关键词： 脂肪干细胞   软骨组织工程   免疫调节   巨噬细胞   软骨细胞外基质代谢  

摘要： 研究背景:先天性小耳畸形是整形外科的常见疾病和治疗难点。组织工程技术为耳廓重建提供了崭新的思路。关键问题之一是如何使组织工程软骨在具有完全免疫能力的大动物体内保持形态和功能的稳定性。其中,以巨噬细胞参与为主的免疫炎症反应是影响组织工程软骨稳定性的关键因素之一,但具体机制尚不明确。CD47-SIRPα通路在巨噬细胞介导的免疫炎症反应中有重要作用,但该通路是否介导了氧化损伤软骨细胞与巨噬细胞间的作用目前尚不明确。脂肪干细胞具备良好的免疫调节效应。但脂肪干细胞是否可以通过调控CD47-SIRPα通路来调节巨噬细胞介导的免疫炎症反应进而有利于组织工程软骨体内植入的稳定性目前尚不明确。研究目的:1、明确体外传代培养及皮下异位移植对软骨细胞CD47的影响;2、构建氧化损伤软骨细胞模型,明确CD47-SIRPα通路在氧化损伤软骨细胞与巨噬细胞间的作用;3、明确在体外条件下脂肪干细胞对CD47-SIRPα通路的调节作用;4、明确大动物体内条件下脂肪干细胞对组织工程软骨植入后以巨噬细胞参与为主的免疫炎症反应以及软骨细胞外基质代谢平衡的调节作用。研究方法和结果:1、体外传代培养及皮下异位移植对软骨细胞CD47分子的影响方法:选取不同代次的体外培养的人软骨细胞,以及皮下埋置1年软骨消化提取的软骨细胞,采用流式细胞术鉴定各组软骨细胞膜表面的CD47的表达及构象改变情况。结果:组织工程软骨修复体构建的关键步骤—体外传代培养以及异位皮下移植均导致软骨细胞CD47构象改变,但均不会导致CD47表达缺失。2、氧化损伤软骨细胞的CD47-SIRPα通路研究方法:构建氧化损伤软骨细胞模型,采用流式细胞术、免疫荧光实验等免疫学检测方法没明确氧化损伤软骨细胞中CD47-SIRPα通路的具体机制及作用。结果:成功构建氧化损伤软骨细胞模型。氧化损伤会导致软骨细胞表面CD47构象改变。构象改变的CD47在TSP-1结合的促进下与SIRPα结合。CD47-SIRPα通路可触发巨噬细胞的吞噬作用。3、体外条件下脂肪干细胞对SIRPα表达的调节作用方法:采用人急性单核细胞性白血病细胞(THP-1)为模型诱导为M1巨噬细胞。通过隔离共培养的方法探究脂肪干细胞对巨噬细胞SIRPα表达的调节作用。结果:体外条件下THP-1细胞成功诱导为M1巨噬细胞,脂肪干细胞可以抑制M1巨噬细胞SIRPα表达,并促进其M2极化。4、局部注射脂肪干细胞对组织工程软骨自体植入后的调节作用方法:体外构建软骨细胞膜片,自体植入猪的皮下组织,实验组在植入体周围局部注射自体脂肪干细胞悬液,对照组注射等量生理盐水。2周后从取出的软骨细胞膜片植入体、植入体周围组织和外周血中采集样本,采用免疫及软骨相关检测方法比较两组的免疫炎症反应和软骨细胞外基质合成的差异。结果:局部注射脂肪干细胞可降低软骨细胞膜片在大动物体内植入后以巨噬细胞参与为主的局部免疫炎症反应,并有利于软骨细胞外基质代谢的平衡。研究结论1、软骨细胞均表达CD47,组织工程软骨修复的关键步骤—异位皮下移植和体外细胞传代培养会导致软骨细胞CD47的构象改变;2、氧化损伤会导致软骨细胞表面CD47构象改变;构象改变的CD47在TSP-1结合的促进下与SIRPα结合,引发巨噬细胞的吞噬作用;3、脂肪干细胞通过抑制M1巨噬细胞SIRPα表达来调节CD47-SIRPα通路并促进M2极化;4、局部注射脂肪干细胞可降低组织工程软骨植入后以巨噬细胞参与为主的局部免疫炎症反应,并且促进软骨细胞外基质代谢平衡。

关键词： 膜性肾病   三焦祛湿方   氧化应激   炎症   阳离子化牛血清白蛋白  

摘要： 膜性肾病（MN）是一种以肾小球基底膜弥漫增厚、上皮下免疫复合物沉积为主要病理表现的肾小球疾病,原发性MN是构成成年患者肾病综合征的常见疾病,约占其30%左右。近十年的调查发现,我国MN患者有年轻化趋势,并逐年增加。目前,MN的治疗方案以激素联合免疫抑制剂为主,伴随着治疗效果,不良反应也逐渐显现,因此,探索更安全有效的治疗方法势在必行。中药复方可以通过多靶点治疗膜性肾病,导师陈志强教授根据多年的临床经验,运用中医理论详细阐述了膜性肾病的发病过程,本病以水肿、蛋白尿为主要症状,湿是其主要致病因素,我们认为本病基本病机为脾肾阳虚为本,水湿痰瘀为标,病机关键在于三焦气化,治当温补脾肾、化湿利水,化湿利水基于气化,故提出三焦祛湿方。我们前期临床研究发现本方治疗MN有较好效果,因此,拟将三焦祛湿方运用于膜性肾病动物模型,观察该方在MN小鼠氧化应激及其引发的炎症反应中的作用,为临床提供基础研究理论依据。 第一部分三焦祛湿方对膜性肾病小鼠生化指标及肾脏组织形态学改变的影响 目的:观察三焦祛湿方对MN小鼠血清生化指标及肾脏病理改变的影响,以探究三焦祛湿方的肾脏保护作用。 方法:将60只雌性BALB/c小鼠随机分为正常组10只和模型组50只。正常组尾静脉注射生理盐水,模型组小鼠注射阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）(6.5mg/kg),成功建立模型的小鼠随机分为模型组、盐酸贝那普利组(0.0013g·kg-1)、三焦祛湿方低剂量组(3.71g·kg-1)及三焦祛湿方高剂量组(7.42g·kg-1),分别给予各组相应剂量的药物灌胃,每天1次,连续4周。分别于造模前、造模后及治疗后检测24h尿蛋白定量（24h UTP）。给药后,检测血清血尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）水平,肾组织行苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）、过碘酸-六胺银（PASM）染色,光镜下观察小鼠肾组织病理形态变化,免疫荧光检测肾组织免疫球蛋白G（IgG）沉积情况,透射电镜下观察肾组织超微结构病理变化。 结果: 1小鼠一般情况 与正常组小鼠相比,模型组小鼠精神萎靡,活动迟缓,毛发干枯,饮食减少,治疗后,与模型组小鼠比较,治疗组小鼠饮食渐增,活动渐多,精神状态有所改善,毛发逐渐有光泽。 2各组24h UTP情况 造模前,各组24h UTP水平比较差异无统计学意义（P>0.05）;造模后,与正常组相比,模型组24h UTP水平显著升高（P<0.01）;给药后,与模型组比较,各治疗组24h UTP水平明显降低（P<0.01）。 3各组血清BUN、Scr、TG、TC、ALB、TP情况 与正常组相比,模型组血清TG、TC水平显著增高（P<0.01）,TP、ALB水平显著降低（P<0.01）;治疗后,与模型组比较,各治疗组血清TG、TC水平显著降低（P<0.01）,TP、ALB水平明显增高（P<0.01,P<0.05）。各组Scr、BUN水平相当,差异无统计学意义（P>0.05）。 4光镜下肾脏组织病理变化 正常组HE染色可见肾小球结构完整,囊腔大小正常;模型组HE染色可见肾小球体积增大,Masson染色可见嗜复红蛋白沉积,PASM染色基底膜增厚,可见“钉突”形成。与模型组比较,干预后,各组HE染色肾小球体积增大有所减轻,Masson染色偶见嗜复红蛋白,PASM染色基底膜增厚程度减轻,“钉突”较少见。 5免疫复合物沉积情况 正常组肾小球未见免疫复合物沉积,荧光强度为“-”,模型组肾小球可见IgG沿毛细血管襻弥漫性沉积,荧光强度为“+++～++++”,干预后,治疗组肾小球可见IgG沿毛细血管襻少量沉积,荧光强度为“+～++”。 6电镜下观察肾脏组织超微结构变化 与正常组相比,模型组基底膜显著增厚,上皮下电子致密物沉积,上皮细胞足突广泛融合;与模型组相比,干预后,各治疗组基底膜增厚程度较模型组减轻,上皮细胞足突排列较整齐、少量融合,偶见上皮下电子致密物沉积。 第二部分三焦祛湿方对膜性肾病小鼠氧化应激和炎症状态的干预作用 目的:观察三焦祛湿方对MN小鼠氧化应激指标及炎症指标的改变情况,以探究该方通过改善氧化应激及炎症反应发挥保护肾脏作用。 方法:小鼠造模、分组及干预方法同前。干预4周后,检测小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）水平,免疫荧光法检测肾组织活性氧（ROS）的表达,Western blot检测肾组织NADPH氧化酶4（NOX4）蛋白的表达,ELISA法检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）水平,荧光定量PCR法检测肾组织单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附因子-1（VCAM-1）mRNA的表达。 结果: 1血清SOD活

关键词： NF-κB   先天免疫   肠道炎症   CK2   中华卤虫   尕海卤虫  

摘要： 无脊椎动物的宿主防御主要依赖先天免疫系统。宿主的外表皮和肠道表皮是外来入侵物种遇到的第一道防线,当第一道防线被打破后,会触发一系列的免疫应答反应。NF-κB家族是一种参与先天免疫反应重要的转录因子,通过调节细胞因子和抗菌因子的转录来影响细胞分化,增殖和存活。研究表明NF-κB在维持上皮屏障中具重要功能,加强NF-κB活化会导致肠道炎症,而抑制NF-κB活化也会导致严重的肠道上皮炎症。目前NF-κB调控肠道炎症的分子机制尚不明确。蛋白激酶CK2是多种蛋白质底物丝氨酸/苏氨酸的激酶,广泛分布在真核细胞中,参与NF-κB信号通路的激活;CK2具结构活性并与多种细胞功能有关,包括细胞周期、细胞凋亡和炎症反应等。为了阐明NF-κB和CK2在甲壳动物先天免疫系统中的具体功能和作用机制,本研究以高盐环境的甲壳动物中华卤虫Artemia sinica为研究材料,探究了NF-κB在肠道炎症中的调控作用和分子机制,以及CK2在2种生活于不同地理环境的卤虫胚胎发育和先天免疫反应中的表达差异和功能。主要研究结果如下:1.利用生物信息技术,从中华卤虫转录组中筛选并鉴定了As NF-κB基因序列,其开放阅读框为3066 bp,编码1021个氨基酸,具典型的N-末端的Rel同源区域(RHD),结合DNA和同源/异源二聚化。利用荧光定量PCR(q RT-PCR)对As NF-κB在中华卤虫不同发育时期和不同细菌刺激下的m RNA表达水平进行了研究,不同发育阶段的As NF-κB水平从无节幼体到成年期呈下降趋势。在Micrococcus lysodeikticu、Vibrio harveyi和Vibrio anguillarum的菌胁迫反应中,As NF-κB的表达水平增加;在Vibrio parahaemolyticus的刺激反应中,As NF-κB的表达水平降低。利用抑制剂SN50阻止As NF-κB进入细胞核启动转录后,白介素17(IL17)和甘露糖受体C型(MRC)的表达被抑制了;结果表明As NF-κB在不同细菌刺激下参与了宿主的免疫反应,并促进IL17和MRC的表达来进行免疫防御。2.本研究通过硫酸葡聚糖钠诱导形成肠道炎症模型,发现在肠道炎症中,As NF-κB活性受到了抑制;当肠道损伤时,SN50降低As NF-κB活性后,检测到了免疫因子IL17,MRC,ABF1/2,Serpin B13和β-arrestin表达量明显被抑制,而Lysozyme的表达量显著增加;在肠道稳态中,抑制As NF-κB表达会导致肠道上皮大范围的损伤和黏膜下层出现血细胞广泛浸润;在肠道炎症中,具高活性As NF-κB表达的中华卤虫表现出较少的肠道损伤并维持肠道屏障的完整性。在细菌感染炎症和肠道炎症反应中,均检测到了As NF-κB对IL17的调控,鉴于IL17既是炎症性疾病中的致病性细胞因子,又是宿主对感染的保护性免疫中的关键细胞因子。本课题研究了肠道炎症中IL17的功能及IL17与As NF-κB之间的联系。肠道损伤会导致IL17的表达显著增加。通过si RNA干扰IL17的表达,发现在肠道损伤中IL17表达降低会增强As NF-κB的活性;同时IL17表达被抑制后会引发肠道上皮结构损伤和大量炎症细胞的浸润,加重肠道炎症反应。结果表明:NF-κB和IL17在维持肠道上皮细胞完整性和免疫稳态中具关键作用。3.采用高通量技术检测中华卤虫肠道炎症中菌群的变化,发现中华卤虫肠道的优势菌群为变形菌门和厚壁菌门;用SN50抑制As NF-κB表达后,肠道中变形菌门的丰度增加,厚壁菌门丰度降低;在属级水平上,弧菌的丰度增加,微小杆菌的丰度降低。在DSS诱导的肠道炎症后,高表达As NF-κB的肠道中变形菌门的丰度下降,厚壁菌门的丰度增加;在属级水平上,弧菌和胞杆菌属的丰度降低;中华卤虫肠道的优势菌群在种级水平上为溶藻弧菌和金橙黄微小杆菌,在肠道炎症中,高表达的As NF-κB的肠道菌群中溶藻弧菌的丰度降低,金橙黄微小杆菌的的物种丰度增加。这些结果揭示了NF-κB活性对肠道微生物的影响。4.采用高通量技术检测了生活在不同地理环境的种群中华卤虫***和青海尕海卤虫Artemia parthenogenetica应对细菌胁迫下的转录组,通过数据比对分析发现中华卤虫的菌刺激差异基因主要富集到Staphylococcus aureus infection、Marlaria和Systemic lupus erythematosus等通路上;尕海卤虫菌刺激差异基因主要富集在Tuberculosis、Phagosome和ABC transporters等KEGG通路。中华卤虫的菌刺激差异GO富集在heme metabolic process、negative regulation of

关键词： oXiris   HA380   脓毒症血液净化   炎症因子  

摘要： 目的:研究不同血液净化治疗模式对脓毒症患者炎症介质的清除作用及疗效。方法:本研究为前瞻性研究,纳入31例符合筛选标准的脓毒症患者,随机分成连续性静脉-静脉血液滤过(CVVH)(o Xiris-百希瑞)+血液灌流HP(HA380)、CVVH(o Xiris)、CVVH(ST100膜)+HP(HA380)组,在48h内分别比较3组患者治疗过程中血浆炎症因子和器官功能指标的变化情况。结果:治疗48h后o Xiris+HA380组血浆IL-6、HMGBI、PCT、心率、升压药剂量、APACHE II、SOFA、尿素氮、肌酐水平较治疗前相比明显降低(t值分别为6.4、3.02、10.49、4.28、2.38、2.16、3.02、3.03、2.85;P值分别为<0.001、0.012、<0.001、0.001、0.037、0.041、0.013、0.011、0.016),平均动脉压、氧合指数(Pa O2/Fi O2)升高(t值分别为-2.84、-3.57,P值为0.016、0.004)。o Xiris组在治疗48h时较治疗前相比IL-6、PCT、心率、APACHII评分、肌酐水平明显降低(t值分别为3.69、1.96、2.92、2.56、3.89,P值分别为0.004、0.041、0.017、0.031、0.003)。o Xiris+HA380△IL-6下降值高于CCVH+380组[(478.18±258.25)pg/ml比(48.40±101.50)pg/ml(F=8.636,P=0.001),△PCT下降值高于o Xiris组(31.39±10.36)ng/ml比(10.87±18.33)ng/ml(F=16.402,P<0.001)。百希瑞+380组机械通气时间明显缩短(P=0.014)但3组患者ICU住院时间、ICU住院死亡率及28d死亡率没有差异(P>0.05)。治疗后48h死亡组炎症因子IL-6、IL-10、HMGBI水平较存活患者显著高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:百希瑞膜联合HA380能在短时间并有效清除脓毒症患者的炎症因子水平,改善组织灌注并帮助机体恢复脏器功能。

关键词： 输尿管软镜术   全身炎症反应综合征   肾结石   列线图  

摘要： 研究目的:运用统计学方法分析接受经尿道输尿管软镜碎石术(Retrograde Intrarenal Surgery,RIRS)术后并发全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)的影响因素,通过建立可视化预测模型,使RIRS术后发生SIRS的风险得到有效预测。研究方法:将2019年8月-2021年10月于*****医院泌尿外科接受RIRS治疗的肾结石患者纳入研究,收集基线资料包括年龄、性别、身高体重(计算BMI)、糖尿病病史、高血压病史、肾脏结石手术史。分别收集患者的术前实验室检查资料及影像学资料,术前实验室检查包括血常规、生化全套、凝血功能等;术前影像资料,如B超、CT、KUB+IVP。记录术中相关数据,如手术时间、结石是否单发、结石是否单盏等,术后观察指标包括术后两小时血常规,体温,呼吸频率,脉搏,术后一天复查KUB等。根据术后是否发生SIRS进行分组,通过统计学分析,探索影响指标及独立危险因素,并将独立危险因素纳入Nomogram预测模型。收集2021.11-2021.12接受RIRS患者的资料进行模型的验证。研究结果:(1)本研究共纳入393例患者的临床资料,排除85例(临床资料不完整,同时行其他手术等原因)。所有患者均顺利完成手术,其中SIRS组共78人,发展为脓毒血症者15人,感染性休克者3人。SIRS者均经抗感染及对症治疗后好转出院;脓毒血症者在普通病房行液体复苏+抗生素升级治疗后好转出院;感染性休克者经ICU高级生命支持治疗后好转出院,无死亡病例。(2)单因素分析结果提示,两组患者在年龄、性别、术前淋巴细胞比率、术前中性细胞比率、系统性炎症反应指数(Systemic inflammatory response index,SIRI)、术前全身免疫炎症(Systemicimmuneinflammationindex,SII)、淋巴细胞/单核细胞计数(Lymphocyte to monocyte ratio,LMR)、中性粒细胞/淋巴细胞计数(Neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)、纤维蛋白原/白蛋白(Fibrinogen to albumin ratio,FAR)、营养预后评分(PNI)、CRP、白蛋白与球蛋白比值、白蛋白、纤维蛋白原、亚硝酸盐、结石负荷、手术时间以及术后残石方面存在显著差异(P<0.05),而在体质指数(BMI)、糖尿病、肾脏结石手术史、血白细胞、尿路感染、血小板/淋巴细胞计数(Plateletcount to lymphocyte ratio,PLR)、CONUT评分、是否单发、是否单盏、是否单侧、是否术前置双J管、ASA评分、是否使用负压鞘等方面无统计学差异(P>0.05)。(3)研究显示性别、术前中性粒细胞比率、LMR、结石负荷、手术时间为RIRS术后并发SIRS的独立危险因素。(4)研究构建的Nomogram模型对预测RIRS术后并发SIRS有良好的效能,内外部验证均提示具有良好的预测能力。结论:(1)本研究认为年龄、性别、术前淋巴细胞比率、术前中性细胞比率、SIRI、SII、NLR、LMR、FAR、PNI评分、CRP、白球比、白蛋白、纤维蛋白原、亚硝酸盐、结石负荷、手术时间以及术后残石可能是RIRS术后并发SIRS的影响因素。(2)本研究认为性别、术前中性粒细胞比率、LMR、结石负荷、手术时间可作为RIRS术后并发SIRS的独立预测因素。(3)本研究构建的Nomogram对预测RIRS术后SIRS具有良好的效能,有利于早期筛选高危患者,尽早采取治疗。

关键词： 自身免疫性脑炎   免疫疗法   治疗反应性   全身炎症免疫指数   免疫反应  

摘要： 背景:自身免疫性脑炎(Autoimmune encephalitis,AE)是一种有致残性但有可能治愈的神经系统罕见疾病。自身免疫性脑炎有不同的亚型,以抗细胞内抗原(突触内部、胞浆或核蛋白)或细胞外突触蛋白和细胞表面抗原的抗体为特征。部分临床诊断的自身免疫性脑炎病例没有已知的自身抗体,因此被称为“血清阴性”自身免疫性脑炎。有些自身免疫性脑炎不伴有其他疾病,而部分自身免疫性脑炎则与潜在的恶性肿瘤有关,即所谓的副肿瘤性自身免疫性脑炎。自身免疫性脑炎患者通常表现为行为改变、记忆和认知障碍、癫痫发作以及运动障碍等。在疾病的急性期,可能会有严重的残疾症状,部分患者经过积极的免疫治疗后,会获得较好的预后,然而部分患者会遗留神经系统症状。自身免疫性脑炎患者预后因抗体亚型而异,细胞表面抗体患者的预后最好,而靶向细胞内抗原的典型副肿瘤性自身免疫性脑炎病例的预后较差。然而,即使在一个亚型中,患者的长期预后也不一致。了解哪些因素可能影响预后对于自身免疫性脑炎未来的治疗决策至关重要。目的:研究全身炎症免疫指数值与自身免疫性脑炎疾病严重程度和治疗反应性相关性。资料与方法:选择郑州大学第一附属医院自2018年1月至2020年9月首次被诊断为自身免疫性脑炎的住院患者进行研究。严格按照纳入排除标准,最终将符合要求的共146名自身免疫性脑炎患者纳入本研究。以改良Rankin评分(Modified Rankin Scale,mRS)评估入院及一线免疫治疗30天后患者病情严重程度。根据患者治疗反应性将符合纳入标准的患者分为2组,分别比较两组患者一般资料、既往史、前驱症状、临床表现、影像学及生化检查。并通过受试者工作特征(ROC)曲线计算全身炎症免疫指数对自身免疫性脑炎治疗反应性的预测价值。采用单因素分析与二元Logistic回归模型分析自身免疫性脑炎治疗反应性较差的危险因素。结果:1.回顾性分析146例诊断为自身免疫性脑炎的患者,ROC分析显示全身炎症免疫指数(Systemic Inflammation Index,SII)预测AE治疗反应性较差的最截断值为863.3,对应的敏感度与特异度分别为83.0%与72.0%,曲线下面积(AUC)为 0.75。2.采用向后逐步方法的二元logistic回归显示,意识水平下降、开始治疗前的时间和SII与免疫治疗反应差有关。此外,SII≤863.3组相比于SII>863.3组有更低的意识障碍、入住NICU与机械通气的百分比,更低的脑脊液压力和更低的血中性粒细胞、血小板计数和较高的血淋巴细胞计数和GCS评分(均P<0.05)。SII与疾病严重程度恶化和治疗反应不佳有关。结论:SII与自身免疫性脑炎疾病严重程度和首诊为自身免疫性脑炎一线免疫治疗30天后治疗反应性有关,SII评分>863.3的患者更有可能对免疫治疗反应较差。

关键词： 全身炎症反应指数   急性前循环脑梗死   血管内治疗   机械取栓  

摘要： 目的探讨全身炎症反应指数(SIRI)与急性前循环脑梗死血管内治疗预后的相关性及预测价值。方法选取2019年10月至2021年10月由华北理工大学附属医院神经内科重症病房及唐山南湖医院神经内科所收治的急性前循环脑梗死且行血管内治疗的118患者作为研究对象。最终入组110例患者完成了研究。依据SIRI中位数1.95×10～9/L将患者分为低SIRI组(≤1.95×10～9/L)55例和高SIRI组(>1.95×10～9/L)55例。所有入组患者入院时收集年龄、性别、既往史等一般资料及入院NHISS评分、入院血糖,血管闭塞位置、术中情况等临床指标,于责任血管开通后1小时内采集肘静脉血送检血常规,测定白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、血小板计数。计算SIRI=中性粒细胞计数×单核细胞计数/淋巴细胞计数。在患者出院90天时对其进行随访,根据m RS评分评价患者的预后情况。采用t检验比较计量资料之间的差异,采用卡方检验比较计数资料之间的差异。采用多因素logistic回归分析以判断SIRI是否为分析不良预后的独立危险因素。通过绘制SIRI及入院NHISS评分的ROC曲线,通过Z检验比较二者的ROC曲线下面积来进一步评价SIRI对预后的预测能力及实际应用价值,采用配对卡方检验及一致性检验来评价SIRI及NHISS评分的校准度。结果1低SIRI组的预后良好率明显高于高SIRI组,差异有统计学意义(P<0.05)。表明SIRI水平对预后有影响。2校正了其他因素干扰后,SIRI仍与急性前循环脑梗死血管内治疗的不良预后有关(P=0.035)。3 SIRI及NHISS评分预测急性前循环脑梗死血管内治疗预后的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.764和0.833,Z值为1.057,P=0.291,差异无统计学意义(P<0.05)。NHISS评分的AUC略大于SIRI,但二者差异无统计学意义(P>0.05)。4根据约登指数最大的原则筛选预测临界值,SIRI的最佳截值点为1.94×10～9/L,NHISS评分的最佳截值点为16.5,当SIRI>1.94×10～9/L时,其灵敏度为82.1%,特异度66.2%,Kappa值为0.439。与NHISS评分的预测结果比较,SIRI灵敏度略高,特异度较低,配对卡方检验P=0.575和P=0.091,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论SIRI是急性前循环脑梗死血管内治疗预后的独立预测因素,SIRI水平越高,预后不良的比例越大,经过外部验证及相关分析,SIRI在实际临床工作中具有一定的应用价值,当界值为1.94×10～9/L时,具有较高的灵敏度和特异度。图1幅;表7个;参131篇。

关键词： 褪黑素   胆汁淤积   炎症   肝损伤  

摘要： 背景及目的胆汁淤积主要是胆汁流动受损,引起胆汁酸(bile acid,BA)在肝脏和血清中积聚,从而导致肝损伤、纤维化、肝硬化及终末期肝衰竭。熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)是胆汁淤积性肝病的一线用药,但是40%左右的原发性胆汁性胆管炎(primary biliary cholangitis,PBC)患者对UDCA治疗无反应,而原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)患者采用UDCA治疗已被证实无效。一种法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)激动剂奥贝胆酸(obeticholicacid,OCA)已被正式批准用于PBC的治疗,但可能出现瘙痒和血脂升高等副作用。因此,探索胆汁淤积性肝病的治疗靶点及药物应用,是未被满足的临床需求。近期有研究表明胆汁酸介导的肝脏炎症反应在胆汁淤积过程中发挥重要作用。胆汁淤积状态下,过量胆汁酸在肝脏积聚,造成肝细胞氧化应激和线粒体损伤,然后激活肝细胞内特异的信号通路和转录因子从而释放炎症因子。这些炎症因子激动并募集免疫细胞造成实质细胞死亡。因此,阻断胆汁酸诱导的肝细胞炎症反应可成为治疗胆汁淤积性肝病的有效方法。褪黑素是一种主要由松果体分泌的吲哚类神经激素,具有很多重要的生理功能,其潜在治疗作用最近受到广泛关注。大量研究显示褪黑素能通过抗氧化、抗炎、抗癌、抗增殖、抗凋亡的机制对各种肝脏疾病起作用。然而,褪黑素通过抑制炎症反应来减轻胆汁淤积性肝损伤的潜在机制仍未阐明。在本研究中,我们旨在探索褪黑素减轻胆汁淤积性肝损伤的作用及其潜在机制。我们发现褪黑素在体内外实验通过抑制胆汁酸诱导的肝细胞炎症反应来减轻胆汁淤积性肝损伤。我们的研究表明褪黑素可能成为一种治疗胆汁淤积性肝损伤的有效药物。方法1.我们检测了梗阻性胆汁淤积患者、PBC患者和对照组患者血清中褪黑素的水平。2.利用0.1%3,5-二乙氧羰基-1,4-二氢三甲吡啶(3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydrocollidine,DDC)饲料或1%胆酸(cholic acid,CA)饲料喂养小鼠构建胆汁淤积模型,并且褪黑素(100 mg/kg)给药处理。利用HE染色和天狼星红染色评估肝损伤。利用Real-time q PCR,Western-blot以及免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测褪黑素对小鼠肝内炎症因子、免疫细胞浸润标志物和转录因子表达的影响。3.分离及培养小鼠原代肝细胞,加入结合型胆汁酸牛磺胆酸(taurocholic acid,TCA)和褪黑素处理,用于体外实验进一步探索褪黑素减少胆汁酸诱导趋化因子表达的机制。结果1.梗阻性胆汁淤积和PBC患者血清中褪黑素水平显著升高,并且与血清学肝损伤标志物呈负相关。2.褪黑素给药(100mg/kg/d)明显改善胆汁淤积小鼠的肝脏炎症和纤维化。3.褪黑素在胆汁淤积状态下的小鼠和小鼠原代肝细胞中可通过ERK/Egr1和JNK/c-Jun信号通路抑制胆汁酸诱导的炎症因子。结论胆汁淤积患者血清中褪黑素明显升高。褪黑素可通过抑制炎症反应减轻胆汁淤积性肝损伤。因此,褪黑素给药可成为改善胆汁淤积的有效策略。

关键词： HSCT   GVHD   感染   LPS   中性粒细胞   巨噬细胞  

摘要： 异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)是将健康供者的造血干细胞移植给患者,从而重建其造血及免疫系统,实现临床血液系统肿瘤治疗的手段之一。目前allo-HSCT仍是临床上主要的移植选择,尤其是半相合造血干细胞移植(haploidentical stem cell transplantation,haplo-HSCT)因供者来源的优势得到了更广泛的应用。然而,由于移植供者和受者之间主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC)的不完全匹配,allo-HSCT常常伴随移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)的发生,使患者面临移植失败的风险。除GVHD以外,感染也是移植后的主要并发症,是移植后患者死亡率增加的主要原因。临床上常见的移植感染包括细菌、真菌、病毒感染。尤其在移植早期中性粒细胞减少期间,细菌感染非常常见。HSCT后患者固有免疫系统重建对移植后早期机体抗感染免疫能力的恢复至关重要。临床发现移植后早期感染相伴的系统性急性炎症反应是导致死亡的主要原因之一,然而由于我们对其背后的免疫学机制尚不完全了解,开发针对HSCT后感染导致的系统性急性炎症反应的有效治疗方法仍然十分困难。我们利用allo-HSCT模型发现伴有GVHD的移植小鼠对低剂量LPS刺激出现超强的炎性免疫反应,血清中检测到高水平的炎性细胞因子IL-6、TNF-α、INF-y、IL-12,提示炎性细胞因子风暴的出现,且12小时内小鼠生存率剧烈降低。同时在GVHD组小鼠的肝、脾、肺脏中也检测到了高水平的炎性细胞因子IL-6和TNF-α。在分析脾脏固有免疫细胞的细胞因子表达水平时,发现单核来源的巨噬细胞产生大量炎性细胞因子。为进一步研究巨噬细胞在移植后LPS诱导败血症中的作用,我们利用氯膦酸脂质体系统清除GVHD组小鼠体内巨噬细胞,相比较未清除巨噬细胞的GVHD组小鼠,巨噬细胞的清除显著降低小鼠对LPS刺激的反应性,血清中IL-6、TNF-α的表达水平明显下降,表明巨噬细胞是allo-HSCT后GVHD下产生炎性细胞因子的主要炎症细胞。对可能发挥免疫调节作用的细胞因子血清学的分析发现,TGF-β1在GVHD组小鼠血清和脾脏的表达水平明显降低。体外实验表明,重组细胞因子TGF-β1处理LPS刺激的腹腔巨噬细胞后可以显著降低其炎性细胞因子的产生。体内实验证实,注射重组细胞因子TGF-β1给GVHD组小鼠可以明显抑制小鼠对LPS刺激的反应水平,并显著提高小鼠的生存率。提示TGF-β1在移植后固有免疫介导的炎性应答中发挥重要免疫负调作用。为了进一步研究巨噬细胞炎性活化的免疫调节机制,我们分析了其它固有免疫细胞在调节巨噬细胞炎性活化中的作用。我们发现,体外成熟中性粒细胞与腹腔巨噬细胞共培养后显著降低腹腔巨噬细胞对LPS刺激的炎性反应,且呈数量依赖关系。体内系统清除中性粒细胞后,GVHD组小鼠对LPS刺激会出现更强的炎性反应;反之,过继转移成熟中性粒细胞后可以抑制小鼠对LPS刺激的炎性水平。提示成熟中性粒细胞在移植后固有免疫介导的炎性应答中发挥重要免疫负调作用。机制研究发现,成熟中性粒细胞对巨噬细胞的炎性反应发挥负调作用与其分泌的基质金属蛋白酶9(MMP9)有关。而GVHD组小鼠中性粒细胞的重建存在缺陷,不成熟中性粒细胞明显增加,MMP9产生不足,不能有效的抑制巨噬细胞的炎性活化,从而降低体内炎症反应的控制。这是GVHD小鼠容易形成LPS诱导炎性细胞因子风暴的另一原因。本课题在小鼠allo-HSCT基础上利用LPS诱导的急性炎症模型探究了GVHD下固有免疫的重建规律及其在移植早期感染相关的急性炎症反应中的作用机制。为临床HSCT患者中相关感染并发症的发生提供了理论解释,并为开发相应的移植并发症的防治策略提供了实验参考。

关键词： 结肠肿瘤   预后   列线图   全身免疫炎症指数   肝转移  

摘要： 目的: 本研究旨在探讨术前全身免疫炎症指数（Systemic immune-inflammation index,SII）对接受根治性手术的结肠癌（Colon cancer）患者术后1、2、3年无病生存期（Disease-free survival,DFS）的预测价值,同时构建列线图预测结肠癌患者术后1、2、3年DFS的概率,提供网页版无病生存概率计算器。 方法: 回顾性分析2013年9月1日至2018年8月31日于东南大学附属中大医院住院行根治性切除术的初诊结肠癌患者共计188例,并收集相应的临床病理资料。 1.根据术前血常规结果计算SII值(SII=血小板（P）×中性粒细胞（N）/淋巴细胞（L）),依据SII的中位数将纳入研究的对象分为高SII组（n=94例）和低SII组（n=94例）,比较两组患者临床特征上的差异性。 2.应用生存分析,比较SII水平高低对患者术后DFS的影响,并对可能影响术后DFS的因素进行单因素及多因素Cox分析。 3.将多因素Cox分析得出的独立危险因素引入R软件（R4.1.1）,构建患者根治术后1、2、3年DFS概率的列线图预测模型,并生成网页版DFS概率计算工具。 4.在出现术后复发的患者中,按照复发方式,将患者分为发生肝转移组（n=36例）和非肝转移组（n=27例）,分析影响肝转移的可能因素。 结果: 1.所有188例结肠癌患者术后中位随访时间1294（206-2766）天,随访期间,63例出现术后复发（其中局部复发11例,52例出现远处转移。在52例出现远处转移病人中,出现肝转移36例,多发转移及其他部位单发转移共16例）,死亡16例（其中因复发转移死亡共13例,包括因肝转移死亡6例及因多发转移及其他部位单发转移死亡6例及局部复发死亡1例）。术后复发率33.5%,死亡率8.5%。 ***的中位数为514.13,以此将188例患者分为低SII组（SII<514.13,94例）和高SII组（SII≥514.13,94例）。两组除了在肿瘤直径上有统计学差异外（c2=8.489,P=0.004）,其余临床特征均无统计学差异（P>0.05）。单因素分析提示术前SII水平、患者年龄、术前癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen,CEA）水平、原发肿瘤部位、脉管侵犯、神经侵犯以及病理学N、TNM分期是影响结肠癌患者术后复发的相关因素（P<0.1）,对上述指标进行多因素COX分析提示术前SII水平、患者年龄、原发肿瘤部位、病理学N分期（P<0.05）是结肠癌患者术后复发的独立危险因素。同时Kaplan-Meier生存分析提示高低两组患者术后平均DFS分别为1833.57±117.644天及2091.91±106.308天,两者统计学差异（P=0.048）。 3.将上述所述的独立危险因素纳入R软件,构建列线图预测模型预测结肠癌患者根治术后1、2、3年DFS的概率（每个独立危险因素对应相应分值,具体如下:0分:术前SII<514.13,30分:SII≥514.13;0分:年龄<65周岁,52分:年龄≥65周岁;0分:原发肿瘤位于左半结肠,50分:原发肿瘤位于右半结肠;0分:肿瘤分期N1,60分:N2,100分:N3）。受试者工作特征曲线（Receiver operating characteristic curve,ROC）及校准曲线表明列线图的预测结果与实际的观测结果一致性较好。同时通过“Dyn Nom”和“shiny”软件包成功构建网页版的1、2、3年DFS概率的动态计算器（https://***/Dyn Nomapp/）。 4.将术后肿瘤复发的63例患者（包括因复发转移死亡的13例患者）按是否发生肝转移分为肝转移组36例,非肝转移组27例,两组在原发肿瘤部位上有统计学差异（c2=5.452,P=0.020）,其余相关临床特征上未见明显统计学差异。 结论: 1.术前SII水平可以作为预测结肠癌患者根治性手术后DFS的指标。 2.年龄≥65周岁,术前SII升高,原发肿瘤位于右半结肠,术后病理N分期为N2的结肠癌患者具有更差的DFS。 3.根据独立危险因素构建的列线图有助于预测患者行结肠癌根治术1、2、3年的DFS概率,且预测价值良好。由此生成的网页版动态计算器可便捷计算术后3年内DFS的概率。 4.原发肿瘤位于右半结肠较左半结肠更容易发生肝转移。