关键词： NLRP3   炎症小体   去泛素化修饰   UAF1   USP  

摘要： 研究背景与目的核苷酸结合寡聚结构域样蛋白3(nucleotide binding domain like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体(inflammasome)是由模式识别受体NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白ASC(apoptosis-associated speck-like protein)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)组成的多聚蛋白复合体,可识别来自病原微生物的病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)和细胞自身释放的损伤相关分子模式(damage associated molecular patterns,DAMPs)而被激活,在抗细菌、抗病毒等多种生理、病理过程中发挥着非常重要的作用。NLRP3炎症小体是目前研究最多、最为深入的炎症小体,其异常的活化与多种疾病的发生、进展紧密相关,如阿尔兹海默症(alzheimer’s disease,AD)、痛风、动脉粥样硬化、Ⅱ型糖尿病、肥胖和感染性疾病等。因此,揭示NLRP3炎症小体活化的精细调控及其作用机制,对于阐明NLRP3炎症小体相关疾病的发生、进展的机理及寻找新的免疫调节疗法具有重要意义。已有文献报道,NLRP3的蛋白表达水平是NLRP3炎症小体活化的重要限速步骤。因此,目前针对NLRP3表达水平的调控,已经成为干预NLRP3炎症小体活化的重要手段。其中,通过调控NLRP3的蛋白翻译后修饰,如泛素化、磷酸化等来干预炎症小体的活化已成为最重要的干预方式之一。E3泛素连接酶TRIM31(Tripartite motif-containing protein 31)可通过促进 NLRP3 K48 位偶联的泛素化修饰,促进其蛋白酶体途径的降解,进而抑制NLRP3炎症小体的活化。肿瘤抑制蛋白 PTEN(phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten)可直接结合NLRP3,使第32位酪氨酸发生去磷酸化,促进NLRP3和ASC相互作用及炎症小体组装,进而正向调控NLRP3炎症小体的活化。ABRO1(Abraxas brother protein 1)可通过招募 BRCC3(BRCA1/BRCA2-containing complex subunit 3)去除NLRP3的K63位偶联的泛素化修饰,从而促进NLRP3炎症小体的组装和激活。但是,目前对于NLRP3 K48位偶联的去泛素化修饰在NLRP3炎症小体活化中的作用尚不明确。UAF1(Ubiquitin specific peptidase1(USP1)-associated factor 1),也叫 WDR48(WD repeat-containing protein 48)或p80,是去泛素化酶的一种结合蛋白,主要参与构成三种去泛素化酶复合体,包括UAF1/USP1、UAF1/USP12(Ubiquitin-specific-processing protease 12)和 UAF1/USP46(Ubiquitin-specific-processing protease46)。去泛素化酶USP1、USP12和USP46单独存在时,它们的去泛素化酶活性极低;当与UAF1结合后,它们的去泛素化酶活性可增强几十倍。UAF1/USP1复合体可去泛素化一系列底物蛋白,参与调控DNA损伤修复、肿瘤的发生发展以及抗病毒免疫反应等。例如,USP1可去除IDs(inhibitors of DNA binding)蛋白家族成员ID 1、ID2和ID3的泛素化修饰,稳定其表达,抑制bHLH(basic-helix-loop-helix)介导的骨细胞分化,进而维持骨肉瘤的间充质干细胞特性。USP12和USP6也可通过去泛素化一系列底物蛋白,如PHLPP1(PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase 1)、TP53(Tumor suppressor p53)和 AR(androgen receptor)等,稳定它们的表达,参与调控肿瘤的发生等。我们在前期实验研究中,发现去泛素化酶USP1可促进NLRP3炎症小体的活化。但是,UAF1是否可通过增强USP1去泛素化酶活性促进炎症小体活化,以及UAF1/USP12和UAF1/USP46去泛素化酶复合体在炎症中的作用,均尚不清楚。本研究旨在探究UAF1去泛素化酶复合体,包括UAF1/USP1、UAF1/USP12和UAF1/USP46,在NLRP3炎症小体活化中的作用及其分子作用机制,为研究NLRP3炎症小体活化调控机制提供新的思路,为NLRP3炎症小体相关疾病的免疫调节治

关键词： 尿石症   经皮肾取石术   术前危险因素   全身炎症反应综合  

摘要： 目的：探讨上尿路结石患者行经皮肾镜碎石取石术后发生全身炎症反应综合征的术前危险因素相关性，从术前开始积极管理患者，避免危险并发症的发生。　　资料及方法：回顾性分析2019年01月至2019年12月于温州医科大学附属台州医院择期行PCNL术治疗上尿路结石的181例患者的基本信息、临床资料，依据PCNL术后是否发生SIRS情况将其分为术后未发生SIRS组（非SIRS组，n=156）和发生SIRS组（SIRS发生组，n=25），记录并分析比较两组患者的基本信息包括患者年龄、性别、体重指数、合并症（高血压、糖尿病）、结石位置、结石直径、尿培养以及术前炎症相关指标NLR、PLR、PNI、SⅡ、AGR等。采用单因素和多因素Logistic回归分析探究与PCNL术后SIRS相关的独立因素，P＜0.05代表差异具有统计学意义。　　结果：两组患者在年龄、性别、BMI、高血压病、糖尿病、结石位置、白细胞、NLR水平、PLR水平、PNI水平、SII水平等方面比较，差异无统计学意义（均P＞0.05）;而在结石直径、尿培养情况、血清白蛋白等方面差异有统计学意义（均P＜0.05）。上尿路结石患者PCNL术后发生SIRS的单因素分析，结果发现：结石直径≥2cm对术后SIRS发生具有统计学意义（OR=4.256,95%CI1.22-14.88,P=0.023*）;尿培养阳性对术后SIRS发生具有统计学意义（OR=2.538，95%CI1.061-6.288,P=0.037*）;血清白蛋白情况对术后SIRS发生具有统计学意义（OR=0.828，95%CI0.739-0.928,P＜0.001*）。其他炎症标志物两组间差异均无统计学意义（均P＞0.05）。将单因素分析中差异有统计学意义（P＜0.05)）的3个因素作为自变量，纳入结石直径、尿培养情况和血清白蛋白构建多因素Logistic回归方程。发现：相对结石＜2cm的患者，结石直径≥2cm将增加术后SIRS发生的风险，具有统计学意义（OR=3.61,95%CI1.006-12.96,P=0.049*）;血清白蛋白越高减少术后SIRS发生的风险，差异具有统计学意义（OR=0.842，95%CI0.749-0.946,P=0.004*）尿培养阳性与术后SIRS发生的风险无统计学意义（OR=1.971,95%CI0.771-5.039,P=0.157）。综上所述，结石直径≥2cm和血清白蛋白情况是发生SIRS的独立相关因素。　　结论：术前白蛋白情况、术前尿培养阳性情况与PCNL术后SIRS发生高度相关，并且结石直径≥2cm患者中术后发生SIRS风险显著高于结石直径＜2cm，结石直径≥2cm和血清白蛋白情况是PCNL术后发生SIRS的独立危险因素。

关键词： 肾透明细胞癌   炎症   转移   miR-483-5p  

摘要： 目的:探究miR-483-5p在肾透明细胞癌中的表达及其与炎症状态的关系方法:从基因表达综合数据库(GEO)下载5例肾透明细胞癌患者术前和术后第7天的血浆微阵列平台,用于检测血浆miRNA的表达,并收集了12例确诊患者的术前及术后第7天血浆来验证上述结果;收集了58位病理确诊的肾透明细胞癌患者的肾癌组织标本及癌旁组织标本,通过即时聚合酶链锁反应检测miR-483-5p在肾癌组织中的表达,也检测miR-483-5p在癌旁组织中的表达;构建miR-483-5p过表达质粒,并在A498细胞及786-O细胞中进行梯度共转染,用于检测其在细胞中表达量高低;将A498细胞及786-O细胞分为对照组及miR-483-5p过表达组转染24小时后进行CCK-8实验、细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell实验等体外实验。收集确诊为肾透明细胞癌的58例患者的临床病理参数及炎症指标,探究其与miR-483-5p的关系。结果:1、从GEO数据库及12例确诊患者术前术后血浆可知:miR-483-5p在肾切除术后血浆中显著上调;2.在58例肾癌组织中,RT-q PCR检测提示miR-483-5p在癌组织中低表达,且与T分期密切相关(p<0.01);***-483-5p较高的相对表达与中性粒细胞-淋巴细胞比例(NLR)(P=0.03)和淋巴细胞-单核细胞比例(LMR)(P=0.26)呈负相关。4.过表达miR-483-5p可逆转上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程,抑制肾癌细胞的增殖和转移5、将A498及786-O细胞各分两组组转染后进行细胞功能实验,miR-483-5p过表达后抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:1.确定miR-483-5p是cc RCC的重要血浆和组织生物标志物。2.肾切除术后血浆中miR-483-5p显著上调。***-483-5p高表达与肿瘤低分期呈正相关,miR-483-5p相对高表达与NLR和LMR呈负相关。***-483-5p在体外不仅能抑制肾癌癌细胞的增殖能力,也能抑制其转移和侵袭能力。

关键词： 环丙藁本   神经炎症   BV2细胞   BID   NF-κB   HT22细胞  

摘要： 目的:小胶质细胞介导的神经炎症是缺血性脑卒中发病中的关键病理因素,通过使用药物对小胶质细胞活化进行干预能够有效改善缺血性脑卒中的神经功能损害。藁本内酯是一种天然苯酞类化合物,具有有效的抗炎活性,环丙藁本(ligusticum cycloprolactam,LIGc)是在藁本内酯分子基础上构建的化学性质稳定的藁本内酯衍生物。本研究以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活的BV2细胞作为体外实验的细胞炎症模型,评估了LIGc对活化BV2细胞炎症反应的抑制作用,以及LIGc对LPS刺激活化的BV2细胞引起的HT22细胞损伤的间接神经保护效应。方法:不同浓度的LPS(0.05、0.1、0.5、1和2μg/m L)作用于BV2细胞,孵育24h,然后筛选出LPS最佳造模浓度。通过CCK-8法检测BV2细胞和HT22细胞活力。使用Griess试剂盒和ELISA试剂盒测定不同浓度LIGc(5、10或20μmol/L)对LPS诱导活化的BV2细胞上清中一氧化氮(NO)和白介素1-β(IL-1β)产生的影响。通过2-DE电泳和质谱鉴定分析LIGc对LPS诱导活化的BV2细胞中蛋白质谱的影响。使用免疫印迹测定LIGc对LPS诱导的BV2细胞中COX-2、TNF-α、i NOS、BID、Bax、Caspase3、p-NF-κB p65和NF-κB p65,以及BV2细胞的条件培养基对HT22细胞中Bcl2、Bax、Cyt C和BID表达水平的影响。结果:不同浓度LPS均可以明显诱导BV2细胞NO产生,其中0.5μg/m L LPS具有更为理想的刺激效果(p<0.001)。0-20μmol/L LIGc对BV2细胞无明显毒性(p>0.05),当其浓度为40μmol/L时,细胞活力下降(p < 0.05)。LIGc(5、10或20μmol/L)预处理不同程度地抑制LPS(0.5μg/m L)诱导的BV2细胞NO和IL-1β的产生(p < 0.05),与另外两种浓度的LIGc相比,10μmol/L LIGc具有更为明显的抑制效果(p<0.001)。Western blot检测结果表明,LPS(0.5μg/m L)处理引起BV2细胞中COX-2(p<0.001)、i NOS(p<0.001)和TNF-α(p<0.01)的表达明显增加,LIGc(10μmol/L)预处理可逆转上述效应(p<0.05)。2-DE电泳鉴定出BID、EIF3I、NPM3、TPM3、PRDX2、PHB和CLIC1等7个差异表达的蛋白质,Western blot检测进一步表明LIGc预处理可以下调BV2细胞中LPS诱导的BID表达(p < 0.05)。单独LPS(0.5μg/m L)干预后,BV2细胞中p-NF-κB p65蛋白水平显著升高(p<0.01),NF-κB p65总蛋白表达无明显差异;10μmol/L LIGc预处理可引起BV2细胞中p-NF-κB p65蛋白水平降低。此外,BV2细胞条件培养基作用于HT22细胞后,Control-CM组或Control-CM+LPS组或Control-CM+LIGc组的HT22细胞活性无明显差异(p>0.05);与LPS-CM组对比,LPS+LIGc-CM条件培养基处理可以提高HT22细胞的存活率(p<0.05),并减少HT22细胞的凋亡。结论:LIGc通过下调LPS诱导的BV2细胞中BID/NF-κB信号传导通路,减少BV2细胞炎症因子的释放,减轻BV2细胞对HT22细胞的毒性作用,从而抑制BV2细胞介导的神经炎症反应。

关键词： 糖尿病肾病   气阴两虚血瘀证   益气养阴通络方   微炎症状态  

摘要： 目的:通过观察益气养阴通络方治疗糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期患者,辨证符合气阴两虚血瘀证的,观察其在临床疗效、24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白、尿白蛋白/肌酐等尿蛋白水平,血清肌酐、血清尿素氮、C反应蛋白、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等指标的影响和安全性,评价中药疗效。方法:纳入糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期的患者80例,中医辨证为气阴两虚血瘀证,符合诊断标准及排除标准,随机方法采用按随机数字表法,对照组及观察组,两组各40例。2组患者均基础治疗为饮食宣教、运动宣教、控制血糖、血压、血脂,对照组加用贝那普利治疗,观察组在对照组的基础上加用益气养阴通络方。观察周期12周。比较两组患者治疗前后的中医症候积分、临床疗效、血清肌酐、尿素氮、24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白、尿微量白蛋白/肌酐、血清肿瘤坏死因子-α、C反应蛋白,根据观察治疗前后两组的中医证候积分和实验室指标的变化,进行中医证候疗效、临床疗效、微炎症状态及安全性的评价。结果:在中医症候积分上,治疗后观察组显著低于对照组,具有统计学意义(P<0.05),临床疗效优于对照组(P<0.05),血清肌酐、血清尿素氮、24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白、尿白蛋白/肌酐、血清肿瘤坏死因子-α、C反应蛋白水平显著低于对照组(P<0.05);2组患者均未出现明显毒副反应。结论:与单用西药相比,益气养阴通络方联合西药对糖尿病肾病Ⅲ-Ⅳ期气阴两虚血瘀证患者安全有效,且能明显改善临床症状,有效减少蛋白尿,延缓肾功能的进展,其作用机制可能与对于微炎症状态的抑制有关。值得进一步的研究和临床应用。

关键词： CKD3-4期   结肠透析   补脾益肾活血法   微炎症   营养状况  

摘要： 目的:本课题于临床上研究CKD3-4期患者观察其临床症状、肾功能、hs-C反应蛋白、营养状况等相关指标,监测结肠透析联合补脾益肾活血法对CKD3-4期患者微炎症状态及营养状况的安全性、治疗疗效,从而为临床治疗CKD非透析患者提供中医药方案,延长患者进入肾脏替代治疗的过程。方法:于2019年8月1日至2021年1月31日从江西省中医院肾病科门诊部及住院部,选取符合纳入标准的患者66例。按照随机数字表法其均分为33例每组(对照组及治疗组)。对照组采用现代医学治疗,治疗组在此基础上采用结肠透析及补脾益肾活血汤口服。结肠透析治疗隔日1次,补脾益肾活血汤每日1剂,分早晚两次温服。连续治疗并观察2个疗程(4周1疗程)。记录患者临床症状,按标准进行评分,监测记录干预治疗前后两组患者的微炎症、营养状况及肾功能(hs-CRP、TP、TC、TG、TRF、ALB、Hb、UA、Scr、BUN、e GFR)等指标。将所有的数据使用Excel2007制成表格录入SPSS26.0分析软件中,根据资料类别进行相应的统计学分析以评价临床治疗疗效。结果:(1)基础指标:本课题研究分为两组,纳入符合要求的患者各33例,治疗期间对照组脱落3例,治疗组脱落1例,最终纳入32例进治疗组,对照组纳入30例,两组患者的性别、年龄、体重、CKD分期分布及治疗前的中医症状积分、肾功能相关指标、微炎症相关指标、营养状况相关指标进行统计学计算分析,P>0.05,表明两组基线无显著差异。(2)疗效方面:治疗组总有效率为81.25%;对照组总有效率为60.00%;经秩和检验得出Z=-3.173511,P=0.001506,P<0.05,两组治疗差异显著,表明对照组疗效低于治疗组。(3)中医证候疗效及中医症状积分:干预治疗后,治疗组中医证候疗效为84.38%;对照组为63.33%,经统计学秩和检验分析,Z=-1.999435,P=0.045561,P<0.05,差异显著有意义。两组中医证候总积分在治疗后皆呈下降状态(P<0.01),但治疗组症状减轻程度显著优于对照组(P<0.01)。在中医症状方面,两组对脾肾气虚、瘀血阻滞的主要症状及次要症状皆有所改善(P<0.01),在脘腹胀满、气短懒言、食少纳呆、腰痛、肢体麻木改善程度上治疗组优于对照组(P<0.05)。(4)肾功能:两组经干预治疗后UA、Scr、BUN下降,e GFR升高,说明治疗的有效性(P<0.01),治疗组患者的Scr及e GFR改善程度显著大于对照组(P<0.01),表明肾功能改善效果治疗组优于对照组。(5)微炎症指标:两组hs-CRP在干预治疗后均呈降低趋势,P<0.01;治疗组hs-CRP的下降幅度显著大于对照组,经统计学分析P<0.05,表明治疗组微炎症状态改善情况优于对照组。(6)营养状况指标:经过治疗后,两组患者在TP、ALB、TC、TRF方面均有改善(P<0.01),对照组在对Hb也有所改善,但差异不大(P>0.05),无统计学意义,治疗组对TG的影响也较小(P>0.05);治疗后的治疗组较对照组而言,在TP、ALB、Hb方面疗效差异较大(P<0.05),治疗组对TP、ALB、Hb的治疗效果优于对照组,对于TC、TG、TRF两组疗效差异不显著。结论:本研究通过观察结肠透析联合补脾益肾活血法与现代医学治疗66例CKD3-4患者,比较两组治疗前后总有效率、中医证候积分及肾功能、e GFR、hs-CRP、营养状况指标(Hb、ALB、TRF、TP、TC、TG)的变化,证明结肠透析联合补脾益肾活血法治疗CKD的安全性及有效性。结果显示结肠透析联合补脾益肾活血法在改善CKD3-4期患者肾功能、微炎症、营养状况方面,治疗组治疗效果明显优于对照组。证明结肠透析联合补脾益肾活血法治疗CKD非透析患者方面不仅安全而且有疗效,在临床上不仅能改善患者临床症状,而且体内毒素清除效率较高,并且此次研究并未出现不良反应及加重病情的情况。本研究为临床治疗CKD非透析患者提供了新的治疗方案,值得进一步研究及推广,为广大肾病患者贡献中医药力量。

关键词： 肾癌   全身炎症反应指数   纤维蛋白原   预后   列线图  

摘要： 目的:全身炎症反应指数(Systemic inflammatory response index SIRI)作为一种新型的炎症指标,包含了外周血中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞,其计算方式为(中性粒细胞/淋巴细胞)*单核细胞,反应了体内三个不同的炎症和免疫途径,有研究认为SIRI与肿瘤的预后存在一定关系。纤维蛋白原(Fibrinogen FIB)是传统意义上是常见的凝血功能指标,其同时在系统炎症反应急性期时也会出现升高,近年来多项研究发现FIB参与了肿瘤的发生发展过程。本文旨在探讨肾癌患者术前全身炎症反应指数和纤维蛋白原在预后评估中的临床价值,更好的评估预后为肾癌患者制定更精确的治疗方案。方法:回顾性分析2011年1月至2014年12月于我院收治并行手术治疗的肾癌患者的临床及术后随访资料;通过受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve ROC)确定SIRI和FIB的最佳临界值。分析低SIRI组与高SIRI组和低FIB组与高FIB组临床特征间的差异;运用Kaplan-Meier法来计算生存率,并通过Log-rank检验比较组间的生存率差异;通过Cox比例风险回归模型来分析影响肾癌预后的影响因素。采用所有影响5年生存率的独立预后指标,包括Fuhrma分级,SIRI值,FIB值建立列线图,预测患者5年生存率。结果:本研究共收集188例肾癌患者,通过ROC曲线确定SIRI和FIB的最佳临界值分别为1.81和3.42g/L,将所有患者分为高SIR组、低SIRI组,高FIB组、低FIB组。术前SIRI水平与组间患者肿瘤大小、TNM分期、Fuhrman分级、淋巴结转移、高血压病史密切相关(P<0.05),具有统计学意义;术前FIB水平与组间患者年龄,TNM分期、Fuhrman分级、淋巴结转移、有无高血压密切相关(P<0.05),具有统计学意义。Cox多因素回归分析结果显示,SIRI>1.81、FIB>3.42g/L、Fuhrman分级是影响肾癌预后的独立危险因素。列线图结果发现C-index指数为0.816(95%CI:0.751-0.880),可以用来预测患者术后5年生存率。结论:术前SIRI和FIB对肾癌切除术后患者的生存期有一定影响作用,SIRI和FIB是肾癌预后不良的独立危险因素,术前高SIRI和高FIB的患者往往提示肿瘤的相对预后不佳,两项指标对预测患者术后生存状况有积极的作用,可以作为预测肾癌患者预后的特异性指标,与常规临床病理参数结合后,可以构建新的模型来提高肾癌切除术后患者预后预测的准确性。

关键词： 全身免疫炎症指数   乳腺癌   Meta分析   预后  

摘要： 目的:乳腺癌是一种具有不同增殖速度、侵袭能力、转移潜能及治疗效果的异质性肿瘤,尽管目前有多种治疗方法,但是还是有很大比例的乳腺癌患者最终会死于乳腺癌的复发及转移。因而,筛选出敏感的预后标志物对乳腺癌患者来说尤为重要。本荟萃分析旨在研究全身免疫炎症指数(systemic immune-inflammation index,SII指数)在乳腺癌患者预后中的预测价值。方法:计算机检索Web of Science,Pubmed,Embase,The Cochrane Library、中国知网及万方等数据库,收集了2015年1月至2020年7月之间所有关于SII指数与乳腺癌患者预后相关性的研究,其中SII指数为血小板计数×中性粒细胞计数/淋巴细胞计数(platele×neutrophil/lymphocyte counts,P×N/L)的计算值,两名研究者根据纳入及排除标准独立地筛选文献,并且对最终纳入的文献进行质量评估及相关资料提取,采用Stata 12.0及Review Manager5.3软件对提取的数据进行统计分析,比值比(Odds ratio,OR)和95%置信区间(Confidence interval,CI)被用于评估SII指数与乳腺癌病理参数(肿瘤大小和淋巴结状态)之间的关系,风险比(Harzard ratio,HR)和95%CI被用于评估乳腺癌患者高SII指数与总生存期(overall survival,OS)及无病生存期(disease free survival,DFS)之间的相关性。结果:本荟萃分析共纳入了8篇文献,其中包括2642名乳腺癌患者,主要结局指标为肿瘤直径大小、淋巴结状态、OS及DFS。本meta分析结果如下:高SII指数的乳腺癌患者出现肿瘤直径>2cm的几率高于低SII指数的患者(合并OR=1.49,95%CI:1.19-1.85,P=0.0004,固定效应模型);高SII指数的乳腺癌患者发生淋巴结转移的几率高于低SII指数的患者(合并OR=1.38,95%CI:1.12-1.69,P=0.002,固定效应模型);高SII指数的乳腺癌患者OS(合并HR=2.06,95%CI:1.55-2.74,P<0.0000,随机效应模型)及DFS(合并HR=1.93,95%CI:1.63-2.30,P<0.0000,固定效应模型)短于低SII指数的患者。结论:SII指数可作为临床预测乳腺癌患者预后的可靠指标。

关键词： 雌激素膜受体   促肾上腺皮质激素释放激素   催产素   重性抑郁障碍   双相障碍   背外侧前额叶   前扣带回   能量代谢   免疫炎症反应   突触功能   细胞骨架构建   细胞粘附进程   神经元投射  

摘要： 背景:重性抑郁障碍(maj or depressive disorder,MDD)和双相障碍(bipolar disorder,BD)是两种主要的心境障碍(mood disorder)亚型,严重危害个人和社会健康与发展。针对其发病机制的研究是目前的研究热点。MDD与BD的诊断具有显著的临床症候群依赖性,其临床症候群之间的异同性(MDD:抑郁;BD:躁狂、抑郁)提示它们的发病机制之间具有共性和差异性。MDD、BD都表现有应激反应系统功能紊乱,下丘脑分泌的应激蛋白分子(神经肽)促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)在心境障碍中扮演重要角色,调控CRH表达的蛋白质及其分子作用机制,例如性激素调控CRH表达的机制是我们组研究的重点。此外,近年来的临床研究发现和我们的前期研究提示,另一神经肽催产素(oxytocin,OXT)活性亢进可能是BD发病的关键特征性机制。我们将基于前期研究基础进一步揭示这些应激反应关键蛋白质分子在MDD、BD发病中的差异性表现及其表达调控机制。另一方面,为了阐明发生在蛋白质网络互作水平的疾病病理机制,我们将首次针对心境障碍患者脑组织进行蛋白质组学研究。因此,在本论文的第一章,基于前期工作基础,作者进一步研究了若干应激分子(蛋白质受体),包括雌激素膜受体调控CRH表达的机制,以及CRH受体(corticotropin-releasing hormone receptor,CRHR1 and CRHR2)、OXT 受体(oxytocin receptor,OXTR)在 MDD、BD 患者的背外侧前额叶(dorsolateral prefrontal cortex,DLPFC)、前扣带回(anterior cingulate cortex,ACC)中 mRNA的表达及其与临床症状的关联。在本论文的第二章,作者针对MDD、BD患者和完好匹配的对照组的DLPFC、ACC样本分别进行了全蛋白质组学研究。旨在从分子到全蛋白质组表达水平探索MDD、BD的(差异性)神经生物学发病机制。材料与方法:(1)采用细胞药理学实验,在神经瘤母细胞系SK-N-SH细胞研究雌激素膜受体-PI3K-一氧化氮(nitric oxide,NO)信号通路、雌激素膜受体-PKC信号通路等对C RH分泌的调控机制。(2)采用实时荧光定量P C R技术检测MDD,BD患者DLPFC、ACC内CRHR1、CRHR2和OXTR的mRNA水平变化及其和临床精神病样症状、自杀的关联。(3)对液氮固定的MDD,BD患者DLPFC、ACC组织样本进行连续切片,采用琉堇染色定量分析切片中皮层组织内灰质和白质面积占整体组织面积的比例;采用串联质谱标签(Tandemn masstag,TMT)标记技术并通过高效液相色谱—串联质谱系统(LC-MS/MS)进行蛋白质组学实验,对个体样本的蛋白质组进行鉴定并且定量蛋白质分子表达水平。采用生物信息学分析进行差异性变化蛋白质的功能富集分析。采用免疫印迹实验(Western blot)对蛋白质组学分析中关键蛋白质分子的表达进行验证。结果:(1)1 nM雌二醇-牛血清白蛋白复合物(estradiol-bovine serum albumin,E2-BSA,注:仅仅和雌激素膜受体结合)在30min时显著刺激SK-N-SH细胞的NO(p=0.019)和CRH(p<0.01)的分泌。E2-BSA/PI3K通路通过促进NO生成而促进CRH的释放;E2-BSA/PKC通路则可以不依赖于NO的生成而促进CRH释放。(2)BD患者的前额叶中OXTR-mRNA水平与对照组相比有升高趋势(DLPFC:p=0.10;ACC:p=0.056),在男性 BD 患者表现更为明显(DLPFC:p<0.01;ACC:p=0.069),MDD 患者无此表现。MDD 患者 DLPFC 中CRHR2-mRNA水平较对照组有下降趋势(p=0.056)。MDD自杀死亡患者中CRHR2-mRNA 水平显著低于对照组(p=0.011)。BD 患者 OXTR-mRNA/CRHR2-mRNA比率在ACC中显著上升且在DLPFC中呈上升趋势(ACC:p=0.035;DLPFC:p=0.078),尤其在男性 BD 患者中表现显著(ACC:p=0.043;DLPFC:p=0.007)。男性BD患者OXTR-mRNA/CRHR1-mRNA 比率在DLPFC中也显著高于男性对照组(p=0.040),MDD患者无此表现。(3)在MDD、BD患者及其对照组的DLPFC和ACC中,白质、灰质分别占整个脑区面积百分比的比值平均数均为2.5,各组之间无明显差异(DLPFC:p=0.927;ACC:p=0.869)。此外,神经元的蛋白质标记物MAP

关键词： 脂多糖   挥发性脂肪酸   瘤胃上皮细胞   载体蛋白  

摘要： 本研究旨在探讨脂多糖(LPS)静脉注射诱导机体炎症反应发生时对瘤胃内环境参数、特别是对瘤胃内挥发性脂肪酸(VFA)吸收的影响,并通过体外细胞培养试验阐明LPS及炎症因子对瘤胃上皮细胞VFA吸收的调控机制。试验分为体内、体外两部分进行。体内试验:选用装有瘤胃瘘管的健康荷斯坦奶公牛3头,采用自身对照试验设计,颈静脉灌注生理盐水(对照组)和0.4μg/kg BW的LPS溶液(处理组)。试验分两期进行,每期15天,其中试验期为前3天,恢复期为后12天。在注射前(0 h)和注射后1,2,3,4,5,6,8,12,24,48和72 h测定直肠温度并采集瘤胃液、瘤胃乳头和颈静脉血测定相关指标。体外试验:于屠宰场采集牛瘤胃上皮,分离、原代培养瘤胃上皮细胞。试验设置在两种p H值条件下(p H 5.5和p H 7),分别添加LPS、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10,培养12 h后收集细胞并提取RNA。测定NF-κB、MCT1、MCT4、NHE1、NHE3、AE2、PAT1基因表达。体内试验结果表明:(1)LPS引起了机体炎症反应,模型构建成功。在本试验中,LPS组直肠温度在灌注后1h内显著升高,24 h后恢复。与生理盐水组相比,LPS组血液中TNF-α和IL-6含量显著升高(P<0.05)。(2)静脉注射LPS处理组瘤胃上皮中VFA吸收相关蛋白MCT1、MCT4、NHE1、NHE3、AE2和PAT1表达显著下调(P<0.05)。(3)LPS灌注1 h后瘤胃p H值显著下降,VFA和NH3-N浓度显著升高。体外试验表明:(1)低p H显著抑制牛瘤胃上皮细胞中MCT1、MCT4和PAT1的基因表达(P<0.05)。(2)在中性条件下,不同炎症因子处理牛瘤胃上皮细胞对VFA吸收相关蛋白有不同的抑制作用。(3)在酸性条件下,IL-10显著抑制牛瘤胃上皮细胞NF-κB基因的表达量(P<0.05)。综上所述,LPS诱导机体发生炎症反应时,瘤胃中VFA吸收受阻,炎症因子IL-6和TNF-α通过激活瘤胃上皮细胞MAPK-ERK1/2信号通路下调了VFA吸收相关蛋白的表达,导致瘤胃内VFA积累,瘤胃中低p H环境更加剧了这种效应,然而炎症因子IL-10在一定程度上可以缓解低p H对瘤胃上皮VFA吸收功能的损伤。