关键词： 糖尿病肾病   Btk   MAPK   NF-κB   巨噬细胞   炎症  

摘要： 背景和目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病患者较为常见的一种并发症,也是引起终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)的重要原因之一。随着人们对糖尿病肾病的研究及认识,现在普遍认为糖尿病肾病是一种慢性炎症性疾病,长期微炎症状态使得肾脏肾小球及肾小管结构的改变,进而引发微量蛋白尿乃至大量蛋白尿。现在不少学者认为巨噬细胞在糖尿病肾病的发生发展中起到了重要作用。Bruton酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase,Btk)是一种非受体型酪氨酸激酶,属于Tec激酶家族。近期研究表明,Btk是Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)等信号通路的重要的信号分子,参与并增强TLR信号转导并最终激活NF-κB和MAPKs信号通路,继而启动炎症反应。同时,Btk仅表达于除T淋巴细胞及组织浆细胞的髓系细胞,较TLR信号通路更有优势,本研究探讨Btk在糖尿病肾脏巨噬细胞激活及肾脏炎症中的作用及分子机制,为糖尿病肾病的治疗提供新的思路及措施。方法:第一部分:提取小鼠骨髓来源的巨噬细胞,培养成熟后采用细胞流式技术对巨噬细胞进行鉴定。采用CCK-8法检测不同浓度的Btk抑制剂PCI-32765对巨噬细胞活性的影响,接着采用Western blot法检测在不同时间点和不同抑制剂浓度下p-Btk的相对表达量以优化实验条件。把巨噬细胞分为:低糖组(LG),抑制剂对照组(LG+PCI-32765),高糖组(HG),抑制剂组(HG+PCI-32765),刺激相应时间后收集细胞和上清,提取细胞m RNA及总蛋白。Transwell法观察巨噬细胞的趋化功能;ELISA法检测上清中IL-1β,TNF-α和MCP-1浓度;实时定量PCR检测IL-1β,TNF-α和MCP-1m RNA表达水平;Western blot检测i NOS,Btk,p-Btk,ERK,p-ERK,JNK,p-JNK,p38,pp38,NF-κB p65,p-NF-κB p65,IκB,p-IκB等蛋白的表达;激光共聚焦法检测巨噬细胞的激活及NF-κB p65核转移。第二部分:选取Btk全髓系敲除小鼠及同背景野生型小鼠各14只作为研究对象,糖尿病组注射50mg/kg.d STZ连续5天,一周后检测各小鼠尾尖血糖,血糖≥16.7mmol/L则视为造模成功。该实验分为四组,分别为:野生型小鼠7只作为正常对照组(WT,n=7),糖尿病小鼠组(Diabetic,n=7),Btk敲基因小鼠组(Btk-/-,n=7)和Btk敲基因糖尿病小鼠组(Btk-/-diabetic,n=7)。12周后检测各小鼠体重、血糖、肾重,收集血、24小时尿及肾脏标本。酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠24小时尿蛋白排泄率;光镜观察小鼠肾脏病理变化;免疫组化方法检测IL-1β,MCP-1,激光共聚焦法检测CD68等;实时定量PCR检测IL-1β,MCP-1和TNF-α的表达;Western blot检测蛋白IL-1β,i NOS,TNF-α,Btk,p-Btk,ERK,p-ERK,JNK,p-JNK,p38,pp38,NF-κB p65,p-NF-κB p65的表达。结果:第一部分:细胞流式结果显示F4/80和CD11b双阳性的细胞占细胞总数的94.5%,细胞的纯度及成熟度均符合实验要求;实验条件优化后选择高糖的浓度为25mmol/L,PCI-32765的干预浓度为10-6mmol/L;Transwell趋化实验结果显示高糖刺激的巨噬细胞趋化的数目明显高于低糖组(P<0.05),PCI-32765干预后细胞趋化数目较高糖组明显下降(P<0.05);实时定量PCR结果显示,高糖组细胞IL-1β,TNF-α和MCP-1m RNA水平较低糖组细胞明显上升(P<0.05),抑制剂组与高糖组相比,三者的m RNA水平明显下调(P<0.05);ELISA结果显示,高糖组细胞上清中IL-1β,TNF-α和MCP-1浓度较低糖组明显升高(P<0.05),与高糖组相比,抑制剂组IL-1β,TNF-α和MCP-1浓度明显下降(P<0.05);Western blot结果显示,与低糖组相比,蛋白i NOS,p-Btk,p-ERK,p-JNK,pp38,p-NF-κB p65,p-IκB相对表达量明显升高(P<0.05),抑制剂组与高糖组比,i NOS,p-Btk,p-ERK,p-NF-κB p65,p-IκB的表达明显下降(P<0.05),p-ERK,p-JNK的表达未见明显变化(P>0.05)

关键词： 重症感染   全身炎症   介质水平   变化状况  

摘要： 目的分析重症感染患者全身炎症介质水平变化的状况。方法选择我院2017年1月～2018年1月收治的重症感染患者120例作为研究对象。将120例患者根据预后情况分为两组,存活组60例,死亡组60例。对两组患者进行血液中炎症因子(TNFα)和sTREM-1的水平进行测定。然后分析两组患者的临床数值和APACHEII的评分变化,然后可以对患者的病情轻重进行评价,同时还可以对预后状况进行评价。结果APACHEII的评分越高那么代表预后就会越差,病情发展,总分也会随之增加,病情好转那么总分也会随之降低。死亡组患者的sTREM-1、TNFα的水平明显增加,病情好转水平则会降低。结论 APACHEII评分、sTREM-1、TNFα水平与患者预后具有密切联系。

关键词： 输血   自体输血   异体输血   肝癌   炎症因子  

摘要： 目的:探讨不同的输血方式对肝癌病人围术期免疫炎症反应的影响。方法:根据病人自身情况及意愿,根据输血方式的不同将60例拟行开腹肝部分切除的肝癌病人分为3组,选取术中只进行自体输血的病人20例(M组)和未予以输血的病人20例(N组),术中仅输入异体血的病人20例(P组)。M组为ANH组,即急性等容血液稀释式自体输血组,在麻醉诱导插管后,根据估计术中的出血量≥400ml,从桡动脉放血,放血的量为一般为7ml/㎏,釆集量不超过全血总容量的10%,同时静脉适当加快滴注等量的羟乙基淀粉。手术结束前,回输给病人。P组为去白细胞异体红细胞输血组,在术中出血时检测血红蛋白(Hb)≤70g/L,或Hb<80g/L,但考虑术中仍将进一步失血,则输入去白细胞异体红细胞。术前病人需血红蛋白大于110g/L、红细胞比容大于0.33,无病毒和(或)细菌感染病人,无凝血功能紊乱,血小板计数异常,无严重的心、肺、肝、肾功能障碍,无内分泌或免疫性疾病,未接受过放疗、化疗或激素治疗,未接受增强免疫功能的药物。比较术前、术后1天、术后5天晨三个时间点内抽取静脉血后,置入抗凝管内,然后使用流式细胞仪检测细胞免疫、体液免疫;用ELISA方法检测炎症因子IL-6、IL-8;采用SPSS 17.0统计软件进行分析。计量资料运用均数±标准差(±s)表示,组间比较运用单因素方差分析,计数资料的比较以卡方检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:术第1天后3组患者的Th,Th/Ts,NK,IgG,IgA,IgM均有所下降,Ts,IL-6,IL-8均有所上升,但自体输血组和未输血组的各项指标较术前无显著差异(P>0.05),而异体输血组患者的各项指标较术前差异有统计学意义(P<0.05)。术后第5天,自体输血组和未输血组患者恢复较快,恢复术前水平,而异体输血还未恢复至术前水平(P<0.05)。结论:1.肝癌切除术异体输血患者术后提示出现了免疫抑制并改变了患者的炎症水平;2.自体输血能减轻肝癌切除术患者的免疫抑制并能更加有效地控制机体的炎症状态,这可能自体血本身免疫成分保留相关。

关键词： 原发性肾病综合征   胆固醇代谢失衡   内质网应激   阿霉素肾病   原发性肾病综合征   NPC1   阿霉素   足细胞   NPC1   炎症   胆固醇稳态平衡   原发性肾病综合征   CD36   NLRP3   足细胞  

摘要： 第一部分阿霉素肾病小鼠模型的建立及其体内胆固醇稳态失衡与内质网应激的关系目的:观察阿霉素肾病小鼠血清、肾脏组织和内质网胆固醇水平及内质网应激的情况,了解胆固醇稳态失衡与原发性肾病综合征发生发展的关系。方法:6-8周雄性BALB/c小鼠分为两组:正常对照组(control,CTL)和阿霉素肾病(ADR)组,于第4、8、12周分别处死小鼠。观察小鼠体重变化及活动情况;考马斯亮蓝法检测小鼠24小时尿蛋白水平;光镜和电镜观察肾小球的病理情况;酶法检测肾脏组织所提取内质网总胆固醇水平;酶法检测血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白及肌酐水平;荧光定量PCR检测肾脏组织葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)、CCAAT/增强结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)m RNA水平。结果:***组小鼠活动较正常对照组明显减少,体重下降明显。2.与CTL组相比,ADR组从第2周起出现大量蛋白尿,并逐渐升高,第8周到达高峰,后逐渐下降(P<0.05)。3.与CTL组相比,光镜下第4周ADR组无明显异常,电镜可见明显足突融合、肾小管内可见脂滴;第8周光镜下ADR组可见大量炎症细胞浸润、肾小球硬化,电镜可见广泛足突融合、系膜细胞增生、尿间隙蛋白质沉积、肾小管内溶酶体及脂质增加;第12周光镜下ADR组可见炎症细胞浸润增多、局灶节段性肾小球硬化,电镜可见广泛足突融合甚至足突消失、足细胞凋亡、系膜细胞增生。4.与CTL组相比,ADR组肾脏组织所提取内质网总胆固醇水平从第4周起明显升高(P<0.05)。5.与CTL组相比,ADR组血清总胆固醇水平和甘油三酯水平从第4周起上升;低密度脂蛋白水平在第4周下降,第8周和12周两组之间无明显差异;肌酐水平在第4周无明显差异,从第8周起上升(P<0.05)。***组肾组织GRP78及CHOP m RNA水平明显高于CTL组,并逐渐升高(P<0.05)。结论:1.阿霉素小鼠肾病模型早期病理表现为微小病变,晚期病理表现为局灶节段性肾小球硬化,并出现肾功能不全。2.阿霉素肾病小鼠出现明显胆固醇稳态失衡,并发生了内质网应激。第二部分NPC1在阿霉素肾病小鼠肾脏组织异常表达目的:观察NPC1在阿霉素肾病小鼠肾脏组织中的表达,了解NPC1和原发性肾病综合征的相关性。方法:6-8周雄性BALB/c小鼠分为两组:正常对照组和阿霉素肾病组,于第4、8、12周分别处死8只小鼠。采用荧光定量PCR和western blot法检测肾组织NPC1的表达;免疫组化和免疫荧光观察NPC1在肾脏中的表达。结果:第4周阿霉素肾病组肾脏组织NPC1 m RNA水平及蛋白水平、肾脏NPC1免疫组化及免疫荧光表达均高于正常对照组;第8周进一步升高达高峰;第12周有所下降(P<0.05)。结论:NPC1可能在阿霉素肾病小鼠肾病的发生发展中起作用。第三部分炎症干扰NPC1介导的胆固醇稳态平衡在足细胞损害中的机制研究目的:观察炎症状态下NPC1在足细胞中的表达,以及干预NPC1对足细胞生理、胆固醇稳态平衡及内质网应激的影响,了解NPC1在炎症介导足细胞损害中的可能作用。方法:小鼠足细胞系MPC5分为对照组(control,CTL组)、高脂组(LDL组)、炎症组(LDL+IL-1β组)和NPC1功能抑制组(U18666A组)四组。采用荧光定量PCR、western blot和免疫荧光检测NPC1在足细胞的表达;流式细胞术AV-PI染色检测足细胞凋亡;荧光定量PCR检测足细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)、CCAAT/增强结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)m RNA水平;酶法检测足细胞内质网胆固醇水平。结果:1.与对照组相比,q PCR、western blot和免疫组化均提示炎症组NPC1表达明显上调(P<0.05);2.与对照组相比,高脂组足细胞凋亡增加,炎症组增加更明显,而抑制NPC1功能可减少足细胞凋亡(P<0.05);3.与对照组相比,高脂组足细胞内质网应激标志蛋白GRP78和凋亡相关蛋白CHOP表达上调,提示足细胞发生了内质网应激并引起了凋亡,而炎症组内质网应激程度更重,但抑制NPC1功能可缓解内质网应激(P<0.05);4.与对照组相比,高脂组内质网胆固醇改变无统计学差异,炎症组内质网胆固醇明显升高,抑制NPC1功能可减少足细胞内质网胆固醇沉积,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:炎症可能通过干扰NPC1而破坏足细胞内胆固醇稳态平衡,促使足细胞发生内质网应激

关键词： 炎症   二甲双胍   线粒体脂肪酸合成通路Ⅱ   线粒体功能障碍   心肌细胞  

摘要： 研究背景:炎症与多种临床疾病的发病机制密切相关,包括心血管疾病、1型糖尿病、2型糖尿病及其并发症等。糖尿病是以高血糖为主要特征的慢性炎症疾病。高血糖和炎性因子表达的增加都会诱发炎症反应,而炎症的发生和发展过程与线粒体密切相关。脓毒症是一种全身性炎症反应性疾病,脂多糖(LPS)被广泛用于诱导心肌细胞炎症和凋亡反应,是诱导细胞脓毒症模型的常用药物。心肌细胞产生的促炎性因子和凋亡在心肌功能障碍的发病机制中至关重要。二甲双胍(Met)具有降血糖和抗炎作用,在多种组织中表现出了抗氧化特性和降低脂质氧化的作用。此外,二甲双胍已经被证明可直接作用于线粒体,保护细胞。目前已知,线粒体可以通过活性氧(ROS)水平、自噬、线粒体的分裂和融合等方面调控炎症的发生。线粒体脂肪酸合成通路Ⅱ(mtFAS Ⅱ)是线粒体功能的重要组成部分,其终产物是硫辛酸(lipoic acid,LA),硫辛酸是蛋白脂酰化反应的主要原料。脂酰化是催化葡萄糖、氨基酸等分解代谢的多种酶的活化所必需的。因此,mtFAS Ⅱ功能的维持是线粒体功能维持的必要条件。目前在炎症状态中mtFAS Ⅱ的变化及其在治疗炎症中的意义还未有研究,因此,本课题将研究不同炎症状态中线粒体脂肪酸合成通路Ⅱ的变化及在二甲双胍治疗心肌炎症中的意义。研究目的:探究mtFAS Ⅱ在多种炎症状态中的变化及其在二甲双胍治疗心肌细胞炎症中的变化及意义。研究内容和方法:本课题主要研究了在肿瘤坏死因子-α、高糖两种炎症状态中,mtFAS Ⅱ的变化,以及在脂多糖诱导的炎症状态下,mtFAS Ⅱ的变化及经二甲双胍治疗后的变化和意义。在肿瘤坏死因子-α和高糖诱导的炎症中,研究mtFAS Ⅱ中丙二酰-CoA/ACP转移酶(MCAT)、3-酮脂酰-ACP合成酶(OXSM)、硫辛酸合成酶(LIAS)和丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase)的E2亚基(PDCE2)脂酰化变化。(1)用10ng/mL的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导炎症状态,按相应的时间梯度处理3T3-L1前脂肪细胞,检测mtFASⅡ中MCAT、OXSM、LIAS的mRNA水平和OXSM的蛋白水平;在DIO肥胖小鼠中,检测在TNF-α高表达的脂肪组织炎症状态下,OXSM的mRNA水平变化。(2)用35mM葡萄糖(D-glucose)诱导炎症状态,按相应的时间梯度处理3T3-L1前脂肪细胞,检测在高糖炎症状态下,MCAT、OXSM、LIAS的mRNA水平和OXSM的蛋白水平;在STZ糖尿病模型小鼠和db/db糖尿病模型小鼠肾脏组织中,分别检测MCAT、OXSM、LIAS的mRNA水平以及STZ糖尿病模型小鼠肾脏组织中MCAT、OXSM、LIAS蛋白水平和PDCE2脂酰化水平变化。在LPS诱导的心肌细胞炎症中,研究mtFAS Ⅱ中MCAT、OXSM、LIAS和PDCE2蛋白脂酰化水平的变化,及其在二甲双胍治疗后的变化。本实验将分为对照组、LPS诱导H9C2型心肌细胞炎症组及3种不同浓度Met与LPS联合治疗组。采用MTT法测定各组细胞活力,流式细胞技术检测各组细胞的凋亡和活性氧水平,蛋白质印记法检测各组的Caspase3、BCL2、BAX、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)、腺苷酸活化蛋白激酶(t-AMPK)、Beclin1、Parkin和mtFAS Ⅱ中MCAT、OXSM、LIAS蛋白水平和脂酰化水平。结果:(1)在TNF-α诱导的炎症状态中,MCAT和LIAS的mRNA水平均出现了短暂性的降低,而OXSM的mRNA水平出现了下降趋势(P<0.05),并且其蛋白表达也出现了持续性的下降,在24h达到最低值(P<0.001)。在TNF-α高表达的DIO小鼠脂肪组织中,OXSM的mRNA水平发生了极其显著的下降(P<0.001)。(2)在高糖诱导的炎症状态中,MCAT、OXSM、LIAS的表达在mRNA水平上发生了短暂性降低,最终恢复到了正常水平。在蛋白水平上,OXSM表达下降,在4h达到最低(P<0.001),在24h时虽有所恢复,但仍低于正常水平。在STZ诱导的糖尿病小鼠肾脏组织中,MCAT、LIAS的mRNA水平都发生了显著下降(P<0.01),但OXSM的mRNA水平不变。在db/db糖尿病小鼠模型肾脏组织中,MCAT、OXSM、LIAS的mRNA水平都发生了显著下降。在STZ诱导的糖尿病小鼠肾脏组织中,OXSM的蛋白水平和PDCE2脂酰化水平发生了极其显著的下降(P<0.001)。(3)在LPS诱导的心肌细胞炎症组中,心肌细胞的凋亡和ROS水平发生了显著升高(P<0.01),自噬相关蛋白、mtFAS Ⅱ中OXSM、LIAS蛋白和PDCE2蛋白的脂酰化水平都发生了显著的下降(P<0.01)。在Met治疗组中,细胞凋亡率和活性氧水平显著下降(

关键词： 肝细胞肝癌   良性终末期肝病   肝移植   围手术期   免疫炎症状态   急性排斥反应  

摘要： 研究目的及背景:本研究的出发点来自于对中国肝移植注册（China Liver Transplant Registry,CLTR）2011中国肝移植年度科学报告中关于肝移植术后急性排斥反应（Acute rejection,AR）发生率的分析,我们发现,中国肝移植注册记录的肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）肝移植中,急性排斥反应发生率为8.68%（770/8874）,而良性终末期肝病（Benign end-stage liver disease,BESLD）肝移植中,急性排斥反应发生率为10.82%（1299/12003）,两者具有极为显著的统计学差异（χ2=26.09,P<0.0001）。是什么原因导致肝癌肝移植术后的急性排斥反应发生率显著低于良性终末期肝病肝移植,值得深入研究。近年来的研究表明,T细胞的凋亡在肝癌的发生发展中起着重要的作用,而T细胞亦是移植术后排斥反应发生的基础。肿瘤微环境中的肿瘤细胞、炎症细胞和抑制性细胞因子构成了一个复杂的免疫抑制网络,调节性T细胞的表型和功能促使T细胞最终分化为凋亡T细胞。因此,我们做出如下推测:肝癌患者术前即存在一定程度的免疫功能抑制,而在肝移植术后这种免疫抑制状态持续存在,降低了术后急性排斥反应的发生率。我们希望通过回顾性研究本中心乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）相关的肝细胞肝癌和良性终末期肝病肝移植患者,分析免疫炎症状态与术后急性排斥反应和预后的关系来验证这一推测。研究方法:回顾性分析海军军医大学长征医院器官移植科2008年9月1日2017年4月1日期间完成的乙肝相关性肝细胞肝癌肝移植及乙肝相关性良性终末期肝病肝移植术后发生急性排斥反应的患者,随访时间截止至2018年4月1日;对发生急性排斥反应的肝癌肝移植受者（AR组）,根据肿瘤分期和免疫抑制剂浓度,按照1:3比例匹配未发生急性排斥反应的肝癌肝移植受者（Non-AR组）,研究两组肝癌肝移植患者围手术期免疫炎症状态及其预后。研究结果:第一部分发生急性排斥反应肝癌肝移植患者与良性终末期肝病肝移植患者围手术期免疫炎症状态比较通过比较本中心肝移植术后急性排斥反应发生率情况与中国肝移植注册显示的急性排斥反应发生率情况的一致性,发现肝细胞肝癌和良性终末期肝病患者肝移植术后急性排斥反应总体发生率分别为8.60%（32/372）和10.61%（24/226）,围手术期（术后28天内）肝细胞肝癌患者（HCC组）急性排斥反应发生率显著低于良性终末期肝病患者（BESLD组）(3.23%vs.7.08%,χ2=4.679,P=0.031)。因此,可以通过本中心的病例数据预测全国大样本的数据情况。于是,我们对本中心HCC组与BESLD组术前、围手术期、术后资料进行比较,发现肝癌肝移植患者发生急性排斥反应时的排斥活动指数评分（Rejection Activity Index score,RAI score）明显低于良性终末期肝病肝移植患者（t=-2.134,P=0.047）,围手术期CD4/CD8比值明显低于良性终末期肝病肝移植患者（F=16.367,P<0.001）。这与我们的猜想肝癌患者术前即存在一定程度的免疫功能抑制是一致的。第二部分发生急性排斥反应的肝癌肝移植患者的配对研究及术前免疫炎症状态与预后分析根据相同的肿瘤分期和同期相同免疫抑制方案,对AR组采用最大化匹配原则匹配Non-AR组,尽量保持基线一致,当匹配到1:4时已无可匹配病例,故最终选取1:3配比。选取目前国内外所有用于描述肝癌免疫炎症状态的指标进行收集,研究发现肝癌肝移植患者肿瘤分期越晚,术前系统性免疫性炎症指数（Systemic Immune-Inflammation Index,SII或P×N/L）、中性粒-淋巴细胞比值（Neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR或N/L）、单核-淋巴细胞比值（Monocyte-to-lymphocyte ratio,MLR或M/L）、血小板-淋巴细胞比值（Platelet-to-lymphocyte ratio,PLR或P/L）比值越高,而CD4/CD8比值越低,其中术前M/L是肝癌肝移植术后总生存时间以及无复发生存的独立危险因素（RR=3.558,P=0.026;RR=11.287,P<0.001）。之后,我们研究比较了AR组和Non-AR组在不同肿瘤负荷下术后肿瘤复发及生存情况,发现AR组患者术后1年、3年、5年生存率分别为76%、71%和53%,Non-AR组患者术后1年、3年、5年生存率分别为67%、37%和25%,AR组累积生存率显著高于Non-AR组（χ2=4.134,P=0.042）。这可能说明肝癌肝移植术后患者发生急性排斥反应预示着较好的预后。结论:肝癌患

关键词： 右美托咪定   盐酸纳布啡   联合用药   神经胶质瘤   免疫炎症反应  

摘要： [目的]观察 CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+、CD16+CD56+(NK 细胞)及 IL-6、IL-10的变化探讨盐酸纳布啡联合右美托咪定对神经胶质瘤手术患者免疫炎症反应的影响。[方法]选择择期行神经胶质瘤开颅切除术的患者120例,年龄20-60岁,ASA分级为Ⅰ-Ⅱ级,排除免疫抑制药物及其他镇静镇痛药物使用,随机将患者均分为四组(n=30):D+N组(纳布啡联合右美托咪定组,于诱导前30min予Dex 0.5ug/kg·min-1泵注10min后改为0.5μg/kg·h-1持续泵注至缝合硬脑膜前,并在切皮前5min静脉注射盐酸纳布啡0.2mg/kg),D组(右美托咪定组,于诱导前30min予Dex 0.5ug/kg·min-1泵注10min后改为0.5ug/kg·h-1持续泵注至缝合硬脑膜前,不给予纳布啡),N组(盐酸纳布啡组,在切皮前5min静脉注射盐酸纳布啡0.2mg/kg,不给予Dex),C组(对照组,予等量生理盐水泵注及静注),各组其余麻醉方案相同。常规监测ECG、HR、有创动脉血压(SBP、DBP、MAP)、SP02、PETC02、BIS,局麻下行桡动脉穿刺置管术,麻醉诱导插管后行右颈内静脉穿刺置管术,分别于麻醉诱导前(TO)、切皮时(T2)、颅内肿瘤切除时(T3)、切皮6小时(T5)、术后24小时(T6)采集患者静脉血液检测炎性相关因子IL-6、IL-10,以及免疫细胞CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+、NK细胞的计数。[结果]1、四组在T0时的HR、MAP无明显差异(P>0.05)。T1、T2、T4时四组HR、MAP由低到高依次为D+N组、D组、N组、C组(P<0.05),其中D+N组和D组T1、T2、T4时的HR、MAP均低于同组TO(P<0.05),N组和C组T1、T2、T4 时 HR、MAP 高于同组 TO(P<0.05)。2、患者术后疼痛视觉模拟评分(VAS评分)及RASS镇静评分比较D+N组术后1小时VAS评分低于D、N、C组(P<0.05),而D、N、C术后1小时VAS评分无明显差异(P>0.05)。四个组在术后6小时和术后24小时的VAS评分无明显差异(P>0.05)。D+N组术后1小时RASS评分低于D、N、C组(P<0.05),而D、N、C术后1小时RASS评分无明显差异(P>0.05)。四个组在术后6小时和术后24小时的RASS评分无明显差异(P>0.05)。3、患者血液炎症因子的变化四组在 T0 时 IL-6、IL-10 无明显差异(P>0.05),在 T2、T3、T5 时 IL-6、IL-10逐渐升高(P<0.05),D+N组和D组T6时较T5时下降(P<0.05),但高于 TO(P<0.05)。在 N 组和 C 组 T6 时的 IL-6、IL-10 较 T5 升高(P<0.05)。IL-6、IL-10 在 T2、T3、T5、T6 时由低到高为 D+N 组、D 组、N 组、C 组(P<0.05)。4、患者免疫细胞数的变化四组CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+、NK细胞计数在T2、T3时逐渐减少(P<0.05),D+N组和D组在T5时增高,并高于T2时(P<0.05)。四组T6时CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+、NK细胞计数均低于同组TO(P<0.05),由高到低依次为D+N 组、D 组、N 组、C 组(P<0.05)。[结论]1、纳布啡联合右美托咪定有良好的镇静镇痛作用,有效稳定血液动力学。2、纳布啡联合右美托咪定降低神经胶质瘤手术患者炎症相关因子IL-6、IL-10的表达,减轻炎症反应。3、纳布啡联合右美托咪定影响神经胶质瘤手术患者免疫细胞CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+、NK细胞计数,术后早期免疫功能恢复加快。

关键词： 脐带间充质干细胞   旁分泌   小胶质细胞   信号通路   免疫调节  

摘要： 目的小胶质细胞过度活化及相关炎症是放射性脑损伤(RBI)的机制之一,间充质干细胞(MSC)是一种具有广泛免疫调节能力的多能干细胞。本研究旨在了解间充质干细胞旁分泌作用对小胶质细胞活化的影响,并阐明其相关的作用机制,为放射性脑损伤(RBI)治疗提供新思路。方法采用经脂多糖(LPS)刺激BV2小胶质细胞制造炎症反应模型,用人脐带间充质干细胞条件培养基(h UC-MSCs-CM)干预,设计实验分为4组:空白对照组,单纯LPS刺激组,h UC-MSCs-CM刺激组,LPS+h UC-MSCs-CM共刺激组。各组经上述刺激24h后收集上清和蛋白,用ELISA法检测BV2细胞上清中TNF-α和IL-6促炎介质水平变化;Western blotting检测CD86、Arg1、P2X7R、p-NF-κBp65、NF-κBp65、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K的蛋白表达;Real-time PCR检测P2X7R m RNA的表达。结果1单纯LPS刺激BV2细胞所分泌的炎性因子TNF-α、IL-6增多,LPS+h UCMSCs-CM共刺激组与LPS组相比,TNF-α、IL-6表达明显降低(P<0.05)。2 LPS刺激组BV2细胞M1型表面标志物CD86表达明显增多,LPS+h UC-MSCs-CM共刺激组与LPS组相比CD86表达降低(P<0.05);LPS+h UC-MSCs-CM共刺激组M2型标志物Arg1表达增多(P<0.05)。3 LPS+h UC-MSCs-CM共刺激组上调PI3K磷酸化水平(P<0.05)。4 LPS诱导的小胶质细胞P2X7R蛋白和m RNA表达增加,NF-κB、AKT磷酸化水平升高,加入h UC-MSCs-CM干预后P2X7R蛋白和m RNA表达明显降低,NF-κB和AKT磷酸化水平降低(P<0.05)。结论1 h UC-MSCs-CM以旁分泌的方式抑制小胶质细胞炎性因子的分泌。2 h UCMSCs-CM促进活化的小胶质细胞由M1型向M2型转化,其机制与激活PI3K信号通路相关。3 h UC-MSCs-CM抑制LPS诱导的小胶质细胞活化和促炎性细胞因子产生的保护机制与P2X7R、NF-κB以及AKT的激活抑制有关。图10幅;表6个;参103篇

关键词： 丹参酮IIA磺酸钠   血液流变学   替米沙坦   微炎症状态   血液透析  

摘要： 目的探讨丹参酮IIA磺酸钠联合替米沙坦对血液透析患者血液流变学及微炎症状态的影响效果。方法选取我院2017年～2018年12月在我院接受血液透析的60例慢性肾衰竭患者作为本次研究对象,采用随机分组的方式,将其分为对照组与观察组,各30例,对照组患者的治疗药物选择为替米沙坦,观察组患者则在使用替米沙坦进行治疗的基础上,联合使用丹参酮IIA磺酸钠完成治疗,在连续进行治疗12周后,观察比较两组患者的血液流变学的相关指标以及微炎症反应。结果经过治疗后,观察组患者的血液流变学相关指标有明显的改善,对照组改善情况则不理想,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组治疗后的微炎症反应明显降低,效果远优于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在采用替米沙坦对慢性肾衰竭患者治疗的基础上,联合采用丹参酮IIA磺酸钠进行治疗,能够明显改善患者的血液流变学相关指标,缓解患者体内炎性因子的表达,有效的减轻患者的微炎症反应。