关键词： 全身性炎症反应综合症   高迁移率族蛋白B1   白细胞介素1β   pyroptosis   半胱氨酸蛋白酶-1   炎症小体   组织蛋白酶B   发动蛋白   晚期糖基化终末产物受体  

摘要： 全身性炎症反应综合症(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)是因感染或非感染因素作用于机体而引发的失控的,自我持续放大和破坏性的全身性炎症反应,其导致的多器官功能衰竭(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)至今仍是临床危重病患者死亡的主要原因[1，2]。虽然不同致病因素引发SIRS的机制不完全相同,但炎症发生至发展过程中细胞因子的级联放大效应是公认共同的重要机制和表现之一[3]。数十年中,研究者陆续对一系列重要的炎症因子展开了深入研究,但目前的成果可能只是揭开了这个复杂的炎症因子网络面纱的一角。 高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1, HMGB1),上世纪末被发现是一种重要的炎症因子[4],目前认为其作为晚期炎症介质在全身炎症反应过程中起关键作用[5]。对HMGB1最初的认识是作为核因子直接与染色质或DNA结合调节基因转录调控,其后陆续发现其具有多种复杂的生物学功能,包括参与脑的发育和神经细胞生长、纤维蛋白溶酶原的活化、细胞迁移、肿瘤细胞转移、免疫细胞分化、组织损伤以及各种组织脏器的炎症反应等[6]。近几年对IMGB1的研究主要集中于其在全身炎症反应过程中的作用及其参与机制。致炎因素作用并激活单核/巨噬细胞后,细胞通过主动分泌的方式将HMGB1释放的细胞外；另一方面,损伤因素导致的细胞坏死后,也可以释放出大量HMGB1。这些HMGB1分子通过进一步激活单核巨噬细胞或内皮细胞等,导致大量炎症因子的释放和黏附分子的表达,参与包括脑、肺、胃肠道、关节、心脏等多种脏器的炎症损伤以及广泛的全身性炎症反应,特别是在晚期炎症反应过程中起重要作用[7]。研究证明,HMGB1可以刺激单核巨噬细胞释放包括IL-1β在内的多种炎症因子,参与细胞因子的级联放大反应[5]。尽管目前对于HMGB1参与炎症反应的作用机制已经有了一些认识,但仍有很多问题不清楚,特别是分泌到细胞外的HMGB1如何作用于效应细胞并引发下游反应。近年研究者们陆续发现晚期糖基化终未产物受体(receptor for advanced gly cation end products, RAGE), Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)4、TLR2等都可以作为HMGB1的细胞表面受体,介导一定的炎症反应功能。然而研究表明,阻断这些受体仍不能完全抑制HMGB1对细胞的作用,即细胞表面可能还存在其它受体或其它可能的信号转导方式。除了可以通过受体将信号传递到细胞内,早在1997年研究者就发现体外表达的HMGB1可以携带DNA载体进入哺乳动物细胞并使载体有效表达[11]。近年还有研究发现HMGB1与核酸物质结合后,可以在RAGE协助下进入细胞并激活细胞内受体[10]，。由此可见,HMGB1作用于细胞的信号传导过程非常复杂,可能通过多种方式激活细胞参与病理生理反应。 白细胞介素1(interleukin-1, IL-1)β是白细胞介素家族重要成员之一,主要由活化的单核巨噬细胞产生,参与机体多种疾病过程,在急性和慢性炎症反应过程中都发挥重要作用[12,131。目前认为,IL-1p在细胞内合成并最终被释放到细胞外,两条信号通路可能参与了这个过程,即TLR信号通路与NLR信号通路协同作用的结果。首先,脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)等通过活化TLR信号通络,参与了细胞内IL-1β前体(pro-IL-1β)在细胞内的生成和表达；而细胞内核苷酸结合寡聚化结构域样受体(nucleotide-binding oligomerization domain (NOD)-like receptor, NLR)的活化,导致炎症小体的组装和激活,进一步激活caspase-1,导致IL-1β的最终成熟和释放[14]。 NLR是一种重要的模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRs),主要存在于细胞质中,感受来自病原微生物的病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)(?)口受损或死亡细胞释放的损伤相关分子模式(damage associated molecular patterns,DAMPs),与其它蛋白共同组装成多分子信号复合物炎症小体(inflatomasome),活化半胱氨酸蛋白酶(caspase),导致炎症介质的表达和释放,引发炎症反应[15,16]。NLRP3参与形成的炎症小体是目前研究最多和最热点的一种炎症小体,多种致炎刺激可以使其组装和活化,包括感染性刺激细菌、病毒、细菌毒素等,非感染性物质如

关键词： 芒果苷   脂多糖   慢性炎症   炎症介质   环氧合酶   脂氧合酶   细胞信号转导   CD14   TLR4   丝裂原活化蛋白激酶  

摘要： 炎症是最重要的基本病理过程之一,各种炎症性疾病在人类疾病谱中占据极为重要的地位。典型的慢性炎症性疾病,如慢性支气管炎等,时至今日依然是严重困扰极大数量人群的常见疾病。不仅如此,近年来的研究表明,许多原本认为与炎症无关或关系不大的疾病事实上也与炎症密切相关。已有大量的研究证据表明,原发性高血压、冠状动脉粥样硬化性心脏病、代谢综合征、2型糖尿病也是一种慢性炎症过程,并且炎症机制在其众多并发症中持续发挥重要的促进作用。在与心血管疾病、糖尿病一样对预期寿命构成严重威胁的恶性肿瘤的发病机制中,慢性炎症也是一个普遍而重要的因素。革兰阴性菌外膜的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是诱发慢性炎症损伤的最主要的病原分子之一,许多疾病与LPS诱导的持续亚临床炎症密切相关。基于与上述研究发现相似的、仍在不断增加的证据,抑制LPS相关慢性炎症可能是阻止许多疾病发生以及治疗众多炎症性疾病的关键,然而现有的药物并不能满足在此领域实施有效药物干预的需求。 基于对慢性炎症复杂多样的病理生理机制的理解,从作用温和但药理效应广泛的天然药物中寻找抗炎药物可能是一个合理的选择。芒果叶为漆树科植物芒果Mangifera indica L.的叶,芒果苷（mangiferin）是芒果叶中的主要活性成分,是一种天然多酚类化合物。既往进行的研究表明,芒果苷对实验性急性炎症、实验性慢性增生性炎症、实验性免疫性炎症均具有显著抑制作用,临床用于治疗呼吸道感染性炎症的咳嗽、咳痰、喘息、发热等症状具有显著疗效,并且安全记录良好。虽然芒果苷的具体作用机制目前尚未完全明确,但这些研究证据已经提示芒果苷具备成为有效抑制慢性炎症的药物的潜质。 为阐明芒果苷抑制LPS相关慢性炎症的作用机制,本研究采用LPS诱导的慢性炎症大鼠为研究对象,探讨芒果苷对LPS诱导的慢性炎症的抗炎效应及其分子机制。 第一部分脂多糖诱导慢性炎症大鼠模型的建立 目的:探讨小剂量LPS间断注射建立大鼠慢性炎症模型的可行性。 方法:48只SD大鼠随机分为6组,每组8只,分别接受生理盐水与40μg/kg、80μg/kg、120μg/kg、160μg/kg、200μg/kg体重剂量LPS尾静脉注射,每周1次,共4周,第4周末评估各组大鼠慢性炎症反应,确定合适的建模LPS剂量。随后以40只SD大鼠随机分为5组,每组8只,按照确定的LPS剂量尾静脉注射LPS,每周1次,共4周,分别于第1、2、3、4周末评估LPS所致慢性炎症反应。 结果:未观察到实验动物死亡。SD大鼠间断尾静脉注射40μg/kg、80μg/kg、120μg/kg、160μg/kg剂量的LPS共4周未能诱导经典的慢性系统性炎症。200μg/kg剂量的LPS间断尾静脉注射4周,可引起外周血白细胞总数与中性粒细胞比例的稳定增加,血清hs-CRP、IL-6、TNF-α持续于较高水平,并导致以炎性细胞浸润、组织瘀血水肿为主要病理表现的组织病理变化。 结论:小剂量间断尾静脉注射LPS建立SD大鼠慢性系统性炎症模型是可行的,可供研究LPS相关慢性炎症长期研究观察之用。 第二部分芒果苷对脂多糖诱导慢性炎症的抗炎效应 目的:探讨芒果苷对LPS诱导慢性炎症的抗炎效应。 方法:90只健康雄性SD大鼠随机分为对照（Control）组、模型（Model）组、泼尼松（PNS）***-1.d-1组与芒果苷高剂量(MGFH, ***-1.d-1)、中剂量(MGFM, ***-1.d-1)、低剂量(MGFL, ***-1.d-1)组,每组15只,均为灌胃给药。以LPS间断尾静脉注射建立慢性炎症模型。药物干预4周后,取血进行大鼠全血白细胞计数与分类;取血分离血清,ELISA测定hs-CRP、IL-6、TNF-α、sICAM-1;HE染色观察心脏、肝脏、肺脏、肾脏病理形态变化。 结果:与Model组比较,MGFH组全血白细胞计数、中性粒细胞比例与血清hs-CRP、IL-6、TNF-α、sICAM-1水平均明显降低（P<0.01）,心脏、肝脏、肺脏、肾脏的慢性炎症性损伤较轻。MGFM组、MGFL组全血白细胞计数、中性粒细胞比例与血清hs-CRP、IL-6、TNF-α、sICAM-1水平与Model组比较差异无统计学意义（P>0.05）,心脏、肝脏、肺脏、肾脏的慢性炎症性损伤仍较明显。 结论:芒果苷可有效抑制LPS诱导的慢性系统性炎症,其作用机制可能与其抑制白细胞动员活化、降低炎性细胞因子水平、减轻炎症性组织损伤有关。 第三部分芒果苷对脂多糖诱导慢性炎症中环氧合酶/脂氧合酶的双重抑制作用 目的:探讨芒果苷对LPS诱导慢性炎症中COX-1、COX-

关键词： 脑缺血再灌注损伤   白蛋白   氯化锌   TLR4   Treg细胞  

摘要： 目的： 采用左侧大脑中动脉闭塞法(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型；观察小鼠脑缺血再灌注损伤早期脑组织TLR4、MyD88、VEGF-A、IL-10、TGF-β1表达变化,脾组织TLR4、VEGF-A、IL-10、TGF-β1、Treg细胞表达变化,胸腺组织TLR4表达变化,同时观察白蛋白或氯化锌干预对这些炎症因子有何影响。首先,明确小鼠脑缺血再灌注损伤早期诱导的免疫炎症反应如何变化；其次,从免疫视角,探讨白蛋白发挥脑保护作用的分子机制；再者,研究氯化锌在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及氯化锌对脑缺血中TLR4表达有何影响。 方法： (一)白蛋白处理脑缺血再灌注损伤小鼠 1.采用五点法,评价小鼠脑缺血再灌注24h神经功能缺陷情况。 2.采用溴甲酚绿比色法,检测小鼠脑缺血再灌注6h、24h血清白蛋白水平。 3.采用PCR法,检测小鼠脑缺血再灌注6h、24h脑组织TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、VEGF-A mRNA、IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA表达水平。 4.采用PCR法,检测小鼠脑缺血再灌注6h、24h脾组织TLR4 mRNA、VEGF-A mRNA、IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA表达水平 5.采用PCR法,检测小鼠脑缺血再灌注6h、24h胸腺组织TLR4 mRNA表达水平。 6.采用免疫组织化学法,检测小鼠脑缺血再灌注24h脑组织、脾组织、胸腺组织TLR4蛋白表达水平。 7.采用流式细胞技术,检测小鼠脑缺血再灌注24h脾组织中四群T细胞水平。 (二)氯化锌处理脑缺血再灌注损伤小鼠 1.采用五点法,评价小鼠脑缺血再灌注24h神经功能缺陷情况。 2.采用PCR法,检测小鼠脑缺血再灌注6h、24h脑组织TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达水平。 3.采用免疫组织化学法,检测小鼠脑缺血再灌注24h脑组织、脾组织、胸腺组织TLR4蛋白表达水平。 4.采用流式细胞技术,检测小鼠脑缺血再灌注24h脾组织中四群T细胞水平。 结果： (一)白蛋白处理脑缺血再灌注损伤小鼠 1.脑缺血再灌注24h白蛋白明显改善了小鼠神经功能缺陷评分(P<0.01)。 2.脑缺血再灌注6h、24h,与假手术组比较,生理盐水组小鼠血清白蛋白水平降低(P<0.01),白蛋白组小鼠血清白蛋白水平升高(P<0.01),与生理盐水组比较,白蛋白组血清白蛋白水平明显升高(P<0.01)。 3.脑缺血再灌注6h、24h,与假手术组比较,生理盐水组与白蛋白组小鼠脑组织TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、VEGF-A mRNA、IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA的表达水平均升高(P<0.01),与生理盐水组比较,白蛋白组脑组织TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、VEGF-AmRNA表达水平降低(p<0.01),IL-10 mRNA、TGF-β1mRNA表达水平升高(P<0.01)。 4.脑缺血再灌注6h、24h,与假手术组比较,生理盐水组与白蛋白组小鼠脾组织TLR4 mRNA、VEGF-A mRNA、IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA的表达水平均升高(p<0.01),与生理盐水组比较,白蛋白组脾组织TLR4 mRNA、VEGF-A mRNA表达水平降低(p<0.01),IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA表达水平升高(P<0.01)。 5.脑缺血再灌注6h、24h,与假手术组比较,生理盐水组与白蛋白组小鼠胸腺组织TLR4 mRNA的表达水平升高(P<0.01),与生理盐水组比较,白蛋白组胸腺组织TLR4 mRNA的表达水平降低(P<0.01)。 6.脑缺血再灌注24h,与假手术组比较,生理盐水组小鼠脑组织、脾组织、胸腺组织TLR4蛋白表达呈强阳性,与生理盐水组比较,白蛋白组脑组织、脾组织、胸腺组织TLR4蛋白表达较弱。 7.脑缺血再灌注24h,对于脾组织中CD4+CD25-FoxP3+T细胞,生理盐水组与假手术组比较,差异无统计学意义(p>0.05),白蛋白组与假手术组比较,水平明显升高(p<0.01),白蛋白组与生理盐水组比较,水平升高(p<0.05)。对于脾组织中CD4+CD25-FoxP3-T细胞,与假手术组比较,生理盐水组和白蛋白组水平明显降低(P<0.01),白蛋白组与生理盐水组比较,水平明显降低(P<0.01)。对于脾组织中CD4+CD25+FoxP3+T(调节T)细胞,与假手术组比较,生理盐水组与白蛋白组水平明显升高(P<0.01),与生理盐水组比较,白蛋白组水平亦明显升

关键词： 系统性红斑狼疮   Th17细胞   调节性T细胞   白介素17   RORγt  

摘要： 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种典型的复杂的侵犯皮肤和多脏器的全身自身免疫性疾病,以出现多种自身抗体为特征,病情呈反复发作与缓解交替发生。青年女性多见,我国患病率高于西方国家,可能与遗传因素相关。SLE的病因及发病机制的研究一直备受关注,目前认为其根本原因是机体对自身抗原失去了免疫耐受,自身反应性免疫细胞失去调控,从而产生大量自身抗体,影响体液免疫、细胞免疫及补体系统。尽管SLE的病死率在过去十年有所降低,但仍然是人类健康的巨大威胁,探索新的有效的治疗途径一直是医学领域研究的热点。 长期以来,人们认为Th细胞只包括Thl和Th2两个亚群,自身免疫病主要是Thl细胞参与的结果,这一传统观念伴随一个崭新的T细胞亚群——Th17细胞的发现而被打破。Th17细胞是在研究实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)和胶原诱导性关节炎(CIA)鼠模型中发现的新的独立的辅助性T细胞亚群,主要与自身免疫性疾病和炎性疾病密切相关,来源于CD4+T细胞,以选择性分泌IL-17为特征。激活的Th17细胞可以分泌IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22以及TNFα,能促进组织炎症,通过诱导组织炎症介导器以及招募白细胞尤其是中性粒细胞达到炎症部位。近年来,有研究发现人类的Thl7细胞可能参与了类风湿性关节炎、SLE及多发性硬化等自身免疫性疾病,因此在自身免疫性疾病中的作用也逐渐受到重视。 初始CD4+T细胞可被诱导分化为Th1、Th2、Thl7和Treg亚群,Treg是具有免疫抑制作用的独立T细胞亚群,能控制效应性T细胞,避免自身免疫性疾病的发生,在稳定机体的免疫平衡、维持机体的免疫耐受中起着至关重要的作用。Treg细胞主要通过细胞接触依赖机制或抑制性细胞因子依赖机制主动调控自身反应性T细胞的生成、活化和增殖,目前关于调节性T细胞在许多自身免疫性疾病发病中的作用引起许多学者的关注。 Th17与Treg细胞来源于共同的前体细胞,Th17细胞与自身免疫性炎症损伤有关；Treg细胞在免疫耐受的诱导中起重要作用,抑制自身免疫性疾病的发生。Thp细胞分化方向取决于调控其分化的关键转录因子,RORγt的表达激活促进前体细胞分化为Th17细胞,是Thl7细胞的特异转录因子。RORγt编码于RORc位点,是维甲酸相关-孤儿核激素受体(retinoic acid-related orphan nuclear hormone receptor)家族成员,对Th17细胞的分化和分泌功能起关键性作用。Thl7细胞参与自身免疫性疾病炎症损害的具体机制讫今尚不清楚。Th17是免疫损伤性因素,Treg是免疫保护性因素,因此推测SLE的发生基于二者互相抗争的结果,Th17/Treg失衡很可能参与了SLE的发病。 本次实验通过检测不同疾病活动程度的SLE患者和正常对照组外周血Th17细胞及Treg细胞所占CD4+T细胞比例、分离外周血单个核细胞(PBMC)经PMA和离子霉素联合刺激培养上清液中的IL-17水平、PBMC中RORyt mRNA表达水平及各指标与SLEDAI等的关系等,进一步研究Th17细胞在SLE免疫炎症反应中的作用机制。 目的： 1、检测SLE患者及正常对照组外周血Th17和Treg细胞占CD4+T细胞比例的相互关系,评估其与疾病活动性以及与狼疮肾炎的关系等,探讨二者数量失衡与SLE疾病活动的相关性,分析Th17/Treg失衡参与SLE炎症反应的可能机制； 2、检测SLE患者及正常对照组外周血单个核细胞用PMA+Ionomycin刺激后培养上清液中IL-17的水平,比较IL-17在狼疮肾炎和非肾炎患者中是否有显著性差异,评估IL-17与患者年龄、疾病活动性、血沉、补体C3、C4及抗ds-DNA滴度等实验室指标之间的关系,分析IL-17参与SLE发病的可能机制； 3、检测SLE患者外周血PBMC中RORγt mRNA的表达水平,研究其与SLE发病以及与疾病活动性的关系,进一步在基因水平探讨Th17细胞在SLE免疫炎症反应中的作用机制。 方法： 1、SLE患者组：共21例,均来自南方医科大学附属南方医院2010年7至12月门诊及住院病人,诊断均符合1982年美国风湿病协会修订的SLE分类诊断标准；所有患者均排除近期感染、支气管哮喘、肿瘤、类风湿性关节炎、炎症性肠病等疾病和过敏体质。其中,男1例,女20例,年龄14-52岁,平均年龄(27.48±9.38)岁。按照SLE疾病活动指数(SLEDAI)对患者进行分组,其中活动期SLE患者组(SLEDAI≥9分)12例,平均年龄(29.08±10.62)岁,非活动期SLE患者组(SLEDAI＜9分)9例,平均年龄(2

关键词： 炎症   固醇调节元件结合蛋白1   脂肪酸合成酶   乙酰辅酶A羧化酶α   甘油三酯  

摘要： 目的异位脂肪沉积（ectopic lipid deposition）是指脂质（主要是甘油三酯）在非脂肪组织内（如肝脏、肌肉、胰腺等）的过多堆积。研究表明异位脂肪沉积与胰岛素抵抗（Insulin resistance, IR）及相关代谢性疾病的发生发展密切相关,但其发生机制至今尚未完全阐明。慢性系统性炎症作为胰岛素抵抗及相关代谢性疾病发病机制的核心环节,能否导致异位脂肪沉积及具体的分子机制尚无定论。细胞内甘油三酯的合成与脂解紊乱可能是导致异位脂肪沉积发生的重要基础,一些关键蛋白在上述过程中发挥了至关重要的作用,比如:核转录因子SREBP-1即固醇调节元件结合蛋白1（sterol regulatory element binding protein 1）及其下游靶点脂肪酸合成酶（fatty acid synthase ,FAS）和乙酰辅酶A羧化酶α（acetyl-CoA carboxylase alpha ACCα）是甘油三酯合成的关键蛋白,而脂肪甘油三酯脂肪酶（adipose triglyceride lipase,ATGL）和激素敏感性脂肪酶（hormone-sensitive lipase,HSL）是脂肪分解的关键酶。 本研究旨在通过体内外模型来观察炎症反应是否干扰了胰岛素主要靶组织（肝脏、肌肉及脂肪）有关生脂（SREBP-1,FAS和ACCα）及脂解途径（ATGL,HSL）关键蛋白的表达,从而探讨炎症反应导致异位脂肪沉积的分子机制。 方法体内实验部分,选用8-10周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为四组:对照组,酪蛋白注射组,高脂饮食组,酪蛋白注射联合高脂饮食组,每组动物数量不少于6,处理18周。用胰岛素耐量和葡萄糖耐量检测以评估胰岛素敏感性,用ELISA法及比色法检测血脂和炎症因子水平。组织包埋后用常规石蜡切片进行HE染色,冰冻切片用于油红O染色。酶学定量测定组织内脂质含量,并用逆转录定量PCR和western blot方法检测mRNA和蛋白水平。 体外实验部分将HepG2和3T3-L1细胞（诱导后定向分化为成熟脂肪细胞）分为:对照组、炎症刺激组、软脂酸组、联合干预组（软脂酸+炎症）,干预时间均为24小时。用油红O染色及脂质定量检测来反映细胞内脂质积聚情况,逆转录定量PCR和western blot检测mRNA和蛋白水平,用酶促反应法检测脂肪酸合成酶活性。 结果我们发现与对照组相比,酪蛋白注射明显增加C57BL/6J小鼠血清中多种炎症因子含量,包括白细胞介素6（interleukin6,IL-6）、血清淀粉样蛋白A（Serum Amyloid A, SAA）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha , TNF-α）,同时伴有非脂肪组织内（肝脏和肌肉）脂质积聚明显增加,以及脂肪组织内脂肪含量无明显改变。进一步研究也证实非脂肪组织内生脂基因SREBP-1,FAS和ACCα的表达均明显增加,然而脂肪组织的生脂关键基因表达减少、脂肪分解酶表达增加。同时,我们还观察到炎症增加血游离脂肪酸水平,加重胰岛素抵抗的发生。 在体外实验中,我们选用肝细胞和脂肪细胞作为非脂肪组织和脂肪组织的代表来观察炎症刺激对细胞生脂途径的影响,进一步佐证体内实验结果。实验发现炎症加重HepG2细胞内脂质沉积。进一步分析表明炎症促进脂肪生成关键因子SREBP-1、ACCα和FAS的表达,并显著增加FAS酶活性。同时,炎症刺激可显著减少脂肪细胞TG含量,而脂肪生成关键因子SREBP-1、ACCα和FAS的表达下降,脂肪分解关键因子ATGL表达增加。 结论慢性系统性炎症反应通过增加非脂肪组织内关键生脂基因SREBP-1、ACCα和FAS和脂肪组织内关键脂解基因ATGL和HSL的表达,从而促进非脂肪组织的脂质合成、增加脂肪组织的脂肪分解,降低脂肪组织脂肪储存能力,最终导致异位脂肪沉积的发生。

关键词： C57BL/6J小鼠   酪蛋白   炎症   炎症   C57BL/6J小鼠   HepG2细胞   胆固醇   胆汁酸   炎症   胆固醇   胆汁酸   LXRα  

摘要： 目的:采用皮下注射酪蛋白(Casein)诱导C57BL/6J小鼠体内产生慢性低丰度系统性炎症,研究在炎症状态下,胆固醇代谢紊乱导致肝组织损害及其相关分子机制。 方法:选取24只8周龄雄性C57 BL/6J小鼠,随机分为普通饮食组(对照组,NCD)、炎症组(NCD+Casein)、高脂组(HFD)、高脂+炎症组(HFD+Casein),每组6只。正常饮食组给予普通饲料喂养,高脂饮食组给予高脂饲料喂养(含15%脂肪, 1.25%胆固醇, 0.5%胆酸盐)。炎症刺激组予隔天皮下注射0.5 ml 10%酪蛋白溶液,非炎症刺激组予隔天皮下注射0.5 ml生理盐水,18周后处死小鼠,收集血清、肝脏、胆囊、小肠组织。采用ELISA法检测血清中炎症指标白介素-6(IL-6)、血清淀粉样蛋白(SAA)、肿瘤坏死因子α(TNFα)的浓度。 结果:与对照组相比,给予炎症刺激的两组小鼠血清中IL-6、SAA、TNFα的浓度水平显著升高,差异具有统计学意义,而单纯高脂组炎症指标水平较对照组相比无明显差异。 结论:隔日皮下注射酪蛋白18周,可诱导C57BL/6J小鼠体内产生慢性低丰度系统性炎症,本实验动物模型建立成功。 目的:观察慢性低丰度系统性炎症状态下,C57BL/6J小鼠血清、肝脏、胆囊、小肠及HepG2细胞中脂质含量水平及胆固醇外排相关指标的变化情况,探讨炎症是否加重脂质诱导的肝损害。 方法:将HepG2细胞分为以下4组:对照组(Control)、炎症组(TNFα)、高脂组(LDL)、高脂+炎症组(LDL+ TNFα)。用HE染色及油红O染色观察小鼠肝脏及HepG2细胞形态及脂质沉积情况。用化学酶促-比色法测定小鼠肝脏及HepG2细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量。用酶法测定小鼠血清TC、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平。用3[H]标记胆固醇-液体闪烁计数法检测HepG2细胞胆固醇外流量。用磷钼酸比色法检测小鼠肝脏、胆囊及近端小肠中胆汁酸水平。 结果:肝组织HE染色显示,与对照组相比,炎症组与高脂组的肝脏组织结构紊乱,肝细胞内有明显脂滴积聚和少量空泡形成,而高脂+炎症组可见肝细胞大量空泡样变性及炎症细胞浸润。肝组织和HepG2细胞油红O染色显示,与对照组相比其余三组红染颗粒增多,且以高脂+炎症组最为明显。肝组织和HepG2细胞内胆固醇检测结果显示,与对照组相比其余三组TC、FC、CE含量均增加,且以高脂+炎症组最为显著(P<0.05)。小鼠血清TC、LDL、HDL检测结果显示,高脂饮食增加了小鼠血清中三者的浓度,而无论给予正常饮食或高脂饮食,炎症刺激均能降低三者血清中的浓度(P<0.05)。细胞内胆固醇外流测定结果显示,与对照组相比,高脂组胆固醇外流量增加而炎症组降低,高脂+炎症组较高脂组外流量明显减少(P<0.05)。小鼠总胆汁酸水平检测结果显示,高脂组肝脏、胆囊及近端小肠中总胆汁酸水平较对照组增高,而高脂+炎症组与单纯高脂组相比,其水平降低(P<0.05)。 结论:慢性低丰度系统性炎症可引起C57BL/6J小鼠肝脏及HepG2细胞内脂质异常积聚,干扰了胆固醇外流及胆汁酸合成过程。 目的:探讨炎症通过干扰过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)、肝X受体α(LXRα)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、胆固醇7α羟化酶1(CYP7A1)介导的胆固醇外排致肝内脂质积聚的分子机制。 方法:在前面两个部分所建立的小鼠及细胞模型上,采用实时定量PCR(Real-Time PCR)法和蛋白免疫印迹(Western Blotting)法分别检测小鼠肝脏和HepG2细胞中PPARα、PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1等基因mRNA和蛋白的表达水平。 结果:Real-Time PCR结果表明,无论在小鼠肝脏或HepG2细胞中,与对照组相比,高脂组中PPARα、PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1的mRNA表达显著上调,炎症组表达则下调,而高脂+炎症组中上述各基因的mRNA表达水平较高脂组明显下降(P<0.05)。Western Blotting结果显示蛋白表达情况与基因相符。 结论:炎症应激可以通过下调肝脏中PPARα/PPARγ-LXRα-ABCA1/CYP7A1的表达,抑制胆固醇的外流和胆汁酸合成,加重脂质在肝脏的沉积从而引起肝损害。

关键词： 血管性痴呆   小檗碱   炎性因子  

摘要： 目的 观察血管性痴呆模型大鼠海马中炎性因子的变化，探讨小檗碱对血管性痴呆的脑保护作用。 方法 采用二血管阻断法+硝普钠法制备血管性痴呆大鼠模型，36只雄性SD大鼠随机分为：正常组、假手术组、痴呆模型组（模型组）、小檗碱低剂量治疗组（10mg/kg）、小檗碱中剂量治疗组（20mg/kg）、小檗碱高剂量治疗组（40mg/kg）治疗组。术后连续给药4周。以Morris水迷宫检测行为学，并测定大鼠海马中IL-8、IL-1β、TNF-α的含量。 结果 1.与正常组相比，假手术组未出现明显的行为学障碍，模型组、治疗组出现明显的学习记忆等行为学障碍。模型组、治疗组海马区IL-8、IL-1β、TNF-α表达较正常组、假手术组明显升高（P<0.05）。 2.与模型组相比，治疗组的行为学症状较模型组明显改善，治疗组海马区IL-8、IL-1β、TNF-α表达明显下降（P<0.05）、高剂量组下降较中、低组明显（P<0.05）。结论 炎性因子IL-8、IL-1β、TNF-α参与血管性痴呆的发生。小檗碱能改善VD大鼠的行为学症状，小檗碱可能是通过降低炎性因子（如IL-8、IL-1β、TNF-α等）抑制炎症反应的途径发挥脑保护作用，使VD症状得到改善。小檗碱抑制炎症反应及脑保护作用存在剂量依赖现象。

关键词： P-选择素   脓毒症   多器官功能障碍   全身炎性反应综合征   内皮功能障碍   血小板激活   全身炎症   黏附分子  

摘要： 脓毒症（sepsis）是感染引起的全身炎性反应综合征（systemicinflammatoryresponsesyndrome，SIRS）。随着人们对脓毒症致病机制研究的不断深入，目前认为，脓毒症是全身炎症平衡紊乱导致的进行性的内皮功能障碍，白细胞和血小板激活，损坏凝血系统，最后引起多器官功能障碍。P-选择素（P—selectin）是黏附分子选择素家族的重要成员，它主要表达在活化的血小板／内皮细胞表面，通过介导细胞起始黏附启动参与了包括白细胞的黏附迁移级联过程，在炎症、血栓形成中起着重要作用。本文就P-选择素在脓毒症的发病及器官功能障碍相关研究进展作一综述。

关键词： 慢性阻塞性肺疾病   发病机制   肺癌   COPD患者   同源性   免疫炎症反应   全身炎症性疾病   遗传易感因素  

摘要： COPD是累及中央气道、外周气道、肺实质和肺血管的复杂慢性全身炎症性疾病,肺癌是COPD的常见合并症之一,二者均与肺部对香烟烟雾等有害气体或颗粒的异常炎症反应有关,且COPD患者发生肺癌的风险增加,提示二者的发生过程存在相关性.为探讨这种相关性是否与烟雾暴露、遗传易感因素和（或）异常的免疫炎症反应有关,现将COPD和肺癌的流行病学、影响因素及发病机制等方面的生物学特征综述如下.

关键词： 大黄   肿瘤坏死因子-α   白细胞介素-10   内毒素  

摘要： 目的探讨大黄对阑尾炎继发腹膜炎患者术后全身炎症水平的影响。方法将60例急性阑尾炎继发弥漫性腹膜炎患者随机分成治疗组、对照组两组,每组各30例。所有患者均予以急诊行阑尾切除、腹腔冲洗引流术,术后常规抗炎、补液、营养支持、对症治疗等。治疗组在上述治疗的基础上还给予大黄粉5g吞服每日3次,共3日。观察患者术后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)和内毒素(LPS)的变化和术后初次排便时间。结果两组手术前TNF-α、IL-10、LPS含量基本一致(P>0.05)。术后48h、术后72h,治疗组TNF-α、LPS含量均明显低于对照组(均P<0.05),IL-10含量明显高于对照组(P<0.05)。治疗组术后初次排便时间为(37.5±6.2)h,对照组术后初次排便时间为(48.9±7.0)h,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论大黄对急性阑尾炎继发弥漫性腹膜炎患者术后的LPS排出有一定的促进作用,对预防患者体内的炎症反应有一定的调控作用。