关键词： 金黄色葡萄球菌   β-溶血素   皮肤炎症   表皮生长因子受体   NK细胞  

摘要： 研究目的:金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,简称金葡菌,是临床重要的病原体之一。中国抗菌药物监测网的最新数据（2021年）显示:在301917株临床分离菌株中,金葡菌占比8.93%,排名第三。金葡菌在机体免疫力降低时可诱发严重的感染性疾病,主要包括皮肤及软组织感染（skin and soft-tissue infections,SSTIs）、肺炎、心内膜炎、烧伤及战伤感染、败血症、中毒性休克等。金葡菌是SSTIs最主要的病原体,据统计,金葡菌引发成年人SSTIs的比率大于30%,引发儿童SSTIs的比率大于80%。除了上述感染性疾病外,金葡菌的定植还与慢性炎症性疾病的发生发展有关。大约20%的人群永久性定植金葡菌但并无明显的感染症状,其定植部位主要包括鼻腔、皮肤、咽部以及胃肠道等。相比于健康人群,糖尿病、特应性皮疹、银屑病、慢性阻塞性肺疾病和慢性肾炎等慢性炎症性疾病患者体内金葡菌定植的比例显著升高。已有的研究表明,在银屑病和特应性皮炎等慢性炎性皮肤病患者群体中,金葡菌的定植率超过50%。β-溶血素,简称Hlb蛋白,是一种金葡菌外毒素,具有中性鞘磷脂酶活性和结合核酸的活性。传统认为Hlb蛋白在金葡菌感染过程中几乎不发挥作用是由于大部分临床分离的金葡菌不表达Hlb蛋白。金葡菌不表达Hlb蛋白是由于hlb基因内部插入了噬菌体φSa3的基因片段,hlb基因被截断导致蛋白无法表达。然而,越来越多的证据表明,在金葡菌感染过程中,面对宿主免疫清除和抗生素杀伤的压力,φSa3的基因片段会被精准剪切,Hlb蛋白得以恢复表达。这提示我们Hlb蛋白可能在金葡菌的体内存活和疾病进展中发挥重要的作用。流行病学调查发现:在SSTIs患者分离的金葡菌菌株中,Hlb蛋白表达率超过40%;在特应性皮炎患者分离的金葡菌菌株中,Hlb蛋白表达率超过50%。在皮肤感染处分离的金葡菌菌株中Hlb蛋白的表达率较高,表明Hlb蛋白可能参与了金葡菌诱发的皮肤感染。本研究旨在探索Hlb蛋白是否参与了金葡菌的皮肤感染以及相关的分子机制,为预防和治疗金葡菌皮肤感染提供候选药物靶点和新的干预策略。研究方法:利用大肠杆菌表达体系,重组表达了Hlb蛋白,纯化后的Hlb蛋白经去内毒素树脂去除内毒素,随后经过细菌过滤器过滤除菌,进而通过皮下注射Hlb蛋白的方式构建小鼠皮肤炎症模型;通过人磷酸化RTK检测试剂盒（Proteome Profiler Human Phospho-RTK Array Kit,RD）筛选Hlb蛋白处理后磷酸化的膜受体;利用特异性抗体通过Western Blot验证表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）磷酸化水平的变化;利用HE（hematoxylin-eosin staining）染色监测小鼠皮肤组织病理改变;利用免疫组织化学技术（immunocytochemistry,IHC）检测募集的炎性细胞类型;利用ELISA和GST-pull down检测Hlb蛋白与EGFR的结合;利用ELISA检测IL-8的分泌;利用流式细胞术检测CD107a的表达;利用ELISA检测IFN-γ的表达;利用RT-PCR检测NK-92细胞FOSB和JUN m RNA水平的变化。通过计算机虚拟筛选获得了能够与Hlb结合的候选化合物,并进一步通过溶血实验筛选能阻断Hlb蛋白溶血的化合物。研究结果（包括以下六个部分的研究内容）:第一,成功构建了Hlb蛋白诱发的小鼠皮肤炎症模型。皮下注射Hlb蛋白部位出现了红肿、脱毛、和溃烂等症状,组织HE染色显示,注射Hlb蛋白部位皮肤的表皮层和真皮层均增厚且有大量炎性细胞的浸润。第二,尽管Hlb蛋白是一种溶血素,但即使在“热-冷”（“hot-cold”）条件下,大多数宿主细胞并不能被Hlb蛋白裂解,而且“热-冷”条件在生理状态下并不存在。随后我们证实了人表皮细胞系细胞Ha Ca T不能被Hlb蛋白直接杀伤,表明Hlb蛋白通过非细胞裂解作用诱发了皮肤炎症。受体酪氨酸激酶（Receptor Tyrosine Kinase-RTK）是一类具有重要调控功能的酶联受体,其定位于细胞膜,能够同配体结合继而自身磷酸化并激活下游信号通路。RTK的细胞表面丰度和活化水平的改变与炎症、糖尿病、心血管疾病以及肿瘤等多种疾病密切相关。通过检测Ha Ca T（人表皮细胞）和HFF-1（人皮肤成纤维细胞）细胞膜表面多种RTK的磷酸化水平,我们发现Hlb蛋白可以特异性促进EGFR的磷酸化。进一步在细胞水平和小鼠体内证实了Hlb蛋白可以促进EGFR的磷酸化,而且EGFR抑制剂erlotinib可以阻断这一促进作用。在小鼠体内,利用erlotinib阻断EGFR的激活后,Hlb蛋白诱导的小鼠皮肤炎症明显减轻。表

关键词： 肾性贫血   罗沙司他   铁代谢   铁调素  

摘要： 目的:贫血是慢性肾脏病(CKD)患者最常见且严重的并发症之一。目前,使用促红细胞生成素(ESA)和铁剂是CKD患者肾性贫血的标准治疗策略,但仍存在较多未被满足的临床挑战。CKD患者中普遍存在微炎症状态,微炎症状态会通过影响铁的代谢而导致静脉补铁和ESA治疗效果不佳甚至无效。作为机制全新的新一代肾性贫血治疗药物,罗沙司他(Roxadustat,FG‐4592)为肾性贫血患者提供了一种全新的治疗选择。有研究显示,铁代谢异常是微炎症状态血透患者造成贫血的重要原因,罗沙司他改善贫血不受微炎症状态的影响,其机制可能与罗沙司他改善了微炎症状态血液透析贫血患者异常铁代谢有关。本研究拟探讨罗沙司他对合并微炎症状态血液透析贫血患者铁代谢的影响,为临床诊疗提供理论依据。方法:选取2020年5月至2020年10月临沂市中心医院收治的68例合并微炎症状态维持性血液透析贫血患者为研究对象(微炎症状态指血清C反应蛋白[CRP]>4.9mg/L,且不合并明显感染者;肾性贫血指:间隔至少1周的两个最近血红蛋白水平为8.0-9.0 g/d L)。按随机数字表法将其分为对照组与罗沙司他组,每组各34人,收集两组研究对象的一般资料,包括(性别、年龄、透析龄[年])和研究对象入院后的血常规(血红蛋白[Hb])、血清铁(SI)、转铁蛋白(TRF)、转铁蛋白饱和度(TSAT)、血清铁蛋白(SF)、总铁结合力(TIBC)、C-反应蛋白(CRP)以及血清甲状旁腺激素(i PTH)化验指标。对照组血液透析后使用重组人源促红细胞生成素(rhu EPO)治疗(起始剂量按100～150 U/kg/周,分3次注射,根据患者血红蛋白(Hb)及血细胞比容(Hct)水平,调整剂量),研究组则使用罗沙司他进行治疗(根据患者体重给予起始剂量,40～60 kg者100 mg/次,>60 kg者120 mg/次,3次/周,饭后服用。根据Hb水平调整剂量),治疗3个月。比较两组治疗前及治疗3个月后Hb、SI、TIBC、TSAT、TRF、SF和铁调素(hepcidin)水平。采用SPSS 20.0软件(IBM)进行统计学分析。结果:1.治疗前两组的年龄(t=1.273,p=0.106)、性别(X2=1.123,p=0.113)、透析龄(X2=1.465,p=0.098)、Hb(t=1.129,p=0.124)、SI(t=1.239,p=0.108)、转铁蛋白(t=1.334,p=0.076)、TSAT(t=1.330,p=0.098)、SF(t=1.235,p=0.112)、TIBC(t=0.998,p=0.162)、C反应蛋白(CRP,Z=0.868,p=0.201)、甲状旁腺激素(Z=1.554,p=0.086)和hepcidin(t=1.654,p=0.099)水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。2.治疗1月后,罗沙司他组患者Hb水平与对照组无差异(9.42±0.54 vs 9.01±0.44,t=1.687,p=0.080)。治疗3月后,罗沙司他组患者Hb水平显著高于对照组(2月:10.32±0.44 vs 9.65±0.34,t=4.245;3月:11.54±0.38 vs 10.00±0.46,t=6.433),差异有统计学意义(**P<0.001)。3治疗3月后,罗沙司他组患者SI水平(2月:8.91±0.23 vs 8.32±0.22 t=2.984,p<0.001;3月:9.32±0.32 vs 8.12±0.37 t=5.433,p<0.001)、TRF水平(2月:2.49±0.21vs 1.90±0.21 t=3.254,p<0.001;3月:2.89±0.18 vs 1.83±0.11 t=4.329,p<0.001)和TIBC水平(2月:61.89±3.45 vs 47.73±5.76 t=3.854,p<0.001;3月:70.87±5.37 vs47.63±4.87 t=5.322,p<0.001)水平显著高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.001)。而治疗3月后,罗沙司他组患者SF水平(1月:235.87±12.31 vs 269.32±10.24 t=2.245,p=0.030;2月:187.62±13.22 vs 241.20±12.11 t=3.851,p<0.001;3月:129.34±15.36vs240.10±10.36 t=6.433,p<0.001)和TSAT水平(1月:20.20±1.21 vs 23.27±1.62t=2.268,p=0.032;2月:19.20±1.10 vs 23.58±1.13 t=3.567,p<0.001;3月:17.60±1.0222.70±1.22 t=4.852,p<0.001)则显著低于对照组,差异有统计学

关键词： 胰腺癌   炎症标志物   系统免疫炎症指数   预后  

摘要： 目的:全身炎症反应标志物与包括胰腺癌(Pancreatic Cancer)在内的多种恶性肿瘤的预后相关。本研究的目的是探讨系统免疫炎症指数(systemic immune inflammation index,SII)对胰腺癌患者的预后价值,同时对血小板/淋巴细胞比值(plateletto-lymphocyte ratio,PLR)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)淋巴细胞/单核细胞比值(lymphocyte-to-monocyte ratio,LMR)的预后价值进行综合简要分析。血小板-白蛋白-胆红素分级(platelet–albumin–bilirubin grade,PALBI grade)是基于肝功能提出的综合评价指标,部分胰头癌患者可因肿瘤浸润或压迫而出现梗阻性黄疸,进而出现肝功能异常。在此基础上,探讨PALBI分级在胰腺癌患者预后中的价值。方法:回顾性分析2000年1月至2019年12月在青岛大学附属医院住院诊断为胰腺癌的457名患者资料,并随访至2020年12月。收集患者未经临床干预前的实验室检测指标,根据外周免疫细胞计数计算各种炎症标志物数值,采用Youden指数计算最佳临界值,将所有患者根据SII最佳临界值分为高低两组。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,曲线间的差异使用对数秩检验分析。采用Cox比例风险回归模型对预后相关的因素进行分析,主要为SII对胰腺癌患者的预后价值,并进一步分析PALBI分级对根治性手术组中胰头癌患者的总生存期(overall survival,OS)和无病生存期(disease-free survival,DFS)的影响;同时,在转移及不可切除的胰腺癌患者中,分析各种炎症标志物对于OS的影响,并进一步验证各种炎症标志物在胰腺癌肝转移中的价值。为了减少对病人的选择偏倚,消除某些混杂因素,采用倾向性评分匹配(Propensity score matching,PSM)进行分析,卡钳值取0.1,分析SII对于OS的影响。结果:1、根治性手术患者队列,共有214名患者(中位年龄60.29岁;128名[59.8%]男性)符合纳入标准,其中胰头癌140例(65.4%)。根据Youden指数,将患者分为高、低SII组及高、低PALBI分级组,其最佳临界值分别为705、-5.6;多因素分析显示,更高的SII(HR,3.058;P<0.001)、淋巴结转移(HR,2.814;P=0.007)、血管侵犯(HR,2.335;P=0.010)及更大的肿瘤直径(HR,0.164;P=0.004)与OS独立相关。此外,肿瘤直径(HR,4.486;P=0.011)、肿瘤位置(HR,4.426;P<0.001)、患有糖尿病(HR,1.928;P=0.034)、神经侵犯(HR,3.082;P=0.002)、淋巴结转移(HR,2.738;P<0.001)和高SII(HR,0.275;P<0.001)与DFS独立相关。在胰头癌患者中,高的PALBI分级与更短的OS相关(P=0.031)。高SII联合高PALBI分级与两低组相比,OS明显缩短,对不良预后有更强的预测价值(P<0.001)。2、转移及不可切除患者队列,共有243名患者(中位年龄61.7岁;152名[62.6%]男性)符合纳入标准,其中102例(42.0%)有肝转移。将患者分为高SII组和低SII组,最佳临界值为533。高SII(HR,2.190;P<0.001)、远处转移(HR,1.776;P=0.001)、淋巴结转移(HR,3.004;P<0.001)和化疗(HR,0.552;P=0.036)是OS的独立危险因素。另外,对肝转移的患者与炎症标志物进行了亚组分析,其中SII、PLR和NLR在肝转移患者中明显高于无肝转移患者。3、为进一步验证SII对于胰腺癌患者预后的影响,对所有的457名患者进行PSM分析。根据SII最佳临界值将患者分为高低两组,两组病例数分别为125名、332名,对患者进行1:2匹配,卡钳值取0.1。PSM后两组分别为113名、182名。结果显示,PSM前后,SII均为胰腺癌患者OS的独立危险因素(P<0.001)。结论:1、高SII的胰腺癌患者总生存期及无病生存期更短。2、PALBI分级与行根治性手术的胰头癌患者的总生存期呈反比;联合SII后有更好的预测价值。3、SII和PLR联合后可更好预测转移及不可切除胰腺癌患者的总生存期。4、高水平的SII、NLR和PLR的胰腺癌患者可能更容易存在早期肝转移,为胰腺癌的早期筛查提供了新思路。

关键词： 结肠炎   结肠癌   TRK融合基因   巨噬细胞   炎症因子  

摘要： 目的：　　TRK融合基因（TRK-fused gene，TFG）是一种从内质网向高尔基体的转运蛋白，在蛋白质分泌、蛋白质稳定性、自噬、抗病毒天然免疫反应和神经发生等多种生物学过程中发挥重要作用。TFG参与多种癌症相关融合基因的产生，包括TFG-ALK、TFG-GPR128、TFG-TEC、TFG-RET、TFG-FGFR1等。然而，TFG在巨噬细胞炎症反应中的作用机制及其对肿瘤进展的影响尚不清楚。本研究拟观察 TFG 对巨噬细胞炎症因子表达的调控作用，明确TFG介导的固有免疫在结肠炎及结肠癌发生发展中的作用。　　方法：　　1、利用靶向TFG基因的特异性小干扰RNA慢病毒载体转导THP-1细胞，构建稳定敲低TFG的THP-1细胞株，应用Western blot检测细胞中非经典NF-κB信号活化情况;用脂多糖（ LPS）联合尼日利亚霉素（ Nigericin）处理细胞，采用 MitoSOX染色和流式细胞术分析线粒体ROS的产生。　　2、利用HEK293细胞外源导入TFG与TRAF3蛋白，进行免疫共沉淀检测，观察两者之间是否有相互作用;将 HA-TRAF3 质粒转染入 HEK293细胞中，利用共聚焦显微镜观察TRAF3与内源性TFG共定位情况。　　3、构建髓系条件性 TFG 基因敲除的模式实验小鼠（myeloid cell-conditional TFG knockout mice，TFGfl/fllyz2Cre/wt，简称TFG-MKO）作为敲除组，选择与实验组相对应性别和周龄的野生型小鼠（TFGfl/fl-lyz2wt/wt，简称WT）作为对照组，分别用PCR和Western bolt技术检测小鼠基因型和TFG蛋白表达情况。　　4、取6-8周龄的WT和TFG-MKO组小鼠，分离并培养腹腔巨噬细胞（peritoneal derived macrophage，PEM）。应用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）处理PEM，提取细胞总RNA，应用qRT-PCR方法检测IL-6、IL-10、TNF-α、iNOS基因的mRNA相对水平，明确TFG对于巨噬细胞炎症因子表达的影响。　　5、利用GEO数据库GSE24287数据集分析27例溃疡性结肠炎患者病变结肠组织和25例溃疡性结肠炎患者正常结肠组织中TFG基因表达情况，明确TFG在人结肠组织中的表达及其与结肠炎发生发展的关系。　　6、取12-14周龄的WT和TFG-MKO组小鼠，应用葡聚糖硫酸钠盐（dextran sulfatesodium salt，DSS）建立急性溃疡性结肠炎模型，观察并记录小鼠急性溃疡性结肠炎进展情况，第7天处死小鼠，完整分离小鼠结直肠组织，应用免疫组织化学HE染色方法观察两组小鼠结肠组织大体形态以及免疫细胞浸润情况，应用免疫荧光染色方法观察两组小鼠结肠的巨噬细胞和中性粒细胞分布情况。　　7、利用 GEPIA2021 分析平台-细胞类型表达分析系统（Cell Type-level Expression Analysis, ），分析GTEx数据来源的正常结肠组织（Colon）、TCGA 数据来源的结肠腺癌患者（COAD）正常结肠组织（COAD Normal）以及TCGA数据来源的COAD癌组织（COAD Tumor）浸润的M1和M2型巨噬细胞中TFG的表达水平，明确TFG在巨噬细胞炎症反应中的作用。　　8、取6-8周龄的WT和TFG-MKO组小鼠，建立MC38结肠癌皮下移植瘤模型，观察记录肿瘤生长情况。于第 12 天处死小鼠，完整分离肿瘤组织并拍照、称重，明确TFG对于肿瘤进展的影响。　　结果：　　1、TFG基因敲低的THP-1细胞中非经典NF-κB信号分子NIK蛋白质水平升高， p52生成增多，线粒体ROS生成增多;应用LPS/Ng刺激细胞后，TFG基因敲低的THP-1细胞中线粒体ROS产生进一步增多。　　2、免疫共沉淀和免疫双荧光染色证实，在HEK293细胞中，TFG与TRAF3相互结合，并在细胞质中共定位。　　3、成功建立髓系条件性TFG基因敲除的TFG-MKO小鼠，与同周龄同性别的WT小鼠相比，TFG-MKO小鼠PEM和BMDM中TFG表达缺失，B细胞和T细胞中TFG的表达正常。　　4、应用LPS刺激小鼠PEM，qRT-PCR结果显示，与WT组相比，TFG-MKO组巨噬细胞中促炎细胞因子（iNOS、IL-6、TNF-α）表达升高，而抑炎细胞因子（IL-10）表达水平降低。　　5、GEO数据库GSE24287数据集的分析结果显示，TFG在溃疡性结肠炎患者组织中的表达水平显著低于正常结肠组织。　　6、应用DSS诱导小鼠急性溃疡性结肠炎模型，结果显示，小鼠饮用2% DSS无菌水6天后，结肠出现显著缩短，HE染色结果显示，结肠组织形态欠完整，中膜层明显增厚

关键词： 肝损伤   炎症反应   Kupffer细胞   细胞浸润  

摘要： 肝损伤是临床常见的疾病，严重危害人类健康。肝损伤由多种因素引起，能够导致肝细胞坏死、凋亡、脂肪变性以及炎症反应的发生。肝损伤后激活的炎症反应是造成肝脏再次损伤的重要原因。最新研究发现，化学性肝损伤中内源性损伤相关分子模式（DAMPs）是引起肝脏炎症反应的关键触发因子。S100家族蛋白作为重要的DAMPs在无菌性炎症触发方面的研究较少，目前S100A6作为DAMP触发炎症反应的研究未见报道。本研究发现，肝损伤早期S100A6表达迅速升高，损伤区域肝脏细胞可快速大量合成S100A6蛋白。S100A6可激活肝脏Kupffer细胞（KCs）分泌TNF-α等炎性因子。推测S100A6可作为DAMP激活肝脏KCs引起炎症反应，但具体机制尚不明确。进一步研究发现，TNF-α刺激肝细胞，可产生CCL2，募集单核/巨噬细胞浸润，从而提出肝损伤后S100A6可激活KCs分泌TNF-α经旁分泌作用肝细胞产生CCL2趋化单核/巨噬细胞浸润的假说。本研究通过肝损伤体内体外模型，围绕肝损伤后S100A6作为DAMP激活KCs触发炎症反应介导单核/巨噬细胞浸润为主的炎症反应分子机制开展系统研究，该研究对抗炎新药物靶点开发有着重要价值。　　研究内容及方法：　　1.利用CCl4小鼠肝损伤模型，通过生化指标检测、病理学切片染色，观察肝脏病理变化。采用流式细胞术检测肝脏免疫细胞的变化，ELISA检测炎性因子的分泌，免疫组织化学染色检测单核/巨噬细胞的浸润，分析CCl4诱导肝损伤后无菌性炎症的发生情况。通过转录组测序（RNA-seq）、RT-qPCR与免疫组织化学染色，探讨S100A6在CCl4诱导肝损伤中的表达变化情况。　　2.利用对乙酰氨基酚（Paracetamo，APAP）小鼠肝损伤模型，通过生化指标检测、病理学切片染色观察肝脏病理变化。流式细胞术检测肝脏单核/巨噬细胞的浸润，ELISA检测炎性因子的分泌，分析APAP诱导肝损伤后无菌性炎症的发生情况。生物信息学分析结合RT-qPCR验证，比较两种肝损伤模型中的DAMPs表达，明确S100A6在两种肝损伤模型中的差异。　　3.体外利用S100A6刺激KCs，通过RT-qPCR、ELISA检测炎性因子的分泌情况。利用TLR4单克隆抗体封闭KCs表面TLR4受体，明确S100A6的结合受体。Westernblot检测p38、ERK、JNK、P65通路蛋白变化，阐明肝损伤中S100A6激活KCs产生炎性因子的分子机制。体外利用TNF-α刺激FL83B细胞，检测CCL2的表达以及p38、ERK、JNK、STAT3通路蛋白变化，进一步研究KCs产生TNF-α旁分泌作用介导FL83B细胞CCL2趋化效应的分子机制。　　4.利用siRNA敲低RAW264.7细胞中S100A6，通过MTS、Transwell，研究S100A6在单核/巨噬细胞中的作用。　　实验结果：　　***4损伤后，肝组织肝门静脉区域2/3面积的弥漫性坏死，损伤区域有大量单核/巨噬细胞浸润，炎性相关因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、INF-γ和CCL2的显著升高。RNA-seq发现，CCl4诱导的肝损伤早期可显著上调DAMPs中的热休克家族蛋白（HSP）和S100家族蛋白。S100A6在正常肝组织中的表达极低，损伤第2dS100A6在损伤区域的肝细胞中高表达，第5d开始表达量快速下降。同时发现，正常肝脏中的KCs不表达S100A6，但损伤后浸润的单核/巨噬细胞表达S100A6。　　***损伤后也可导致肝脏组织大面积弥漫性坏死，炎性因子TNF-α、IL-1β显著升高，并伴随单核/巨噬细胞浸润。RNA-seq测序发现APAP诱导的肝损伤早期可显著上调DAMPs中的高迁移率族蛋白（HMGB）、HSP和S100家族蛋白。基因聚类分析发现S100A6在两种损伤模型中极显著升高，进一步相关性分析显示炎性相关因子表达与S100A6表达呈正相关，提示S100A6在早期炎症反应中可能发挥重要作用。　　3.抗体封闭实验表明S100A6通过结合TLR4激活KCs促进炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌。Westernblot检测信号通路发现，S100A6可通过p38、JNK、P65信号通路激活KCs释放TNF-α等炎性因子。进一步的研究表明TNF-α可通过p38、JNK信号途径激活静息FL83B细胞产生趋化因子CCL2，趋化单核/巨噬细胞的浸润。　　4.干扰S100A6的表达后，RAW264.7细胞增殖、迁移能力显著降低，说明S100A6能够促进单核/巨噬细胞的增殖、迁移。　　研究结论：　　***4与APAP诱导肝损伤中DAMPs有所差异，但S100家族蛋白在两种模型中均显著上调。尤其S100A6在损伤早期被损伤区域肝细胞迅速合成，推测其与早

关键词： 动脉瘤性蛛网膜下腔出血   全身免疫炎症指数   全身炎症反应  

摘要： 全身炎症反应与危重患者的预后密切相关。近年来,全身免疫炎症指数(Systemic immune-inflammation index,SII)作为反映炎症反应和免疫状态的指标,被证明可以预测癌性和非癌性疾病的预后情况。本研究的目的是探索动脉瘤性蛛网膜下腔出血(Aneurysmal subarachnoid hemorrhage,a SAH)患者入院时SII与发病6个月预后之间的关系。本研究分析了76例a SAH患者的临床资料。采用改良Rankin量表(Modified Rankin scale,m RS)评价6个月预后,其中不良预后定义为m RS评分≥3。此外,进行多因素分析,探讨与预后不良的独立相关因素。采用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristics,ROC)来确定SII与预后情况的最佳分界值。在我们的研究中,36例(47.4%)患者在发病6个月时出现预后不良(m RS≥3),其中24例(66.7%)在高SII组。二元逻辑回归分析显示,入院时的SII值与6个月临床预后之间存在独立相关性(校正后OR=4.499,95%CI:1.242-16.295,P<0.05)。预测不良预后的SII的曲线下面积为0.692(95%CI:0.571-0.814,P<0.05)。因此,SII可能是早期预测a SAH患者结局的一种新的独立预后因子。

关键词： 急性缺血性脑卒中   Th1/Th2免疫平衡   免疫炎症反应   通窍活血汤  

摘要： 目的:通过观察通窍活血汤对急性缺血性脑卒中的治疗效果,以及通窍活血汤对Th1、Th2相关细胞因子数量变化的影响,从Th1/Th2免疫平衡的视角,了解通窍活血汤防治急性缺血性脑卒中的作用机理,为中医药防治急性缺血性脑卒中对免疫方面的影响提供研究基础。方法:1.临床研究:在柳州市中医医院(柳州市壮医医院)神经内科病区中选择符合本临床试验研究标准的急性缺血性脑卒中病人60例,并使用数字随机法分为对照组30例以及通窍活血汤组30例。对照组的病人使用一般常规治疗,通窍活血汤组的病人在一般常规治疗上再加以口服中药汤剂通窍活血汤,两组病人的治疗疗程均为14天。在治疗前的第1天及治疗后14天分别对两组病人进行NIHSS评分和m RS评分,并采集血清标本,用流式细胞仪检测技术分别检测两组受试者血清中Th1、Th2细胞分泌的相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10的数量。2.动物实验:以健康雄性SD大鼠做为研究对象,选择Zea-Longa线栓术阻断大鼠右脑中动脉血管,制作大鼠MCAO模型,在造模后24h,使用Longa神经功能缺损评分确认造模效果,剔除不符合的大鼠后,使用随机分组的方式将MCAO大鼠分为4组,分别为模型组以及通窍活血汤高、中、低剂量组,每组大鼠各10只。再另选10只大鼠作为假手术组,处理方法与MCAO相同,但仅分离血管,不进行结扎及放置线栓。分组完成后即可开始治疗,高、中、低剂量组的大鼠分别以0.72ml/100g、0.36ml/100g、0.18ml/100g剂量的通窍活血汤配以0.28ml/100g、0.64ml/100g、0.82ml/100g体积的蒸馏水灌胃,1次/d,假手术组及模型组的大鼠则配以1ml/100g体积的蒸馏水进行灌胃,各组大鼠的疗程均为14d,并在24h、14d后使用Longa神经功能缺损程度对大鼠进行评分。在最后一次灌药评分后处死大鼠,采集脑组织标本,脑组织进行切片后行TTC染色,用Image Pro-plus6.0软件计算各组大鼠的脑梗体积百分比,另外采用RT-PCR法分别检测各组大鼠脑组织中Th1、Th2相关细胞因子IFN-γm RNA、TNF-αm RNA、IL-6 m RNA、IL-10 m RNA的表达水平。结果:1.临床实验:在临床疗效中,对照组及通窍活血汤组在治疗前的组间比较中,NIHSS评分和m RS评分均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组NIHSS评分、m RS评分较治疗前对比都有所下降,具有显著统计学意义(P<0.01);而与对照组比较,通窍活血汤组NIHSS评分和m RS评分下降更明显。细胞因子表达情况中,在治疗前,对照组与通窍活血汤组血清Th1、Th2细胞分泌的IFN-γ、IL-4、IL-10等因子表达无明显差异(P>0.05)。治疗后,在Th1相关因子中,两组中的IFN-γ炎症因子水平在治疗后均呈下降趋势(P<0.05),而通窍活血汤组下降更明显(P<0.01);在Th2相关因子中,对照组在治疗后,IL-4炎症因子水平未见改变,无统计学意义(P>0.05),通窍活血汤组中的IL-4因子水平上升则显著表达(P<0.01),而两组血清中Th2细胞相关因子的IL-10水平则呈上升趋势(P<0.05),以通窍活血汤组上升更明显(P<0.01)。在治疗前,两组IFN-γ/IL-4比值进行比较中,统计无差异性(P>0.05);而两组在治疗后同治疗前对比,其表达水平均下降(P<0.05),通窍活血汤组下降则更显著(P<0.01)。2.动物研究结果提示:(1)神经功能缺损情况:造模后24h、14d两个时间点分别对五组大鼠行Longa神经功能缺损的评分,结果表明,假手术组的大鼠的评分均为0分,没有任何神经功能缺损的症状表现,而模型组大鼠则出现相关神经功能障碍的症状表现;与假手术组比较,模型组具有显著统计学意义(P<0.01)。与模型组对比,通窍活血汤的三个治疗组在24h时的评分并无明显差别,无统计学意义(P>0.05)。在14d后,通窍活血汤三组大鼠的评分与模型组对比有统计学意义(P<0.05),而高剂量组大鼠评分具有显著统计学意义(P<0.01),说明通窍活血汤治疗可以改善MCAO大鼠的神经功能缺损。(2)脑梗死体积百分比变化:各组大鼠切片在经过TTC试剂染色后,MCAO模型大鼠在脑的冠状区域其组织切片能见到明显的苍白色梗塞病灶,而假手术组大鼠的切片未见有梗塞病灶的表现。与假手术组对比,模型组大鼠脑切片的梗死体积百分比具有显著统计学差异(P<0.01);与模型组相比,通窍活血汤组三组大鼠的脑梗面积均有缩小,其梗死体积百分比降低且具有统计学差异(P<0.05),其中通窍活血汤高剂量组脑梗面积缩小更明显,具有显著性差异(P<0.01)。(3)各组Th1、Th2相关炎症因子m RNA水平变

关键词： 全身免疫炎症指数   急性缺血性卒中   卒中严重程度   出血转化   预后  

摘要： 目的:探讨全身免疫炎症指数(Systemic Immune-inflammation Index,SII)与急性缺血性卒中(Acute Ischemic Stroke,AIS)患者入院时病情严重程度的相关性及SII对发病7天内出血转化(Hemorrhagic Transformation,HT)和发病90天后的神经功能预后的预测价值。方法:本研究数据来源于脑卒中防治工程管理专项数据库,从数据库中回顾性连续纳入2020年8月至2021年8月烟台毓璜顶医院急诊内科收治的首次发病24小时内的AIS患者。采集患者的一般资料及临床资料。在发病24小时内完成血常规检测并根据外周血小板、中性粒细胞和淋巴细胞计数计算SII值。所有患者在入院3小时内完成首次NIHSS评分,NIHSS评分≤5分定义为轻度,NIHSS评分≥6分定义为中重度。使用改良Rankin量表评价患者90天临床预后,m RS评分≤2分定义为预后良好,m RS评分≥3分为预后不良。通过基线资料及多因素Logistic回归分析SII与病情严重程度、发病1周内HT发生情况及临床预后的关系。绘制SII、血小板与淋巴细胞比值(Platelet to lymphocyte ratio,PLR)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(Neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)、SII联合NIHSS评分对HT及预后不良预测的ROC曲线,并将AUC值进行比较。P<0.05定义为差异有统计学意义。结果:***与卒中严重程度的关系:轻度组168人(63.2%),中重度组98人(36.8%)。中重度组的白细胞计数、中性粒细胞百分比、NLR、PLR、SII、TC、LDL-C、INR高于轻度组,HDL-C、淋巴细胞百分比低于轻度组,组间上述差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,在校正人口学特征及血管危险因素等混杂因素后,SII(OR 1.004,95%CI 1.001～1.006,P=0.007)与AIS患者入院时严重程度相关。***与卒中HT的关系:非HT组213人(80.1%),HT组53人(19.9%)。与非HT组患者相比,HT组患者年龄及梗死面积更大,入院时NIHSS评分更高,预后不良患者更多。HT组患者入院后白细胞计数、中性粒细胞百分比、血小板计数、NLR、PLR、SII、INR高于非HT组,淋巴细胞百分低于非HT组,组间以上差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,在校正人口学特征及血管危险因素等混杂因素后,SII(OR 1.326,95%CI 1.126～1.438,P=0.005)与AIS患者发病7天内HT相关。***与卒中预后的关系:轻度卒中患者预后不良44人(23.8%),中重度卒中患者预后不良56人(57.1%)。在轻度卒中组内,与预后良好患者相比,预后不良患者的中性粒细胞百分比、血小板计数、NLR、PLR、SII水平更高,淋巴细胞百分更低,组间以上差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,在校正人口学特征及血管危险因素等混杂因素后,在轻度卒中组中,SII(OR 1.016,95%CI 1.005～1.032,P=0.016)与AIS患者发病90天预后不良相关。中重度卒中患者预后的亚组分析中,SII(OR 1.010,95%CI 1.006～1.011,P=0.025)同样与AIS患者发病90天预后不良相关。***对卒中的预测价值:构建ROC曲线发现SII、NLR、PLR、SII联合NIHSS评分预测发病7天内HT的AUC值为0.857(95%CI 0.808-0.907)、0.832(95%CI 0.775-0.890)、0.848(95%CI 0.789-0.898)、0.815(95%CI 0.745-0.884)(P<0.001)。通过Med Calc 19.0软件对比后发现,SII与NLR、PLR、SII联合NIHSS评分预测发病7天内HT的AUC值之间的差异无统计学意义(P>0.05)。构建ROC曲线发现SII、NLR、PLR、SII联合NIHSS评分预测AIS患者发病90天预后不良的AUC值为0.880(95%CI 0.836-0.924)、0.806(95%CI 0.751-0.862)、0.892(95%CI 0.851-0.933)、0.902(95%CI 0.860-0.944)(P<0.001)。通过Med Calc 19.0软件对比后发现,SII与NLR、SII联合NIHSS评分预测AIS患者发病90天预后不良的AUC值之间的差异有统计学意义(P<0.05),与PLR预测AIS患者发病90天预后不良的AUC值之间的差异无统计学意义(

关键词： N-乙酰半胱氨酸   雾化吸入   慢性阻塞性肺疾病急性加重期   中性粒细胞/淋巴细胞比率   嗜酸性粒细胞/嗜碱性粒细胞比率   呼出气一氧化氮   CAT评分  

摘要： 目的:探讨雾化吸入N-乙酰半胱氨酸（NAC）治疗对慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患者全身炎症标志物[中性粒细胞和淋巴细胞比率（NLR）、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞比率（EBR）、C反应蛋白（CRP）]和气道局部炎症标志物[呼出气一氧化氮（FeNO）、小气道/肺泡一氧化氮（CaNO）]及疗效[慢性阻塞性肺疾病评估测试（CAT）]的影响和意义。同时,观察AECOPD患者NLR、EBR、FeNO、CaNO及CRP的水平变化及与CAT评分等的相关性,为AECOPD的病情评估和治疗提供帮助。方法:选择2020年11月至2021年12月在河北工程大学附属医院呼吸与危重症医学二科住院的AECOPD患者共96例,随机分为对照组（n=48）和观察组（n=48）,并选取同期健康体检中心体检者40例为健康组（n=40）。观察组和对照组患者均给予控制性氧疗、吸入等剂量支气管扩张剂及糖皮质激素、抗感染（必要时）等常规治疗,观察组在常规治疗的基础上,同时给予NAC溶液300mg雾化吸入,每日2次,疗程为10天。观察组和对照组于入院后开始治疗前行CAT评分及FeNO、CaNO测定,并抽取空腹静脉血检测CRP、血常规（计算NLR、EBR）;于治疗后第10天,观察组和对照组再次行CAT评分及FeNO、CaNO测定,并完成CRP、血常规（计算NLR、EBR）的检测。健康组于体检当天行FeNO、CaNO测定,并抽血检测CRP、血常规（计算NLR、EBR）。观察NLR、EBR、CRP及FeNO、CaNO在健康人群与AECOPD患者间及AECOPD患者中治疗前、后的变化,探讨雾化吸入NAC对AECOPD患者NLR、EBR、CRP、FeNO、CaNO及CAT评分的影响。结果:1.治疗前对照组与观察组血清NLR值、CaNO水平均显著高于健康组（p＜0.05）,两组间NLR值、CaNO水平差异无统计学意义（p＞0.05）。治疗后对照组与观察组NLR值、CaNO水平较治疗前均明显降低（p＜0.05）,但均仍高于健康组水平（p＜0.05）;治疗后两组间NLR值、CaNO水平均无显著性差异（p＞0.05）。2.治疗前对照组与观察组血清EBR值均显著低于健康组（p＜0.05）,两组间EBR值差异无统计学意义（p＞0.05）。治疗后对照组与观察组EBR值较治疗前明显升高（p＜0.05）,但仍低于健康组水平（p＜0.05）;治疗后两组间EBR值无显著性差异（p＞0.05）。3.治疗前对照组与观察组FeNO水平均显著高于健康组（p＜0.05）,两组间FeNO值差异无统计学意义（p＞0.05）。治疗后对照组与观察组FeNO值较治疗前明显降低（p＜0.05）,且观察组较对照组降低更显著（p＜0.05）、并接近于健康组水平（p＞0.05）,治疗后对照组FeNO值仍高于健康组水平（p＜0.05）。4.治疗前对照组与观察组血清CRP水平均显著高于健康组（p＜0.05）,两组间CRP水平差异无统计学意义（p＞0.05）;治疗后对照组与观察组CRP水平较治疗前明显降低（p＜0.05）,观察组较对照组降低更显著（p＜0.05）,但仍高于健康组水平（p＜0.05）。5.治疗前对照组与观察组CAT评分差异无统计学意义（p＞0.05）;治疗后对照组与观察组CAT评分较治疗前明显降低（p＜0.05）,且观察组较对照组下降更显著（p＜0.05）。6.对照组、观察组治疗前NLR、CRP、FeNO均与CAT评分呈正相关（p＜0.05）,EBR与CAT评分呈负相关（p＜0.05）,CaNO与CAT评分无相关性（p＞0.05）;NLR、FeNO与CRP呈正相关（p＜0.05）,EBR、CaNO与CRP无明显相关性（p＞0.05）;两组治疗前FeNO与CaNO水平均呈正相关（p＜0.05）。结论:AECOPD患者NLR、CRP、FeNO、CaNO及CAT评分升高,EBR水平减低,治疗缓解后,NLR、CRP、FeNO、CaNO及CAT评分均有下降,EBR值升高;NLR、CRP及FeNO与CAT评分呈正相关,EBR与CAT评分呈负相关,NLR、FeNO与CRP呈正相关,FeNO与CaNO呈正相关。NLR、EBR、CRP与FeNO在一定程度上可反映AECOPD患者的炎症状态、病情严重程度及治疗效果,而CaNO可评估AECOPD患者的炎症状态及治疗效果,但不能反映患者的病情严重程度,FeNO与CaNO联合检测评价AECOPD气道炎症更准确,各指标联合检测有助于病情更全面地评估。雾化吸入NAC治疗后,AECOPD患者CRP水平、FeNO值及CAT评分均明显降低,雾化吸入NAC可减轻AECOPD患者气道和全身炎症反应并改善临床症状。