方法:用自体血注射法建立野生型(wild type,WT)小鼠和Tim-3基因敲除(Tim-3-/-)小鼠的脑出血模型,分别在操作后12小时和1、3、5、7天测定血肿周围脑组织中Tim-3的表达、TNF-a和IL-1β的浓度和脑含水量。免疫荧光染色测定Tim-3阳性细胞、星形细胞、中性粒细胞和小胶质细胞/巨噬细胞的数量。免疫荧光双染分辨Tim-3表达的细胞来源。ELISA法测定TNF-a和IL-1β的表达。小鼠行为学测定评估神经缺陷的程度。结果:***-3阳性细胞数和Tim-3 mRNA在WT脑出血组从出血后12小时开始升高,1天时达高峰,3天时开始下降,与WT对照组比较,Tim-3阳性细胞数和Tim-3mRNA在各检测时间点均有显著性差异(P<0.01)。2.免疫荧光双染技术显示Tim-3优势表达在CD11b阳性细胞(小胶质细胞/巨噬细胞),较少在MPO阳性细胞(中性粒细胞)中表达,在GFAP阳性细胞(星形细胞)中表达最少。***-1β和TNF-a的浓度在出血后12小时开始升高,1天时达高峰,3天时开始下降,WT脑出血组与WT对照组比较有显著性差异(P<0.01)。血肿周围脑组织含水量在出血后12小时升高,高峰在1天和3天,然后逐渐下降,WT脑出血组与WT对照组比较有显著性差异(P<0.01)。***-3的表达与IL-1β、TNF-a的浓度和脑含水量正相关(IL-1β::0.618,P<0.001;TNF-a:r=0.610,P<0.001;脑含水量:r=0.566,P=0.001)。5.在Tim-3-/-脑出血组小鼠血肿周围脑组织中IL-1β、TNF-a的浓度显著下降,同WT脑出血组比较有显著性差异(Tim-3-/-脑出血组与WT脑出血组比较,IL-1 β : 12 h P<0.01;1d P<0.05;3 d P<0.05;5d P<0.05;7d P<***-a12h P<0.05;Id P<0.05;3d P<0.01;5d P<0.01;7d P<0.01)。在各检测时间点,脑含水量在Tim-3-/-脑出血组也明显降低(Tim-3-/-ICH组与WT出血组比较,12hP<0.01;1dP<0.01;3d P<0.01;5d P<0.01;7d P<0.05)。出血后12小时和1天,神经功能缺损评分(neurological deficit scores,NDS在Ti