关键词： mi R-214   腺苷A2A受体   炎症   表达调控   急性肺损伤  

摘要： 炎症（inflammation）是具有血管系统的机体对损伤因子所发生的一系列复杂的防御反应,具有杀灭病原体、限制感染及修复损伤等作用,是损伤、抗损伤和修复三为一体的统一过程。炎症是伴随多种疾病状态下一种共有的复杂的病理现象,体表的外伤感染和各器官的大部分常见病和多发病（如肺炎、肝炎、肾炎等）都属于炎症性疾病。炎症的发生、发展和转归取决于体内各种促炎因素及抗炎因素在不同的环节、时相和过程相互作用和博弈时形成的复杂而又精细的调控网络是否平衡。微小RNA（micro RNA,mi RNA）已被证实在炎症反应中发挥重要的调节作用。和其他分子类似,miRNA也有抑炎和促炎之分。其中的miR-214,目前研究提示主要发挥促炎作用,其机制为延缓单核细胞的凋亡及维持T细胞的活化,但miR-214能否通过直接抑制某些抑炎基因的表达来实现促炎尚无文献报道。近年的研究表明,腺苷A2A受体（A2AR）活化后在外周组织通过抑制促炎细胞因子的产生和释放、中性粒细胞浸润等在多种器官组织损伤和炎症模型（如缺血性肝损伤、急性肺损伤、缺血再灌注损伤及急性肾损伤模型）中发挥显著的抑制炎症保护作用,但A2AR的蛋白表达水平却在上述模型中表达下调,这无疑制约了A2AR激动剂的应用。目前对A2AR自身表达调控对其抑炎作用的影响尚不清楚。鉴于mi R-214和A2AR在炎症中均具有重要作用,那么A2AR的表达是否受到mi R-214的调控?mi RNA的加工和合成同样受到其他分子的调控,A2AR的抑炎效应是否包括抑制miR-214的表达?以上目前均未有相关报道。为了明确mi R-214与A2AR之间在炎症中相互表达调控的作用机制及在炎症中的作用:在本课题中,我们首先使用生物信息学预测,筛选出mi R-214为研究对象,在小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中,借助miR-214 mimic观察对A2AR蛋白和mRNA表达的影响,然后利用报告基因分析解析A2AR基因3'端非编码区（3'-UTR）与mi R-214的结合位点。然后,我们猜测A2AR反过来也可能调控mi R-214的表达,使用A2AR的激动剂CGS21680和拮抗剂ZM241385、PKA抑制剂H89和NF-κB抑制剂BAY 11-7082处理小鼠骨髓来源的巨噬细胞（BMDMs）和RAW264.7细胞,观察对mi R-214表达的影响,探讨了可能涉及的主要信号通路。最后,在bmdms中过表达mir-214检测对炎症因子tnf-α和il-6表达的影响,借助脂多糖（lps）诱导的小鼠急性肺损伤（ali）模型,观察a2ar蛋白和mir-214的表达相关性以及联合应用a2ar激动剂和mir-214抑制剂对小鼠ali模型伤情的影响。主要取得了以下研究结果:1.利用targetscan、miranda和mirmap生物信息学在线软件预测可能调控a2ar的mirna,发现在3'-utr有mir-214潜在的结合位点;在raw264.7细胞中,借助mir-214mimic过表达mir-214,westernblot和real-timepcr证实,mir-214可以在蛋白水平而不是mrna水平抑制a2ar的表达;构建含a2ar3'-utr的报告基因载体,使用双荧光素酶报告基因检测结合定点突变,详细解析了a2ar3'-utr与mir-214结合的精确位点;进行功能回复实验,向转染了mimic的细胞中同时转染不含3'-utr的a2ar真核表达质粒,进一步确定mir-214是通过与a2ar3'-utr的特异性结合来调控其表达。以上结果提示a2ar是mir-214的另一靶基因。2.生物信息学预测在mir-214启动子区-1000+200存在两个转录因子nf-κb可能的结合位点;据此构建了包含不同长度的mir-214启动子区luc报告基因载体并结合定点突变,luc报告基因检测显示nf-κb的激活能够促进mir-214启动子的转录活性;结合染色质免疫沉淀（chip）实验证实nf-κb的p65亚基特异性的与mir-214启动子区-490-481和-27-16结合。在raw264.7细胞中,借助a2ar激动剂和拮抗剂,pka和nf-κb抑制剂,经westernblot检测,a2ar活化后通过pka途径抑制iκbα的磷酸化进而抑制nf-κbp65亚基的核转位从而抑制nf-κb通路;在bmdms和raw264.7中证实激活a2ar后通过pka-nf-κb途径下调mir-214表达,经emsa和chip-qpcr证实可能的机制是a2ar的活化使nf-κbp65的核转位受到抑制,减弱其与mir-214启动子区的结合从而降低了转录活性。以上结果阐明了a2ar下调mir-214表达的分子机制,综合1中结果,初步提示在细胞炎症模型中存在mir-214/a2ar

关键词： 巨噬细胞   金黄色葡萄球菌   Toll样受体2   吞噬   自噬   c-Jun氨基末端激酶变应性气道炎症   天然免疫  

摘要： Toll样受体(TLRs)是Ⅰ型跨膜蛋白家族,在体内主要负责感知入侵的病原体。到目前为止,已经确定发现的人类TLR家族有10个成员。它们调节的天然免疫反应被认为参与了多种感染和炎症性疾病的发病。本论文中,我们主要针对TLR2进行了两个方面的研究。***2介导的金黄色葡萄球菌刺激巨噬细胞吞噬和自噬信号通路的分子机制研究背景有报道显示,Toll样受体2(TLR2)能够参与金葡菌的识别,然而,在金葡菌感染的气道环境中,巨噬细胞是否能够激活吞噬和自噬反应予以应对,TLR2在巨噬细胞活化的天然免疫过程中所发挥的作用以及潜在的机制,目前尚未阐明清楚。研究目的1.研究金葡菌感染巨噬细胞过程中,相关吞噬和自噬信号的活化情况。2.探讨TLR2及下游潜在信号级联在金葡菌刺激巨噬细胞所诱导的吞噬和自噬过程中的作用。研究方法1.金葡菌刺激巨噬细胞不同时间信号分子表达及自噬的检测金葡菌刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264.715min、30min、45min、60min、120min、 240min。采用Western Blot方法检测多种信号分子和自噬蛋白的表达;通过瞬时转染GFP-LC3质粒的方法,激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬的水平。***干扰TLR2对巨噬细胞吞噬金葡菌及自噬诱导的影响评估TLR2 siRNA作用于RAW264.7细胞的同时,给予金葡菌刺激1h。吞噬试验观察细胞吞噬金葡菌;通过瞬时转染GFP-LC3质粒的方法,激光共聚焦显微镜观察细胞自噬的水平;同时,采用Western Blot方法检测吞噬和自噬蛋白的表达。3.靶向抑制JNK对巨噬细胞吞噬金葡菌及自噬诱导的影响评估JNK特异性抑制剂SP600125处理RAW264.7细胞的同时,给予金葡菌刺激1h。吞噬试验观察细胞吞噬金葡菌;通过瞬时转染GFP-LC3质粒的方法,激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬的水平;同时,采用Western Blot方法检测吞噬和自噬蛋白的表达。研究结果1.金葡菌刺激巨噬细胞活化多种信号通路及自噬RAW264.7细胞在金葡菌刺激作用下,P-JNK、P-ERK、P-p38 MAPKs, MyD88, P-Akt, GTP-Rac1的表达显著增加,在活化的MAPKs中,仅有JNK磷酸化水平的升高是以一种时间依赖性方式进行的;与此同时,金葡菌刺激RAW264.7细胞明显上调了自噬蛋白Beclin-1和LC3-II的表达,以及细胞中GFP-LC3点状颗粒的表达数量。***2对巨噬细胞吞噬金葡菌以及金葡菌诱导的自噬至关重要在TLR2 siRNA作用下,RAW264.7细胞吞噬金葡菌的能力显著降低,金葡菌刺激诱导的P-Akt、GTP-Rac1吞噬蛋白以及P-JNK的表达显著下调,但不减弱ERK、 p38的磷酸化;给予RAW264.7细胞siRNA沉默TLR2,金葡菌刺激细胞活化的自噬蛋白Beclin-1和LC3-II的表达水平明显降低,细胞中GFP-LC3点状颗粒的表达数量也相应的减少。***2依赖的JNK信号通路参与巨噬细胞吞噬金葡菌以及金葡菌诱导的自噬JNK抑制剂作用RAW264.7细胞减弱了细胞吞噬金葡菌的能力,下调了金葡菌刺激诱导的吞噬蛋白P-Akt和GTP-Rac1的表达;给予RAW264.7细胞SP600125处理,金葡菌刺激细胞活化的自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达水平降低,细胞中GFP-LC3点状颗粒的表达数量也相应的减少。TLR2 siRNA和SP600125同时作用与TLR2 siRNA单独作用相比,并未进一步降低RAW264.7细胞吞噬金葡菌的能力以及金葡菌刺激细胞活化的自噬水平。研究结论1.金葡菌刺激巨噬细胞诱导了吞噬和自噬活化。***2通过JNK信号通路介导了金葡菌刺激巨噬细胞诱导的吞噬和自噬,是一种新的可能的天然免疫调节机制。2.靶向抑制TLR2基因敲除小鼠JNK信号对变应性气道炎症及自噬活化的影响研究背景据世界卫生组织(WHO)评估,全世界超过3亿人罹患支气管哮喘(简称哮喘)。目前,已有的TLR2激活的天然免疫反应在哮喘发病中的作用研究仍存在争议。另外,哮喘发病过程中自噬的发生情况也不十分清楚。考虑到是哮喘最具特征性的临床表现之一,TLR2在变应性气道炎症中的作用,和对相关自噬活化的影响及潜在的信号机制有待阐明。研究目的1.观察变应性气道炎症模型中TLR2的表达情况。2.探讨TLR2及下游潜在信号级联在小鼠变应性气道炎症及自噬活化中的作用。研究方法1.建立变应性气道炎症模型,检测野生型小鼠肺组织中TLR2的表达卵清蛋白(OVA)致敏和激发野生型小鼠。采用Western Blot方法检测野生型小鼠肺组织中TLR2的蛋白表达水平;通过免疫荧光的方法,荧光倒置显微镜观察野生型小鼠气道TLR2的表达。***2基因敲除对小

关键词： 奶牛子宫内膜炎   脂多糖   鱼腥草素钠   NF-κB   MAPK  

摘要： 奶牛产后子宫内膜炎是由致病微生物上行感染母牛生殖道而引起的炎症。大肠杆菌是主要的致病菌之一,但其发病机制并不十分清楚。鱼腥草素钠(Sodium houttuyfonate, SH)是鱼腥草有效成分鱼腥草素的亚硫酸氢钠加成化合物,稳定性强,临床上用于治疗炎症疾病。目前鱼腥草素钠对抗炎症疾病的分子机制还不完全清楚,我们假设NF-κB充当关键调解物,从体外细胞水平探明其抗炎分子机制。并在体内对小鼠子宫内膜炎模型和奶牛子宫内膜炎的疗效进行观察。从而深入研究SH抗炎活性和其药理机制。 本研究运用体外原代培养细胞的方法,分离鉴定了奶牛子宫内膜上皮细胞和基质细胞。并对培养获得的原代细胞进行了不同染色方法的形态学观察和透射电镜观察。在此基础上,建立LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(bEECs)炎症模型。为了评估SH的体内外抗炎作用,首先用MTT法和LDH分析检测梯度浓度的SH对bEECs的毒性;其次用ELISA和qRT-PCR方法分别从蛋白分泌和nRNA表达两个水平检测细胞炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8,同时用western blotting的方法检测细胞内炎症信号转导通路MAPKs/NF-κB的关键蛋白ERK、JNK、p38、IκBα和NF-κBp65;最后用临床诊断的方法评估SH治疗小鼠和奶牛子宫内膜炎的疗效。 研究表明,运用组织培养和复合酶消化结合差时技术可以分离出纯度很高的bEECs,为后续的实验提供了足够的细胞。不同染色方法对子宫内膜细胞观察可知其细胞结构清晰,胞浆胞膜分明;超微结构观察结果显示,体外培养的子宫内膜上皮细胞可清晰看到微胞凸,胞内各种细胞器清晰可见。细胞毒性实验显示,SH (120μg/mL)浓度范围内对bEECs无毒副作用;15,30and60μg/mL高中低浓度的SH可以抑制LPS诱导bEECs的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的蛋白分泌水平,并呈浓度依赖关系;对炎性细胞因子的mRNA有同样的调控作用。而且,在LPS激活的bEECs中,SH抑制了IκBα的降解和NF-κB p65的磷酸化;压制了ERK、JNK、p38磷酸化水平。体内疗效实验证实,SH能够显著减弱模型组小鼠子宫内膜的炎性反应,子宫指数与正常对照组差异不显著,镜检子宫组织显示显微结构基本正常,表明SH对实验性子宫内膜炎模型小鼠有很好的治疗效果。用SH治疗奶牛临床型子宫内膜炎受孕率达到86%,发情头数占总头数的91.7%。而用土霉素治疗奶牛受孕率为50%,发情头数占总头数的67%。在发情头数和受孕率上SH的治疗效果优于土霉素。

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒   nsp11   nsp1α   NLRP3炎症小体   IL-1β  

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是严重危害养猪业的重大病毒性传染病,其致病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抑制宿主的天然免疫和特异性免疫反应,引起机体免疫抑制,造成持续性感染,从而给该病的防控带来困难。PRRSV感染可以引起机体强烈的间质性肺炎,诱导肺部许多促炎性细胞因子的产生。最近的研究表明PRRSV可以激活NLRP3介导的炎症反应,诱导促炎性细胞因子IL-1β的分泌。炎症反应是机体天然免疫系统中抵抗病毒入侵的坚固防线,但是对PRRSV如何调控炎症反应从而实现免疫逃逸的研究还未见报道。因此,本篇论文对PRRSV调控NLRP3介导的炎症反应的分子机制加以研究。其主要内容和结果如下:***激活NLRP3炎症小体的动态变化情况。用PRRSV BJ-4株在不同时间点(12 h、24 h、48 h、72 h)感染猪肺泡巨噬细胞(Porcine alveolar macrophages,PAMs),利用荧光定量PCR和ELISA方法检测NLRP3介导的炎症反应信号通路中重要组分的mRNA水平和IL-1β的蛋白水平,发现NLRP3、ASC、procaspase-1和pro-IL-1β的mRNA水平和细胞上清中的IL-1β在PRRSV感染早期都呈现上升趋势,并分别在24 h和48 h达到峰值,但是在感染晚期NLRP3、ASC、procaspase-1和pro-IL-1β的mRNA水平急剧下降,并与空白对照组水平相当,IL-1β的蛋白水平在之后的阶段也呈现出下降趋势。而不同剂量PRRSV感染PAMs的实验发现,PRRSV上调的procaspase-1、pro-IL-1β的mRNA水平和IL-1β的蛋白水平呈明显的剂量依赖效应。这些实验结果表明PRRSV通过上调NLRP3信号通路蛋白而促进早期炎症反应,但在感染晚期,PRRSV可能通过某种机制而抑制了NLRP3介导的炎症反应。因此接下来本研究首先确证PRRSV激活的炎症反应是NLRP3炎症小体所依赖的,然后筛选鉴定PRRSV编码抑制炎症反应的组分,最后探究PRRSV感染早期促进炎症反应的分子机制。***诱导IL-1β的分泌依赖于NLRP3炎症小体。分别利用NLRP3的特异性抑制剂Glyburide以及针对NLRP3和ASC的特异性siRNAs对NLRP3炎症小体进行抑制和干扰,结果发现,Glyburide能够显著抑制由PRRSV BJ-4株诱导的IL-1β的分泌,而且,针对NLRP3和ASC的特异性siRNAs可以显著下调该基因的表达,并且也能够显著抑制由PRRSV诱导的IL-1β的分泌。***非结构蛋白nsp11和nsp1α是抑制NLRP3炎症小体介导的IL-1β分泌的病毒组分。分别将nsp11及其核酸内切酶活性缺失的突变体和nsp1α及其缺失或突变N端锌指(ZF)结构的突变体转染PAMs细胞,结果发现,nsp11和nsp1α都能够抑制由LPS引起的pro-IL-1βmRNA水平的升高以及由LPS和尼日利亚菌素(Nigericin)引起的IL-1β蛋白水平的升高。进一步的突变实验结果显示nsp11的核酸内切酶活性以及nsp1α的N端锌指结构对于其抑制作用是必需的。然后,在已重构NLRP3炎症小体模型的HEK293T细胞上转染PRRSV nsp11和nsp1α及其突变体的真核表达质粒,得到与PAMs细胞上相一致的实验结果,进一步确定nsp11和nsp1α对NLRP3炎症小体介导的IL-1β表达的抑制作用。***上调的miR-373能促进炎症反应。我们的前期实验发现PRRSV感染MARC-145细胞后上调宿主miR-373的表达,而进一步的实验发现,在LPS和Nigericin共同刺激的PAMs细胞上过表达miR-373,可以显著增加NLRP3炎症小体介导的IL-1β的分泌以及促进NLRP3、procaspase-1和pro-IL-1βmRNA水平的升高,从而促进炎症反应的发生。另外,PRRSV感染PAMs细胞后可以显著下调miR-373的靶基因TGFBR2(免疫抑制性受体)的表达。综上所述,PRRSV感染激活NLRP3炎症小体并产生IL-1β等促炎性细胞因子来抵御病毒入侵和保护机体的同时,病毒自身又编码能拮抗NLRP3炎症小体活化的蛋白——nsp11和nsp1α,抑制炎症反应的发生,从而使其能够在宿主体内持续增殖。另外,首次发现miR-373可以促进炎症反应的发生,可能参与调控PRRSV引起的天然免疫反应过程。PRRSV感染可以显著上调miR-373并下调其靶基因TG

关键词： 重症肺炎   头孢哌酮   舒巴坦   加替沙星  

摘要： 目的:分析重症肺炎患者采用头孢哌酮、舒巴坦联合加替沙星治疗对其炎症状态的影响。方法观察组则以头孢哌酮-舒巴坦联合加替沙星进行治疗,头孢哌酮-舒巴坦3g/次的用量治疗,q8h.。加替沙星则以0.4g的用量治疗,q.d。对照组以头孢哌酮-舒巴坦3g/次的用量治疗,q8h;均10d1个疗程。前后的血清炎性应激指标比较。结果两组治疗前后的血清PCT及IFN-γ水平比较治疗前对照组的血清PCT及IFN-γ水平分别为(6.50±1.33)μg/L及(30.59±4.68)pg/ml,观察组分别为(6.52±1.32)μg/L及(30.62±4.66)pg/ml,两组比较,>0.05。治疗后对照组分别为(4.27±0.65)μg/L及(20.76±3.53)pg/ml,观察组分别为(1.88±0.36)μg/L及(15.45±2.78)pg/ml。治疗后观察组低于对照组治疗后及本组治疗前,<0.05。治疗前对照组的血清PCT及IFN-γ阳性例数为48例和46例,阳性率为96.00%和92.00%,观察组阳性例数为50例和46例,阳性率为100.00%和92.00%,两组比较,>0.05。治疗后对照组阳性例数为24例和20例,阳性率为48.00%和40.00%,观察组阳性例数为6例和4例,阳性率为12.00%和8.00%,治疗后观察组低于对照组治疗后及本组治疗前,<0.05。结论联合应用加替沙星较单用头孢哌酮-舒巴坦在控制患者的血清PCT及IFN-γ水平与阳性率方面效果更为突出,说明联合用药对患者疾病炎性状态的控制效果更好。

关键词： 不稳定型心绞痛   盐酸川芎嗪   辅酶Q10   炎症反应   免疫功能  

摘要： 目的观察盐酸川芎嗪联合辅酶Q10对不稳定型心绞痛患者炎症反应和免疫功能的影响。方法将不稳定型心绞痛患者215例随机分为联合用药组110例和对照组105例。联合用药组在常规治疗基础上给予盐酸川芎嗪80 mg/d和辅酶Q1010 mg/d静点,对照组仅给予常规治疗。治疗2周后观察2组临床疗效,检测治疗前后炎性因子白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,免疫球蛋白Ig A、Ig G、Ig M及免疫细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平。结果联合用药组的有效率为89.09%,对照组为78.10%,联合用药组有效率高于对照组(P<0.05);联合用药组心电图改善率为88.18%,高于对照组的75.24%(P<0.05);2组治疗后IL-2、TNF-α、hs-CRP水平较治疗前均明显降低(P均<0.05),且联合用药组治疗后各指标水平均低于同时点对照组(P均<0.05);治疗后2组Ig A、Ig G、Ig M、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均明显降低;与对照组比较,除CD4+/CD8+外,各指标水平联合用药组降低更为明显(P均<0.05)。结论盐酸川芎嗪联合辅酶Q10用于治疗不稳定型心绞痛效果良好,具有抑制全身炎症反应、改善免疫功能的作用。

关键词： 早期免疫型肠内营养   全身炎症反应综合征   炎症细胞因子   免疫球蛋白  

摘要： 目的:观察早期免疫型肠内营养治疗全身炎症反应综合征的临床疗效、血清炎症细胞因子及免疫球蛋白水平的变化。方法:选择我院重症医学科(ICU)全身炎症反应综合征患者70例,按随机数字表法分为对照组(34例)和试验组(36例)。两组一般治疗措施相同,对照组给予常规肠内营养,试验组在常规营养支持基础上每日添加生理需要量的鱼油、谷氨酰胺及精氨酸。两组均治疗7 d。两组于治疗前后行急性生理与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)和SIRS评分,检测C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1、IL-6I、L-8)、免疫球蛋白(Ig G、Ig A、Ig M)水平。结果:两组治疗前APACHEⅡ、SIRS评分,CRP、TNF-α、IL-1、IL-6I、L-8、Ig G、Ig A、Ig M水平比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。与对照组比较,试验组治疗后APACHEⅡ、SIRS评分,CRP、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8下降更为显著(均P<0.05);Ig G、Ig A、Ig M显著增高(均P<0.05)。结论:早期免疫型肠内营养能提高患者免疫功能,减轻全身炎症反应程度,促进患者康复。

关键词： 羊膜上皮细胞   羊膜间充质细胞   脐带间充质细胞   M1型巨噬细胞   M2型巨噬细胞  

摘要： 目的比较人羊膜上皮细胞((human amniotic epithelial cell,H-AEC))、羊膜间充质细胞(human amniotic mesenchymal cell,HA-MSC)和脐带间充质细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSC)分泌的细胞因子对脂多糖刺激巨噬细胞系RAW264.7炎症状态的影响。方法将LPS刺激的RAW264.7细胞炎症模型作为对照组,比较H-AEC、HA-MSC、UC-MSC和RAW264.7共培养或条件培养基培养RAW264.7对RAW264.7炎症状态的影响。比较各组RAW264.7细胞的迁移能力;检测各组细胞分泌一氧化氮(NO)的水平;用实时定量多聚酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞经典激活的巨噬细胞(classically activated macrophage,M1 macrophage)相关的促炎基因如白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死基因а(TNFа)、一氧化氮合成酶-2(NOS-2)以及M2 macrophage相关的抑炎基因如精氨酸酶(Arg-1)、甘露糖受体基因CD206、B类清道夫受体CD36)表达情况。结果 (1)H-AEC、HA-MSC、UC-MSC处理后RAW264.7的迁移率分别为14.7%±4.5%、9.6%±0.7%、13.0%±0.9%,与对照组(31.1%±11.0%)相比,3种细胞的条件培养基处理后RAW264.7的迁移率均降低,差异具有显著性(P<0.05);(2)H-AEC、HA-MSC、UCMSC共培养后RAW264.7细胞分泌NO的水平分别为24.26±0.72、44.52±2.51、42.25±0.76μmol/L,与对照组(45.65±1.78μmol/L)相比,H-AEC组细胞分泌的NO有显著性下降(P<0.05);(3)促炎基因与抑炎基因的表达改变:(A)H-AEC处理组促炎基因IL-1β、TNFа、NOS-2、INFβ的表达下调,与对照组相比有显著差别;HA-MSC、UC-MSC处理组促炎基因INFβ表达下调显著,其余基因均上调表达;抑炎相关基因如Arg-1、CD206、CD36均上调;(B)3组细胞干预后抑炎症相关基因Arg-1、CD206、CD36表达均上调,与对照组有显著差异。结论人羊膜上皮细胞、羊膜间充质细胞和脐带间充质细胞可以促进巨噬细胞向M2型分化,但其效果和机制存在不同。

关键词： 侵袭性肺曲霉病   免疫抑制   小鼠   过度炎症反应  

摘要： 目的免疫抑制小鼠经气管切开注入烟曲霉孢子悬液建立侵袭性肺曲霉病（IPA）动物模型并动态观察其肺组织病理改变，以期为IPA研究提供在体模型及观察IPA疾病发展过程。方法C57BL／6J小鼠经腹腔注射250mg／kg环磷酰胺×2次构建免疫抑制状态；麻醉状态下于小鼠颈部切开-0．3cm小口，分离出气管并接种烟曲霉临床株；动态观察小鼠一般情况、生存率、肺部真菌负荷、肺组织大体及病理变化。结果小鼠感染烟曲霉后第4天死亡率为100％；感染后第1天肺部曲霉孢子含量最高，后逐渐降低；肺组织大体表现为出血、水肿及白色菌团结节，呈逐渐加重趋势；病理发现肺泡内炎症细胞渗出，以淋巴细胞浸润为主，肺组织大量出血、坏死，随时间延长而加重，最终正常肺泡结构消失。结论通过环磷酰胺腹腔注射使小鼠免疫抑制，经气管切开成功建立了IPA小鼠模型，过度炎症反应是其死亡的重要原因。