关键词： 小儿豉翘清热颗粒   支原体肺炎   阿奇霉素   免疫功能  

摘要： 目的分析探讨小儿肺炎支原体感染患儿采取小儿豉翘清热颗粒联合阿奇霉素治疗的临床效果以及相关表现。方法对照组患儿采取阿奇霉素静脉滴注治疗,观察组患儿在此基础上联合小儿豉翘清热颗粒治疗。结果观察组治愈率为96.0%。对照组治愈率为82.0%。组间对比差异明显,具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的hs-CRP、TNF-ɑ、IL-6较对照组明显较高,而WBC较对照组明显较低,存在差异(P<0.05),有统计学意义。结论对于支原体肺炎患儿,在阿奇霉素治疗的基础上,结合小儿豉翘清热颗粒共同治疗,能有效改善患儿肺部炎症,提高其免疫功能,从而恢复患儿健康。

关键词： FK506结合蛋白12   细胞程序性坏死   肿瘤坏死因子   全身炎症反应综合征  

摘要： 一.研究背景细胞程序性坏死是一种新近鉴定的细胞程序性死亡,具有明确的调控靶点、具体的调控机制和确切的生理和病理功能。细胞程序性坏死是一种可调控的细胞死亡方式,只是由于死亡细胞表现出细胞坏死的形态特征(如细胞器肿胀和细胞膜破裂等),因而被命名为细胞程序性坏死(programmed cell death,necroptosis)。已有研究表明,死亡配体、化疗药物、病原微生物(细菌和病毒)入侵等多种因素都能诱导细胞程序性坏死,从而决定了它具有广泛的生物学功能,在胚胎发育,缺血再灌注损伤和炎症等生理和病理过程中发挥重要调控作用。因此,鉴定调控细胞程序性坏死的新靶点并探讨其调控机制,可以为细胞程序性坏死相关疾病的药物研发及临床治疗提供理论指导与参考。FK506结合蛋白 12(FK506-bindingprotein 12,FKBP12)是一种分子量为12kD的亲免素家族蛋白,含有肽基-脯氨酰异构酶结构域,可以催化多肽或蛋白质脯氨酸残基中N端肽键的顺反构象变化,改变底物蛋白的活性。同时,FKBP12也可发挥分子伴侣和接头蛋白的作用,介导蛋白复合体的组装和活化。因此,FKBP12具有多种生物学功能,如调控基因转录和细胞内钙离子的浓度,阻断TGF-Smad通路的信号转导等。但是,目前并无相关研究发现FKBP12参与细胞程序性坏死的调控。二.研究目的本研究将鉴定FKBP12在细胞程序性坏死中的调控作用和机制,并探讨FKBP12在细胞程序性坏死相关疾病中的作用,从而鉴定调控细胞程序性坏死的新靶点,为细胞程序性坏死相关疾病的治疗提供参考。三.研究方法(1)通过透射电镜分析细胞死亡的形态特征、Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞仪检测细胞死亡类型和比例,鉴定TNFα诱导的L929和HT22细胞死亡方式。(2)利用显微镜直接观察法、台盼蓝拒染法及流式细胞术测定PI染色阳性细胞比例的方法检测TNFα诱导的细胞程序性坏死。通过慢病毒介导的基因敲入和敲低技术,构建稳定过表达或敲低FKBP12的细胞系,并结合FKBP12配体药物,鉴定FKBP12对细胞程序性坏死的调控作用。(3)利用TNFα与CHX联合诱导的NIH/3T3细胞死亡模型,研究FKBP12敲低对细胞凋亡的影响。(4)利用免疫沉淀和Western blot技术检测RIPK1和RIPK3的相互结合,同时利用Duolink in situ PLA技术体系配合激光共聚焦显微镜观察对RIPK1与RIPK3结合形成坏死复合体进行验证。(5)利用NuPAGE(?)electrophoresis system技术体系和Duolink in situ PLA技术体系检测RIPK1、RIPK3及MLKL蛋白同源分子间的相互作用。(6)利用Real-time PCR或Western blot技术对FKBP12敲低或过表达效果进行验证,同时,Western blot也用于检测其他蛋白的表达或磷酸化水平变化,并配合细胞成份分离技术检测蛋白质的亚细胞定位。(7)通过小鼠尾静脉注射TNFα构建全身炎症反应综合征(systemic infalmattory response syndrome,SIRS)动物模型,通过监测小鼠的体温变化和生存率,判定SIRS的发病程度;利用HE染色检测小鼠肝脏和盲肠组织的损伤情况,评价SIRS作用的靶器官。(8)通过慢病毒介导的RNA干扰技术建立FKBP12敲低小鼠,或利用FKBP12配体化合物进行处理,检测FKBP12在TNFα诱导的全身炎症反应综合征中的调控作用和机制。四.研究结果(一)FKBP12是调控细胞程序性坏死的新靶点。(1)TNFα与Z-VAD联合诱导的L929和HT22细胞死亡具有经典的坏死样细胞的形态结构变化,表现为Annxin V-FITC/PI双阳性染色,且能被细胞程序性坏死的靶点抑制剂Necrostatin-1(Nec-1),GSK'872和Necrosalfonamide(NSA)所阻断,因而是经典的细胞程序性坏死。(2)FKBP12配体化合物及FKBP12敲低能够阻断TNFα单独或与其他化合物联合诱导的细胞程序性坏死,且在FKBP12敲低的细胞中恢复FKBP12的表达能够恢复L929细胞对TNFα诱导的细胞程序性坏死的敏感性,表明FKBP12是调控细胞程序性坏死的重要靶点。(二)FKBP12在TNFα诱导的细胞程序性坏死中的调控机制研究。(1)FKBP12敲低及FKBP12配体FK506能够阻断TNFα诱导的细胞程序性坏死,但是对TNFα诱导的mTOR信号通路的活化并没有影响,因此,FKBP12对细胞程序性坏死的调控与mTOR信号通路无关。(2)FKBP12敲低可以显著抑制TNFα与Z-VAD联合诱导RIPK1,RIPK3和MLKL磷酸化,及MLKL多聚体

关键词： 慢性硬膜下血肿   全身炎症反应相关指标   NLR   PLR   LMR  

摘要： 背景:慢性硬膜下血肿在神经外科较为常见,其主要特点是含血性成分的物质在硬膜下腔异常积聚并缓慢机化,血肿体积不断增加。由于慢性硬膜下血肿病程较长,机体对血肿体积的缓慢增加有一定的代偿能力,当患者出现头痛、呕吐等颅内压增高症状及局部神经功能改变时,血肿体积巨大,中线移位明显。钻孔冲洗术治疗是临床上最为常用治疗方式,手术操作难度较小,效果明显。然而慢性硬膜下血肿患者大多高龄,平均年龄在60岁以上,身体基础条件差,往往还伴随各种慢性病,手术清除血肿治疗依然存在很大的风险,还有部分患者术后一段时间再次复发慢性硬膜下血肿或者硬膜下积液也是本疾病的风险之一,是否首选手术治疗依然存在很大的争议。虽然目前慢性硬膜下血肿形成机制的假说很多,但是慢性硬膜下血肿的确切发病机制还不十分清楚,对慢性硬膜下血肿的发病机制的研究有助于改善这一疾病的治疗,并有效的预防复发,因此对慢性硬膜下血肿的发病机制的深度研究就变得十分重要。目前较为主流的学说是渗透学说,轻度外伤导致的桥静脉的撕裂,静脉血缓慢渗出,聚集成血肿腔,因为渗血速度缓慢,往往在早期没有任何临床症状,当血肿体积增大到一定程度后,颅内压失代偿,进而引发头痛、呕吐等颅高压表现以及局部神经功能改变等症状,然而这一学说还不能完全解释这一疾病的发生。研究发现在慢性硬膜下血肿的血肿腔内和壁层都发现了一些炎症因子,此研究表明全身性免疫炎症反应可能参与到了慢性硬膜下血肿的形成。从免疫炎症异常的角度出发,有部分人尝试用抗炎药物治疗慢性硬膜下血肿,比如阿托伐他汀、地塞米松等药物无论单独使用还是联合手术治疗都取得了一定的疗效,并有效降低慢性硬膜下血肿术后复发的风险。目的:研究慢性硬膜下血肿患者组与健康对照组、创伤性慢性硬膜下血肿组与非创伤性慢性硬膜下血肿组、非创伤性慢性硬膜下血肿男性患者组和女性患者组之间的外周血中白细胞总数、NLR、PLR、LMR变化。试图证明慢性硬膜下血肿患者存在全身性的免疫炎症状态的异常,探求慢性硬膜下血肿的发病机制与全身免疫炎症异常状态有关,免疫炎症反应在创伤性慢性硬膜下血肿和非创伤性慢性硬膜下血肿的发病中起到的不同的作用,非创伤性性慢性硬膜下血肿患者外周血中全身炎症相关指标是否存在性别差异,为药物治疗慢性硬膜下血肿寻求科学依据。研究方法:回顾性分析研究并选取2011年1月-2018年12月之间中国医大一院门诊和急诊收治的慢性硬膜下血肿病例共计266例,平均年龄(63.55±9.19)岁,其中男性患者200例,女性患者66例,有头部外伤史(外伤病史1个月-7个月)152例,无头部外伤史114例,单侧硬膜下血肿205例,双侧硬膜下血肿61例,原发硬膜下血肿262例,术后复发硬膜下血肿4例;选取同期中国医大一院体检中心进行健康体检并确认无病人群共150例为对照组,平均年龄(56.68±14.78)岁,其中男性81例,女性69例。采集病例组及对照组外周静脉血行血常规化验,收集并整理每个病例和对照的白细胞总数、中性粒细胞数、淋巴细胞数、单核细胞数、血小板数,进行计算并整理每个病例组和对照组的白细胞总数、NLR、PLR、LMR。利用IBM SPSS22.0统计软件进行数据处理,计量资料数据,以(?x±s)表示。评估慢性硬膜下血肿患者组与健康对照组、创伤性慢性硬膜下血肿组与非创伤性慢性硬膜下血肿组、非创伤性慢性硬膜下血肿男性患者组和女性患者组之间的外周血中白细胞总数、NLR、PLR、LMR的变化。采用独立样本T检验进行统计分析。结果:研究结果显示慢性硬膜下血肿组白细胞总数的平均值为(6.92±1.94)×10/L,对照组白细胞总数的平均值为(6.26±1.39)×10/L,(t=3.678,p=0.0003);慢性硬膜下血肿组NLR的平均值为(3.4±2.69),健康对照组为(1.82±0.86),(t=6.985,p﹤0.0001);慢性硬膜下血肿组PLR的平均值为(147.2±80.3),健康对照组为(127.8±51.04),(t=2.670,p=0.0079);慢性硬膜下血肿组LMR的平均值为(3.95±2.04),健康对照组为(5.12±1.78),(t=5.878,p﹤0.0001)。创伤性慢性硬膜下血肿组的白细胞总和平均值为(6.95±1.71),非创伤性慢性硬膜下血肿组的白细胞总数的平均值为(6.87±2.22),(t=0.337,p=0.736);创伤性慢性硬膜下血肿组的NLR平均值为(3.06±1.96),非创伤性慢性硬膜下血肿组的NLR的平均值为(3.86±3.39),(t=2.419,p=0.0162);创伤性慢性硬膜下血肿组的PLR和平均值为(136.3±59.73),非创伤性慢性硬膜下血肿组的PLR的平均值为(161.9±99.88),(t=2.606,p=0.0097);创伤性慢性

关键词： 原发性肝癌   肝细胞肝癌   经肝动脉介入化疗栓塞术   炎症因子   IL-8  

摘要： 目的:通过前瞻性队列研究探索解毒方(Jiedu Fang,JDF)对原发性肝癌患者行肝动脉化疗栓塞术(Transcatheter arterial chemoembolization,TACE)后临床疗效及预后的影响,并明确JDF与TACE术前后患者血清炎症因子变化的关系,同时对其部分作用机制进行初步研究。方法:1.通过前瞻性队列研究,纳入2018年2月至2018年8月于长海医院行TACE术的原发性肝癌患者,分为JDF组与单纯行TACE术的对照组,通过安德森症候评分表评估患者术前24小时、术后24小时、术后72小时的生存质量,分析JDF能否缓解TACE术后栓塞综合征。并于术前、术后第3天、术后2个月抽取外周血检测血常规、肝功能、白介素(Interleukin,IL)-1β等炎症因子水平,分析两组患者炎症因子及基于炎症评分系统分数的变化,通过单变量分析筛选出JDF作用的敏感因子。2.绘制kaplan-Meier生存曲线并通过Log-rank检验比较解JDF组与对照组的术后无疾病进展生存期(Progresstion free survival,PFS)的差别,同时采用COX比例风险模型对TACE术后6个月PFS的可能预后因素进行多因素生存分析,筛选出独立影响因子。3.通过MTT检测JDF对Huh 7细胞及*** 926细胞增殖率的影响,并通过血管生成实验检测JDF对缺氧条件下血管生成的作用。通过PCR实验探索JDF作用于缺氧条件下Huh 7细胞的缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible factor,HIF)-1α、血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)及IL-8 m RNA表达水平,并进一步通过ELISA验证对IL-8表达的作用。采用人重组IL-8细胞因子干预,通过Western blot方法检测JDF对IL-8作用下HIF-1α及VEGF表达的影响及其与血管生成的关系。4.建立基质胶血管形成模型,在体内验证IL-8对基质胶组织血红蛋白浓度、VEGF及血管生成标志物CD31和v WF的影响以及JDF的拮抗效应。结果:1.本研究共纳入88例HCC患者,其中对照组47例,JDF组41例。纳入患者TACE术后格拉斯哥预后评分(Glasgow Prognostic Score,GPS)及改良评分m GPS评分高于术前,中性粒淋巴细胞比(Neutrophil lymphocyte ratio,NLR)由术前(2.56±2.48)上升到术后的(8.50±4.40),血小板淋巴细胞比(Platelet lymphocyte ratio,PLR)由术前的(110.66±49.46)上升到术后的(136.26±78.04),IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-8均上调。与对照组相比,JDF能有效改善TACE术后HCC患者的生活质量,其中以疼痛、呕吐、便秘等症状改善最为明显。JDF组对于TACE术后栓塞综合症的完全缓解率优于对照组,可能与降低IL-8、PLR、NLR等炎症因子及炎症分数有关,其中以抑制IL-8效果最为明显。2.为期2个月的近期疗效评价中,JDF组客观缓解率ORR为41%,疾病控制率DCR为71%,对照组ORR为13%,DCR为68%,JDF组优于对照组。为期6个月的随访JDF作用术后无疾病进展生存期PFS优于对照组。单因素COX生存分析发现,术前PLR、术后第3天的IL-2R、术后2个月的m GPS、GPS、PLR是其影响因素。多因素分析发现术前m GPS、PLR及IL8,术后第3天的NLR、IL-2R、AFP,以及术后2个月的PLR均是影响PFS的因素。***实验结果显示不同浓度JDF作用24 h及48 h后,*** 926细胞增殖受到抑制,呈时间和浓度依赖性,但抑制率<20%。RT-PCR实验结果显示,缺氧诱导Huh 7细胞中IL-8、HIF-1α及VEGF的m RNA表达,JDF能拮抗该效应,ELISA实验提示JDF能抑制缺氧条件下IL-8的高表达。缺氧条件及IL-8均能诱导血管生成,而JDF能拮抗该效应,提示JDF可能通过抑制缺氧条件下IL-8的表达进而抑制血管生成,发挥抗肝癌的效应。4.体内基质胶血管形成模型结果显示,IL-8能促进基质胶组织血管生成,提高血红蛋白的表达浓度,HE染色结果提示JDF能拮抗IL-8诱导的血管生成。免疫组化结果显示IL-8组VEGF、CD31及v WF的表达阳性率较对照组明显上升,而IL-8+JDF组较IL-8组其VEGF、CD31及v WF的表达阳性率均下降,提示JDF对IL-8的拮抗作用。结论:***联合TACE术能明显降低原发性肝癌患者TACE术后炎症因子的表达,在改善HCC患者生活质量、延长PFS

关键词： 双倍剂量   阿法骨化醇   IgA肾病   尿蛋白   微炎症状态  

摘要： 目的:探讨双倍剂量阿法骨化醇对IgA肾病患者尿蛋白及微炎症状态的影响.方法:本次研究对象为我院2017年2月至2018年3月期间收治的80例IgA肾病患者,电脑随机进行分组各40例,两组患者均接受双倍剂量肾素血管紧张素系统(RAS)阻断剂治疗,对照组在此基础上加用小剂量阿法骨化醇,观察组加用双倍剂量阿法骨化醇,均治疗3个月,比较两组患者治疗前后的尿蛋白及微炎症状态.结果:治疗前两组的24h尿蛋白定量(24hUTP)差异不大(P>0.05),治疗后两组指标均有下降,但观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前两组患者的白介素(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、转化生长因子(TGF-β1)差异不大(P>0.05),治疗后两组各项炎症因子水平均下降,但观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:双倍剂量阿法骨化醇对IgA肾病患者的效果良好,可以减轻蛋白尿,改善微炎症状态,值得临床进一步推广.

关键词： 石榴皮多酚   安石榴苷   鞣花酸   抗炎作用   MAPK-NF-κB  

摘要： 代谢综合征(Metabolic Syndrome,MS)是机体内多种营养成分发生代谢紊乱的一组疾病症候群。MS与心脑血管疾病、2型糖尿病、癌症等慢性疾病密切相关,是糖尿病、心脑血管疾病等高发病率的基础。MS的发病机理从本质上认为是长期慢性炎症的作用,因此,研究炎症在机体和细胞内的作用机理,抑制炎症的发生和发展,对于预防和改善MS等心脑血管疾病具有积极的理论指导意义。石榴含有多种的营养成分,多酚类和黄酮类化合物的种类和含量都很丰富,而石榴皮中的多酚种类繁多且在石榴各部位中含量最高,这些丰富的植物化学物使得石榴皮提取物具有许多生物活性。研究表明,石榴及其提取物具有抗糖尿病、抗氧化、抗菌、抗肥胖、抗癌、降血脂等功效。在炎症方面,已经有研究发现石榴皮提取物具有抑制某些炎性介质和促炎细胞因子分泌的作用,具有一定的抗炎效果,但是其作用机理和主要活性成分尚不清楚。因此,石榴皮多酚(Pomegranate peel polyphenols,PPPs)及其主要成分对炎症的抑制效果及其作用的分子机制有必要进一步深入研究。本论文从体外试验和体内试验两方面入手,首先用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞建立体外细胞炎症模型,研究PPPs及其主要成分安石榴苷(Punicalagin,PC)和鞣花酸(Ellagic acid,EA)对促炎细胞因子和炎性介质的抑制作用,并进一步通过炎症信号通路揭示其抗炎的分子机制和作用靶点;同时,建立高糖高脂诱导SD大鼠MS模型,进一步通过试验动物体内试验,研究PPPs对SD大鼠MS的预防和改善作用。研究结果如下:(1)本试验通过高效液相色谱法(HPLC)对石榴皮提取纯化物的多酚组成进行鉴定,共检测出没食子酸,安石榴苷α和β,儿茶素,绿原酸,表儿茶素和鞣花酸6种化合物。其中,安石榴苷含量最高,为464.48 mg/g;其次为鞣花酸,含量为71.50 mg/g;其它四种成分含量较低,依次为儿茶素45.14 mg/g,没食子酸38.24 mg/g,表儿茶素35.28 mg/g和绿原酸8.85 mg/g。(2)PPPs(1～100μg/mL)、PC和EA(1～50 μM)均能够剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞中ROS的升高;显著降低细胞炎症因子TNF-α,IL-1β和IL-6的分泌和基因表达;并且能够通过下调炎性介质iNOS和COX-2的基因表达,来抑制其下游产物NO和PGE2的生成。(3)PPPs(100 μg/mL)、PC和EA(50 μM)均能够显著性地抑制LPS诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞中TLR4的基因和蛋白表达,说明其可以从受体识别阶段调控细胞内的炎症信号传导。此外,PPPs及其主要组分PC和EA,均可通过降低IκB的磷酸化、泛素化和蛋白酶体降解来阻止p65转移入核,从而起到抑制LPS诱导的NF-κB炎症信号通路激活的作用。此外,PPPs和PC、EA还可对MAPK信号通路进行调控,通过抑制ERK、JNK和p38 MAPK的磷酸化,来抑制MAPK通路的激活,从而下调炎性介质iNOS和COX-2的蛋白表达,降低NO和PGE2的分泌。也就是说,石榴多酚降低细胞炎症反应的分子机制,可能是通过抑制TLR4-MAPK/NF-κB炎症通路的激活而实现的。(4)体外细胞抗炎作用显示,PC的抗炎效果明显优于EA,因此,PC可能是PPPs中发挥抗炎作用的主要活性成分。(5)通过高糖高脂喂养建立SD大鼠MS模型,对SD大鼠分别灌胃PPPs(150 mg/kg·bw·d,300 mg/kg·bw·d)和对照药物辛伐他汀(1 mg/kg·bw·d)。经过连续12周的高糖高脂喂养和灌胃处理,结果显示,PPPs能够显著降低MS大鼠的体重和肝重指数,降低血脂(TC、TG、LDL)和肝脂(TC、TG)及空腹血糖水平,说明PPPs具有预防MS的作用;此外,PPPs能够显著性地抑制血清转氨酶(AST和ALT)的活性,降低FFA、CRP和MPO的水平,病理切片观察发现,PPPs能够减少肝脏炎性细胞的浸润,减少肝细胞内脂滴堆积,说明PPPs有一定的肝保护作用。通过对炎症相关因子的测定及分子信号通路的研究,发现PPPs能够降低MS大鼠血清和肝组织中炎症细胞因子和炎性介质的分泌,下调肝组织中细胞炎性介质及炎症因子mRNA的表达,具有明显的抗炎作用;其发挥抗炎作用的分子机制可能是通过抑制MAPK和NF-κB通路的激活来实现的,这与体外细胞试验结果一致。综上,石榴多酚对实验性MS模型大鼠有明显的预防和改善作用,体外细胞模型试验也显示出良好的抗炎效果,体内体外试验研究结果一致,石榴多酚可下调炎症相关因子的基因表达,抑制促炎细胞因子和炎性介质的分泌,从而发挥抗炎作用,其分子机制可能是通过抑制

关键词： 急性冠脉综合征   肠道微生物   代谢组学   适应性免疫   炎症反应  

摘要： 背景和目的:冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)目前仍居各种疾病致死原因的首位。经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous coronary intervention,PCI)的发展及优化药物治疗也只减少但并未能完全抑制负性心脏事件的发生。从稳定的动脉粥样硬化到急性心脏事件——急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)的发生,其发生机制仍需深入研究。近年来研究提示肠道菌群在心脏代谢性疾病如糖尿病、代谢综合征、动脉粥样硬化中起到重要作用,但在ACS中的作用机制仍需进一步研究。肠道菌群为寄生于人体肠道黏膜表面的微生物群体,肠道黏膜作为人体与外界接触的防线,是人体最大的免疫活性器官之一,因此有多项研究表明肠道菌群组成的改变及其产生的代谢产物可与宿主的免疫系统相互作用,但是在ACS中肠道菌群是否可以通过免疫调节发挥作用尚不清楚。ACS发生包括复杂的炎症反应及免疫代谢失调过程,涉及多种免疫细胞及炎症介质,其中适应性免疫的标志性细胞CD4+T细胞因其可分化为不同细胞亚群受到广泛关注。研究表明ACS患者循环中CD4+T细胞极化状态发生改变,其中两种标志性的细胞亚群:辅助型T细胞-17(T helpers cells 17,Th17)及调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)存在比例失衡。因此,以CD4+T细胞极化为靶点,本研究对肠道菌群、免疫炎症反应及ACS三者之间的关联性进行了探究,第一部分旨在通过分析ACS患者肠道菌群组成特异性及CD4+T细胞极化状态,探究肠道菌群与CD4+T细胞亚群极化间的关联性,从而证明肠道菌群可能是通过对CD4+T细胞极化的调节来影响ACS的发生发展;第二部分对血浆代谢产物与CD4+T细胞极化情况的关联性进行分析,探究肠道菌群是否是通过代谢产物介导免疫失衡的发生;第三部分选取标志性代谢产物通过体外细胞实验验证其对于CD4+T细胞极化的影响及其作用机制。内容与方法:第一部分2017年10月至2018年10月根据纳入排除标准前瞻性选取100例ACS患者,50例稳定型心绞痛(Stable angina,SA)患者及50例冠脉造影证实冠脉正常的患者。留取患者粪便及血清标本,进行粪便16S rDNA肠道微生物检测,比较ACS患者与对照组之间是否存在肠道微生物组成差异。应用流式细胞仪检测CD4+T细胞亚组Treg以及Th17细胞比例,应用ELISA检测血清细胞因子白介素10(Interleukin-10,IL10)及白介素17A(Interleukin 17A,IL17A)水平。探究肠道菌群与ACS炎症反应之间的关联性及肠道菌群可能影响ACS发生的机制。第二部分从上述ACS、SA及正常对照组患者中按照2:1:1比例随机抽取40例患者,留取血清样本,应用液相色谱-质谱联用法(LC-MS)对外周血代谢产物进行分析,比较ACS患者与对照组相比是否存在代谢产物差异,探究肠道微生物代谢产物与ACS炎症反应间的关联性。第三部分通过体外实验验证肠道微生物代谢产物氧化三甲胺(Trimethylamine N-oxide,TMAO)对CD4+T细胞增殖分化的影响及其机制研究。原代分离CD4+T细胞,分别加入0μmol/l,50μmol/1,l00μmol/1,200μmol/l,300μmol/l,600μmol/l,900μmol/l TMAO,应用CCK8检测CD4+T细胞增殖活性变化,选取最佳实验浓度,并应用ELISA测定细胞因子IL-10及IL-17A的浓度,应用流式细胞仪检测CD4+T细胞向亚群Treg及Th17极化的情况,并用western blot检测Treg标志蛋白叉头翼状螺旋转录因子3(Forkhead box P3,FoxP3),Th17 标志性蛋白维甲酸相关孤核受体γt(Retinoid-related orphan nuclear receptor γt,RORyt),以及信号通路Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)磷酸化表达情况。结果:第一部分与对照组相比,ACS患者布劳特氏菌属(0.13±0.11 vs.0.09±0.07 vs.0.06±0.03,P=0.011)及双歧杆菌属(0.12±0.1 vs.0.06±0.08 vs.0.02±0.01,P=0.02)丰度明显降低,而梭杆菌门(0.0029±0.005 vs.0.0005±0.001 vs.0.0004±0.0005,P=0.022)、肠球菌属(0.16±0.04 vs.0.02±0.005 vs.0.006±0.002,P=0.025)、魏斯氏菌属(0.13±0.04 vs.0.02±0.0

关键词： 慢性肾衰竭   微炎症状态   肾衰方   促炎性细胞因子   肿瘤坏死因子-α   白介素-6  

摘要： 目的:通过观察本院肾内科经验方肾衰方及其拆方对慢性肾衰竭(CRF)模型大鼠肾脏及肾功能的影响,以证实肾衰方的疗效;同时观察其对CRF模型大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)促炎性细胞因子水平的影响,研究其在控制微炎症状态的疗效差别以反向探析不同中医病理机制在CRF发病过程中占据的地位及对疾病的发展。材料与方法:将75只SD大鼠按照随机原则分成正常组及造模组,造模组按照Yokozawa法采用腺嘌呤灌胃以复制慢性肾衰模型,造模成功后按照随机原则分成正常组,模型组,肾衰方组,补益组,化瘀组,泄浊组及氯沙坦组,各药物干预组予相应药物水溶液,正常组予蒸馏水进行灌胃。连续给药8周后取血检测大鼠血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血清白蛋白(ALB)、血清谷丙转氨酶(ALT)、TNF-α、IL-6、CRP,测得各项计量资料采用统计学软件SSPS25.0进行统计学分析。结果:1.肾衰方组大鼠Scr水平低于各拆方组、氯沙坦组及模型组(P<0.05);同时泄浊组Scr水平也低于其余拆方组、氯沙坦组及模型组(P<0.05);肾衰方组BUN水平低于除正常组外的其余各组(P<0.05)。2.肾衰方组与泄浊组大鼠TNF-α、IL-6、CRP水平低于其余拆方组及氯沙坦组(P<0.05)。3.药物治疗后肾衰方组大鼠体重水平高于补益组、化瘀组、泄浊组、氯沙坦组、模型组(P<0.05)。4.肾衰方组与补益组大鼠ALB水平高于化瘀组、泄浊组、氯沙坦组及模型组(P<0.05)。5.与正常组比较,肾衰方组及其拆方组大鼠ALT水平无明显差异(P>0.05)。结论:1.肾衰方与泄浊方可以通过提高GRF,明显改善腺嘌呤对大鼠肾功能损伤,促进毒素排泄,减轻氮质血症;其中肾衰方效果最佳。2.肾衰方及其泄浊方可以通过降低促炎性细胞因子的浓度以减轻CRF大鼠的微炎症状态;CRF的微炎症状态与中医的湿浊证具有一定的相关性。3.肾衰方可以明显缓解慢性肾衰竭模型大鼠体重的减轻,且有效提高CRF模型大鼠血清ALB水平,表明肾衰方对可以改善CRF大鼠营养状态。4.肾衰方及其拆方对CRF大鼠无肝损伤风险。

关键词： 肾结石   经皮肾镜取石术   全身炎症反应综合征   多因素分析  

摘要： 目的:本研究旨在探讨经皮肾镜碎石术（percutaneous nephrolithotomy,PCNL）后全身炎症反应综合征（systemic inflammation response syndrome,SIRS）的相关危险因素。方法:对2017年12月至2018年12月之间入住我科的213例因上尿路结石而接受PCNL患者的相关实验室检查结果进行回顾性分析,统计得出其中54例术后发生SIRS,159例未发生SIRS,归类为SIRS+组和SIRS-组。通过单因素分析(计数资料采用χ2检验、Fisher精确概率法,计量资料采用独立样本t检验、曼-惠特尼秩和检验（Mann-Whitney U test）,多因素分析采用logistic回归分析PCNL术后SIRS的风险因素,P<0.05被认为具有统计学意义,列线图模型通过Bootstrap自抽样及内部验证,计算C-index并绘制校准曲线。变量包括年龄、性别、身体质量指数（Body Mass Index,BMI）、麻醉ASA分级、术前血肌酐、术前尿培养阴性或阳性、手术时间、术后是否输血,以及外周血炎症指标如:中性粒细胞比值,中性粒细胞与淋巴细胞比值（neutrophil to lymphocyte ratio,NLR）、中性粒细胞与单核细胞比值（neutrophil to monocyte ratio,NMR）、血小板与淋巴细胞比值（platelet-to-lymphocyte ratio,PLR）。结果:单因素分析中性别、糖尿病病史、术前尿培养阳性、手术时间、结石大小、术后即刻中性粒细胞比值、术后即刻NLR和术后是否输血与术后SIRS的发生相关（P<0.05）。多因素logistic回归结果显示:性别、糖尿病病史、结石表面积、术后即刻中性粒细胞比值、术后即刻NLR、是否需要输血是术后SIRS发生的独立危险因素。结论:PCNL术后SIRS与患者性别、结石大小、糖尿病病史、术后中性粒比值、术后NLR、术后输血有密切关系,基于回归模型,建立列线图模型,内部校正后C-index 0.791,区分度好,校准曲线贴合斜率为1的直线,表示构建的列线图模型的预测风险接近于实际风险,模型的符合度好。

关键词： 持续性血液透析   微炎症状态   研究进展   临床价值  

摘要： 对于终末期肾病患者而言,持续性血液透析能够延长其生存时间,对他们的生活有重大意义。但在研究中发现,持续进行血液透析的患者本身普遍存在炎症反应,但因炎症因子作用缓慢,从而使得其表现为微炎症反应。在深入研究后发现,微炎症反应与患者生活质量关系密切,因此在预后过程中要仔细注意患者的生活质量。本文对维持性血液透析患者微炎症状态的影响进行全面综述,并讨论其治疗情况。