关键词： 调节性T细胞   TGF-β   Neupilin-1   Helios   肠炎  

摘要： 研究目的:本课题研究Nrp-1和Helios在tTreg,pTreg和iTreg细胞表达的差异,通过体内体外实验观察Nrp-1iTreg细胞的功能和稳定性,尤其在炎症状态下Nrp-1iTreg细胞的免疫调节作用和稳定性,并探讨其发挥免疫抑制作用和维持免疫稳态的机制。研究方法:1.流式细胞术(FCM)法检测B6Foxp3GFP小鼠脾脏CD4、CD8、CD19、CD11c、NK1.1、CD11b阳性细胞Nrp-1和Helios的表达水平。以及检测小鼠胸腺、淋巴结、脾脏和外周血细胞CD4Foxp3+T细胞和CD4Foxp3-T细胞Nrp-1和Helios的表达水平。2.构建骨髓移植模型,FCM法检测移植8周后淋巴结、脾脏和外周血CD4Foxp3+T细胞和CD4Foxp3-T细胞Nrp-1和Helios的表达水平。3.在不同条件下体外培养获得Th0、Th1、Th2、Th17、CD4T和iTreg细胞,检测各自Nrp-1和Helios的表达水平。***-2和TGF-β条件下体外培养iTreg细胞,检测第0、2、3、7和13天Nrp-1和Helios的表达水平。5.体外诱导iTreg细胞,加入Smad3抑制剂(SIS3)、J-NK抑制剂(JNKi)或I型TGF-β受体(ALK5)抑制剂(ALK5i)或DMSO对照,比较不同抑制剂对iTreg细胞Nrp-1和Helios表达的影响。6.体外分选出Nrp-1iTreg和Nrp-1-iTreg细胞,体外直接培养后第4和7天检测Foxp3GFP、IFN-γ和IL-17A表达水平;或经尾静脉输注到B6 Rag1-/-小鼠,第4、7和12天后检测Foxp3GFP、IFN-γ和IL-17A表达水平。***-1iTreg、Nrp-1-iTreg 和 Nrp-1-Foxp3-CD4T 细胞抑制 CD4CD25-T细胞增殖的差异比较。8.采用B6 Rag1-/-小鼠,腹腔注射CD4CD25-CD45RBhi T细胞,诱导T细胞介导肠炎模型。分为 5 组,CD4CD25-CD45RBhiT 细胞,CD4CD25-CD45RBhiT细胞 +Nrp-1iTreg,CD4CD25-CD45RBhiT 细胞 +Nrp-1-iTreg 细胞,CD4CD25-CD45RBhiT 细胞+ Nrp-1+Foxp3-CD4T,CD4CD25-CD45RBhiT 细胞+Nrp-1-Foxp3-CD4T,观察小鼠体重变化、肠道病理,肠系膜淋巴结细胞IFN-γ,IL-17A和Foxp3表达水平。9.体外诱导得到小鼠CD4iTreg细胞,检测Nrp-1iTreg和Nrp-1-iTreg细胞IL-10和IL-10R表达水平。进一步分选出Nrp-1iTreg和Nrp-1-iTreg体外培养静息培养4天,然后再刺激50小时,以及不同细胞因子IL-2或IL-27条件下,检测IL-10和IL-10R表达水平。实验结果:***结果显示,小鼠脾脏CD4T、DC和NK细胞显著表达Nrp-1,而Helios主要在CD4T细胞表达;Nrp-1和Helios在胸腺CD4Foxp3+T细胞(tTreg)都表达,Nrp-1表达水平低于Helios,然而Helios在胸腺CD4Foxp3-T细胞也有较高的表达。另外,Nrp-1和Helios在淋巴结、脾脏和外周血CD4Foxp3+T细胞表达,但Nrp-1表达水平高于Helios。2.骨髓移植重建模型结果显示,8周后分离得到淋巴结、脾脏和外周血,CD4Foxp3+T 细胞(pTreg)显著表达 Nrp-1 和 Helios。***-2和TGF-p体外培养的iTreg细胞Nrp-1和Helios表达明显升高,尤其在CD4Foxp3+iTreg 细胞,Nrp-1 在 CD4T 细胞(IL-2,无 TGF-β 条件下)低表达,Helios 在 CD4T 细胞有一定的表达。Th0、Th1、Th2 和 Th17 细胞 Nrp-1 和 Helios低表达。4.体外培养的iTreg细胞第3-13天Nrp-1明显升高,Nrp-1+/Foxp3+达70%左右;Helios表达水平在第3天达高峰,之后表达下降。5.体外培养的iTreg细胞表达Nrp-1和Helios依赖于TGF-β信号(ALK5i),不依赖于Smad3和JNK信号通路。6.体外稳定性实验显示,Nrp-1iTreg和Nrp-1-iTreg体外培养第4和7天,Nrp-1iTreg细胞Foxp3GFP表达水平高于Nrp-1-iTreg细胞,而IFN-y表达水平低于Nrp-11iTreg细胞。体内稳定性实验显示,细胞输注后第4、7和12天Nrp-1iTreg细胞Foxp3GFP表达水平高于Nrp-1-iTreg细胞,而第7和12天IFN-γ和IL-17A表达水平低于

关键词： 肺部炎症   NEC   J Immunol   肠炎   肠疾病   坏死性   分子机制  

摘要： 坏死性小肠结肠炎(NEC)是高发于新生儿的致死性肠道疾病。随着疾病的恶化,会有严重的肺部炎症的出现。针对NEC介导的肺炎的发生机制,来自约翰霍普金斯大学的David ***课题组进行了深入研究,发现NEC引发的肺部炎症依赖于局部的TLR4信号,且肠道微生物分泌的HMGB1是引发肺脏炎症反应的关键配体物质,HMGB1能够促进肺脏中性粒细胞的分泌以

关键词： 高血压心脏损伤   炎症反应   RNA-Seq   内质网应激   骨髓移植  

摘要： 背景高血压的危害性在于它会导致靶器官损伤,其中心脏损伤非常重要,在此过程中炎症反应发挥十分重要的作用。我们研究已经证明,骨髓来源的炎症细胞,包括巨噬细胞,T细胞和中性粒细胞,在高血压心脏损伤中发挥重要作用,但其中的分子机制尚未在整体水平上进行阐明。全基因组学（RNA-Seq）技术为基础的转录组研究,能够从整体水平研究基因功能以及基因结构,揭示特定生物学过程以及疾病发生过程中的分子机理,但是目前RNA-Seq技术尚未运用于高血压诱导的心脏损伤研究中。大量研究表明内质网应激（ERS）信号通路的激活可以调控炎症反应的发生发展,并参与到多种心血管疾病中。然而,ERS是否参与高血压诱导的心脏炎症反应,以及ERS在此过程中发挥着什么样的作用仍不清楚。所以本研究使用RNA-Seq技术在整体基因组水平研究了炎症反应在高血压心脏损伤的分子机制,以及高血压早期ERS在高血压诱导的心脏炎症损伤中的作用。目的Ang II灌注复制小鼠高血压模型于1、3、7天收取心脏组织提取RNA,采用RNA-Seq进行动态筛选,采用生物学信息分析软件进行在线分析,寻找早期升高最明显的信号通路及ERS相关的信号通路,进而采用ERS信号通路相关分子的敲除小鼠复制高血压模型,观察心脏组织中炎症细胞、炎症因子变化。在整体基因组水平明确炎症反应在高血压心脏损伤的分子机制;并明确ERS在高血压导致心脏损伤过程中的作用,阐明ERS参与心脏损伤过程中的分子机理。方法1.高血压心脏损伤模型制备:采用持续皮下微量泵灌注angii的方法建立高血压心脏损伤模型,灌注angii的剂量为1500ng/kg/min,灌注的时间分别为1、3、7天,设置微量泵灌注生理盐水为对照组（sham）。angii灌注后监测血压高于140/90mmhg提示模型建立成功。2.血压监测:采用尾动脉套管法血压测量仪在angii灌注前测量小鼠基础血压;并在angii灌注后连续测定小鼠血压,明确高血压模型是否建立成功。3.心功能测定:使用visualsonicsvevo2100小动物超声在小鼠angii灌注前测定小鼠基础心功能,并在angii灌注后第7天测量高血压小鼠的心脏功能,明确心功能相关指标的改变。4.炎症细胞浸润检测:采用流式细胞术测定angii灌注前和angii灌注后心脏组织中浸润炎症细胞的种类和数量的变化,包括中性粒细胞、巨噬细胞、t细胞等。5.心脏纤维化检测:采用masson三色染色法,天狼猩红染色法,免疫组化染色法（α-sma、tgf-β1）以及realtime-pcr（collagen1,collagen3和fibronectin）等方法检测angii灌注前和angii灌注后心脏组织中纤维化形成情况。6.基因组变化的检测:运用rna-seq技术（illuminahiseqtm2000）对wt小鼠angii灌注后0、1、3、7天的rna样品进行测序,并对差异表达基因进行表达模式聚类分析、go功能显著性富集分析、pathway显著性富集分析和蛋白质相互作用网络分析。7.心脏炎症因子的检测:使用rna-seq技术检测和分析炎症因子相关基因的改变,并采用realtime-pcr对相应炎症因子的mrna表达水平进行验证（s100a8、s100a9、cxcl1、cxcl2、ccl2、ccl9等）。8.骨髓移植:8-12周龄的wt和chop-/-受体小鼠钴60放射源10gy进行照射后,4-8小时内回输供体小鼠骨髓细胞5x106个/只,放入干净的spf环境下进行饲养8周进行骨髓重建。在此期间饮水为加广谱抗真菌和抗细菌抗生素、ph=2.0的无菌水,8周后改为正常饮水,并可进行相应的实验。9.小鼠骨髓中性粒细胞:采用密度梯度离心法分离骨髓中性粒细胞。10.凋亡及凋亡细胞类型:tunel染色法检测心脏组织中凋亡的细胞,并使用免疫荧光共染的方法确定凋亡细胞的类型。11.凋亡信号通路检测:westernblot检测凋亡相关蛋白bcl-2、bcl-xl等的改变。12.统计学分析:所有数据都以平均值±标准差（x±sem）表示。符合正态分布的计量资料,两组间比较采用成组t检验,不符合正态分布的计量资料采用秩和检验。p＜0.05为差异有统计学意义。所有数据采用graphpadprism软件进行统计分析。结果第一部分***诱导高血压心脏炎症和纤维化损伤的模型建立成功。2.差异表达基因（degs）分析显示,与对照组sham相比,angii灌注1天、3天、7天后发生变化的基因共有1801个。***的go分析显示angii灌注后,富集的go通路包括对内源性刺激的反应,对急性应激的反应,免疫系统的反应,细胞外组织结构的重建以及细胞外基质的重建等。***的kegg信号通路分析显示angii灌注后,细胞因子-细胞因子相互作用通路,趋

关键词： 炎症反应   氧化应激   麻醉剂   老龄大鼠   认知功能   分子机制  

摘要： 由血管损伤和炎症引起的认知障碍影响着大脑功能。研究已经证实,认知障碍与血管性损伤、炎症直接关联,而损伤程度与炎症、血管性损伤呈正相关。研究表明,大脑在认知功能上发挥着自已的特殊作用,全面的大脑保护可能在急性心肌缺血再灌注损伤的情况下,有助于降低患者的认知障碍。七氟醚对抗心肌和脑损伤能起到积极的作用,因为它有助于降低心肌耗氧量,抑制心肌钙离子的运动,激活线粒体信号传导通路,并且阻止炎症因子的产生。目前对于血管损伤的治疗主要依赖于手术与麻醉的联合治疗,然而,关于七氟醚在急性心肌缺血再灌注损伤导致的认知障碍治疗方面的效果,没有直接的和系统化的验证。在本研究中,我们设法确定麻醉剂七氟醚和芬太尼对于大鼠脑组织长期认知功能的影响,以及和炎性因子如血管内皮生长因子(VEGF)、白介素-1β (IL-1β)和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)潜在的相关性。我们使用穿梭箱和水迷宫测试去研究Wistar大鼠的认知功能。结果表明,经过七氟醚或芬太尼治疗的大鼠同急性心肌缺血再灌注大鼠模型相比,电击次数更少并且有更多的主动逃生次数。麻醉剂的治疗也缩短学习和记忆的周期,这表明了麻醉剂在认知功能方面的保护作用。此外,我们的研究结果揭示在使用麻醉药的大鼠头部组织中TNF-α和IL-1β表达降低而VEGF表达升高。这些发现强调了通过调节炎症因子的表达,七氟醚和芬太尼在急性心肌缺血再灌注损伤老龄大鼠的认知功能恢复中发挥着改善作用。与微血管损伤相关的缺血组织再灌注是炎症反应活化的直接后果。临床治疗血管损伤的主要方法是手术结合麻醉,常规的麻醉剂如丙泊酚可能引起自主认知功能障碍,不利于血管损伤后认知障碍的康复。所以我们计划通过动物实验的方法,对于七氟醚和芬太尼对急性心肌缺血再灌注损伤的老龄大鼠大脑的保护作用进行调查。前期研究中,我们认为七氟醚和芬太尼在上调VEGF表达,降低TNF-α和IL-1β表达水平时,可能有助于老龄大鼠术后认知功能损害的康复。本研究拟从分子机制方面探讨七氟醚和芬太尼对老龄大鼠认知功能的影响,探讨其对认知功能的保护机制。120只Wistar大鼠随机分为四组,A组大鼠接受假手术,B组大鼠为急性心肌缺血再灌注模型,C组为B组的基础上吸入七氟醚,D组在B组的基础上静脉注射芬太尼。采用TUNEL检测Wistar大鼠海马神经元细胞凋亡指数,采用流式细胞术测定海马神经元的凋亡率和胞浆内钙离子水平。再利用荧光探针测定鼠海马神经元胞浆中线粒体的膜电位情况。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定大鼠心尖血液中炎症因子的含量。测定各组经前述方法分离提纯的海马神经元细胞匀浆内线粒体呼吸链复合物活性。使用麻醉药的大鼠血液中TNF一α和IL-1β表达降低而VEGF表达升高。麻醉剂的治疗降低了神经元凋亡率和凋亡指数,减轻了缺血时钙离子向神经元细胞内的转移,提高了神经元胞浆内线粒体膜电位活性和线粒体呼吸链复合物Ⅰ～Ⅳ活性。麻醉剂可以有效减轻老龄大鼠因急性心肌缺血再灌注损伤造成的认知功能障碍,其机制与提高VEGF表达水平,促进新生血管形成过程,减轻炎症因子所参与的对海马神经元细胞所造成的炎性损伤有关。此外,麻醉剂还能够减轻海马神经元内氧化应激过程,从而减少了海马神经元细胞凋亡,减轻了认知功能障碍的发生。

关键词： 炎症   高脂   足细胞   胆固醇转运   内质网应激   细胞凋亡  

摘要： 目的:观察炎症状态下高脂介导的内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在足细胞损伤中的作用,并探讨胞内胆固醇转运蛋白C型1类尼曼-匹克蛋(Niemann-pick C1protein,NPC1)介导脂质紊乱致ERS的分子机制。方法:将足细胞分为对照组、高脂组(low-densitylipoprotein,LDL)、高脂+炎症因子组(LDL+IL-1β)、衣霉素干预组(TM)、4-苯基丁酸(4-PBA)干预组、辛伐他汀干预组(Statin)。流式细胞术检测足细胞凋亡;油红O染色检测足细胞胞内脂质沉积;酶法检测内质网总胆固醇含量,荧光定量PCR检测NPC1、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)、活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)m RNA水平;荧光免疫技术分析GRP78的表达。结果:1、与对照组和高脂组比较,高脂加炎症因子组足细胞的凋亡率明显上升(P<0.01);胞内脂质沉积,内质网上脂质含量显著增多(P<0.001)以及GRP78、PERK、ATF6、NPC1m RNA的表达明显上升(P均<0.05);3、与高脂加炎症因子组比较,小剂量衣霉素预处理和4-PBA能降低细胞凋亡比例(P<0.05),减轻GRP78、PERK和ATF6 m RNA的表达(P均<0.05);且4-PBA明显减弱GRP78荧光表达,他汀和4-PBA可以降低胞内脂质沉积和NPC1m RNA的表达(P<0.05);三者均不同程度减低内质网上脂质含量(P均<0.05)。结论:炎症状态下脂质可能通过NPC1过度转运到内质网并诱发ERS引起足细胞损伤,缓解内质网应激和降低胞内脂质沉积能减轻足细胞损伤。

关键词： 溃疡性结肠炎   炎症状态   结肠镜诊断   粘膜损伤  

摘要： 目的:本文旨在对其在溃疡性结肠炎患者中建立疾病活动能力的临床、内镜、实验室及影像标志进行严格的审查。　　材料和方法:炎症状态的测定是评估疾病活动度和调整治疗方法的关键。回顾性研究30例（3月2015～一月2016）在患者临床史、血清标志物、粪便检查、结肠镜检查及影像学检查结果的基础上，对溃疡性结肠炎的炎症活动进行评估。研究组包括17名男性患者和13名女性患者。年龄从20岁至75岁不等，平均年龄为49岁。在女性的平均年龄为53岁（20至75岁），男性45岁（23至72岁）。临床特征包括性别、年龄、排便次数、大便带血、发热、心率、白细胞、血小板、血红蛋白、白蛋白、ESR、CRP、ANCA，ASCA、结肠镜和CT评分评估炎症。　　结果:来自大连医科大学附属医院消化一科的30例患者的疾病活动性的评价。患者的年龄各有不同，但大多是50岁以上。根据Truelove和Wins标准评估疾病的严重程度:”轻度13％，中度40％，重度47％。根据对30例结肠镜检查结果，主要获得以下研究结果，充血78％，糜烂82％，息肉9％，45％浅表溃疡出现。记录30例患者术后观察，15％例轻度，44％例中度，41％例重度。其中最常见的一个发现是结肠壁厚87％的患者。其他血清标志物在60％和ANCA ASCA阳性阳性只有10％。血沉在急性期疾病活动相关性良好。　　结论:对溃疡性结肠炎的诊断有不同的诊断工具预测其病程及活动性。许多这些工具显示出有预见性的结果，但缺乏特异性仍然是一个问题。虽然结肠镜检查是耗时的、侵入性的和昂贵的，但它仍然显示粘膜损伤的直接证据。内镜是溃疡性结肠炎的金标准试验。

关键词： 类风湿性关节炎   佐剂性关节炎   巨噬细胞   NLRP3炎症小体   miR-223   细胞因子  

摘要： 类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一个以关节滑膜炎症为特点的慢性自身免疫性疾病,它可以导致骨的侵蚀和关节的破坏,最后造成关节畸形,病因迄今仍未被阐明。RA的发病与炎症密切相关,异常的细胞免疫反应和体液免疫反应在疾病发病中起着重要作用。有学者研究表明巨噬细胞在RA发病中至关重要。固有免疫反应是机体防御病原体的第一道防线,炎症小体作为固有免疫的重要组成部分,主要通过模式识别受体(pattern recognization receptors, PRRs)来识别病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns, PAMPs),从而产生免疫应答。PRRs包括位于细胞膜的Toll样受体(TLRs)、位于细胞质的NOD样受体(NLRs)、C型凝集素受体(CLRs)等。NLRP3炎症小体是迄今为止研究最为广泛的由NLR家族组成的炎症小体之一,参与炎症、肿瘤的发病,也在正常生理稳态维持过程中起到重要的作用。佐剂性关节炎(AA)大鼠模型是最为经典的RA动物模型之一,本课题在前期研究中发现,AA模型大鼠血清以及腹腔巨噬细胞体外培养的细胞上清液中IL-1β、 IL-18等炎症因子分泌明显增加(P<0.01)。使用免疫组织化学方法测得AA大鼠滑膜组织中NLRP3炎症小体的三个组分NIrp3、ASC、caspase-1均明显提高(P<0.01)。提示NLRP3炎症小体可能参与AA大鼠的发病。与此同时,前期研究发现AA大鼠腹腔巨噬细胞中的NLRP3炎症小体组分表达增加的同时(P<0.01)而miR-223表达明显降低(P<0.01)。微小RNA(miRNA)是广泛存在于动植物中由21-25个核苷酸构成非编码RNA。有学者研究表明miRNA与许多病理生理过程密切相关,它可识别特定的目的RNA,使之降解或表达下调,参与基因转录后水平调控,从而影响目的基因的蛋白质合成,在细胞分化、凋亡等生理活动中发挥重要的调控作用。本课题组使用双荧光素酶鉴定NLRP3和miR-223存在靶向关系。鉴于AA模型中以及AA模型腹腔巨噬细胞中NLRP3炎症小体各组分以及下游调控的各种炎症因子分泌异常,miR-223表达下调,本课题联系三者的密切相关性,提出科学假设：AA发病中miR-223是否通过调控NLRP3炎症小体的表达从而影响下游细胞因子的分泌?miR-223能否具有缓解AA发病的靶向药物的前景?本课题鉴于Nlrp3以及miR-223的表达在大鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7、THP-1细胞上存在共性,因此,本课题利用RAW264.7巨噬细胞株为工具细胞开展课题研究。研究内容主要包括以下四个部分：***大鼠模型建立以及炎症因子检测从模型建立成功第12天开始,AA大鼠体重较Normal组明显减轻,继发性的足肿胀较Normal组明显增加,但从第28天开始,逐渐出现恢复迹象。病理组织学观察显示,AA大鼠与Normal组相比,滑膜明显增厚,由3-4层甚至更多层滑膜细胞组成,并向关节腔内伸展,骨组织及软骨组织有少量破坏,同时有大量炎性细胞浸润至关节组织,并有少量血管生成。ELISA结果显示,AA组与Normal组相比,血清中的IL-1β、IL-18、IL-22及IL-33的浓度明显升高。免疫细胞化学和免疫荧光检测发现,AA大鼠腹腔灌注提取的细胞呈CD68强阳性,表明提取的细胞为巨噬细胞。ELISA结果显示,AA组大鼠腹腔巨噬细胞上清液中IL-1β和IL-18的浓度明显高于Normal组;2. NLRP3炎症小体与miR-223在AA大鼠中的表达AA大鼠造模成功之后,取AA大鼠滑膜组织与Normal组滑膜组织用免疫组化方法检测,结果表明：AA大鼠滑膜组织中NIrp3、ASC、caspase-1阳性细胞数量明显高于Normal组,且差异具有统计学意义。real-time PCR和western bblot结果显示,AA大鼠腹腔巨噬细胞中NIrp3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白的水平明显高于Normal组,而miR-223表达则降低。提示NLRP3炎症小体与miR-223可能存在调节关联。3.巨噬细胞的筛选与NLRP3炎症小体在RAW264.7细胞株上调控炎症因子分泌本课题组使用LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7细胞、THP-1细胞,ELISA结果显示,IL-1p和IL-18的含量明显高于正常组,real-time PCR结果提示,LPS诱导可以显著降低大鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7细胞、THP-1细胞中miR-223mRNA的水平,同时Nlrp3的mRNA和蛋白水平表达明显增加,其差异具有统计学意义。LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7细胞、THP-1细胞在Nlrp3与miR

关键词： 马兜铃酸-Ⅰ   肿瘤祖细胞   炎症癌症恶性转化   miRNAs   白细胞介素-6   信号转导与转录激活因子-3   八聚体核转录因子-4   肝胚胎胞衬蛋白   转化生长因子2型受体   磷酸化叉头框O1   let-7 miRNAs   miR-27a   RNA结合蛋白Lin28B   NF-κB  

摘要： 第一部分：马兜铃酸-I致比格犬肝急性炎症伴肿瘤祖细胞形成目的：明确马兜铃酸Ⅰ （Aristolochic acid Ⅰ, AA Ⅰ）致比格犬肝急性炎症中,炎症细胞因子白细胞介素-6 （Interleukin 6, IL-6）及炎症信号通路信号转导与转录激活子-3 （Signaling transducer and activator of transcription-3, STAT3）,转录因子核因子-κB （Transcription factors nuclear factor-κB, NF-κB）,探索急性炎症环境下是否存在肿瘤祖细胞发生。方法：健康成年比格犬8只,每组4只。实验组口服3 mg/kg/day AA I胶囊,对照组口服辅料胶囊；连续给药至第10天,并于第12天处死。苏木素-伊红（Hematoxylin & eosin, H&E）染色评价肝脏损伤状况并采用TUNEL染色检测肝细胞凋亡情况。通过ELISA及RT-PCR分别检测肝组织中IL-6释放水平及基因表达水平；采用免疫荧光,蛋白免疫印迹及免疫组织化学法检测IL-6下游炎症信号通路白细胞介素-6受体a （Interleukin 6 receptor a, IL-6Ra）/Janus酪氨酸激酶2（Janus tyrosine kinases 2, JAK2）/STAT3,激活蛋白1 （Activator protein 1, AP-1） /NF-κB炎症通路及转化生长因子-β （Transforming growth factor β, TGF-β）通路激活情况；通过免疫组化表型鉴定,蛋白检测及蛋白免疫共沉淀法检测肝前体细胞发生情况；采用激光共聚焦结合免疫荧光法鉴定肿瘤祖细胞标志。结果：AAI连续给药10天,H&E染色组织切片显示比格犬肝小叶紊乱,TUNEL免疫荧光染色呈现大量阳染细胞,提示肝细胞发生凋亡。肝组织中IL-6表达水平上调,其下游通路IL-6Ra/JAK2/STAT3处于激活状态；同时炎症相关核转录因子NF-κB也处于激活状态,说明AAI致比格犬肝损伤伴急性炎症发生,其炎症主要由炎症细胞因子IL-6及核转录因子NF-κB介导。免疫组化,免疫印迹及蛋白质免疫共沉淀法系统地评价了在炎症环境下,肝组织出现八聚体结合转录因子-4（Octamer-binding transcription factor-4, Oct4）, STAT3阳染肝前体细胞,并伴有TGF-β1信号通路激活,推测急性炎症期TGF-β1通路激活有利于肝前体细胞增殖分化。通过组织免疫荧光染色法确定了表型为Oct4阳性,STAT3阳性,TGF-β1 Ⅱ型受体（TGF-β1 receptor Ⅱ, TBRⅡ）阴性,胚胎肝胞衬蛋白（Embryonic liver fodrin, ELF）阴性的肿瘤祖细胞,证实肿瘤祖细胞出现在AAI引发的肝急性炎症环境中。结论：AA I致比格犬肝急性损伤,可见肝细胞凋亡伴TGF-β1信号通路与IL-6/STAT3/NF-KB同时激活,出现"Oct4+, STAT3+伴TBRⅡ-, ELF-"特征的肿瘤祖细胞。第二部分：马兜铃酸-I致比格犬肝脏miRNome改变与肿瘤祖细胞形成的相关性目的：探索AAI致比格犬急性炎症伴肿瘤祖细胞发生过程miRNAs表达谱,明确miRNAs靶向转录后调控的分子事件。方法：采用Exiqon miRCURY LNATM芯片平台检测犬类miRNAs表达谱,生物信息学预测,并通过qRT-PCR法验证差异表达miRNAs：变化>1.5倍,P<0.05)。通过数据库（***）, （***）, （***）推测miRNAs可能调控的靶基因,并通过蛋白免疫印迹法对其进行确认,采用激光共聚焦结合免疫荧光,检测恶性转化相关蛋白促癌蛋白Myc （Oncogenic transcription factor Myc, c-Myc）及癌胚RNA结合蛋白Lin28同源物B （Oncofetal RNA-binding protein Lin28 homolog B, Lin28B）表达情况。结果： AAI致肝组织中73个miRNAs变化大于1.5倍,其中cfa-miR-200c, cfa-miR-34a, cfa-miR-378, cfa-miR-223, cfa-miR-24, cfa-let-7b变化>1.5倍,P<0.05。通过生物信息学预测,qRT-PCR验证以上6个miRNAs及let-7a-1～let-7b簇,miR-27a-miR-24簇成员let-7a-1及miR-27a表达水平均呈现出不同程度差异表达（变化>1.5倍,P<0.05）。通过生物信息学数据库分析与预测,及蛋白

关键词： 牙周炎   先天性免疫   适应性免疫  

摘要： 在牙周炎这一慢性炎症反应过程中，涉及了一系列的免疫炎症反应。牙周炎的免疫炎症主要有两个方面：先天性免疫反应和适应性免疫反应。先天性免疫反应由不同细胞和因子组成，其中最重要的是补体、急性期蛋白、中性粒细胞；适应性免疫包括细胞介导的免疫炎症反应和体液介导的免疫炎症反应。近年来，有学者发现具有Toll样受体（TLRs）的树突状细胞介导的免疫调节在牙周炎中发挥一定作用。本文从先天性和适应性免疫反应两个角度，对目前有关免疫炎症反应与牙周炎的关系进行综述。

关键词： TLR4   免疫炎症反应   继发性脑损伤   新生鼠   信号转导   hypoxic   脑组织损伤   细胞损伤   激动剂   神经发生  

摘要： 新生儿缺血缺氧性脑病(Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)的发病机理牵涉到多种复杂因素,其中免疫炎症反应是其关键因素之一。TLR4(Toll like receptor-4)通过My D88依赖性通路和TRIF依赖性通路调节免疫炎症反应。在大鼠和小鼠脑缺氧缺血后,TLR4通路被激活,增强炎症反应,并加重脑组织损伤;在新生鼠脑组织中可见TLR4的表达;用特异性TLR4激动剂活化TLR4通路可以导致发育时期大脑的白质损伤;敲除TLR4基因可增加少突胶质细胞对LPS导致的细胞损伤的耐受;TLR4对神经发生和神经轴突生长的调节起关键作用,并且调控干细胞的增殖和分化。TLR4信号通路可能参与HIE的发生发展和继发性脑损伤的免疫炎症反应过程及脑损伤后的神经修复的调控。