关键词： 阿尔茨海默病   β淀粉样蛋白DNA疫苗   炎症反应  

摘要： 目的探讨DNA疫苗p(Aβ3-10)10-mIL-4免疫阿尔茨海默病转基因鼠(APP/PS1)免疫反应类型及对脑内炎症反应的影响。方法构建DNA疫苗p(Aβ3-10)10-mIL-4,用其免疫APP/PS1转基因鼠,Aβ42肽及pcDNA3.1(+)作为对照组。ELISA法检测免疫后转基因鼠脾细胞培养上清中白细胞介素-4(IL-4)及γ干扰素(IFN-γ)的含量,免疫荧光检测小鼠脑内老年斑及小胶质细胞。结果 Aβ42组及p(Aβ3-10)10-mIL-4组的IL-4的含量均明显高于pcDNA3.1(+)组(P<0.01),但是两组比较无显著差异(P>0.05)。Aβ42组的IFN-γ的含量明显高于p(Aβ3-10)10-mIL-4组及pcDNA3.1(+)组(P<0.01),而p(Aβ3-10)10-mIL-4组和pcDNA3.1(+)组比较没有显著差别(P>0.05,)。Aβ42组及p(Aβ3-10)10-mIL-4组脑组织中老年斑及小胶质细胞与pcDNA3.1(+)组相比明显减少。结论DNA疫苗p(Aβ3-10)10-mIL-4免疫APP/PS1转基因鼠后,产生了Th2型免疫反应,减轻小鼠脑内Aβ沉积,同时可以改善鼠脑内的炎症反应,可以作为阿尔茨海默病的候选疫苗进一步进行研究。

关键词： 炎症状态   规范性护理   重症监护室   呼吸机相关肺炎  

摘要： 目的探讨规范性护理在重症监护室呼吸机相关肺炎患者中的应用效果。方法选择2015年10月至2017年10月收治的呼吸机相关肺炎患者88例作为研究对象,按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组44例。对照组给予常规护理,观察组给予规范性护理,比较两组炎症状态、重症监护时间、总住院时间及住院费用。结果观察组炎症状态优于对照组,重症监护时间、总住院时间短于对照组,住院费用少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论规范性护理在重症监护室呼吸机相关肺炎患者中的应用效果显著,能够改善患者的炎症状态,缩短住院时间,降低治疗费用。

关键词： 重症急性胰腺炎   肠内营养   膳食纤维   炎症反应   免疫应答  

摘要： 目的:研究肠内营养中添加膳食纤维对重症急性胰腺炎患者炎症反应、免疫应答及肠黏膜屏障的影响。方法:选择我院收治的重症急性胰腺炎患者并随机分为两组,观察组接受基础治疗联合添加膳食纤维的肠内营养、对照组接受基础治疗联合常规肠内营养。治疗前及治疗后7天,分别测定血清中炎症细胞因子及肠黏膜屏障标志物的含量、外周血中免疫细胞的数目、粪便中肠道菌群的数目。结果:两组治疗后的血清细胞介素-8(IL-8)、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM1)、内毒素、D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)含量、外周血CD8^+T细胞数目、粪便肠球菌及肠杆菌数目数目均明显降低,外周血CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、CD19^+B细胞、CD16^+CD56^+NK细胞数目及粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌数目均明显升高且观察组治疗后的血清IL-8、MCP-1、sICAM-1、sTREM1、内毒素、D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)含量、外周血CD8^+T细胞数目、粪便肠球菌及肠杆菌数目数目均明显低于对照组,外周血CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、CD19^+B细胞、CD16^+CD56^+NK细胞数目及粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌数目均明显高于对照组。结论:肠内营养中添加膳食纤维用于重症急性胰腺炎患者能够减轻炎症反应、改善免疫应答、纠正肠黏膜屏障功能紊乱。

关键词： 氟立康唑   内镜手术   真菌性鼻-鼻窦炎  

摘要： 目的:使用氟立康唑联合内镜手术对真菌性鼻-鼻窦炎患者炎症反应及免疫功能的影响.方法:将100例真菌性鼻-鼻窦炎患者随机分成观察组(50例)与对照组(50例),对照组使用内镜手术治疗,观察组使用氟立康唑联合内镜手术治疗,观察两组炎症反应及免疫功能.结果:术后观察组的治疗总有效率为90％(45/50)明显高于对照组的64％(32/50),差异显著(P<0.05);术后观察组的IL-4、IL-12明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组IL-6、IL-17与对照组,差异不具有统计学意义(P>0.05);血清中IgG,IgM较术前均有所提高,且IgG术后差异具有统计学意义(P<0.05),IgM术后差异无统计学意义(P>0.05).结论:氟立康唑联合内镜手术治疗真菌性鼻-鼻窦炎可以改善患者炎症反应,增强其免疫功能.

关键词： 全身炎症反应综合征   尿路结石   经皮肾镜取石术  

摘要： 目的探讨经皮肾镜取石术治疗老年上尿路结石患者术后全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)的危险因素。方法回顾性分析95例老年上尿路结石经皮肾镜术后患者临床资料,评估术前术中各种因素与术后SIRS的相关性。结果 95例患者中,SIRS表现22例(23.2%),其中2例发生感染性休克,经积极抗感染和支持治疗后痊愈,无死亡病例。SIRS组糖尿病史、反复尿路感染史、术前尿培养阳性率、鹿角形结石率、结石负荷和手术时间均明显高于或多于非SIRS组,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示,反复尿路感染病史、鹿角形结石、糖尿病史是老年人经皮肾镜术后SIRS发生的危险因素。结论对于有反复尿路感染病史、鹿角形结石及糖尿病史的老年患者要提高警惕,术前积极控制感染,术中注意避免集合系统损伤,术后严密监控,以降低SIRS发生率。

关键词： 乌司他丁   创伤和损伤   肿瘤坏死因子-α   白细胞介素-6   T淋巴细胞亚群  

摘要： 研究目的:探讨乌司他丁在严重多发伤患者早期免疫炎症方面的调控作用,主要以免疫系统中T淋巴细胞亚群的相关调控变化及早期炎症相关指标作为研究对象,分析其在严重多发伤患者早期治疗中的临床价值、相关并发症及影响临床预后的情况。研究方法:选取陆军军医大学第一附属医院急救部创伤救治中心2016年1月至2019年1月收治住院的严重多发伤患者40例(ISS评分均>16),年龄165(45.1±8.7)岁,男性25例,女性15例。损伤因素:交通事故伤18例,高坠伤12例,重物砸伤5例,机器挤压伤3例,其他2例。损伤类型:胸腹联合伤为主21例,腹部伤为主7例,胸部伤为主5例,骨盆、四肢多处骨折为主7例,ISS评分为(23.9±6.7)分。采用随机数字表法分为对照组和乌司他丁治疗组(n=20)。对照组和乌司他丁治疗组均给予常规抗感染治疗,细菌培养指导下合理应用抗生素,纠正水电解质、酸碱平衡紊乱,静脉营养支持治疗。乌司他丁治疗组在此基础之上于入院当天即联合应用药物乌司他丁(广东天普生化医药股份有限公司)100 kU,加入0.9%生理盐水100mL中静脉滴注,3次/d,连续7d,对照组相同时间段给予0.9%生理盐水100 mL中静脉滴注,3次/d,持续相同的时间。所有研究对象于发病就诊后入院当天、住院后第1天、第3天、第7天,由同一医师早晨8:00采集肘静脉血,通过检测外周血T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8比率的变化数值,炎症性相关指标白细胞计数(WBC,×10/L)、C反应蛋白(CRP,mg/L)、降钙素原(PCT,ng/mL)、肿瘤坏死因子α(TNF-α,pg/mL)、白细胞介素-6(IL-6,pg/mL),临床各系统标志指标:肝功能谷丙转氨酶(ALT,U/L)、肾功能尿素氮(BUN,mmol/L)、肌酐值Scr(mol/L),内分泌激素水平皮质醇(nmol/L)含量等,以及临床次要影响指标平均住院时间(d)、入住ICU时间(d)、并发症(脓毒血症、应激性溃疡、MODS等)发生率(%)、病死率(%)相关指标进行对比。研究结果:1.两组严重多发伤患者不同时间点T淋巴细胞亚群的变化具有显著差异性。乌司他丁治疗组与对照组相比较,T淋巴细胞亚群CD3、CD4细胞数及CD4/CD8比值升高(P<0.05),CD8细胞的比值降低(P<0.05)。2.两组严重多发伤患者不同时间点炎症相关指标比较绝大多数差异显著。乌司他丁治疗组治疗后的第3天、第7天,患者的WBC、CRP、PCT、TNF-α、IL-6水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而入院当天、住院后第1天,各指标间差异不明显(P>0.05)。3.两组严重多发伤患者不同时间点临床各系统相关指标的变化少部分有显著差异。机体内皮质醇含量在乌司他丁治疗组第3天、第7天组内、组间比较治疗前后具有差异性,均具有统计学意义(P<0.05)。而两组患者其他临床相关指标在治疗各时间点ALT、BUN、Scr无明显差异性。4.两组严重多发伤患者平均住院时间、入住ICU住院时间、并发症发生率及28 d病死率情况的对比具有统计学差异。与对照组比较,乌司他丁治疗组患者平均住院时间、入住ICU时间、并发症发生率间差异均有统计学意义(P<0.05),但病死率差异无统计学意义。结论:本研究结果表明乌司他丁在严重多发伤患者早期使用能促进T淋巴细胞亚群的恢复,减少炎症细胞因子的释放,抑制炎症反应,减少入住ICU和住院天数,降低并发症发生率,但不能改善病死率,但其疗效机制还待多中心、大规模临床研究予以验证,乌司他丁的最佳剂量与给药时机等尚需进一步临床研究。

关键词： 血液透析   微炎症状态   氧化应激   黄葵胶囊  

摘要： 目的:探讨黄葵胶囊对维持性血液透析患者微炎症状态的改善作用;方法 :将维持性血液透析1年以上患者60例,随机分为观察组和治疗组各30例,同时选取20名健康体检者作为对照组.观察组给予常规血液透析治疗,4h/次,3次/周;治疗组在常规透析基础上给予黄葵胶囊,每次2.5g,3次/日,治疗12周,检测各组WBC、CRP、IL-6、TNF-α、SOD、MDA等指标变化.结果:治疗前观察组与治疗组较对照组相比,WBC、CRP、IL-6、TNF-α,MDA水平均升高,SOD水平下降,差异有统计学意义(P<0.05).治疗后,治疗组较观察组相比,WBC、CRP、IL-6、TNF-α,MDA水平明显下降,SOD水平升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:黄葵胶囊可改善透析患者微炎症及氧化应激状态,有效降低患者并发症及死亡率.

关键词： 高通量血液透析   营养状况   血液透析患者   微炎症状态  

摘要： 目的对血液透析患者使用高通量血液透析来改善患者营养状况及其微炎症状态的效果进行研究。方法选取我院2016年1月～2018年1月接受治疗的50例患者,按照随机法将其中25例患者归为实验组,另外25例患者则纳入对照组,对照组患者治疗期间使用常规血液透析,实验组患者治疗期间使用高通量血液透析,对两组患者的血浆总蛋白水平、血浆细胞因子、体重指数及其血浆血蛋白水平进行测定并分析比较。结果实施高通量血液透析的实验组在血浆细胞因子维持方面优于常规透析对照组,P<0.05;实验组在接受高通量透析治疗后,微炎症状态改善效果高于实验组,P<0.05,并在营养状况改善方面,高通量透析实验组也明显优越于常规透析对照组P<0.05。结论相较于常规血液透析,在改善血液透析患者微炎症状态与营养状况方面,高通量血液透析所取得效果更佳。

关键词： 类风湿关节炎   成纤维样滑膜细胞   锌指环指蛋白3   凋亡   炎症  

摘要： 一、研究背景类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种可发生于任何年龄的慢性自身免疫性疾病,主要临床表现为侵蚀性关节炎,基本病理表现为滑膜炎症、血管翳形成,关节软骨的侵蚀、骨的破坏,最终导致关节畸形和功能丧失。其发病机制目前尚不明确。成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)在RA中数量病态性增加,凋亡减少,形成血管翳,侵蚀软骨,最终引起骨的破坏。在RA中,RA-FLS的激活是受多种信号通路影响,其中Wnt信号通路是近年来研究的热点,被认为在RA的发生发展中起到了非常重要的作用。锌指环指蛋白3(Zinc and ring finger 3,ZNRF3)是近年来发现的一种Wnt通路负反馈调控蛋白,其通过泛素化降解细胞膜表面Wnt蛋白受体卷曲蛋白(Frizzled,Fz),起到抑制Wnt信号通路活性的作用。但是目前关于ZNRF3的研究多集中于肿瘤,RA中还没有ZNRF3的相关研究。因此,本课题观察比较了ZNRF3在RA患者滑膜组织中的表达,以及ZNRF3对于RA-FLS的生物学行为的影响,同时进行体内实验,观察了ZNRF3对于CIA小鼠的影响,探讨了相关分子机制。二、研究目的第一部分:明确ZNRF3在RA患者滑膜组织及细胞中表达情况。第二部分:研究ZNRF3对成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡、周期、迁移、侵袭及炎症反应的作用。第三部分:研究ZNRF3对胶原诱导关节炎小鼠模型关节肿胀、滑膜炎症、滑膜细胞凋亡、软骨和骨的破坏、炎症因子的分泌的影响。第四部分:探讨ZNRF3在RA发生发展中的分子机制。三、研究方法第一部分:(1)收集RA、骨关节炎(Osteoarthritis,OA)、创伤(Trauma)患者滑膜,酶消法提取人原代成纤维样滑膜细胞。(2)HE染色比较三组滑膜组织病理。(3)免疫组化法比较ZNRF3在三组滑膜组织中的表达情况。(4)流式细胞仪、细胞免疫荧光鉴定细胞。(5)免疫荧光法观察ZNRF3在三组FLS中的表达。(6)通过实时定量PCR(qPCR)和免疫印迹法(Western Blot)比较ZNRF3在三组患者滑膜组织和FLS中的表达情况。第二部分:(1))构建慢病毒载体,进行慢病毒包装。(2)慢病毒感染RA-FLS细胞,使用嘌呤霉素筛选。(3)qPCR和Western Blot法检测转染效果。(4)CCK8法测细胞活性,比较感染后RA-FLS增殖情况。(5)流式细胞仪检测感染后RA-FLS细胞晚期凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。(6)流式细胞仪检测感染后RA-FLS的细胞周期。(7)划痕实验和Transwell迁移实验比较感染后RA-FLS的迁移能力。(8)Transwell侵袭实验比较感染后RA-FLS的侵袭能力。(9)提取RNA及蛋白,分别用qPCR及酶联免疫吸附实验(ELISA)检测IL-1β、IL-6、IL-8的表达水平。第三部分:(1)构建慢病毒载体,进行慢病毒包装。(2)建立CIA模型。(3)小鼠关节腔注射慢病毒,活体成像实验进行验证。(4)记录CIA模型小鼠足爪关节炎指数。(5)眼球摘除取血处死小鼠。(6)使用多因子试剂盒,通过流式细胞仪检测小鼠血清中炎症因子TNF-a、IL-1B、IL-6的表达水平。(7)取小鼠膝关节,固定、脱钙、切片后HE染色观察小鼠膝关节病理改变,并对进行评分。(8)使用番红O-固绿观察小鼠膝关节软骨破坏情况,并进行评分。(9)荧光TUNEL法检测膝关节滑膜细胞凋亡情况。第四部分:(1)Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路及NF-κB信号通路相关蛋白。(2)构建ZNRF3过表达质粒和siRNA干扰序列后用脂质体转染细胞,Western blot法鉴定转染效果。(3)质粒共转染后行双荧光素酶报告基因实验,验证ZNRF3对TCF/LEF-1以及NF-κB启动子的活性。四、结果第一部分:(1)成功分离培养出FLS,于第3代对细胞进行细胞鉴定,流式细胞仪显示培养出的细胞CD90和CD29双标的阳性率>90%,免疫荧光显示绝大多数细胞表现为Vimentin蛋白阳性以及CD68阴性。(2)滑膜HE结果显示与OA和Trauma患者相比,RA组滑膜增厚且有大量炎症细胞浸润。(3)滑膜组织的免疫组化、qPCR以及Western blot结果均显示RA患者滑膜中ZNRF3的表达明显高于Trauma患者,但是与OA组患者相比,差异无统计学意义。(4)免疫荧光显示ZNRF3在RA-FLS中定位于细胞质及质膜。(5)qPCR以及Western blot结果显示RA患者FLS中ZNRF3的表达明显高于Trauma患者,但是与OA组患者相比,差异无统计学意义。第二部分:(1)当干扰对照(Sh-c

关键词： 炎症反应   调控机制   天然免疫   CD4+T细胞   MHCclassⅡ  

摘要： 炎症反应是机体应对外界病原菌感染，自身组织发生的损伤，组织压力以及机体故障一种复杂的生理和病理反应。一定的炎症反应可以帮助机体有效的清除病原菌，使机体组织得到修复，并且适应压力使机体恢复稳态。但是过激的炎症反应如果得不到有效调控就会使机体产成病理反应并且伴随着相关疾病的产生，例如败血症、流感、以及埃博拉出血热等等。实验室早先研究表明，在病毒感染过程中，初始T细胞可以抑制天然免疫过激炎性反应，这种抑制作用是依赖细胞与细胞之间相互接触以及主要组织相容复合物(MHCclassⅡ)分子存在的，但是初始T细胞是否使用其他的共受体以及免疫突触来抑制炎症反应机制还未知，本论文研究结果如下:　　***4+T细胞数目急剧减少是败血症发病和死亡的重要原因。　　为了证实败血症可以诱导T细胞急剧减少症发生，本论文用LPS感染小鼠检测到血清中肿瘤坏死因子(TNF)以及白介素(IL-6)水平的升高，小鼠死于炎症风暴。为了查明病因检测小鼠脾脏、胸腺以及外周血中CD4+T细胞的数目变化，发现细胞急剧减少，并且胸腺发生萎缩。通过体内删除以及回输CD4+T细胞实验证实CD4+T细胞能够通过抑制炎性因子产生挽救小鼠败血症。体外实验进一步证明是CD4+T细胞表面的CD4分子发挥抑制作用，并非T细胞抗原受体(TCR)。除此之外，只要细胞表面表达CD4分子就可以发挥抑制功能。因此，CD4+T细胞在调控败血症过激炎症中发挥充分必要作用，并且是通过细胞表面的CD4分子来抑制炎性因子的产生。　　2.可溶性CD4蛋白足以抑制天然免疫炎性反应。　　CD4分子是TCR在T细胞免疫中的共同受体。在LPS诱导败血症模型中，本论文首先发现外周中可溶性CD4蛋白随病理进程发生而升高。为了探究其存在形式的功能以及初始T细胞抑制炎性反应的特性是否膜结合方式，紧接着发现用可溶性CD4蛋白足够抑制炎性反应，并且这种抑制作用具有剂量梯度依赖的特性。并且CD4-D1D2蛋白足以抑制LPS刺激下巨噬细胞产生的炎性因子，并且这种抑炎作用并非诱导巨噬细胞凋亡导致的。进一步我们发现可溶性CD4蛋白对不同TLR信号(TLR3，TLR9，TLR7)的激活都有抑制效果，证实了可溶性CD4蛋白抑炎效果的普适性。同时发现可溶性CD4蛋白抑炎作用不仅局限在巨噬细胞还可以作用于树突状细胞。同时体内实验也证明可溶性CD4蛋白也可以挽回LPS诱导致死败血症。这些结果表明无论是膜结合方式还是可溶性CD4蛋白都能抑制天然免疫过激炎性反应。　　***4分子发挥抑制炎症作用依赖于MHCclassⅡ分子存在。　　在形成T细胞-抗原呈递细胞(Antigen-presenting cells，APC)免疫突触中，CD4分子胞外域D1可以与MHCⅡ分子的α2和β2结合。本论文使用MHCclassⅡ缺陷小鼠体外实验发现初始CD4+T细胞抑炎作用消失，进一步也证明了可溶性的CD4蛋白也无法抑制MHCclassⅡ缺失巨噬细胞产生的炎性反应，先前报道CD40L-CD40共刺激因子可以通过分泌IL-10来发挥抑制炎症的作用，同时实验体系里发现CD4发挥作用不依赖与CD40L的存在，并且CD4-MHCclassⅡ与CD40L-CD40之间并不存在交互作用。　　***4-MHCⅡ作用通过活化SHP-2来调控TLR的信号通路。　　LPS主要通过TLR4受体激活MyD88依赖的信号通路产生炎性因子，招募以及使IRAK1发生磷酸化来活化MAPK以及NF-κB信号通路。我们检测下游MAPK通路以及NF-κB通路的蛋白发现Erk，Jnk，p38，IRAK1，IκBα以及IRF3的磷酸化水平都削弱。然而CD4对TNF-TNFR信号通路并没有影响。酪氨酸激酶在负向调控TLR信号通路中有重要作用，检测发现在存在CD4情况下，整体酪氨酸的磷酸化水平升高，并且发现SHP-2的磷酸化水平有升高;当SHP-2缺失后，CD4的抑制炎症反应功能消失。进一步免疫共沉淀实验检测到SHP-2可以与TRAF6蛋白有相互作用从而影响TLR/MyD88依赖的信号通路。免疫荧光实验检测到MHCⅡ与SHP-2之间存在共定位。总之，SHP-2参与调控CD4/MHCⅡ作用抑制TLR4/MyD88炎症通路。　　***4可以抑制EBOV-GP诱导的过激炎性反应。　　和败血症一样，T细胞急剧减少也是埃博拉出血热感染的主要特征，淋巴细胞减少程度与过激炎性反应程度以及致死性密切相关。埃博拉糖蛋白(EBOV-GP)在埃博拉病毒感染过程中发挥着重要的作用，EBOV-GP可以通过与TLR4结合激活巨噬细胞以及树突状细胞产生大量的炎性因子。体内回输CD4+T细胞以及sCD4蛋白可以抑制GP诱导的炎性反应。　　综上所述，本论文研究发现了初始T细胞可以通过细胞表面的CD4分子与MHCⅡ相互作用，激活SHP2信号从而负