关键词： 巨噬细胞极化   牙周炎症   慢性牙周炎   牙龈组织   免疫荧光  

摘要： 【背景】慢性牙周炎是一种以牙周支持组织进行性破坏为特点的口腔慢性感染性疾病。越来越多的研究证实牙周炎症的发生是机体免疫系统与口腔致病微生物之间相互作用的结果。现阶段临床上的牙周治疗手段多局限于机械性地清除牙菌斑而忽视了对宿主免疫系统的关注,因此治疗效果往往因人而异,且长期效果尚不稳定,因此新的牙周治疗理念亟待研究发现。骨免疫是近年来提出的新概念,是因为有学者在其研究中发现机体骨骼系统和免疫系统之间不仅紧密相关,还会相互作用相互影响。由于考虑到免疫系统对骨骼系统具有重要影响,可以试图通过调节机体的免疫系统影响牙槽骨的吸收或再生从而达到治愈牙周炎的目的,因此越来越多的学者开始关注免疫系统对牙周炎症发生发展过程中的作用。单核巨噬细胞是机体固有免疫系统的重要成员之一。它不仅在炎症反应的初始阶段促进炎症细胞的募集和病原体的吞噬,亦在随后激活机体获得性免疫反应及炎症后期调控骨吸收或再生的过程中有重要作用。因此,巨噬细胞免疫防御功能和免疫调节功能的平衡对牙周组织的炎症进程至关重要。巨噬细胞在机体的免疫防御过程中可以发挥不同的作用是因为其在特定的组织微环境下可以极化为两种功能不同的表型。通过经典途径在辅助性T细胞1(Th1)相关的细胞因子如干扰素(IFN-γ)或脂多糖(LPS)的刺激下极化产生的巨噬细胞为M1型巨噬细胞。活化后的M1型巨噬细胞在炎症反应的早期阶段能有效地吞噬病原体,并通过分泌大量炎性细胞因子促进机体的炎症反应,增加机体的免疫防御功能,但同时也有可能引起间接性的组织损伤。M2型巨噬细胞是在辅助性T细胞2(Th2)型细胞因子,如白细胞介素(IL-4或13)刺激下通过选择性途径诱导产生。与M1型巨噬细胞不同的是,M2型巨噬细胞可以通过产生IL-10和TGF等抗炎型细胞因子抑制炎症反应的进程,调节机体免疫平衡,并在炎症反应的后期阶段促进局部组织的修复及再生。巨噬细胞的多形性决定了其在免疫反应中的重要作用,活化后的不同表型在机体对抗入侵病原体的免疫防御过程中通过其各自不同的作用共同影响着局部牙周组织的稳态平衡。也就是说,促炎M1型巨噬细胞与抗炎M2型巨噬细胞在牙周组织中存在的比例可能会很大程度上决定着牙周炎症的发展进程。现阶段关于巨噬细胞及其表型在人慢性牙周炎发生发展中具体作用机制的研究还尚未清晰,曾有一国外文献报道称当给实验小鼠用免疫调节药物去除体内大多数的巨噬细胞后再感染牙龈卟啉单胞菌,其牙周炎症状态明显轻于未去除巨噬细胞的小鼠。随后有人对实验性牙周炎大鼠的牙龈组织进行免疫荧光及免疫组织化学检测牙周组织发现,与对照组相比,牙周炎组大鼠的牙周组织中M1/M2比值明显增加。这些研究证实了巨噬细胞及其表型在动物实验性牙周炎的发生发展过程中确实起到了重要的作用,然而关于巨噬细胞表型在人牙周炎症组织中的表达的研究却少有报道,值得我们进行进一步研究。此外,巨噬细胞除了可以在极化为M1型或M2型巨噬细胞后通过自身直接吞噬、中和组织内的病原微生物或炎症代谢产物,还可以通过其分泌的促炎或抗炎细胞因子扩大或终止炎症进程。也就是说巨噬细胞的极化及其在免疫反应过程中的促炎抗炎功能及免疫调控作用需要在多种与巨噬细胞相关的细胞因子共同完成,因此研究巨噬细胞相关细胞因子在人炎症牙周组织中的表达状况也尤为重要。本研究以慢性牙周炎及慢性龈炎患者的牙龈组织作为实验组,牙周健康志愿者的牙龈组织作为对照组,通过观察M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞在不同牙周健康状下的牙龈组织中的表达,以及检测巨噬细胞相关细胞因子(IL-4,IL-10,IL-12,IFN-γ,TNF-α,IL-6)在三组牙龈组织中表达的差异,了解牙周炎症状态与人牙龈组织中巨噬细胞极化和功能的相关性,从而进一步验证巨噬细胞的极化过程对慢性牙周炎发生发展的影响。【目的】通过比较慢性牙周炎,慢性龈炎及牙周健康受试者的牙龈标本中M1/M2的表达情况,并检测巨噬细胞相关细胞因子(IL4、IL-10、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α)在三组受试者牙龈组织中的表达差异,探究牙周炎症状态与局部牙周炎症组织中巨噬细胞极化和功能的相关性,从而探究巨噬细胞极化在慢性牙周炎发生发展过程中的作用。【方法】1、牙周炎症状态对牙龈组织中巨噬细胞极化的影响在临床诊疗过程中随机将符合分组纳入条件的受试者分为慢性牙周炎组(P)、慢性龈炎组(G)及牙周健康组(H)。随后将从三组受试者口内获得的牙龈组织固定、切片处理后进行HE染色和免疫荧光染色观察。2、牙周炎症状态对牙龈组织中巨噬细胞相关细胞因子表达的影响将上述三组受试者的牙龈组织标本进行进行免疫组织化学颜色,观察IL4、IL-10、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α在牙龈组织中的表达。3、牙周炎症状态下的牙周指数、巨噬细胞极化及巨噬细胞相关细胞因子表达的相关性分析在分组后对

关键词： 支气管哮喘   金黄色葡萄球菌   肺泡巨噬细胞   Toll样受体2   磷脂酰肌醇3-激酶  

摘要： 研究背景支气管哮喘是以气道炎症为主要病理特征的气道疾病之一。近20年来,支气管哮喘的发病率持续增加,全球支气管哮喘患者人数已逾3亿。金黄色葡萄球菌(简称金葡菌,staphylococcus aureus,SA)作为自然界中最常见的革兰氏阳性病原体,已经成为哮喘等慢性气道炎症性疾病最主要的危险因素之一。此外,研究发现Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)信号通路调控自噬和炎症因子的释放,参与了哮喘的发病机理。因此,我们采用金葡菌刺激小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,在细胞水平观察TLR2对金葡菌诱导肺泡巨噬细胞自噬和炎症反应的影响。研究目的探讨肺泡巨噬细胞表面受体TLR2在金葡菌诱导巨噬细胞自噬和炎症反应中的潜在分子机制。研究方法1.检测巨噬细胞受到不同时间金葡菌刺激后自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7受到不同时间金葡菌刺激后,通过Western blot和ELISA方法检测巨噬细胞受到刺激后自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达水平;通过激光共聚焦扫描显微镜观察巨噬细胞内自噬溶酶体的数量。***干扰TLR2对金葡菌诱导巨噬细胞自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白表达的影响检测用金葡菌刺激TLR2 si RNA干预的RAW264.7巨噬细胞2h后,通过Western blot和ELISA方法检测TLR2 si RNA干预的巨噬细胞受到金葡菌刺激后自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达水平;通过激光共聚焦扫描显微镜观察巨噬细胞内自噬溶酶体的数量。3.特异性抑制PI3K信号通路对金葡菌诱导巨噬细胞自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白表达的影响检测用金葡菌刺激PI3K特异性抑制剂3-MA干预的RAW264.巨噬细胞2h后,通过Western blot和ELISA方法检测3-MA干预的巨噬细胞受到金葡菌刺激后自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达水平;通过激光共聚焦扫描显微镜观察巨噬细胞内自噬溶酶体的数量。研究结果1.金葡菌诱导巨噬细胞自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞受到不同时间的金葡菌刺激后,TLR2、My D88、PI3K和p-NF-κBp65信号通路蛋白的表达随时间依赖性的方式显著增加;与此同时,自噬蛋白Beclin-1、LC3-II和促炎症因子TNF-α和IL-6的表达以及巨噬细胞中自噬溶酶体的表达数量也随时间依赖性的方式显著增加。***2对金葡菌诱导巨噬细胞自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达至关重要金葡菌刺激TLR2 si RNA干预的RAW264.巨噬细胞2h后,TLR2、My D88、PI3K和p-NF-κBp65信号通路蛋白的表达显著受到抑制;与此同时,自噬蛋白Beclin-1、LC3-II和促炎症因子TNF-α和IL-6的表达以及巨噬细胞中自噬溶酶体的表达数量也明显受到抑制。***3K信号通路对金葡菌诱导巨噬细胞自噬蛋白和促炎症因子以及NF-κB信号通路蛋白的表达至关重要用金葡菌刺激PI3K特异性抑制剂3-MA干预的RAW264.巨噬细胞2h后,PI3K和p-NF-κBp65信号通路蛋白的表达显著受到抑制;与此同时,自噬蛋白Beclin-1、LC3-II和促炎症因子TNF-α和IL-6的表达以及巨噬细胞中自噬溶酶体的表达数量也明显受到抑制。研究结论1.金葡菌能够诱导巨噬细胞活化自噬和炎症反应。***2信号通路能够调控金葡菌诱导巨噬细胞活化自噬和炎症反应。***2能够通过PI3K信号通路调控金葡菌诱导巨噬细胞活化自噬和炎症反应。

关键词： 脱细胞血管材料   胰酶法   巨噬细胞   免疫炎症反应   原子火焰法   脂肪间充质干细胞   脂联素   血管生长因子   脂肪细胞   工程血管   脱细胞血管   细胞片   钙化  

摘要： 第一部分异种与同种动脉脱细胞血管材料在大鼠体内的免疫反应及钙化表现目的:先天性心脏病（Congenital Heart Disease,CHD）是最常见的先天性出生缺陷,随着我国放开二胎政策以及产检、手术水平的增加,预计先心病患儿数量逐年增多。CHD常需要应用不同材质、不同口径的血管材料进行手术治疗,然而目前市面上的血管或瓣膜材料都会在患者体内产生炎症反应从而钙化衰败。本研究期望探索有效的脱细胞血管材料的建造方法。通过大鼠皮下模型,来评价同种脱细胞血管材料和异种脱细胞血管材料在动物体内的炎症反应,以及钙化情况,从而初步了解两种材料引起机体免疫反应及钙化的相关性。方法:取供体大鼠的颈动脉材料约5cm,以及猪颈动脉5cm,将血管材料裁剪成0.5×0.5cm的血管片。用胰酶法对血管材料进行脱细胞处理,并且对脱细胞水平进行鉴定。将符合标准的血管材料冻干保存。用胰酶法制作猪颈动脉和大鼠降颈动脉脱细胞血管材料,并且对脱细胞水平进行鉴定。实验组在6周龄SD大鼠皮下植入同种脱细胞血管材料（N=6）;对照组6周龄SD大鼠皮下植入猪颈动脉脱细胞血管（N=6）,每只四个位点。两组内取材时间分别为血管移植后2周和4周。通过HE染色、天狼星红染色、免疫荧光染色、免疫组化以及Von Kossa硝酸银法检查材料于动物体内移植后的再细胞化及钙化情况是否有差异。结果:（1）脱细胞镜下结果显示,胰酶法脱细胞处理的血管材料没有细胞核残余,血管材料外观形态基本正常。猪脱细胞血管DNA平均光密度值为（4.59±0.49）,未经脱细胞血管处理的猪血管DNA光密度值（564.35±26.13）。同种脱细胞血管DNA平均光密度值（5.45±0.24）,处理前的同种血管DNA光密度值（497.1±7.12）。表明该处理方法可以有效去除血管组织中的细胞成分。（2）天狼猩红染色显示2h胰酶的处理的血管组织绿色弹性纤维缺失断裂明显,表明血管外膜、中膜弹性纤维有明显损害。胰酶处理1h,Ⅰ、Ⅲ型弹力纤维波浪状结构保存相对完好。0.05%胰酶浓度37℃处理1h的血管材料能够有效去除细胞成分,并且保留较好的血管弹性纤维形态。（3）两周后从大鼠体内取出血管,血管移植物基本保持原有形状外观,没有分解的征象,外边可见包裹的纤维组织。HE染色可见大量的自体细胞渗入脱细胞血管的纤维蛋白支架内。每个时间点两组血管细胞渗入数量均有明显差异（二周P=0.023,四周P=0.019）。宿主细胞通过血管两侧的断裂位置渗入的程度更深,数量更多。在远离断端的靠近血管壁中心的位置,细胞渗入主要发生在内外膜（行进方向为血管横截面方向）,渗入速度较血管断端慢。4周的皮下植入,可以见到包裹血管的纤维组织中有滋养血管生长,包裹血管材料周围的纤维组织内也布满自体细胞,自体组织与移植血管组织没有明显界限,需要通过移植组织的弹性纤维条状形态进行区分。（4）细胞免疫荧光染色发现,同种脱细胞血管中引起的巨大多核巨噬细胞的数量少于异种脱细胞血管。二周时同种脱细胞血管镜下的多核巨噬细胞渗入个数为 1.60± 1.70 个/7.6*104μm2,异种脱细胞血管为 2.14±1.64 个/7.6*104μm2,两组没有显著性差异（P=0.055）。四周时,多核巨噬细胞渗入增多,同种材料中6.58±2.72个/7.6*104 μ m2,异种材料中7.85±3.15个/7.6*104 μ m2,两组有显著性差异（P=0.012）。镜下可见,巨大多核的巨噬细胞多出现于血管材料表面,难以渗入血管材料内部。CD68免疫组化染色的巨噬细胞明显聚集于血管内外膜接触表面,提示血管与自体组织接触表面发生着巨噬细胞介导的炎症反应。（5）钙化染色结果发现,4周时,两组的钙化镜下未见明显差异,原子火焰法检测钙化2周时同种脱细胞血管钙化为1.08±0.34μg/mg,异种脱细胞血管钙化为1.23±0.32μg/mg（P=0.44）;4周时同种脱细胞血管钙化为1.75±0.34μg/mg,异种脱细胞血管钙化为3.06±0.30μg/mg（P<0.01）。同种脱细胞血管的钙化程度两周、四周时均明显轻于异种血管组。结论:通过0.05%胰酶、SDS、Triton的化学消化法可以制作脱细胞率达99%以上的细胞外基质。同种或异种脱细胞血管支架,虽然去除了 99%以上的细胞成分,在动物体内实验仍然引起以巨噬细胞为主的炎症细胞聚集。同种脱细胞血管支架在动物体内引起多核巨噬细胞的数量明显少于异种脱细胞血管支架。同种脱细胞血管支架在动物体内4周引起的钙化程度明显小于异种脱细胞血管支架。脱细胞血管的钙化反应与巨噬细胞介导的免疫炎症反应明显相关,然而具体机制仍需要进一步探究。第二部分脂肪干细胞体外分化得到的脂肪细胞分泌功能的鉴定目的:种子细胞的应用在血管组织工程里十分普遍,他们可以通过自身

关键词： 颅内动脉瘤   分子机制   基因   RNA   慢性炎症  

摘要： 颅内动脉瘤是颅内常见的血管畸形,目前颅内动脉瘤手术率大大提高。通常认为直径≥0.6cm有较高的破裂风险,而且死亡率很高。对于高破裂风险者,有创手术或者血管内干预都是有效的治疗方法,但具有神经损伤的风险。目前,由于动脉瘤的相关分子机制尚不明确,所以为寻找更有效的治疗措施造成了难题,因而迫切需要阐明动脉瘤的相关分子学机制。在过去十多年以来,基因学和分子生物学的发展推动了动脉瘤相关研究的进展。本文将从以下几个方面阐述颅内动脉瘤的相关机制:(1)分子机制方面:髓过氧化物酶(MPO)、Kruppel样因子(KLF2)、PINCH蛋白、一磷酸鞘氨醇 1 型(Sphigosine-1-phosphate S1P1)受体激动剂ASP4058;(2)基因方面:常见的基因有1p34.3-p36.13,7q11,19q13.3,Xp22 等;(3)RNA:长的非编码 RNA(LncRNA)、环状RNA(circRNA);(4)慢性炎症与颅内动脉瘤的关系。

关键词： TGR5   炎症   CREB   β-arrestin2   NF-κB信号途径  

摘要： 炎症是一种常见的病理现象,与多种疾病的发生发展有关,慢性炎症可发展成恶性肿瘤,因此研究炎症的分子机制至关重要。研究已发现多条炎症信号通路和关键信号因子,基于这些重要分子为靶点的抗炎药物被广泛关注。NF-κB通路是一条重要的炎症通路。G 蛋白胆汁酸偶联受体 5(Takeda G-protein-coupled receptor 5,TGR5),在胆汁酸代谢、糖和能量代谢、炎症和癌症中起重要调控作用。TGR5可通过多种信号通路抑制炎症,已有研究发现TGR5可通过抑制IκBα磷酸化、p65易位、NF-κB的结合转录活性等抑制NF-κB介导的炎症。但TGR5诱导炎症的具体分子机制仍有待研究。cAMP反应元件结合蛋白(CREB),是一种细胞核内调控因子,TGR5可调控PKA/CREB途径。β-arrestin2属于Arrestin家族,是视觉抑制蛋白的一种,它负责调节G蛋白偶联受体信号的转导,通过和活化的G蛋白偶联受体结合使其失去与其他配体结合的能力。研究发现TGR5的激活可增强IκBα和β-arrestin2的相互作用。TGR5通过介导IκBα和β-arrestin2之间的相互作用抑制NF-κB通路。本实验进一步探究TGR5在炎症通路中的分子机制,研究了TGR5在CREB、β-arrestin2基因编码受抑制的情况下对炎症因子和NF-κB通路的影响。分别在小鼠巨噬细胞和人胃癌细胞中用TGR5的INT-777等激活剂激活TGR5,通过siRNA干扰的方式沉默CREB和β-arrestin2基因的表达。结果表明TGR5可通过NF-κB通路抑制p65和LPS诱导的巨噬细胞炎症和胃炎。而CREB和β-arrestin2的敲低使TGR5对NF-κB通路及炎症的抑制作用降低。

关键词： NLRP3炎症小体   IL-1β   Cullin1   泛素化   ASB17   负调控  

摘要： 先天性免疫系统是宿主依靠模式识别受体识别细胞应激反应和外源病原体,其中炎症小体是先天性免疫系统的重要组成部分。炎症小体是能够识别病原体相关的分子模式和宿主细胞的危险信号(危险相关的分子模式)的多蛋白大复合物。NLRP3炎症小体是目前研究最为清楚的炎症小体,它主要由NLRP3,ASC和proCaspase-1构成。NLRP3炎症小体能够调控细胞因子IL-1β和IL-18的成熟和分泌,这些细胞因子对于炎症反应起着非常重要的调控作用。NRLP3炎症小体的调节失控和很多炎症性疾病紧密相关,例如痛风、自身免疫性疾病、动脉粥样硬化、2型糖尿病、等等,所以机体对于调控NLRP3炎症小体的激活控制的非常严格。目前,对于激活NLRP3炎症小体的调控研究较多。然而对于负调控NLRP3炎症小体激活的机制不是很清楚。本文通过酵母双杂交,以NLRP3的第一个结构域PYD为诱饵蛋白进行目的蛋白的筛选,首次发现了Cullin1和ASB17可以和NLRP3相互作用,同时Cullin1和ASB17可以负调控NLRP3炎症小体的激活。本研究中,我们首次确定了Cullin1可以和NLRP3相互作用。同时发现Cullin1和NLRP3的相互作用不依赖于Skp1和ROC1。在HEK293T细胞中重建NLRP3炎症小体模型,通过过表达Cullin1和干扰Cullin1,发现Cullin1可以特异性抑制NLRP3炎症小体的激活。在TPA诱导分化THP-1的巨噬细胞中,Cullin1也可以抑制NLRP3炎症小体的激活。后来我们发现Cullin1可以促进NLRP3的泛素化,但是不降解NLRP3。在小鼠腹膜腔炎症模型中,发现Cullin1抑制了NLRP3炎症小体的激活和免疫反应。同时,我们也确定了ASB17可以和NLRP3相互作用。在HEK293T细胞重建NLRP3炎症小体模型中,ASB17可以抑制NLRP3炎症小体的激活,同时发现ASB17可以降解NLRP3。在TPA诱导分化THP-1的巨噬细胞中,过表达ASB17可以明显抑制NLRP3炎症小体的激活。在四个经典炎症小体(NLRP3、NLRP1、NLRC4和AIM2)中,ASB17不仅可以降解NLRP3,还可以降解NLRC4。此外,发现ASB17可以泛素化NLRP3而导致NLRP3通过蛋白酶体降解。同时通过构建NLRP3一系列的泛素化位点突变,发现ASB17泛素化降解NLRP3的位点为K689。总之,我们的研究结果表明,Cullin1和ASB17能够抑制NLRP3炎症小体的激活,这对于机体负调控NLRP3炎症小体的分子机制有了更加深入的了解。

关键词： IgG4相关泌尿系损害   炎症状态   CD4+细胞毒T细胞   尿外泌体  

摘要： 研究背景:IgG4相关疾病(IgG4-relateddisease,IgG4-RD)是一种多系统受累的自身免疫性疾病,IgG4-RD的特点为多脏器弥漫性肿大、血清IgG4水平升高、受累组织中弥漫淋巴浆细胞浸润伴席纹样纤维化。泌尿系统(包括肾脏、输尿管、膀胱)是IgG4-RD最常累及的系统之一,肾实质损伤或肾后性梗阻均可造成肾脏功能异常,如未能及时诊治可发展至终末期肾脏病(endstagerenaldisease,ESRD)。IgG4-RD的危险因素尚不明确、致病机制亦不清晰,固有免疫与体液免疫均可能参与疾病的发生、发展。虽然绝大多数患者对糖皮质激素治疗反应良好,但减量过程中易反复。因此针对发病机制进行深入研究并探讨可能的特异性治疗方式为目前临床需要解决的首要问题。有关IgG4相关泌尿系损害的致病机制研究报道相对较少,近年研究发现CD4+SLAMF7+细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)在IgG4-RD患者外周血中表达增加,在IgG4相关泪腺炎、涎腺炎患者受累组织中亦有浸润,其通过分泌颗粒酶A、穿孔素、IFN-γ等因子直接造成组织损伤及纤维化。目前在IgG4相关泌尿系损伤中尚无研究证实CD4+CTL是否参与组织损伤,其造成损伤的具体机制也有待进一步深入探究。研究目的:1.分析IgG4相关泌尿系损害住院患者的临床、病理特点和疾病转归,尝试探究IgG4-RD合并泌尿系损害的危险因素;2.评价IgG4相关肾实质损害患者外周血与肾脏组织中CD4+CTL表达情况,初步了解外周血相关细胞表达与组织细胞浸润水平是否相关,分析其与临床表现的相关性;3.通过IgG4相关泌尿系损害患者的尿外泌体,初步探究泌尿系损害潜在的致病分子通路,以期找到可能的IgG4相关泌尿系损害的诊治标志物。研究方法:2009年1月1日至2018年6月1日北京协和医院住院诊断IgG4相关泌尿系损害患者共49例,回顾性分析其临床、病理及随访资料,探究疾病特异性诊断指标及病理损伤特点,进而评价单纯激素和激素联合免疫抑制剂治疗方案对疾病预后影响;同时通过临床资料分析尝试寻找影响IgG4-RD出现泌尿系受累的相关危险因素。利用流式细胞术对IgG4相关泌尿系损害患者和健康对照的外周血单个核细胞进行CD4+CTL相关特异性标志物染色,同时通过肾脏石蜡组织切片进行CD4、SLAMF7、GZMA免疫荧光共染,评价CD4+ CTL在IgG4相关肾脏受累患者的肾组织中浸润程度,初步探讨CD4+CTL在IgG4相关泌尿系损害患者循环与组织中的表达情况及两者间可能的相关性。通过 IgG4 相关肾病(IgG4-related kidney disease,IgG4-RKD)、腹膜后纤维化及IgG4相关输尿管损害导致肾后性梗阻患者的尿外泌体,以无泌尿系受累的IgG4-RD患者、泌尿系结石导致梗阻患者及健康男性作为对照,研究mTOR、PI3K、Akt、NF-κB-p65、Fas、caspase3在尿外泌体中的表达和变化,了解IgG4相关泌尿系损伤组织炎症损伤的可能机制和无创标志物。研究结果:***4相关泌尿系损害住院患者的临床、病理特点与危险因素初探:49例IgG4相关泌尿系损害患者以男性为主(男:女=39:10),平均诊断年龄62.5±11.9岁,40.8%的患者具有明确过敏史。患者平均受累脏器数为3(1-4)个,伴随损害脏器以颌下腺(34.7%)、胰腺(26.5%)及腮腺(26.5%)为主。嗜酸性粒细胞增高(32.7%)是IgG4相关泌尿系受累的特点之一,其中增高至嗜酸性粒细胞增多症水平的患者(8.2%)表现出炎症极度活动的消耗状态。肾实质损害及腹膜后纤维化为IgG4相关泌尿系损害的主要损伤形式,其中肾实质受累患者以IgG4相关小管间质性肾炎(IgG4-related tubulointerstitial nephritis,IgG4-TIN)为主,患者就诊时多出现少量蛋白尿1.12(0.67-1.34)g/24h,尿中小管损伤指标明显升高,无范可尼综合征表现,可进入CKD4-5期;而IgG4相关膜性肾病(IgG4-related membranous nephropathy,IgG4-MN)则以肾病综合征起病。腹膜后纤维化患者就诊时除少量蛋白尿0.76(0.38-1.05)g/24h外,SCr升高至279.0(134.0-559.0)μmol/L,急性肾损伤为其主要特点。血IgG4水平在上述三组患者中存在显著差异(15500vs17800vs4030mg/L,P<0.05)。所有IgG4相关泌尿系损害患者均呈现明显炎症活动状态,炎症指标如ESR高达70.0(34.0-90.5)mm/h,hsCRP 5.57(1.25-20.89)mg/L。IgG4 相关泌尿

关键词： 地塞米松   直肠癌手术   全身麻醉   并发症  

摘要： 目的:探究术前使用塞米松对结直肠癌术后全身炎症反应及并发症的影响.方法:随机选取我院2014年6月-2016年6月收治的行结直肠癌手术的患者90例,将他们分为研究组和对照组,每组各45例.给予对照组患者常规静脉麻醉,研究组患者在此基础上联合地塞米松辅助麻醉.对比两组患者手术治疗前后VAS评分、炎症反应相关指标、胃功能恢复情况、并发症的发生率.结果:手术前两组患者的VAS评分无明显区别(P>0.05),手术后两组患者的VAS评分均有明显改善,研究者患者改善程度显著高于对照组(P<0.05);手术前两组患者的C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)、淋巴细胞比例(N％)等炎症指标无明显区别(P>0.05),手术后两组CRP、WBC、N％均低于手术前,且研究组患者明显低于对照组(P<0.05);手术后两组患者肛门排气时间、平均住院时间均显著短于对照组(P<0.05),同时研究组术后恶心呕吐评分显著低于对照组患者(P<0.05).研究组患者相关并发症的发生概率均低于对照组患者(P<0.05).结论:术前应用地塞米松辅助治疗行结直肠癌手术患者效果显著,能够明显减轻患者痛苦,有效缩短住院时间,可在临床上大力推广使用.

关键词： 榛仁多肽   免疫活性   分离纯化   结构鉴定  

摘要： 榛仁含油脂、蛋白质、碳水化合物、不饱和脂肪酸和纤维等多种营养成分,其中蛋白质含量约占20%,蛋白质中氨基酸比例均衡,尤其谷氨酸和精氨酸含量丰富,可满足成年人对各种氨基酸的需求。植物源蛋白肽具有功能性和安全性。本研究在实验室前期研究基础上,对榛仁水解获得的免疫调节肽进行分离纯化和结构鉴定,并对获得的多肽进行细胞体外验证,最后利用细胞炎症模型,探讨榛仁源免疫肽对NF-κB和MAPK信号通路的作用机制,为榛仁免疫活性肽的开发和利用提供依据。具体结果如下:以榛仁多肽为原料,在前期完成榛仁水解肽G-25和G15分离纯化的基础上采用反相高效液相色谱(Reversed-phase high performance liquid)对榛仁多肽进行进一步分离纯化,最终得到组分F1、F2、F3、F4、F5和F6。利用电喷雾串联质谱(Electrospray tandem mass spectrometer)技术对组分F1、F2、F3、F4、F5和F6进行结构鉴定,对质谱鉴定结果筛选得到10个榛仁肽,其氨基酸序列为Val-Asp-Glu-Asp-Thr-Ala-Arg(VDEDTAR)、Val-Leu-Leu-Ala-Leu-Val-Leu-Leu-Arg(V LLALVLLR)、Pro-Glu-Asp-Glu-Phe-Arg(PEDEFR)、Arg-Asn-Val-Glu-Asp-Glu-Leu-AlaArg(RNVEDELAR)、Val-Glu-Asp-Glu-Leu-Arg-Val-Leu(VEDELRVL)、Asp-Glu-Glu-Th r-Arg-Pro-Trp-Arg(DEETRPWR)、His-Leu-Arg-Asp-Pro-Gln(HLRDPQ)、Ala-Asp-Leu-T yr-Asn-Pro-Arg(ADLYNPR)、His-Leu-Arg-Asp-Pro-Thr-His(HLRDPTH)、Leu-Asp-AlaPro-Gly-His-Arg(LDAPGHR)。采用固相合成法合成10个多肽并评价其免疫活性,其中LDAPGHR具有较好的免疫调节能力。免疫试验结果表明:LDAPGHR能提高小鼠巨噬细胞吞噬能力和促进脾脏淋巴增值率。利用LPS刺激小鼠RAW264.7细胞建立细胞体外模型,研究了LDAPGHR对丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase)和核转录因子κB(Nuclear transcription factor-κB)信号通路的影响。结果显示:LDAPGHR与脂多糖(Lipopolysaccharide)共同刺激后,在12.5-50μmol/L浓度下,对细胞无毒性作用。与LPS组相比,LDAPGHR能抑制小鼠RAW264.7细胞中细胞因子NO、PGE2、IL-1β、IL-6的分泌及其mRNA表达(P<0.05),而对TNF-α无显著性影响。该肽能抑制MAPK通路中p-JNK、p-ERK和p-p38的蛋白表达和NF-κB通路中p-IκB-α和细胞核中p-65的蛋白表达,由此可以推断,LDAPGHR可以通过抑NF-κB和MAPK通路,来抑制LPS刺激小鼠RAW264.7细胞所产生的炎症反应。

关键词： 中西结合治疗   全身炎症反应综合征   临床治疗效果  

摘要： 目的:研究选择采用中西医结合治疗方法对于全身炎症反应综合征患者进行治疗的临床治疗效果。方法:此次研究的对象是选择本院收治的100例全身炎症反应综合征患者,将其临床资料进行回顾性分析,将所有患者分为观察组和对照组,各50例。对于对照组患者选择采用单纯的西医治疗方法进行治疗,观察组患者选择采用中西医结合的方法进行治疗,对于两组患者治疗结束以后的治疗效果进行评价,并作比较。结果:评价本研究两组治疗结束之后临床治疗的总有效率情况,观察组患者的治疗总有效率明显比对照组更高,P<0.05,差异具有统计学意义。结论:对全身炎症反应综合征患者在进行治疗时,为患者配合采用中西医结合治疗方法进行治疗符合治疗的原则,可以有效的缓解患者的相关症状,提高患者治疗的有效率。