关键词： PM2.5   HUVEC   单核细胞   粘附   功能紊乱   炎症   MAPK   NF-κB  

摘要： 目的:研究PM2.5对心血管内皮细胞功能和炎症的影响及其潜在分子机制,为科学评价PM2.5对人体心血管系统健康的潜在风险提供基础科学数据。方法:以人脐静脉细胞(HUVEC)为细胞模型,运用透射电镜观察HUVEC对PM2.5的吸收情况;分别利用实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验、Western Blot技术等检测内皮细胞功能和炎症反应的重要生物标志物:eNOS、ET-1、TF、PAI-1、MCP-1、IL-6、IL-8、TNF-α等的mRNA或蛋白的表达和释放;并从MAPK-IKKβ-NF-κB信号通路中的关键蛋白及其磷酸化水平来探讨PM2.5致内皮细胞功能紊乱与炎症的分子机制。结果:HUVECs细胞、THP-1细胞可以吞噬吸收PM2.5颗粒,且主要分布在胞质中。PM2.5可降低HUVECs细胞内eNOS表达,升高ET-1的表达,致NO/ET失衡;增强TF和PAI-1的表达,影响血凝/纤溶系统的正常功能;促进靶细胞中趋化因子及炎症因子(MCP-1、IL-6、IL-8、TNF-α)mRNA和蛋白的表达,引起炎症反应;PM2.5能促进MAPK途径的关键调控蛋白(JNK/ERK/P38)和炎症信号通路的关键调控蛋白(IKK/NF-κB)的磷酸化;并且上述各目标蛋白的表达或磷酸化水平,随PM2.5作用的剂量增加而增加,呈明显的剂量-效应关系。此外,PMPM2.5还能促进HUVECs细胞对THP-1细胞吸附和相关炎症因子的表达。结论:PM2.5可能通过MAPK-IKKβ-NF-κB途径致HUVECs功能紊乱和炎症,并促进内皮细胞对单核细胞的吸附。

关键词： 哺乳期乳腺炎   中医药   炎症   乳汁  

摘要： 目的:观察通乳方联合手法排乳对郁滞期外吹乳痈的临床疗效,探讨通乳方降低血清及乳汁中炎症水平的有效性。方法:将入组的郁滞期外吹乳痈患者随机分为治疗组与对照组,对照组予手法排乳治疗;治疗组在手法排乳的基础上予中药煎剂通乳方口服,每日2次,每袋100ml。分别于治疗前、治疗第7天用积分量表的形式评估两组患者郁滞期外吹乳痈的症状及体征,同时测定患者血清中白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比(N%)、C反应蛋白(CRP)的含量及患乳乳汁中IL-6的浓度。结果:1.经7天治疗后,两组患者症状学总积分均较前降低(p<0.05);但与对照组相比,治疗组临床症状积分降低更明显(p<0.05)。就单个症状而言:治疗组患者治疗后乳汁排泄不畅、乳房胀痛、乳房肿块、局部皮肤红热、恶寒发热、头痛身痛、烦躁、口渴、便秘症状均明显改善,与治疗前相比存在统计学意义(p<0.01)。对照组乳汁排泄、乳房胀痛、局部皮肤、恶寒发热、头痛身痛的积分较前治疗前明显降低,存在统计学意义(p<0.01);但乳房肿块、烦躁、口渴、便秘积分与治疗前相比无显著性差异(p>0.05)。两组对比,治疗组在降低乳房胀痛、恶寒发热、头痛身痛、烦躁、口渴、便秘症状积分上较对照组更具优势,差异有统计学意义(p<0.05)。2.经治疗,治疗组与对照组血清炎症水平均较前降低,但治疗组7天后的血清炎症水平(WBC、N%、CRP)明显低于对照组,二者之间的差异存在统计学意义(p<0.05)。3.治疗后两组乳汁中IL-6浓度均较前降低,但治疗组患者7天后的乳汁中IL-6浓度明显低于对照组,两组比较存在统计学意义(p<0.05)。结论:通乳方能有效的降低郁滞期外吹乳痈患者血清及乳汁中的炎症水平,改善郁滞期外吹乳痈的症状和体征。有助于阻止哺乳期乳腺炎疾病进展,帮助哺乳期乳腺炎康复。

关键词： 竹节参皂苷Ⅳa   内质网应激   肌醇需求激酶1α   toll样受体4   肝细胞炎性因子  

摘要： 目的:非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的发病率逐年上升,严重危害人类健康,目前仍缺乏有效干预措施,而内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)通过放大toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)信号通路增加炎性因子释放是炎症性疾病的关键环节。因此本研究目的如下:(1)应用棕榈酸(palmitic acid,PA)联合内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)刺激肝细胞,建立炎症反应模型。(2)探讨内质网应激(ERS)放大toll样受体4(TLR4)信号通路的分子机制。(3)研究竹节参皂苷Ⅳa对肝细胞炎症反应的影响。方法:(1)利用TG联合PA建立内质网应激放大TLR4信号介导的炎症模型。不同浓度的TG,PA单独及联合处理细胞LO2细胞24小时后,RT-PCR检测XBP-1的活化情况;流式细胞术检测TLR4蛋白的表达情况;ELISA检测炎性因子IL-6的含量;根据这些结果,最终确定TG联合PA建立内质网应激放大TLR4信号介导的炎症模型的最佳浓度。(2)应用TG联合PA诱导炎症模型,分别采用抑制剂、siRNA、竹节参皂苷Ⅳa干预,用RT-PCR检测XBP-1的活化情况;用Western blot检测IRE1α、p-IRE1α蛋白的表达;流式细胞术检测TLR4蛋白的表达;免疫荧光法检测的NF-κB核移位;ELISA检测炎性因子IL-6的含量;利用计算机辅助药物设计预测节参皂苷Ⅳa可能的作用靶点。结果:(1)与对照相比,模型组的p-IRE1α蛋白、TLR4蛋白、炎性因子IL-6的分泌量显著升高(p<0.05),NF-κB蛋白进入细胞核;TG浓度为1 nM,PA浓度为25μM,处理LO2细胞24小时可以成功建立出内质网应激放大TLR4信号介导的炎症模型。(2)竹节参皂苷Ⅳa干预组与模型组相比,加入竹节参皂苷Ⅳa后,p-IRE1α蛋白、TLR4蛋白、炎性因子IL-6的分泌量显著降低(p<0.05),阻止NF-κB蛋白进入细胞核。(3)计算机辅助药物设计的结果表明竹节参皂苷Ⅳa可以与IRE1α蛋白结合。(4)与模型组比较,转染IRE1αsiRNA,或加入IRE1α抑制剂4μ8C后,p-IRE1α蛋白、TLR4蛋白、炎性因子IL-6的分泌量显著降低(p<0.05),阻止NF-κB蛋白进入细胞核。(5)与模型组比较,抑制剂组中的IRE1α下游信分子TRAF2,以及炎症因子IL-1,IL-6,TNFα转录水平的表达显著降低(p<0.05)。但IRE1α下游信分子IKK变化不明显。结论:(1)ERS信号分子可以通过放大TLR4信号通路增加炎性因子的释放。(2)竹节参皂苷Ⅳa可减少ERS信号分子介导的TLR4炎症信号放大效应,从而改善非酒精性脂肪性肝炎。

关键词： 结直肠癌   腹腔镜   全身炎症   局部炎症  

摘要： 目的随着现代医疗科技的不断发展,腹腔镜手术治疗结直肠癌患者的数量逐年增加,近10年来已扩展至广大的基层医院。本研究拟通过探讨两种手术方式后全身及局部炎性因子的变化,评价两种不同术式对机体创伤带来的影响。方法选取我院2015年09月至2017年09月收治的结肠癌患者121例,根据患者病史、查体及影像学表现初步评估为结直肠癌占位,考虑恶性病变,符合腹腔镜结直肠癌根治术手术指征。将患者分为2组:腹腔镜组、开腹组,分别采用的是腹腔镜结直肠癌根治术及行开腹结直肠癌根治术;所有患者分别于手术前(中)、术后24小时、72小时对静脉血/腹腔冲洗液(或腹腔引流液)白细胞(White blood cell,WBC)、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)以及纤维蛋白的检测。动态比较上述指标在术前、术后24小时及72小时的变化,并比较两组患者不同时间点炎症指标水平的高低;此外,通过对两组患者术后常规随访,评价两组患者发生术后黏连性肠梗阻及肿瘤复发的情况。结果根据纳入标准和排除标准,腹腔镜组及开腹组分别入选患者34例(17例患者因手术探查结果分期较晚;3例患者术中因肿瘤位置的原因转行开放手术;2例患者因直肠肿瘤位置较低行经腹会阴联合切除术;3例患者因基础情况较差或术前胃肠道准备不充分行回肠造口术;2例患者因术后出现持续高热)及32例(18例患者因术中肿瘤探查分期过晚;4例患者因直肠肿瘤位置较低行经腹会阴联合切除术;4例患者因基础情况较差或术前胃肠道准备不充分行回肠造口术;1例患者因术后出持续高热;1例患者因术后出现肺部感染)。结果如下:(1)两组患者在手术时间、肿瘤切缘距离、清除淋巴结个数等方面的差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)腹腔镜组患者在术中出血量、肠蠕动功能恢复时间、住院天数均小于开腹组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)腹腔镜组与开腹组患者在术前外周血WBC、CRP、TNF-α、IL-6、IL-10及纤维蛋白水平方面的差异无统计学差异(P>0.05);腹腔镜组术后24小时、72小时外周血WBC、CRP、TNF-α、IL-6及纤维蛋白水平均低于开腹组,差异均有统计学意义(P<0.05);而在IL-10水平方面差异无统计学差异(P>0.05)。(4)两组患者术前腹腔冲洗液中WBC、CRP、TNF-α、IL-6、IL-10及纤维蛋白水平方面的差异无统计学差异(P>0.05);腹腔镜组术后24小时腹腔引流液WBC、CRP、IL-6、纤维蛋白均低于开腹组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组患者术后24小时TNF-α浓度、IL-10浓度比较均无统计学差异(P>0.05),腹腔镜组患者术后72小时腹腔引流液中WBC计数、TNF-α浓度及IL-6浓度均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),两组患者术后72小时腹腔引流液CRP浓度、IL-10浓度比较,不具有统计学差异(P>0.05)。(5)两组患者出院后随访时间均为6～24月,其中腹腔镜组术后发生黏连性肠梗阻2人,术后复发2人;开腹组术后发生黏连性肠梗阻4人,术后复发2人;两组患者在术后并发症方面的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论腹腔镜结直肠癌根治术与开腹结直肠癌根治术相比具有创伤小、术中出血少、术后肠功能恢复快、住院时间少等优点,是安全可行的,并且能够达到与开腹手术相同的肿瘤根治效果。

关键词： 乙酰胆碱酯酶   糖尿病视网膜病变   多奈哌齐   炎症小体  

摘要： 目的:探讨AChE是否调控糖尿病视网膜病变炎症反应,并探索其调控的分子机制。方法:(1)本实验通过雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病动物模型(DM)并通过标准饲料中添加AChE抑制剂多奈哌齐干预处理。实验分为Vehicle+Non-DM组、Vehicle+DM组、Donepezil+Non-DM组、Donepezil+DM组。Western Blot测定各组视网膜ICAM-1、Albumin、ZO-1的表达,免疫荧光技术检测各组中ICAM-1、GFAP、VEGF表达,刀豆凝集素灌注法检测视网膜血管白细胞粘附,视网膜染色铺片检测视网膜上紧密连接蛋白Claudin5表达情况。同时采用AChE基因缺陷小鼠建立DM动物模型,实验分为AChE+/++Non-DM组、AChE+/++DM组、AChE+/-+Non-DM组、AChE+/-+DM组,Western Blot测定各组视网膜ICAM-1、ZO-1的表达,免疫荧光技术检测各实验组视网膜上ICAM-1、GFAP、VEGF表达,伊文思蓝血管通透性分析检测各组小鼠视网膜血管渗漏程度,视网膜染色铺片检测紧密连接蛋白Claudin5表达情况。(2)建立DM动物模型,含多奈哌齐的标准饲料喂养糖尿病小鼠。Western Blot测定各组视网膜NLRP3炎症小体相关蛋白的表达,免疫荧光技术检测各实验组视网膜上Caspase-1的表达。(3)进一步,采用Caspase-1基因缺陷小鼠建立DM动物模型,Western Blot测定各组视网膜IL-1β、ICAM-1、GFAP、Albumin的表达,刀豆凝集素灌注法检测视网膜血管白细胞粘附。结果:(1)AChE明显上调糖尿病小鼠视网膜ICAM-1、Albumin、ZO-1、VEGF的表达,增加DM组视网膜白细胞粘附及血管渗漏,激活视网膜胶质细胞,并且这些能被AChE抑制剂多奈哌齐以及基因敲除AChE所逆转。(2)DM组视网膜NLRP3、Caspase1、IL-1β的表达较Non-DM组明显上调,且多奈哌齐抑制AChE表达后以上检测指标较DM组降低。(3)基因敲除Caspase-1表达可逆转DM组小鼠视网膜上IL-1β、ICAM-1、GFAP、Albumin的升高,降低视网膜白细胞粘附。结论:这些结果表明,AChE可调控糖尿病小鼠视网膜炎症反应,其机制可能是通过激活NLRP3-Caspase-1炎症小体实现的,为今后更好地治疗DR奠定新的理论基础和提供新的药物靶点。

关键词： 抑郁症   中性粒细胞与淋巴细胞比值   免疫炎症反应  

摘要： 目的研究中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil/lymphocyte ratio,NLR)和抑郁症严重程度的相关性,并探讨NLR对重度抑郁症的预测价值。方法收集2016年8月1日至2017年9月1日于开滦精神卫生中心住院或门诊治疗的抑郁症患者,收集患者的一般资料并对患者进行汉密尔顿抑郁量表评分测定及血常规检查,根据血常规中性粒细胞数目和淋巴细胞数目计算NLR。根据汉密尔顿抑郁量表将抑郁症患者分为轻、中、重度组,对NLR与抑郁症严重程度的关系进行统计学分析。结果 (1)三组抑郁症患者之间NLR水平分别为轻度(1.78±0.66)、中度(2.00±0.53)、重度(2.07±0.67),差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)抑郁症严重程度与NLR之间具有相关性,r=0.324,P<0.001。(3)NLR对重度抑郁症的预测曲线分析,NLR越高,重度抑郁症的可能性越大。曲线下面积为0.684,NLR对重度抑郁症的预测最佳临界值为2.19,敏感度为0.628,特异度为0.704。结论中性粒细胞与淋巴细胞比值和抑郁症严重程度之间存在相关性,外周血NLR可以为重度抑郁症的诊断提供预测价值,简单易测且价格低廉的血常规可以在临床上为抑郁症严重程度的诊疗提供帮助。

关键词： 上颌窦后鼻孔息肉   普通鼻息肉   组织学差异   炎症状态   水肿机制  

摘要： 目的：通过比较上颌窦后鼻孔息肉和普遍鼻息肉的组织学差异，了解它们的炎症状态以及引起组织水肿的机制。　　方法：取20例正常对照组病人的下鼻甲组织，53例普通鼻息肉病人（其中26例为Eos CRSwNP，27例为NonEos CRSwNP）和25例上颌窦后鼻孔息肉病人的鼻息肉组织，通过HE和IHC的方法对各组中炎症程度，上皮状态，腺体数目，炎细胞数等进行比较。运用RT-PCR检测鼻组织中tPA，uPA，PAI-1，FXIIIA等的表达;ELISA检测鼻组织中tPA，FXIIIA，d-dimer以及其他细胞因子的蛋白表达。培养Beas-2b细胞，用刺激剂刺激其细胞系用来检测tPA的表达。应用免疫荧光染色对鼻组织中FXIIIA进行定位。　　结果：与正常组和普通鼻息肉相比，上颌窦后鼻孔息肉组织中上皮鳞状化生严重，水肿较明显，腺体较少，嗜酸性粒细胞较少。上颌窦后鼻孔息肉与普通鼻息肉不同，与Th1,2,17的炎症关系不大，而与中性粒细胞炎症更相关。tPA，d-dimer的表达在上颌窦后鼻孔息肉中最少。　　结论：和普通息肉相对，上颌窦后鼻孔息肉更水肿，且以中性粒细胞炎症为主。tPA有关的凝血过程可能参与鼻息肉的组织重塑。

关键词： 非酒精性脂肪性肝炎   参附注射液   棕榈酸   NADPH氧化酶4   线粒体功能异常   细胞因子   细胞凋亡   人肠上皮细胞-6   细胞凋亡   细胞因子   活性氧   核转录因子   参附注射液  

摘要： 第一部分参附注射液通过抑制JNK/Nox4和JNK/NFκB途径来保护棕榈酸诱导的肝AML12细胞损伤目的:非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis,NASH)包括脂肪变性、肝炎、肝细胞损伤和纤维化。在本研究中,我们拟探讨一种传统中药-参附注射液(Shen Fu preparation,SF)在体外肝脂肪变性模型中的保护作用和潜在机制。方法:建立棕榈酸(Palmitic acid,PA)诱导鼠肝细胞损伤模拟离体NASH模型,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(Terminal dexynucleotidyl transferase(Td T)-mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL)和甘油三酯比色测定法(TG Colorimetric Assay)对细胞凋亡和细胞内甘油三酯水平(Intracellular triglyceride,i TG)进行评估;分别采用DCF(Dichlorofluorescein,二氯荧光素)和JC-1(5,5‘,6,6’-四氯-1,1‘,3,3’-四乙基苯酸盐-咪唑羰基花青素)测定活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)水平;使用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)评估细胞因子水平;用免疫印迹法(Immunoblot)检测JNK(C-Jun N-terminal kinase,c-Jun氨基末端激酶)、Nox4(NADPH oxidase 4,NADPH氧化酶4)和NFκB(Nuclear factor kappa B,核因子kappa B)的表达变化。结果:参附注射液减轻了棕榈酸诱导的细胞凋亡,以及降低了IL-6(白细胞介素-6)、IL-8(白细胞介素-8)和i TG的表达。经过棕榈酸处理的细胞中,添加参附注射液,可以降低Nox4和ROS的水平,同时MMP、Mn SOD(锰超氧化物歧化酶)和过氧化氢酶的表达升高,表明线粒体功能障碍的发生。应用Nox4抑制剂-GKT137381抑制了由棕榈酸诱导产生的ROS和细胞凋亡的增加,同时降低了i TG的量,但并没有影响IL-8和IL-6的水平。参附注射液可以抑制棕榈酸诱导的磷酸化氨基末端激酶的上调。JNK抑制剂-SP600125抑制了由棕榈酸诱导的Nox4、IL-8、IL-6和i TG的增加。应用参附注射液后,可以阻断棕榈酸处理过的细胞中检测到的NFκB/p65核转位。BAY11-7082,一种IκB(Inhibitor of NF-κB)降解抑制剂,降低了由棕榈酸诱导的IL-8、IL-6以及i TG的量,而它只是轻微地降低了ROS含量,对细胞凋亡没有影响。结论:参附注射液通过减少氧化应激和细胞因子的产生以及抑制JNK/Nox4和JNK/NFκB途径,在预防肝细胞损伤过程中发挥了至关重要的作用。第二部分参附注射液能显著改善脂多糖诱导的肠道上皮细胞损伤目的:肠道上皮细胞在肠道屏障功能的维护中起着至关重要的作用,而潜在的损伤机制还没有完全阐明。本研究拟对一种传统中药-参附注射液(Shen Fu preparation,SF)在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的肠道上皮细胞损伤中的保护作用和分子机制进行系统探讨。方法:采用HIEC-6细胞(Human intestinal epithelial cell,人肠上皮细胞系),单独应用LPS或LPS与SF联合应用来进行实验。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(Terminal dexynucleotidyl transferase(Td T)-mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL)对细胞凋亡进行评估。活性氧(ROS)水平是用DCF(Dichlorofluorescein,二氯荧光素)测定法测定的。经transwell培养板培养的单层人肠上皮细胞-6,通过FITC-albumin influx assay分析其渗透性。应用即时聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)来对细胞因子IL-1β(白介素-1β)、IL-6(白介素-6)和TNF-α(肿瘤坏死因子-α)进行定量分析。蛋白质印迹法(Western blot)用于测定胞浆IκBα(核因子κB抑制因子α)和核NFκB/p65亚基的含量。结果:在脂多糖处理的细胞中发现了细胞凋亡、ROS和细胞因子的产生,以及NFκB/p65的核转位。DPI(二碘基苯)是一种特

关键词： 肿瘤坏死因子   程序性细胞坏死   炎症反应   细胞因子  

摘要： 肿瘤坏死因子TNFα可以激活不同的信号通路:促进炎症反应和细胞的存活;通过细胞凋亡或者程序性细胞坏死来执行细胞死亡。程序性细胞坏死是一种可调控的细胞坏死方式，它的发生依赖于RIPK1、RIPK3和MLKL。程序性细胞坏死在体内可以诱发炎症，但其具体机制尚不清楚。其中，在程序性细胞坏死发生时细胞释放的内容物，比如高速泳动族蛋白和细胞器，可以促进炎症反应的发生。然而，程序性细胞坏死是否可以主动地调控炎症反应，目前还不得而知。我们重点研究并报道了:在程序性细胞坏死过程中，细胞通过内源性信号通路强烈并且特异性地激活促炎症细胞因子的表达。我们发现:在TNFα诱导的程序性细胞坏死过程中有两个促炎症细胞因子的表达高峰。第一个表达高峰与第二个高峰相比非常短暂，而且比较弱，主要是TNFα引起的;而第二个高峰的促炎症细胞因子表达更加高和持久，并且依赖于TNFα和程序性细胞坏死信号通路。我们还证明:程序性细胞坏死是细胞自主性地增强TNFα下游促炎症细胞因子转录的。程序性细胞坏死过程中的关键蛋白RIPK1、RIPK3和MLKL可以激活NF-κB信号通路和p38信号通路，这二者都参与并介导了程序性细胞坏死过程中第二个高峰的促炎症细胞因子表达。然而，相比TNFα诱导的程序性细胞坏死，MLKL直接多聚化诱导的程序性细胞坏死只引起少量的促炎症细胞因子表达。因此，我们推断:在程序性细胞坏死过程中，RIPK1和RIPK3介导的TNFα下游信号通路和MLKL的多聚化共同通过内源性激活NF-κB和p38的方式促进细胞因子的表达。这一研究揭示了:程序性细胞坏死能够主动地增强促炎症细胞因子的表达，来引起免疫反应。这为程序性细胞坏死在人类疾病中促进炎症反应的发生提供了新的分子机制。