关键词： 音猬因子   未折叠蛋白反应   肌醇需求酶1   牙周炎   内质网应激  

摘要： 目的:多项研究显示在炎症发生时,细胞内产生错误折叠蛋白,内质网应激发生,肌醇需要酶1α(Inositol-requiring enzyme 1,IRE1α)介导的经典通路在消除内质网应激和炎症免疫中起重要作用,IRE1α基因的缺失会导致更加严重的内质网应激以及炎症反应。音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)通路被证明在炎症中发挥重要抗炎作用并积极参与炎症后机体的稳态维持,组织修复。通过探究Shh信号通路与IRE1α基因在炎症发展调节过程中可能起到的共同作用,从而深入对炎症发展调节规律的了解,为炎症的临床处理提供理论基础。方法:制备IRE1α骨髓细胞特异性敲除小鼠,取骨髓细胞诱导分化为巨噬细胞,成功分化的巨噬细胞加入脂多糖(lipopolysaccharides,LPS),白介素4(Interleukin 4,IL4),刺激其分别向经典活化性巨噬细胞(classically activated macrophages,M1)和选择活化性巨噬细胞(alternatively activated macrophages,M2)型极化。极化后的巨噬细胞提取RNA进行高通量测序,通过生物信息学分析分别在肺组织炎症和极化巨噬细胞中Shh信号通路相关基因的表达情况,对比敲除IRE1α后组织细胞与正常状态下Shh信号通路的变化。结果:组学分析表明,在LPS,IL4诱导巨噬细胞极化后,Shh信号通路相关基因表达降低,说明Shh在M1和M2型巨噬细胞中受到抑制作用,而在IRE1α敲除后,Shh通路中的生长阻滞特异性1(Gas1)显著增高。结论:生长阻滞特异性1(Gas1)已被证明其表达水平与细胞增殖与凋亡相关,在敲除IRE1的巨噬细胞中我们发现了Gas1基因的显著上升,Shh通路受到抑制,其细胞增殖受到抑制,被诱导凋亡。由此我们发现Shh信号通路与内质网应激经典途径IRE1α存在某种相互作用,二者可能互为正向调控。该发现为牙周炎,种植体周围炎等一系列口腔炎症提供新的理论依据,同时提出了新的潜在的治疗方法。

关键词： 髓样细胞表达的激发受体-1   白色念珠菌素   细胞外信号调节激酶   小鼠角膜  

摘要： 目的:研究白色念珠菌素(Candidalysin)通过TREM-1调控白色念珠菌性角膜炎免疫炎症反应的分子机制。方法:1、使用白色念珠菌感染C57BL/6小鼠角膜,建立白色念珠菌性角膜炎1天、3天、5天小鼠模型,采用PCR法检测小鼠角膜中TREM-1 m RNA的表达水平;采用Western blot法检测小鼠角膜中TREM-1蛋白的表达水平。2、给予小鼠结膜下注射不同浓度TREM-1抑制剂GF9(0.1、0.2、0.5mg/ml)预处理24h,然后建立白色念珠菌性角膜炎小鼠模型,采用PCR法检测小鼠角膜中TREM-1 m RNA的表达水平,筛选出对TREM-1具有最佳抑制效果的GF9浓度,并在接下来的实验中使用该浓度GF9预处理小鼠角膜。采用Western blot法检测正常组、单纯加菌组和GF9(0.2mg/ml)预处理组小鼠角膜中TREM-1蛋白的表达水平。采用免疫荧光染色法检测各组小鼠角膜组织中TREM-1蛋白的表达和定位。采用PCR法检测各组小鼠角膜中炎症细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)m RNA的表达水平。3、观察白色念珠菌感染1天、3天、5天后小鼠角膜的形态和炎症程度,对小鼠角膜进行临床评分,将小鼠角膜的临床评分与角膜组织中TREM-1 m RNA的表达水平进行Pearson相关分析。4、给予小鼠结膜下注射GF9预处理24h或Candidalysin刺激2h,然后使用白色念珠菌感染小鼠角膜,分为正常组、单纯加菌组、GF9预处理组、Candidalysin预处理组、GF9+Candidalysin预处理组。采用PCR法检测各组小鼠角膜中TREM-1、TNF-α、IL-1β及IL-6 m RNA的表达水平,采用Western blot法检测各组小鼠角膜中TREM-1、ERK及p-ERK蛋白的表达水平。5、给予小鼠结膜下注射ERK通路抑制剂PD98059预处理24h或Candidalysin刺激2h,然后使用白色念珠菌感染小鼠角膜。采用PCR检测各组小鼠角膜中炎症细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)m RNA的表达水平,Western blot法检测小鼠角膜中ERK以及p-ERK蛋白的表达水平。结果:1、白色念珠菌感染1天、3天、5天的小鼠角膜中TREM-1 m RNA表达较正常组明显升高,感染第3天小鼠角膜中TREM-1 m RNA含量达到峰值;白色念珠菌感染3天、5天的小鼠角膜中TREM-1蛋白的表达明显高于正常角膜,感染第5天较第3天有所下降。2、与单纯加菌组相比,不同浓度的GF9预处理小鼠角膜均能明显降低小鼠角膜中TREM-1 m RNA的表达水平,当GF9浓度为0.2mg/ml时,对TRME-1的抑制效果最佳。在此浓度下,使用GF9预处理小鼠角膜能够显著降低角膜组织中TREM-1蛋白的表达水平以及角膜中炎症细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)m RNA的表达水平。3、感染白色念珠菌1天、3天、5天后小鼠角膜的临床评分明显高于正常小鼠角膜,在感染第3天时临床评分最高。Pearson相关分析结果显示小鼠角膜临床评分与角膜组织中TREM-1 m RNA表达水平呈明显正相关。4、与单纯加菌组相比,Candidalysin预处理组小鼠角膜中TREM-1 m RNA和蛋白的表达水平明显增加,角膜中炎症细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)m RNA的表达水平也明显增加;与Candidalyisn预处理组相比,GF9+Candidalysin预处理组小鼠角膜中TREM-1 m RNA和蛋白的表达水平降低,角膜中炎症细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)m RNA的表达水平也降低。5、与单纯加菌组相比,Candidalysin预处理能增加小鼠角膜中ERK蛋白的磷酸化水平,而GF9预处理能降低白色念珠菌或Candidalysin诱导的小鼠角膜中ERK蛋白的磷酸化水平。6、与Candidalysin预处理组相比,在Candidalysin预处理前使用ERK抑制剂PD98059预处理小鼠角膜,可以显著减少角膜中炎症细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)m RNA的表达水平以及角膜中ERK蛋白的磷酸化水平。结论:白色念珠菌感染小鼠角膜可以引起角膜中TREM-1的表达升高,Candidalysin可以通过TREM-1增强白色念珠菌性角膜炎炎症反应,并且通过增强下游信号激酶ERK的磷酸化途径调节炎症细胞因子的表达。

关键词： 桃核承气汤   慢性肾衰竭   中医“肠肾轴”理论   肠道屏障   Toll样受体/核转录因子-κB信号通路  

摘要： 目的:1.通过文献研究,探讨“肠肾轴”的中医内涵,系统梳理并完善中医“肠肾轴”理论,拓展治疗辨证思路,提高临床指导价值。2.以“肠肾轴”为新角度,从Toll样受体/核转录因子-κB经典炎症信号通路切入,深入研究桃核承气汤改善慢性肾衰竭大鼠微炎症状态分子机制,以夯实该方治疗慢性肾衰竭的科学依据。方法:1.理论研究以文献梳理为研究方法:文献来源于福建中医药大学图书馆馆藏图书,通过目录索引和关键词搜索,整理各时期主要著作中“肠、肾”相关文献及概念阐述,并运用中医理论分析,总结中医“肠肾轴”理论的发生与发展、生理和病理表现,以知网、万方等数据库为平台,补充中医“肠肾轴”理论的现代研究。2.实验研究以动物实验为研究方法:以5/6肾切除慢性肾衰竭大鼠为研究载体,70只Wistar大鼠,经造模、分组、干预给药后采集相关样本。运用酶联免疫吸附法检测血清肌酐、尿素氮、白介素-6、白介素-10、肿瘤坏死因子-α、硫酸吲哚酚、硫酸对甲酚、脂多糖、氧化三甲胺和粪便中分泌型免疫球蛋白A;蛋白印迹法检测肠组织封闭蛋白-1、闭合蛋白、闭锁小带蛋白-1、Toll样受体2、Toll样受体4、髓样分化因子88、核转录因子-κB的蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应技术检测肠组织Toll样受体2、Toll样受体4、髓样分化因子88、核转录因子-κB的m RNA;光镜观察肾、肠组织病理,透射电镜观察肠组织病理。结果:理论研究结果:1.中医“肠肾轴”理论历经秦汉时期、晋唐时期、宋金元时期、明清时期、晚清至民国时期,依据不同时代背景下中医理论的发展与创新,在肠与肾的解剖结构、生理病理和相关疾病治疗等方面均得到补充和深化。2.中医“肠肾轴”生理表现:中医“肠肾轴”可通过中介络属关联间的相互配合,发挥出对水液代谢、精血化生、二便开闭、下焦气化的调控作用。3.中医“肠肾轴”病理表现:水液代谢紊乱可见水肿、小便不利、消渴、痰饮、浊毒等;精血化生失常可见呕恶腹胀、瘀血、尿血、尿浊、便血、虚损等;二便传导失司可见遗尿、夜尿、尿闭、泄泻、便秘等。4.中医“肠肾轴”理论是指在中医理论的指导下,肠与肾之间表现出双向调节作用规律,其中精津是该作用的物质基础,气化是原动力,其学术内涵可总结为“吸纳更迭精津、气化以用”。实验研究结果:1.实验一:桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠一般状态和微炎症状态的影响:桃核承气汤可降低慢性肾衰竭大鼠血清肌酐、尿素氮含量,降低血清白介素-6、肿瘤坏死因子-α的水平,提高血清白介素-10的表达,减轻肾小球水肿、系膜基质积聚和肾小管扩张等肾脏病理改变。2.实验二:桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠肠道屏障的影响:桃核承气汤可降低慢性肾衰竭大鼠血清硫酸吲哚酚、硫酸对甲酚、脂多糖、氧化三甲胺的水平,刺激分泌型免疫球蛋白A表达,延缓肠组织中封闭蛋白-1、闭合蛋白、闭锁小带蛋白-1的损伤,维持肠组织上皮细胞和紧密连接结构。3.实验三:桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠肠组织Toll样受体/核转录因子-κB信号通路的调控:桃核承气汤可降低慢性肾衰竭大鼠肠组织Toll样受体2、Toll样受体4、髓样分化因子88、核转录因子-κB的m RNA和蛋白表达。结论:1.从理论的发生与发展、肠与肾的生理和病理表现、现代研究等方面构建的中医“肠肾轴”理论,表现出肠与肾之间具有正向、反向的双向调节作用,其中医内涵可总结为“吸纳更迭精津、气化以用”。2.基于“肠肾轴”理论,桃核承气汤改善慢性肾衰竭大鼠微炎症状态的分子机制可能与降低促炎因子和内毒素的水平,提高肠道屏障功能,抑制肠道Toll样受体/核转录因子-κB信号通路相关。创新点:1.理论创新:藉由西方医学概念假说“肠肾轴”,总结了中医“肠肾轴”理论及学术内涵“吸纳更迭精津、气化以用”,是推动中医理论现代研究与创新的新探索。2.实验创新:从肠、肾双角度开展经方桃核承气汤治疗慢性肾衰竭大鼠的机制研究,重点在于对肠道屏障的影响和对肠道Toll样受体/核转录因子-κB通路的调控,为经方辨治疑难病提供新的思路和依据。

关键词： NLRP3   炎症小体   免疫调节   PERK  

摘要： NLRP3炎症小体是由NOD样受体NLRP3、接头蛋白ASC和胱冬肽酶-1(caspase-1)组成的蛋白复合体。NRLP3炎症小体在感受外源微生物PAMPs或细胞自身产生的危险信号DAMPs后活化并发生组装,切割并引起炎性细胞因子IL-1β和IL-18等的释放,通过切割GSDMD在细胞膜形成孔道,引起细胞肿胀及内容物释放,最终导致细胞焦亡。NLRP3炎症小体是当前探究相较最深入的炎症小体,广泛表达于骨髓细胞、肌肉细胞、神经元细胞和内分泌细胞中;其异常活化与阿尔茨海默氏病、Ⅱ型糖尿病、动脉粥样硬化等多种疾病的发生发展密切相关。因此,研究如何调控NLRP3炎症小体的活化及其分子机制对查明以上疾病是如何产生以及如何治疗十分重要。人体存在多种调节机制维持NLRP3炎症小体的适宜程度的激活,在各种调节方式中,磷酸化NLRP3的氨基酸位点是关键方式之一。有研究者的研究表明NLRP3的PYD结构域第5位丝氨酸磷酸化能够抑制ASC的招募,而NACHT结构域第295位丝氨酸磷酸化则影响了 NLRP3的定位。是否存在更多激酶特异性调控NLRP3炎症小体的活化过程,有待进一步研究。蛋白激酶PERK是内质网应激(unfolded protein response,UPR)过程中最关键的感受器之一,PERK可以调节蛋白质的合成与折叠、细胞自噬与凋亡,并整合细胞内各细胞器之间的反应,决定发生UPR的细胞的转归,是UPR的核心枢纽。PERK效应功能域具有激酶活性,那么PERK是否可以影响NLRP3炎症小体活化?还有待进一步研究。为了研究PERK对NLRP3炎症小体的活化的调控作用,我们通过Western blot及ELISA等相关实验,发现PERK可以显著促进NLRP3炎症小体的活化及IL-1β的分泌;继续研究发现,PERK不影响NF-κB通路的活化及NLRP3的转录,且PERK与NLRP3结合,提示PERK很大可能是结合NLRP3,对活化NLRP3炎症小体发挥影响作用。我们还探究了 PERK在NLRP3炎症小体相关疾病模型中的作用,发现PERK可以加重LPS诱导的内毒素休克疾病模型、明矾诱导的急性腹膜炎疾病模型和叶酸诱导的急性肾小管损伤疾病模型的炎性程度。本课题研究发现了 PERK可以通过靶向NLRP3,促进NLRP3炎症小体的活化及加重多种NLRP3炎症小体相关疾病;提示PERK可能作为炎症小体相关疾病治疗的靶分子,为NLRP3炎症小体异常活化相关疾病的防治提供了理论依据。

关键词： NLRP3   炎症小体   炎症   ZAP   ZAPS  

摘要： NLRP3(nucleotide-binding domain(NOD)-like receptor prtein3)是 NLRP3 炎症小体(inflammasome)的重要组成成分,同时它也是模式识别受体中NOD样家族的成员之一。NLRP3炎症小体作为研究最广泛和深入的炎症小体,它的活化异常会诱发多种疾病如癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等。因此,精细调控NLRP3炎症小体的激活程度,对于探究上述疾病的发生、发展机理以及寻求新的相关防治途径具有重要意义。NLRP3炎症小体能够被多种来源、化学组成以及结构性质上都毫无关联的激动剂所激活,如尿酸盐结晶、尼日利亚菌素、ATP、葡萄糖等代谢产物等。NLRP3炎症小体所共有的活化及调控机制还没被完全揭示,需要进一步深入研究。锌指抗病毒蛋白 ZAP(zinc-finger CCCH-type antiviral protein 1,由ZC3HAV1基因所编码),也叫 PARP13(ADP-ribosyltransferase diphtheria toxin-like 13),是PARP超家族成员之一。它是一种重要的宿主抑制因子,能够识别并招募细胞质中的病毒RNA,并通过N端的锌指结构与RNA病毒的ZRE(ZAP-responsive element)反应元件结合并降解病毒RNA,且这种抗病毒作用不依赖于TLRs和RLRs家族成员。已有研究表明,ZAP有多种蛋白亚型。其中,ZAPL(ZAPlong isoform)和ZAPS(ZAP shortisoform)是目前研究最多的两种亚型。已有文献报道,ZAP蛋白亚型具有不同的抗病毒活性。ZAPL对Sindbis病毒(SINV)和HIV-1的抗病毒能力比ZAPS强,而ZAPS对XMRV病毒和HBV病毒的抗病毒能力比ZAPL强。然而,ZAP及其蛋白亚型,尤其是ZAPL和ZAPS在炎症中的作用尚不清楚。有文献报道,ZAPS是RIG-I信号通路的关键调节因子,在干扰素处理或病原菌感知时比ZAPL更容易被诱导,而且可与RIG-I结合并相互作用,促进RIG-I的寡聚化,从而增强I型IFNs的产生。众所周知,NLRP3寡聚化是NLRP3炎症小体活化的一个关键步骤。因此,我们猜想ZAP是否可通过调控NLRP3寡聚化的方式,来调控NLRP3炎症小体的激活,进而在NLRP3炎症小体相关疾病中发挥调控作用呢?我们的预实验结果显示,LPS可显著诱导ZAP的表达,而IL-1β可抑制ZAP表达,这提示我们ZAP可能参与调控炎症免疫反应。同时,我们还发现,ZAPS的表达变化比ZAPL的表达变化更为明显。于是,我们接下来主要探究了 ZAPS在NLRP3炎症性小体活化中的作用。然后,我们利用Zap的特异性小干扰RNA和Zap基因敲除小鼠进行相关实验,发现Zap基因沉默或者基因敲除均可显著抑制NLRP3炎症小体活化诱导的IL-1β表达;还能明显抑制Caspase-1的自我剪切。以上结果表明,ZAP可促进NLRP3炎症小体的活化。另外,我们通过免疫共沉淀实验证明,ZAPS可特异性结合NLRP3。通过进一步实验,我们发现ZAP不影响NLRP3的表达。接下来,我们探究了一下ZAP是否影响NLRP3的寡聚化。我们的实验结果显示,ZAPS和ZAPL高表达均可促进NLRP3寡聚化,而且ZAPS的作用更为明显。同时,Zap基因沉默或者基因敲除均可显著抑制NLRP3内源性寡聚化。综上所述,ZAPS可通过靶向NLRP3,促进NLRP3寡聚化,进而促进NLRP3炎症小体的活化。本研究的意义和创新性在于,通过探究锌指抗病毒蛋白ZAP在NLRP3炎症小体活化中的作用和其分子机制,加深了对NLRP3炎症小体活化机制的认识;后续我们将通过利用Zap基因敲除小鼠,构建NLRP3相关疾病模型,进一步探究ZAP的生理学作用,将为NLRP3相关疾病的防治提供新的药物靶点和思路。

关键词： 全身免疫炎症指数   淋巴结转移   子宫内膜癌  

摘要： 目的:分析发生淋巴结转移(lymph node metastasis,LNM)的子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)患者的临床特点;探讨术前全身免疫炎症指数(systemic immune inflammatory index,SII)对EC患者发生LNM的预测价值。方法:1、本研究纳入2013年1月至2019年1月期间就诊于福建省妇幼保健院并行手术治疗的392例EC患者,其中包括364例未发生LNM者及28例发生LNM的EC患者。回顾性的收集了包括年龄、体重指数(body mass index,BMI)、是否绝经、血清炎症免疫相关指数、血清肿瘤标志物、糖尿病和高血压病史、内膜癌临床分期、组织学类型、子宫肌层浸润情况、淋巴结转移情况等临床数据。2、采用卡方检验或Fisher精确检验、t检验、Mann-Whitney U检验、logistic回归分析等统计学方法,分析并评估各临床指标与LNM之间的关联。并利用R软件建立了列线图模型。结果:1、研究结果表明,与无LNM的EC患者相比,发生LNM的EC患者中性粒细胞计数(neutrophil,NE)、单核细胞计数(monocyte,MO)、SII、癌抗原125(cancer antigen 125,CA125)、癌抗原153(cancer antigen 153,CA153)、癌抗原199(cancer antigen 199,CA199)显著升高(P<0.05)。此外,淋巴管脉管浸润(lymphovascular space invasion,LVSI)也与EC患者发生LNM显著相关(P<0.05)。2、logistic回归分析结果表明,SII、CA125、CA153和LVSI是EC患者发生LNM的独立危险因素。将SII、CA125、CA153和LVSI作为预测因子,建立了列线图模型,预测EC患者发生LNM的概率。校准图和ROC曲线评估结果提示该模型的具有较好预测性能。3、此外,研究结果提示SII还与年龄、是否绝经、分期显著相关(P<0.05)。为了进一步探索SII的临床应用价值,我们根据年龄和是否绝经对EC患者重新分组进行了分析。结果显示,绝经前年轻的EC患者的血清SII与病理分级、肌层浸润情况密切相关(P<0.05)。在年龄≥55岁或绝经后EC患者中,SII与分期相关(P<0.05)。进一步logistic回归结果表明,血清SII升高是绝经前年轻的EC患者发生深肌层浸润和进展为更高病理等级的独立危险因素(P<0.05)。此外,SII升高的55岁以上或绝经后EC患者进展至晚期的风险更高(P<0.05)。结论:升高的SII是EC患者发生LNM的独立危险因素。此外,SII在不同年龄阶段及绝经状态的EC患者中具有不同的临床应用价值。值得注意的是,在年轻的绝经前EC患者中,SII可用作深肌层浸润和更高病理分级的预测指标。

关键词： 成骨细胞   种植体周围炎   Wnt4   脂多糖   增殖  

摘要： 目的通过建立体外炎性环境,分组对比研究Wnt4重组蛋白在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,观察炎性状态下,成骨细胞在钛片上的黏附、伸展情况,探讨Wnt4重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用以及对成骨细胞在钛表面黏附的影响,为临床上种植体周围炎治疗提供一种理论依据和实验数据。方法1、酶消法从小鼠颅顶骨中提取成骨细胞,结合差速贴壁法纯化细胞。通过形态学观察、生物学行为及成骨能力对其进行鉴定。2、通过CCK8法检测不同浓度LPS、Wnt4重组蛋白对小鼠成骨细胞增殖分化的影响,设计浓度梯度,根据检测结果及形态学观察确定所需的最适浓度,为后续实验提供依据。3、体外成骨诱导培养,按是否添加LPS、Wnt4重组蛋白分为四组:(1)对照组:成骨诱导液培养,(2)LPS组:成骨诱导液添加LPS(1μg/ml)培养,(3)Wnt4组:成骨诱导液添加Wnt4重组蛋白(0.05μg/ml)培养,(4)LPS+Wnt4组:成骨诱导液添加LPS(1μg/ml)、Wnt4重组蛋白(0.05μg/ml)培养。培养3、6、9天后,分别提取m RNA应用RT-PCR法检测BGLAP、Col I及Runx2的相对表达量;培养7天后比较碱性磷酸酶活性。培养21天后应用茜素红染色法比较细胞矿化能力。扫描电镜比较观察钛片表面成骨细胞黏附能力。结果1、通过酶消化法从小鼠颅骨成功提取出成骨细胞。细胞形态呈长梭型、纺锤型或不规则多边形,胞浆丰富,细胞核呈卵圆形,核仁明显。在体外行成骨诱导培养14天、21后,成骨细胞可分泌碱性磷酸酶并生成矿化结节及钙盐沉积。结果证明我们提取的细胞具有成骨分化的能力,为成骨细胞。2、细胞形态学观察及CCK8法检测不同浓度LPS及Wnt4重组蛋白对成骨细胞增殖的影响,结果显示在LPS刺激下各实验组CCK8数值均小于对照组,差异显著具有统计学意义(p﹤0.05),且随着LPS浓度增强,抑制作用也随之增强。而在Wnt4重组蛋白刺激下,0.05μg/ml Wnt4重组蛋白组CCK8数值大于对照组,差异具有统计学意义(p﹤0.05),对成骨细胞增殖呈促进作用。当Wnt4重组蛋白浓度大于0.1μg/ml时,CCK8数值小于对照组,对成骨细胞增殖呈抑制作用,并随着浓度增大抑制作用有增高的趋势,在2μg/ml Wnt4重组蛋白浓度下,成骨细胞几乎全部死亡。3、经过分组培养7天后,与LPS组相比,LPS+Wnt4组碱性磷酸酶活性明显升高(LPS组:166.23±32.52 LPS+Wnt4组:436.48±41.73),差异具有统计学意义(p﹤0.05)。第21天的茜素红染色结果表明LPS+Wnt4组矿化能力高于LPS组且差异具有统计学意义(LPS组:5.23±2.41 LPS+Wnt4组:18.33±8.85,p﹤0.05)。4、分组培养3、6、9天后应用RT-PCR测定成骨相关基因(BGLAP、COL-I、Runx2)m RNA的表达量,其中Wnt4组中各基因相对表达量均高于其他组,第3、6天差异具有统计学意义(p﹤0.05)。LPS组各基因相对表达量均小于其他组且具有统计学意义(p﹤0.05)。COL-I目的基因相对表达量,Wnt4组均高于其他各组,且数据具有统计学意义(p﹤0.05),在6、9天时LPS+Wnt4组基因表达量高于对照组。而LPS+Wnt4组、Wnt4组Rnux2目的基因三个时间段的表达量均高于其他组且具有统计学意义(p﹤0.05)。5、SEM观察显示,Wnt4组钛片上成骨细胞伸展形态好于其他各组,伪足数目及长度优于其他组。LPS组钛片上成骨细胞伸展最差且几乎没有伪足伸展。LPS+Wnt4组钛片上成骨细胞黏附形态与对照组相近。结论本实验通过提取小鼠原代成骨细胞,分组对比研究不同浓度的Wnt4在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,揭示0.05μg/m LWnt4重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用,为临床治疗种植体周围炎提供一种新的思路。

关键词： 乳腺癌   新辅助化疗   全身炎症反应指数   病理完全缓解  

摘要： 背景:在许多瘤种中,例如乳腺癌和胃癌,全身炎症反应指数(systemic inflammation response index,SIRI)与患者的预后之间具有显著的联系。然而,有关SIRI与乳腺癌新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NAC)疗效预测之间的相关性研究甚少,其预测价值尚不明确。本研究旨在探究接受NAC的乳腺癌患者的SIRI和疗效预测之间的相关性,并为乳腺癌NAC疗效提供简单方便和准确的预测指标。方法:本研究回顾性分析了从2015年6月至2020年6月期间接受NAC的241例乳腺癌患者的临床病理参数和治疗前外周静脉血参数的特征。使用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线来获得炎症血标志物的最佳截断值。使用ROC曲线的曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)来比较不同炎症标志物对病理完全缓解(pathological complete response,p CR)的预测优劣性。卡方检验用于探究临床参数与p CR的相关性。Logistic回归模型被用于多因素分析。结果:本研究中我们收集了299名接受NAC的乳腺癌患者的临床数据。根据纳入和排除标准,最终纳入241例乳腺癌患者进行研究分析。SIRI的最佳截断值为0.72;中性粒细胞淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)的最佳截断值为1.77;淋巴细胞单核细胞比值(lymphocyte to monocyte ratio,LMR)的最佳截断值为5.38;绝对淋巴细胞计数(absolute lymphocyte count,ALC)的最佳截断值为1.57。在241例乳腺癌患者中,只有48例NAC后(19.92%)达到p CR。所有乳腺癌患者诊断时的中位年龄为48岁。体重指数(body mass index,BMI)≥24和BMI<24组分别有116和125名患者。84名乳腺癌患者在诊断时经检测其腋窝淋巴结未发现转移性病灶。低和高SIRI组分别包括63名和178名乳腺癌患者。本研究纳入三阴型乳腺癌53例;HER-2过表达型乳腺癌87例;激素受体阳性型101例。在本研究中,临床T和N分期、BMI、组织学分级、分子亚型、SIRI、NLR和LMR与p CR具有统计学相关性。有趣的是,低BMI值的患者的p CR率高于高BMI值的患者。此外,在临床T和N分期较高的患者中观察到较低的p CR率。激素受体阳性型乳腺癌患者的p CR率低于三阴型乳腺癌和HER-2过表达型乳腺癌患者。此外,低SIRI值的患者的p CR率高于高SIRI值的患者且低NLR的患者也被观察到具有较高的p CR率。高LMR值的患者的p CR率较高。多因素分析表明,只有临床T和N分期、NLR和SIRI保留了它们与p CR的统计学相关性。SIRI的AUC大于NLR。SIRI<0.72的患者达到p CR的机会比SIRI≥0.72的患者高出近5倍(OR,4.999;95%CI:1.510-16.551,P=0.008)。结论:治疗前SIRI可以预测接受NAC的乳腺癌患者是否更容易达到p CR,该参数可帮助临床医生采用更为简便的方法提前预测NAC的疗效,从而进一步为患者制定个性化的治疗策略。

关键词： 膀胱尿路上皮癌   全身免疫炎症指数   预后  

摘要： 目的:探讨全身免疫炎症指数(SII)在不同分期膀胱尿路上皮癌患者诊疗中的意义。方法:回顾性研究自2014年9月至2017年9月首次就诊于我院的154例膀胱癌患者的临床资料,将其中119例行经尿道膀胱肿瘤电切术(transurethral resection of bladder tumor,TURBT)进行治疗的患者设为non muscle invasive bladder cancer组;将35例行膀胱根治性切除术(RC)+尿流改道手术治疗的患者设为muscle invasive bladder cancer组。同时随机选取我院100例健康人群设为对照组,将该组设为正常体检组。应用SPSS26.0并对其相关资料进行统计学分析,对比三组的术前SII值,再根据NMIBC组和MIBC组患者术后是否出现肿瘤复发,绘制受试者工作特征曲线(Roc曲线)来确定SII最佳截断值,通过SII最佳截断值来比较不同分期的膀胱癌患者的临床病理特征,以及评估SII值是否可以作为不同分期膀胱癌患者预后的指标。结果:健康人群、NMIBC患者和MIBC患者三种不同类型人群中的SII存在差异(P<0.05)。在NMIBC患者中,高SII组(SII≥370.35)和低SII组(SII<370.35)在肿瘤大小、肿瘤数量以及术后肿瘤是否复发上存在差异(P<0.05),多因素Cox回归分析结果显示:多发肿瘤(HR=1.94,95%CI:1.06—3.551,P=0.032)、肿瘤≥3cm(HR=1.86,95%CI:1.048—3.3,P=0.034)、高级别肿瘤(HR=1.777,95%CI:1.035—3.052,P=0.037)及SII≥370.35(HR=1.955,95%CI:1.051—3.638,P=0.034)均是影响NMIBC患者术后RFS的独立危险因素。在MIBC患者中,高SII组(SII≥687.26)和低SII组(SII<687.26)在肿瘤分期上存在差异(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示:病理T3分期(HR=3.237,95%CI:1.074-9.752,P=0.037)、高级别肿瘤(HR=6.178,95%CI:1.345-28.384,P=0.019)及SII≥687.26(HR=3.656,95%CI:1.006-13.282,P=0.049)是影响MIBC患者RFS的独立危险因素。结论:***在正常健康人群、非肌层浸润性和肌层浸润性膀胱癌患者均存在差异,并对膀胱尿路上皮癌的浸润深度有一定的诊断价值。***是NMIBC患者和MIBC患者独立的预后因素,高SII提示预后不良,可以作为不同分期膀胱癌患者评估预后的指标。***容易计算,同时经济成本低,便于检测。

关键词： 解毒化瘀颗粒   慢加急性肝衰竭   Th17相关炎症因子   免疫炎症反应  

摘要： 目的:观察解毒化瘀颗粒对慢加急性肝衰竭（Acute-on-Chronic Liver Failure,ACLF）大鼠一般情况、体重、肝功能、肝组织病理改变及大鼠血清白细胞介素17（Interleukin-17,IL-17）、白细胞介素17A（Interleukin-17A,IL-17A）、白细胞介素23（Interleukin-23,IL-23）炎症因子含量的影响,从免疫炎症角度探讨解毒化瘀颗粒拮抗大鼠ACLF的作用机理。方法:将40只SPF级SD大鼠适应性喂养1周后,将SPF级SD大鼠40只,雄性,220g±10g,随机分为3组,正常组（Normal）10只、模型组（Model）15只、中药组（JDHY）15只,除正常组外,模型组与中药组按40%四氯化碳（CCl4）:橄榄油=4:6配比,以2.0ml/Kg腹腔注射,每周2次,持续10周建立肝硬化大鼠模型,再以400mg·kg-1D-氨基半乳糖（D-galactosamine D-Ga LN）和10μg·kg-1脂多糖（Lipopolysaccharide LPS）一次性腹腔注射诱导建立大鼠ACLF模型,于D-Gal N、LPS急性攻击前5天开始灌胃,中药组给予解毒化瘀颗粒中药液,模型组给予等量蒸馏水灌胃进行对照,期间观察大鼠一般情况、体重变化、死亡情况、大小便情况,三组大鼠在造模成功后48h处死,腹主动脉采血、剖取肝脏,HE染色后观察大鼠肝脏病理变化,全自动多功能酶标仪检测血清谷氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase ALT）、天门冬氨酸转移酶（aspartic transaminase AST）、总胆红素（total bilirubin TBi L）水平,ELISA试剂盒检测血清IL-17、IL-17A、IL-23含量。结果:（1）一般情况:在适应性喂养1周期间,三组大鼠精神状况良好,毛色光亮,饮食正常,大小便正常。注射CCl4橄榄油期间,模型组、中药组大鼠活动较前减少,毛色光泽度下降,饮食逐渐减少,10周末大鼠腹部膨隆,腹水明显,大便稀烂、部分不成形,小便颜色变深;腹腔注射D-Gal N和LPS后,模型组大鼠精神萎靡,喜蜷卧,毛色暗黄无光泽,不喜进食,大便稀烂,小便深黄,经干预后,中药组大鼠与模型组大鼠相比活动增加,进食较多,大便部分可成形,小便淡黄,一般情况较模型组改善。（2）各组大鼠存活率比较:正常组大鼠全部存活,模型组、中药组大鼠各15只,在肝硬化基础上急性攻击48小时后,最终模型组剩余8只,存活率为53.3%,与文献相近[1],中药组剩余9只,存活率为60%。（3）各组大鼠体重变化:实验前正常组、模型组、中药组大鼠体重组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）;实验后模型组、中药组大鼠体重增长均明显低于正常组,差异具有统计学意义（P<0.05）,中药组与模型组对比,差异无统计学意义（P>0.05）。（4）各组大鼠肝脏组织病理学比较:HE染色下正常组大鼠肝细胞排列整齐,肝小叶结构清晰,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列,未见明显水肿及坏死,无炎症细胞浸润,无纤维组织增生;肝硬化大鼠肝脏组织可见正常肝小叶结构被破坏,大量增生的纤维组织将肝细胞再生结节分割包绕成大小不等的类圆形肝细胞团,明显的假小叶形成,假小叶内肝细胞排列紊乱,可见肝细胞水肿、坏死及再生;模型组大鼠可见肝细胞大片状坏死,细胞核变大,呈现双核、多核的异型性,大量炎症细胞浸润,肝小叶结构模糊不清,肝窦扩张充血,残留肝细胞水肿明显;中药组大鼠肝细胞坏死面积较模型组减少,炎症细胞浸润明显减少,细胞肿胀、坏死减轻。（5）各组大鼠血清肝功能ALT、AST、TBi L的比较:与正常组相比,实验后模型组、中药组ALT、AST、TBi L均明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,中药组ALT、AST、TBi L均明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（6）各组大鼠血清IL-17、IL-17A、IL-23的表达水平:与正常组相比,实验后模型组、中药组IL-17、IL-17A、IL-23均明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,中药组IL-17、IL-17A、IL-23均明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）结论:（1）解毒化瘀颗粒可改善ACLF大鼠的精神状况、毛色光泽度及大小便情况,增加ACLF大鼠的进食;（2）在ACLF大鼠中,大鼠血清IL-17、IL-17A、IL-23炎症细胞表达水平较高,肝脏炎症细胞浸润明显,肝脏处于免疫炎症激活状态;（3）解毒化瘀颗粒能通过减少Th17相关炎症因子IL-17、IL-17A、IL-23的表达,减轻肝脏炎症损伤,改善ACLF大鼠的ALT、AST、TBi L,提高ACLF大鼠的存活率,这可能是解毒化瘀颗粒拮抗