关键词： 既病防变   加味黄芩汤   炎症性肠病癌变   IL-6/STAT3信号通路  

摘要： 目的： 根据中医“既病防变”理论,从整体、分子及细胞水平探讨加味黄芩汤对肠道炎症及肿瘤的发生、发展的影响及与IL-6/STAT3通路调控作用的关系。明确IL-6/STAT3信号通路与慢性炎症及癌变的关系,达到预防炎症性肠病癌变的目的,最终降低结直肠癌的发病率。为防治结直肠癌提供新的研究思路,探索新的防治方法。 方法： 1.实验一：将大鼠70只随机分成正常对照组、模型组、加味黄芩汤组、美沙拉嗪组、黄芩汤组、马齿苋组,每组10只,参照文献方法制作TNB S诱导的结肠炎大鼠模型。结肠组织做病理切片；放射免疫检测血清IL-6含量；免疫组化染色方法检测MPO；酶联免疫分析法检测sIL-6Rα、gp130； RT-PCR方法检测STAT3、IL-6mRNA。 2.实验二：将小鼠75只,随机分成正常对照组、模型组、黄芩汤组、加味黄芩汤组、马齿苋组,每组15只,依据文献复制小鼠结肠炎相关结肠癌(CAC)模型。组织病理学观察；细胞凋亡指数；ELISA法检测MPO、TNF-α水平。 3.实验三：将小鼠50只,随机分为正常对照组、模型组、环磷酰胺组、黄芩汤组、加味黄芩汤组,每组10只,建立S180肉瘤接种建立荷瘤小鼠模型及小鼠结肠癌细胞株(CoCon-26)培养；体内抑瘤作用观察IR；T淋巴细胞增值：体外抑瘤作用：对小鼠结肠癌细胞株CoCon-26的作用。 结果： 1.加味黄芩汤能够改善炎症性肠病大鼠进食量及排便,减轻肠粘膜水肿,与模型组、黄芩汤组、马齿苋组、美沙拉嗪组比较差异具有显著性。在血清IL-6、肠组织MPO及血清sIL-6Ra、gp130含量,STAT3、IL-6mRNA的表达水平等方面,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01),黄芩汤组、马齿苋组、美沙拉嗪组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。黄芩汤组、马齿苋组、美沙拉嗪三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 2.加味黄芩汤能减轻炎症性肠病癌变小鼠结肠粘膜水肿,减少炎症反应,与模型组、与黄芩汤组、马齿苋组比较差异具有显著性。在对细胞凋亡指数、MPO及TNF-α的影响方面,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01),与黄芩汤组、马齿苋组比较差异具有统计学意义(P<0.05),黄芩汤组与马齿苋组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 3.加味黄芩汤能够促进T淋巴细胞增殖,抑制荷瘤小鼠体内肿瘤生长,抑制小鼠结肠癌细胞CoCon-26的增殖能力,加味黄芩汤组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01),与黄芩汤组、马齿苋组比较差异具有统计学意义(P<0.05),与环磷酰胺组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论： 1.加味黄芩汤能够改善大鼠进食量及排便,进一步减轻肠粘膜水肿；通过降低大鼠血清IL-6、肠组织MPO及血清sIL-6Rα、gp130含量,进一步减轻sIL-6Rα与IL-6形成复合物而引起的炎症反应；进一步通过IL-6/STAT3信号通路,下调大鼠肠组织STAT3、IL-6mRNA的表达水平,起到抑制炎症的发生。 2.加味黄芩汤能改善结肠粘膜水肿,减少炎症反应,降低MPO、NF-α水平,抑制细胞凋亡。说明加味黄芩汤通过有效抑制炎症反应,减轻细胞水肿,抑制细胞凋亡,进一步抑制炎症发生癌变。这可能是加味黄芩汤抑制炎症性肠病癌变的机制之一。 3.加味黄芩汤能够促进T淋巴细胞增殖,促进机体细胞免疫,提高机体免疫功能,有效抑制荷瘤小鼠体内肿瘤生长。可以抑制小鼠结肠癌细胞CoCon-26的增殖能力,减少肿瘤的发生。

关键词： 维持性血液透析   褪黑素   睡眠障碍   氧化应激   炎症  

摘要： 目的:维持性血液透析(Maintenance hemodialysis,MHD)患者常处于氧化应激(Oxidative stress)及微炎症状态,多合并睡眠障碍。松果体分泌的褪黑素(Melatonin,MT)除具有调节人体觉醒功能外还具有强大的抗氧化、抗炎作用。本研究通过检测维持性血液透析患者血清褪黑素水平、睡眠质量、氧化应激和炎症水平,来探讨血清褪黑素水平与维持性血液透析患者睡眠障碍、氧化应激及微炎症状态的关系。方法:选择42例维持性血液透析患者,于透析前空腹抽取静脉血,以同期查体的20例健康志愿者为正常对照组。采用ELISA检测血清褪黑素(Melatonin,MT),白介素6(Interleukin 6,IL-6)水平;采用比色法检测丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(Nitric oxide,NO)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathion peroxidase,GSH-Px)水平;全自动生化仪检测肾功能、C反应蛋白(C reactive protein,CRP)等指标。运用匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)作为评价MHD患者睡眠质量的指标。结果:1 MHD患者组与正常对照组比较MDA(5.75±1.35 VS 2.80±0.51nmol/L)和NO(27.62±17.32 VS 10.82±4.51μmol/L)水平均显著增加(P<0.01),而MT(20.30±2.87 VS 24.85±2.51pg/m L)、SOD(74.40±11.07 VS 85.90±10.44U/m L)和GSH-Px(65.56±14.67 VS 79.26±14.61 U/m L)水平均显著降低(P<0.01)。与正常对照组比较,MHD患者IL-6(24.76±4.43 VS 9.59±1.01pg/m L)和CRP(8.51±6.56 VS 2.41±0.09mg/L)水平均明显高于健康对照组(P<0.01)。MHD患者PSQI总分(17.5±1.29),提示MHD患者MT水平降低,氧化应激、炎症水平增加,并存睡眠障碍。2以血清褪黑素水平为因变量,以氧化应激指标(MDA、NO、SOD和GSH-Px)为自变量进行多元线性回归分析,多元回归方程为MT=20.587-1.209 MDA-0.012NO+0.076SOD+0.02GSH-Px。提示血清褪黑素水平可能与MDA和NO呈负相关,可能与SOD和GSH-Px呈正相关。3以血清褪黑素水平为因变量,以炎症指标(IL-6和CRP)为自变量进行多元回归分析。多元回归方程为MT=30.126-0.331(IL-6)-0.192CRP。提示血清褪黑素水平可能与IL-6和CRP呈负相关。4以血清褪黑素水平为因变量,以PSQI为自变量进行一元回归分析。一元回归方程为MT=29.207-0.65PSQI。提示血清MT水平下降可能与睡眠质量差有关。结论:1 MHD患者的MT水平显著下降,氧化应激和炎症水平显著增加,并存在睡眠障碍。2 MHD患者血清褪黑素水平与氧化应激、炎症及PSQI呈负相关。提示血清褪黑素水平降低可能由氧化应激、炎症导致,MHD患者睡眠质量差可能是由血清褪黑素水平降低引起。

关键词： 气道炎症   中性粒细胞   炎症小体   IL-1β   L-17A+λδT细胞  

摘要： 背景支气管哮喘是一种复杂的气炎症反应综合征,以气道阻塞、气道炎症和气道高反应性为特点。难治性哮喘以中性粒细胞气道炎症为主。臭氧暴露是诱导中性粒细胞气道炎症的方法,但是其具体机制尚未明确。此外,臭氧暴露还可以导致哮喘患者急性发作。臭氧介导的气道炎症的特点是中性粒细胞浸润、气道高反应性以及前炎症因子的释放,如TNFα、IL-6、MIP-21-4。目前的很多研究表明,T细胞在哮喘的发生和发展过程中发挥了重要的作用。T细胞可以通过产生细胞因子介导炎症细胞聚集和气道高反应性的发生。Th17细胞是近年来发现的不同于Thl和Th2细胞的另一种CD4+T细胞的新亚型,有调查发现哮喘患者体内IL-17水平升高。IL-17是一种促炎因子,可以调节中性粒细胞反应。临床研究发现,IL-17A与IL-17F的表达水平与哮喘病人的病情严重程度呈正相关,重度哮喘患者血清中IL-17的水平较轻、中度患者明显增高,激素抵抗的重症哮喘患者IL-17A的水平与气道中性粒细胞数量呈正相关。炎症小体9-11是由胞浆内多蛋白复合物,是天然免疫系统的重要组成部分。炎症小体能够识别PAMPs或者宿主来源的DAMPs,招募和激活促炎症蛋白酶Caspase-19。活化的Caspase-1切割IL-1p和IL-18的前体,产生相应的成熟细胞因子9-11。IL-1p是IL-1家族的成员之一,作为一种重要的炎症调节因子参与多种疾病的发生发展。炎症小体参与很多与IL-1β相关的疾病如cryopyrin-associated periodic综合征、肠炎以及2型糖尿病13。IL-1β在抗感染免疫与慢性炎症相关的组织损伤中都起重要作用。IL-1β联合IL-6以及IL-23可通过促进转录因子IFR4和RORyt的表达促进Th17分化¨。Caspase-1和IL-1信号通路都与臭氧介导的中性粒细胞气道炎症有关”,但其具体机制未明。γδT细胞是一种T细胞的亚群,表达TCRyδ,是区分于与αβT细胞的另一种T细胞亚型16-18。γαTδT细胞属于非MHC限制性免疫细胞,可不通过抗原识别过程直接识别抗原,但识别范围较窄。外周血的γδT细胞占总T细胞数量的5%以下。组织γδT细胞主要分部在肺、皮肤、尿道以及小肠的粘膜中。78T细胞参与了很多生物学过程如感染性疾病,自身免疫性疾病,及抗肿瘤免疫19,20。分泌IL-17的78T细胞在肿瘤生长21及肾损伤22中都起关键调节作用23。在COPD24和过敏性疾病患者25体内,γδT细胞比例增高。已有研究报道,γδT细胞参与臭氧诱导的中性粒细胞气道炎症,但其具体机制未明。由于炎症小体-IL-1信号通路及IL-17均在中性粒细胞气道炎症中起关键调节作用,本课题假设臭氧可以活化炎症小体,促进成熟型IL-1p产生。微环境中的IL-1β可以活化γδT细胞分泌IL-17,最终导致中性粒细胞气道炎症。本研究在臭氧诱导的中性粒细胞气道炎症模型中,通过整体模型、体外细胞培养等方法,阐明炎症小体在哮喘发病中对IL-17+γδT细胞/中性粒细胞炎症调控的关键分子机制,为开发研究治疗气道慢性炎症性疾病新的药物靶点提供理论依据。第一部分臭氧诱导中性粒细胞气道炎症和IL-17A+γδT细胞目的：建立臭氧诱导的中性粒细胞气道炎症模型,观察IL-17A的变化,寻找IL-17A的分泌来源。方法：C57/BL6小鼠(雌性,6-8周)随机分为2组,每组5-7只小鼠。分别予以空气(Air)和臭氧(Ozone)暴露72小时,停止暴露后24小时处死小鼠。取小鼠BALF,进行细胞总数与细胞分类计数。Elisa方法测定肺组织炎症因子的表达。BCA法测定BALF蛋白浓度。病理切片HE染色观察气道炎症细胞浸润。提取肺组织淋巴细胞流式分析IL-17A+细胞的比例及其分泌来源。Ⅱ17a-/-小鼠臭氧暴露,观察其BALF炎症细胞、炎症因子及BALF,总蛋白的表达。结果：成功地构建了中性粒细胞气道炎症模型。小鼠BALF炎症细胞浸润明显增加,肺组织炎症因子IL-1β, IL-18, IL-17A, G-CSF, IP-10表达明显增加,BALF,总蛋白水平明显增加。臭氧诱导气道炎症的同时伴随着IL-17A+淋巴细胞的增多。分泌IL-17A的淋巴细胞主要为TCRγδ+γδT细胞,而不是TCRβ+细胞。Il17a-/-小鼠阻断IL-17A可以有效地抑制臭氧诱导的中性粒细胞气道炎症和炎症因子分泌。结论：臭氧暴露可以成功地诱导中性粒细胞气道炎症,这种气道炎症是由IL-17A和IL-17A+γ8T细胞介导的。第二部分臭氧暴露活化炎症小体和IL-1R通路目的：探讨臭氧介导中性粒细胞气道炎症的分子机制。方法：C57/BL6小鼠分为Air组和Ozone组,Ozone组小鼠暴露与0.7 ppm臭氧环境中,分别在暴露中6h、12h、24h、

关键词： 甜菜碱   高果糖饮食   代谢综合征   下丘脑炎症   非酒精性脂肪肝   内质网应激  

摘要： 研究背景:研究表明,高果糖饮食可诱发中枢神经炎症,与代谢综合征、非酒精性脂肪肝(NAFLD)等疾病的高发病率密切相关。下丘脑是中枢神经系统(CNS)调节饮食行为和机体能量代谢的主要区域。下丘脑炎症会引起中枢神经功能受损,并影响神经肽转运,导致机体肥胖及相关代谢性紊乱疾病。本课题组前期研究发现营养素甜菜碱通过对高果糖模型大鼠肾脏核转录因子κB(NF-κB)和NOD样受体蛋白3炎症小体(NLRP3)的抑制作用,缓解高果糖饮食所诱导的代谢综合征大鼠肾脏炎症反应、胰岛素抵抗和脂质堆积等,进而发挥其肾保护作用。本文进一步研究甜菜碱对高果糖模型大鼠非酒精性脂肪肝和中枢下丘脑炎症的改善作用及分子机制,为甜菜碱用于防治营养性代谢综合征提供理论依据。研究方法:雄性SD大鼠每天饮用10%果糖水4周后,给予甜菜碱(62.5,125和250mg/kg)4周。测定动物体重、日常摄食量与脂肪堆积量;采用商品试剂盒测定血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、葡萄糖、胰岛素、瘦素等含量;采用商品试剂盒测定肝脏组织中糖元、TG和TC含量;采用ELISA法测定血清中白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)含量;采用Western blot方法检测下丘脑组织中POMC、黑素皮质素受体4(Mc4R)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase1)、IL-1β、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、IκB激酶β(IKKβ)、核因子κB抑制蛋白α(IkBα)、核转录因子κB(NF-κB)/(p-NF-κB)、组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)等蛋白表达水平;采用Western blot方法检测肝脏组织中肝脏X受体(LXRα)、类固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK/p-PERK)、真核翻译启动因子2亚单α(Eif2α)/(p-Eif2α)、细胞核转录因子X盒结合蛋白(XBP1)、转录因子6(ATF6)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACCα)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)、脂肪合成酶(FAS)、脂肪分化相关蛋白(ADFP)、过氧化物酶体增殖物激活型受体α(PPARα)、蛋白激酶 B(AKT)/(p-AKT)、叉头转录因子(FOXO1)/(p-FOXO1)、丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)/(p-P38 MAPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/(p-mTOR)、NF-κB/p-NF-κB、NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase1)、IL-1β、PPARα等蛋白表达水平;采用Q-PCR方法检测下丘脑组织中POMC、刺鼠色蛋白相关蛋白(AgRP)、神经肽Y(NPY)等mRNA表达水平;采用Q-PCR方法检测肝脏组织中LXRα、PPARα、SREBP-lc、葡萄糖-6-磷酸酶(G6pc)、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(Pck1)、苹果酸脱氢酶(Mdh1)、可溶性苹果酸酶(Mel)等mRNA表达水平;采用免疫荧光化学法检测下丘脑弓状核(ARC)区域POMC、Mc4R、GFAP和IκBα等阳性细胞表达的变化;采用H&E和油红O染色法观察肝脏组织病理学变化。研究结果:研究发现,高果糖饮食诱导大鼠出现肥胖、高胰岛素血症、高瘦素血症和高甘油三脂血症以及系统性炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α高表达等代谢综合征病理特征,并伴随非酒精性脂肪肝的发生。高果糖饮食抑制动物肝脏LXRα和PPARα表达,促进内质网(ER)应激反应标志物蛋白p-PERK、p-eIF2α、XBP1和ATF6等过表达,提高SREBP-1c表达,上调脂质合成过程中关键酶ACCα、SCD1和FAS以及脂滴合成相关蛋白ADFP的表达上调,这可能是引起肝脏脂质堆积的关键途径;高果糖饮食还提高模型动物肝脏AKT、FOXO1、p38 MAPK和mTOR等蛋白表达,抑制G6pc和Pck1表达,促进Mdhl和Mel表达,引起肝脏糖原含量下降;同时激活肝脏NF-κB信号,上调肝脏NLRP3、ASC和Caspase1蛋白表达,并诱导肝脏IL-1β、IL-6和IL-18高表达。甜菜碱能提高高果糖模型大鼠肝脏LXRα和PPARα的表达,下调p-PERK、p-eIF2α、XBP1和ATF6表达;抑制SREBP-1c、ACCα、SCD1和FAS以及ADFP高表达,改善模型动物肝脏脂质堆积;同时抑制AKT、FOXO1、p38 MAPK和mTOR等蛋白表达而改善高果糖模型大鼠肝脏糖异生作用。另一方面,甜菜碱可抑制高果糖模型大鼠肝脏NF-κB信号和NLRP3炎症小体的激活,降低IL-1β、IL-6和IL-18水平,提示甜菜碱通过下

关键词： 痤疮丙酸杆菌   脂磷壁酸   炎症   miR155   IL-29   miR143   TLR2  

摘要： 痤疮在青少年人群中成为一种流行病,而痤疮病情的反反复复更是使患有痤疮的病人痛苦不堪,因此寻找到有效治疗痤疮的药物迫在眉睫。已知痤疮的发生主要是由痤疮丙酸杆菌(Propionibacteriumacnes,***)在毛囊中大量增殖造成的,而我们的前期研究发现革兰氏阳性菌细胞壁成分脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)可以免疫调节***引起的炎症,但对其调节机制并不清楚。本论文首先研究***在皮肤角质形成细胞中诱导炎症因子表达的分子机制,发现***诱导前炎症因子的表达依赖于TLR2,而miR155和IL-29的沉默会抑制***诱导的前炎症因子TNF-α和IL-6的表达,并且TLR2的缺失会降低***诱导的miR155和IL-29的表达,miR155的沉默会抑制***诱导的IL-29的表达。这些研究结果说明***通过激活TLR2-miR155-IL-29信号通路诱导角质形成细胞中前炎症因子TNF-α和IL-6的表达。另外,我们发现LTA能够抑制***诱导的炎症。在将miRNA成熟的关键酶Dicer沉默时发现miRNA在LTA抑制的炎症中发挥重要作用。通过筛选发现LTA抑制***诱导的炎症依赖于miR143。当将miR143沉默时,***诱导的炎症上调,而过表达miR143时,***诱导的炎症下调。另外,将miR143 inhibitor转染细胞并以LTA和***刺激时,LTA抑制炎症的能力明显的减弱。进一步研究发现LTA通过诱导miR143与TLR2 3'UTR相互作用来抑制TLR2的表达,从而达到抑制***诱导的炎症的目的。最后,我们发现LTA在早期诱导TLR2的表达,在3h以后开始抑制TLR2的表达,这存在一个时间差上的问题,即LTA作为TLR2的配体在3h以前诱导TLR2的表达,LTA激活TLR2后进一步快速地诱导miR143的表达,当miR143的表达量积累到一定程度时,将有效地靶向TLR2mRNA的3'UTR,从而降低了TLR2的表达。所以在LTA处理的后期,TLR2的表达量下降,miR143的表达也随之下降。综上所述,我们的研究证明了***通过激活TLR2-miR155-IL-29信号通路来诱导炎症因子的表达,而LTA前期通过激活TLR2来诱导miR143的表达,后期miR143靶向TLR2 3'UTR降低了 TLR2的表达,从而抑制了***诱导的炎症。本研究的开展首次揭示了 LTA抑制***诱导的炎症的关键点在于对其受体TLR2的调节,这一发现将为日后痤疮的治疗提供新的靶点。

关键词： 脂肪组织   炎症状态   心血管疾病   型糖尿病   巨噬细胞浸润   胰岛素抵抗   研究领域   细胞因子   细胞激活   慢性炎症   机体   关键步骤   分子机制   肥胖   病理作用   外周血   合并症   代谢性   靶组织   综述  

摘要： 肥胖及其合并症，包括2型糖尿病和心血管疾病，与机体全身及其特定靶组织的处于慢性低度炎症状态有关。最近的研究领域主要在于炎症在胰岛素抵抗的糖尿病心血管疾病分子机制及病理作用。脂肪组织的巨噬细胞浸润增多被认为是代谢性炎症的关键步骤。在慢性炎症的持续作用下，肥胖机体的外周血单核细胞激活并持续增多，促炎反应引起血清中细胞因子增多。本文对脂肪组织炎症进行综述。

关键词： 肺炎支原体肺炎   探讨应用   皮质激素治疗   免疫炎症反应   糖皮质激素   肺炎支原体感染   大环内酯类抗生素   公共卫生学   职业卫生   支气管炎   医学专业   细胞亚群   细胞免疫   通讯作者   体液免疫   免疫作用   免疫抑制   免疫逃逸   免疫调节   临床症状  

摘要： 肺炎支原体是一种介于细菌与病毒之间的微小非活性生长的微生物，是目前支气管炎、肺炎的重要病原之一，小儿肺炎支原体肺炎的发病率近年来逐渐增加，不仅能引发呼吸系统常见症状，并且可导致血液、神经、消化、泌尿、循环等多系统及皮肤病变。具有好发年龄提前、病程长、易反复的特点，成为儿科临床医生关注的热点和重点。大环内酯类抗生素依然是小儿肺炎支原体感染的首选抗生素。近年来有研究证实支原体感染与体液免疫、细胞免疫均有关，存在机体免疫逃逸、免疫调节、免疫抑制、免疫蓄积等多种免疫作用[1-2]。多数报道认为糖皮质激素可抑制肺炎支原体所致的免疫炎症反应，但不宜作为常规使用。所以进一步探讨应用糖皮质激素辅助治疗支原体肺炎时机体T细胞亚群的变化，是否可常规化应用糖皮质激素以尽快地缓解临床症状，促进炎症吸收。
　　通讯作者：金玉兰，（1973.11~），女，吉林，博士，副教授，河北联合大学公共卫生学院，职业卫生与职业医学专业。

关键词： 血管性痴呆   白介素-2   学习记忆能力   免疫炎症反应   发病机制  

摘要： 目的：通过对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马组织白介素-2（IL-2）的表达研究，探讨免疫炎症反应在血管性痴呆发病机制中的作用。　　方法：Wistar大鼠33只，体重250±20g，随机分为空白对照组，模型组及假手术组。模型组采用双侧颈总动脉结扎法（bilateral common carotid artery occlusion，2-VO）诱导血管性痴呆大鼠模型;假手术组造模过程同模型组，但不结扎颈总动脉。3组大鼠术后14天进行Morris水迷宫实验，检测各组大鼠逃避潜伏期，进行统计学处理;20天时将大鼠断头处死，完整剥取海马脑组织、固定，免疫组化检测海马组织IL-2表达。统计数据采取单因素方差分析(one-way ANOVA)和t检验。　　结果：模型组大鼠水迷宫实验第二天至第五天逃避潜伏期显著高于假手术组及对照组（P<0.05）;模型组大鼠海马组织IL-2表达量较假手术组及对照组显著增高（P<0.05）。　　结论：2-vo诱导的血管性痴呆大鼠模型的空间学习记忆能力明显下降;海马组织IL-2表达水平显著提高，提示IL-2及其介导的免疫炎症反应参与了血管性痴呆的发病过程。

关键词： 小肠干细胞   谱系追踪   炎性细胞   放射损伤  

摘要： 小肠绒毛是机体内增殖最活跃的组织之一,小肠粘膜上皮细胞终身在不断地自我更新,这一过程依赖小肠隐窝中的干细胞的持续增殖、分化取代外层的终末分化细胞来完成。当照射剂量<8Gy，隐窝细胞出现凋亡,照射剂量>14Gy,隐窝细胞消失,绒毛出现脱落。因此胃肠的放射损伤及恢复程度与隐窝细胞或者干细胞的损伤、再生密切相关。小肠干细胞分子表面标志的研究进展缓慢,一直制约着对小肠干细胞调控及胃肠损伤机制的研究。直到近几年来,利用基因小鼠模型和谱系追踪技术,才成功的鉴定到了多种小肠干细胞的分子表面标志,确定了小肠干细胞的位置和分群。目前鉴定的小肠干细胞主要分为2类,一类为静息干细胞,主要位于小肠隐窝基底部+4位,表面标志包括Bmi1, mTert, Hopx及Lrig1等,另一类为Lgr5标记的循环干细胞。其中,lgr5循环干细胞对辐射敏感,而辐射耐受的静息干细胞可在激活后补充循环干细胞和快速增殖的TA细胞。前期我们的研究结果表明,S1P1受体调节剂对小肠隐窝细胞有明显的保护作用。S1P1是磷脂类分子S1P的的G蛋白偶联受体,主要分布在血管内皮细胞和淋巴细胞上。在维持血管通透性和完整性、淋巴细胞发育和循环上有重要的作用。因此本实验第一部分主要应用带有小肠干细胞特征标志的模式动物,如小鼠、小鼠等,研究Lgr5标记的连续分裂ISCs和Bmi1标记的静态ISCs放射损伤特点,研究S1P1受体调节剂对放射后小肠干细胞组织重建的调控作用。首先我们培育并鉴定、鼠,然后通过他莫西芬诱导并在诱导后5d观察到荧光细胞从隐窝开始向绒毛顶尖处移动,由此建立了小肠干细胞分析检测方法。其次通过不同照射剂量的摸索观察放射对小肠干细胞的影响,发现在10Gy腹部照射和12Gy全身照射下,可观察到小肠干细胞在照射后从消失到再生的过程。随后研究了S1P1受体调节剂对不同照射剂量下小肠干细胞组织重建的调控作用,发现S1P1受体调节剂CYM5442对16Gy高剂量局部照射小鼠没有明显的治疗作用;在15Gy全身照射后3.5d CYM5442并不能有效的增加Lgr5+细胞的数量,但能有效的促进隐窝细胞的增殖。我们通过分离不同肠道组织(十二指肠、空肠、回肠、结肠),发现10Gy和12Gy全身照射下S1P1受体激动剂CYM5442能在照射后3.5d和7d提高各个肠段组织再生隐窝的数量。应用qPCR的方法检测了15Gy照射后干细胞相关基因(Lgr5、olfm4、mTert、Hopx、Lrig1、Bmi1、Ascl2)的表达,发现S1P1受体调节剂CYM5442在照后6h显著提高这些基因的表达、照后1d对mTert、Bmil等+4位基因依然有着提高的作用,照后3.5d对干细胞相关基因则影响不大。小肠粘膜在辐射诱导的免疫炎性反应中是高敏感的器官。小肠在受到放射损伤后会产生大量的细胞因子。因此在第二部分实验中我们应用流式细胞分析等技术重点观察天然免疫细胞如中性粒细胞、单核—巨噬细胞等在照后不同时间的变化,分析炎症免疫细胞浸润与放射损伤发生、发展的关系,并研究S1P1受体调节剂对炎性反应的调控作用。我们通过分离小鼠小肠固有层细胞,发现在15Gy全身照射后24h和48h,SlP1受体调节剂CYM5442能显著减少中性粒细胞的数量,但对其它类型的细胞群体没有影响。随后用qPCR的方法检测了15Gy照射后炎性因子相关基因(白介素类IL-1b、IL-6、IL-10、IL-12b,趋化因子Ccl2、Ccl5, Cxcl1、Cxcl2、Cxcl10,粘附分子Icaml、Vcaml)的表达,发现S1P1受体调节剂CYM5442在照射后6h抑制白介素类和趋化因子,提高粘附分子的表达。照射后1d反而提高白介素类和趋化因子,抑制粘附分子。照射后3.5d则对这些基因影响不大。我们通过S1P1受体调节剂对小肠干细胞组织功能重建机制以及放射引起的肠道组织炎性反应的研究,可以更好的揭示急性放射病发病新机制,同时也为基于靶点的抗放药物设计提供了基础。

关键词： 营养不良-炎症状态   营养不良-炎症评分   改良定量主观整体评估   生存质量   维持性血液透析  

摘要： 目的：研究维持性血液透析患者的营养不良-炎症状态的评估及其对生存质量的影响。方法：选择2014年1月-2015年1月在云南省肾脏病医院血液净化中心治疗≥3个月的符合入选标准的维持性血液透析患者130例为研究对象,行改良定量整体主观评估(MQSGA)和营养不良炎症评分(MIS),同时检测MHD患者的人体测量指标、生化指标、微炎症指标,运用生物电阻抗法行人体成分分析,分析MQSGA和MIS与各项指标的相关性,并比较两种方法对营养不良-炎症状态的评价效能。利用SF-36量表评估患者的生存质量,分析不同程度的营养不良-炎症状态对生存质量的影响,并探讨其影响因素。结果：1.一般情况：入选MHD患者130例(男/女：84/46),平均年龄46.80±14.34岁,平均透析龄34.88±31.07个月。其中慢性肾小球肾炎87例(66.92%),糖尿病肾病18例(13.85%),良性肾小动脉硬化症18例(13.85%),其他7例(5.38%)。2.入选患者的营养状况：按MQSGA的标准,130例MHD患者中,营养不良的患者98例,占75.4%,其中轻、中度营养不良95例,占73.1%,重度营养不良3例,占2.3%。按照MIS的标准,入选患者全部为营养不良,其中轻度营养不良78例,占60%,中度营养不良45例,占34.6%,重度营养不良7例,占5.4%。3.比较MQSGA、MIS对营养-炎症状态的评估：MQSGA和MIS的得分均与MHD患者的营养指标体质量指数、肱三头肌皮褶厚度、上臂肌围、白蛋白、铁蛋白、去脂体重、肌肉量、体脂肪量、握力呈负相关,MIS还与前白蛋白呈负相关(P<0.05);MQSGA口MIS均与炎症指标hs-CRP、IL-6呈正相关(P<0.05);除肱三头肌皮褶厚度外,MIS与各营养指标及炎症指标的相关系数均高于MQSGA。4.入选患者的炎症指标及与营养指标的相关性分析：将hs-CRP、IL-6、TNF-α与相关的营养指标做线性相关分析,结果显示hs-CRP和握力、前白蛋白呈负相关;IL-6和上臂肌围、白蛋白、前白蛋白呈负相关;TNF-α和前白蛋白、血红蛋白呈负相关(P<0.05)。5.营养不良-炎症状态对生存质量的影响：因MIS评分与各个营养指标和炎症指标的相关性更好,根据MIS得分将MHD患者的营养不良-炎症状态分为轻度、中度、重度三组,三组患者在SF-36总评分、PF、Pain、GH、EWB、SocF、Energ、生理领域、心理领域得分间的差异均有统计学意义,在RP、RE领域得分无统计学差异;进一步行两两比较,重度组在SF-36总评分、PF、Pain、GH、EWB、 SocF、Energ、PH、MH领域得分均低于轻度组和中度组,异均有统计学意义(P<0.05),在RP、RE领域三组得分无统计学差异(P>0.05);轻度组在PH领域高于中度组,在SF-36总评分及其分支领域、MH领域得分均无统计学差异。6.影响MIS评分的自身因素的多因素分析：MIS得分与年龄、透析龄呈正相关,与BMI呈负相关,性别、原发病对MIS得分无影响,其中BMI对MIS得分的影响最大,其次是透析龄、年龄。结论：1.维持性血液透析患者普遍存在营养不良和炎症状态,且关系密切;2. MQSGA和MIS均能评估MHD患者的营养不良-炎症状态,但MIS与相关指标的相关性更好,能对其营养不良-炎症状态及严重程度做出更准确的评价;***分级越高,MHD患者生存质量的得分也越低,营养不良-炎症状态影响着MHD患者生存质量的多个领域,改善患者的营养不良-炎症状态可提高患者的生存质量;***得分与年龄、透析龄呈正相关,与BMI呈负相关,其中BMI对MIS得分的影响最大,其次是透析龄、年龄。