关键词： 加速康复外科   胃癌   炎症反应   体液免疫   细胞免疫  

摘要： 目的本研究旨在观察加速康复外科(enhanced recovery after surgery,ERAS)应用于胃癌患者围手术期管理对胃癌患者术后炎症反应和免疫功能的影响。方法选取2017年02月至2017年09月在我院胃肠外科行胃癌根治术的81例胃癌患者,随机分为两组,分别为加速康复外科实验组(ERAS组)40例和常规组(对照组)41例。对照组采取传统围手术期处理措施;ERAS组采取加速康复外科治疗模式。收集两组患者术后恢复进食时间、首次排气时间、首次排便时间、下床活动时间、理想术后住院时间、实际术后住院时间的数据,并进行比较分析。检测两组患者各时间段炎症指标(血清C-反应蛋白和PCT)、补体(C3和C4)、体液免疫指标(免疫球蛋白Ig G、Ig A和Ig M)及细胞免疫指标(CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞)的水平,并进行比较分析。使用统计学软件SPSS 20.0,组间差异比较采用t检验,分类资料差异比较采用?2检验,P<0.05认为差异具有统计学意义。结果ERAS组患者的术后恢复进食时间、首次排气时间、首次排便时间、下床活动时间、理想术后住院时间均小于对照组患者,差异具有统计学意义(P<0.001)。两组患者的术前血清C-反应蛋白(C-reaction protein,CRP)和降钙素原(procalcitonin,PCT)水平的比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后第1天,ERAS组患者的血清CRP和PCT水平均明显低于对照组(P<0.05),两组患者的血清CRP和PCT均高于术前水平(P<0.01);术后第4天,ERAS组患者的血清CRP和PCT水平仍均小于对照组(P<0.05),两组患者的血清CRP和PCT水平仍均高于术前(P<0.01);术后第7天,ERAS组患者的血清PCT水平明显低于对照组(P<0.05),两组患者的血清CRP和PCT水平还是均高于术前(P<0.01)。两组患者的术前免疫球蛋白Ig G、Ig A及Ig M水平的比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后第1天,ERAS组患者的免疫球蛋白Ig G和Ig A水平明显高于对照组(P<0.05),两组患者的免疫球蛋白Ig G、Ig A及Ig M水平均较术前均明显降低(P<0.05);术后第4天,ERAS组患者的免疫球蛋白Ig G和Ig A水平仍高于对照组(P<0.05),ERAS组患者的免疫球蛋白Ig G、Ig M水平较术前明显降低(P<0.01),而对照组患者的免疫球蛋白Ig G、Ig A及Ig M水平仍均较术前降低(P<0.05);术后第7天,ERAS组患者的免疫球蛋白Ig G、Ig A及Ig M与对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05),对照组患者的免疫球蛋白Ig G和Ig M水平仍较术前降低(P<0.05),而ERAS组患者仅免疫球蛋白Ig G水平较术前降低(P<0.05)。两组患者的术前、术后补体C3、C4水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后第1天,两组患者的补体C3、C4水平均较术前均明显降低(P<0.05);术后第4天,只有对照组患者的补体C3、C4水平仍均较术前降低(P<0.05)。两组患者的术前、术后CD3+、CD4+和CD8+的T淋巴细胞百分比的比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后第1天,两组患者的CD3+、CD4+和CD8+的T淋巴细胞百分比较术前均明显降低(P<0.05);术后第4天,ERAS组患者的CD4+T淋巴细胞百分比较术前明显降低(P<0.01),而对照组患者的CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比均较术前明显降低(P<0.05);术后第7天,两组患者的CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比均恢复甚至超过术前水平,差异无统计学意义(P>0.05)。结论加速康复外科应用于胃癌围手术期管理可减轻患者术后炎症反应,保护患者术后补体系统,促进患者术后免疫功能的恢复并加快患者术后的康复,值得在临床上广泛推广应用。

关键词： 糖尿病   糖尿病心肌病   丹蛭降糖胶囊   免疫炎症反应   实验研究   细胞凋亡   TLR4-MyD88-NF-κB信号通路  

摘要： 目的观察丹蛭降糖胶囊保护2型糖尿病模型大鼠心肌损伤的作用;完善TLR4-MyD88-NF-κB信号通路调节糖尿病心肌损伤的病理机制;揭示丹蛭降糖胶囊防治糖尿病心肌损伤的分子机制。方法在体动物实验,以高脂饲料联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法复制2型糖尿病大鼠模型,丹蛭降糖胶囊分别按照270、540、1080 mg/kg三个剂量组连续干预8周,通过观察丹蛭降糖胶囊对模型大鼠一般体征(体重、饮水量、摄食量)、血糖和血脂水平、血流动力学指标、心肌组织病理形态学(HE和Masson染色)的影响,研究丹蛭降糖胶囊防治2型糖尿病及并发心肌损伤的药物效应;借助Western blot、RT-qPCR、免疫组化等现代分子生物学实验方法和技术,研究模型大鼠心肌组织TLR4-MyD88-NF-κB信号通路相关蛋白和基因表达及下游相关炎症因子的变化规律,观察模型大鼠心肌组织凋亡的变化,并研究丹蛭降糖胶囊的干预作用。体外细胞实验,通过体外高糖诱导H9c2心肌细胞损伤模型,TLR4特异性阻断剂TAK-242及丹蛭降糖胶囊含药血清干预后,采用MTT及流式细胞术观察高糖对心肌细胞活力及凋亡率的影响,检测TLR4-MyD88-NF-κB信号通路和相关凋亡调节蛋白的变化,阐明TLR4-MyD88-NF-κB信号通路调节高糖诱导心肌细胞坏死和凋亡过程的病理机制,揭示丹蛭降糖胶囊干预高糖诱导心肌细胞凋亡作用及与调节TLR4-MyD88-NF-κB信号通路的关系。结果第一部分,TLR4-MyD88-NF-κB信号通路调节糖尿病心肌损伤的机制及丹蛭降糖胶囊的干预作用研究(1)与正常组比,模型组大鼠给药0w、4w和8w空腹血糖,8w糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三脂显著性升高(P(27)0.01);大鼠体重随时间呈降低趋势,摄食量和饮水量呈递增趋势,且部分时间点观察结果有显著差异(P(27)0.01,P(27)0.05);大鼠心脏重量指数、左心室重量指数显著增加(P(27)0.01);左心室收缩压、左室内压最大收缩率、左室内压最大舒张率显著降低(P(27)0.01),左心舒张末压显著升高(P(27)0.01);HE及Masson结果提示,模型组大鼠心肌组织出现了明显的心肌细胞坏死、间质纤维化、炎细胞浸润等病理学改变。(2)与模型组比,丹蛭降糖胶囊各剂量组干预后模型大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三脂均显著降低(P(27)0.01,P(27)0.05),同时有效改善模型大鼠体重降低及摄食和饮水量的增加;大鼠心脏重量指数、左心室重量指数显著降低(P(27)0.01,P(27)0.05);左心室收缩压、左室内压最大收缩率、左室内压最大舒张率显著升高(P(27)0.01,P(27)0.05),左心舒张末压显著降低(P(27)0.01,P(27)0.05);HE及Masson结果也提示模型大鼠心肌组织病理学损伤得到显著改善。(3)与正常组比,模型组大鼠心肌组织TLR4、MyD88、NF-κB的蛋白和mRNA表达显著增加,血清TNF-α、IL-1β和IL-6含量显著增加,TUNEL染色显示心肌组织凋亡率显著增加(P(27)0.01);(4)丹蛭降糖胶囊各剂量组与模型组比,心肌组织TLR4、MyD88、NF-κB的蛋白和mRNA表达显著减少,血清TNF-α、IL-1β和IL-6含量显著减少(P(27)0.01,P(27)0.05),模型大鼠的凋亡率显著降低(P(27)0.01,P(27)0.05)。第二部分,丹蛭降糖胶囊调节TLR4-MyD88-NF-κB信号通路抗高糖诱导心肌细胞凋亡的机制研究。(1)不同糖浓度(5.5、15、30、45、60mmol/L)和不同干预时间(12、24、48h),对H9c2心肌细胞存活率和心肌细胞凋亡率的观察结果显示,与正常对照组(5.5mmol/L)比,高糖模型组(30mmol/L)干预48h可显著降低心肌细胞存活率和增加心肌细胞凋亡率(P(27)0.01);(2)与正常对照组比,高糖模型组心肌细胞TLR4、MyD88的蛋白表达,MyD88和NF-κB p65 mRNA表达显著增加(P(27)0.01),NF-κB p65蛋白磷酸化水平(磷酸化p65/p65比值)显著提高(P(27)0.01),同时流式细胞术检测心肌细胞凋亡率显著增加(P(27)0.01)、caspase-3蛋白表达和Bax/Bcl-2比值(蛋白相对表达量比值)显著增加(P(27)0.01);(3)TLR4特异性阻断剂TAK-242的干预组与高糖模型组比,心肌细胞MyD88的蛋白表达、MyD88和NF-κB p65的mRNA表达、NF-κB p65蛋白磷酸化水平均显著降低(P(27)0.01),心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达、Bax/Bc

关键词： 小儿   哮喘   免疫炎症反应   布地奈德   西替利嗪  

摘要： 目的分析西替利嗪口服联合布地奈德吸入对小儿哮喘急性发作过程中免疫炎症反应。方法 2016年7月至2017年10月,医院门急诊收治的小儿哮喘患儿入组,采用布的奈德为主的药物治疗76例,纳入对照组,选择西替利嗪口服联合布地奈德吸入联合治疗,纳入观察组。结果 1周后,观察组与对照组外周血淋巴细胞计数、CD4+/CD8+、CRP低于治疗前,两组IL-3高于治疗前,观察组外周血淋巴细胞计数、CD4+/CD8+、IL-6、CRP下降值高于对照组,观察组NK、IL-10下降水平低于高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论西替利嗪口服联合布地奈德吸入对小儿哮喘急性发作,其具有调节免疫、抗炎效果。

关键词： BCL6   肾脏炎症   炎性小体   血管重构   氧化应激   高血压  

摘要： 原癌基因B细胞淋巴瘤6(B-cell lymphoma 6,BCL6)是一种序列特异性的转录抑制因子,其结构包含N端疏水的BTB/POZ区域和C末端6个kruppel样的锌指结构。BCL6通过与靶基因启动子区域特异性的DNA序列结合,抑制其转录。受BCL6调控的靶基因主要与细胞的活化、分化、凋亡、细胞周期阻滞等相关。BCL6在维持巨噬细胞静息状态,终止炎症的过程中发挥重要作用。BCL6与辅抑制因子SMRT、NCoR结合,通过抑制炎症反应,改善小鼠动脉粥样硬化。本论文包括两个部分,分别探讨了(1)BCL6在高血压的肾脏炎症中的作用及其分子机制;(2)BCL6高血压的血管重构中的作用与机制。一、BCL6通过负调控NLRP3转录抑制肾脏炎症1.背景肾脏的慢性炎症在高血压的发生发展中起重要作用,改善肾脏炎症可能成为降血压的治疗手段。多种炎症疾病的模型中均存在核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白 3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors family pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体的激活,然而NLRP3炎性小体在高血压肾脏损伤中的研究还十分有限。转录抑制因子BCL6负性调节NF-κB的表达,从而抑制NF-κB介导的炎症反应。已发现BCL6是自身免疫疾病和癌症治疗的治疗靶点。BCL6在高血压的肾脏炎症中的作用尚不明确。2.目的本研究拟探讨高血压炎症模型中BCL6对NLRP3炎性小体的激活和炎症的作用及其分子机制;并探讨慢病毒过表达BCL6对自发性高血压大鼠肾脏炎症的治疗作用。3.方法人肾小管上皮细胞系(HK-2)培养在10%FBS和1%双抗(100 units/ml青霉素、100 mg/ml链霉素)的DMEM/F12培养基中,并且保持37℃,5%的CO2饱和湿度。人胚肾细胞系(293ET细胞)培养在10%FBS和1%双抗(100 units/ml青霉素、100 mg/ml链霉素)的DMEM培养基中。在体实验部分采用13周龄雄性自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)和WKY大鼠,随机各分成两组。肾实质分别注射BCL6或者对照ERFP的重组慢病毒,为确保BCL6过表达的有效性,2周后再次尾静脉分别注射BCL6或者对照ERFP的重组慢病毒。2周之后4组大鼠利用Powerlab测压系统测量清醒状态下的尾动脉收缩压(systolic arterial pressure,SBP)后分别进行取材和急性试验。利用尿素测定试剂盒和肌酐测定试剂盒检测血清尿素氮和肌酐的含量。采用蛋白质免疫分析技术(Western blotting)检测BCL6、NLRP3、含CARD结构域的凋亡相关斑点蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1前体(pro-cysteinyl aspartate specific proteinase 1,pro-caspase-1)前体、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutropil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、肾损伤分子-1(Kidney injury molecule-1,kim-1)、胱抑素 C(CystatinC)、白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)前体及成熟体和磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde phosphate dehydrogenase,GAPDH)表达。免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测NLRP3及BCL6的表达。用real-time PCR(RT-PCR)检测BCL6、NLRP3、IL-1β、白细胞介素-6 Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosi s factor-α,TNF-α)、趋化因子 C CL2 和 CXCL2的mRNA水平。采用双荧光素酶报告基因检测BCL6 与 NLRP3启动子的结合活性。电泳迁移率变化分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)和染色质免疫共沉淀分析(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)等方法研究 BCL6 与 NLRP3 启动子结合的结合位点。4.结果(1)SHR大鼠肾皮质BCL6 mRNA和蛋白水平下调,NLRP3炎性小体激活。(2)AngⅡ或LPS抑制HK-2细

关键词： 椎间盘退变   病理机制   自身免疫炎症反应   髓核细胞   白细胞介素9   肿瘤坏死因子α   前列腺素E2  

摘要： 椎间盘退变(Intervertebral disc degeneration，IDD)是导致腰背痛及椎间盘源性腰痛的最常见原因，给患者个人家庭及社会带来极大的经济负担。IDD的特征为椎间盘发生广泛的形态学和生物力学变化，椎间隙高度减低，椎间盘结构破坏，脊柱活动度下降，最终导致椎间盘生物力学功能丧失，同时引起下腰痛等临床症状。椎间盘退变主要的生化改变为椎间盘内软骨样髓核细胞出现变性及坏死，髓核细胞功能降低和数量减少，髓核细胞外基质中Ⅱ型胶原(TypeⅡ collagen，ColⅡ)、蛋白聚糖等功能性基质大分子丢失造成细胞赖以生存的环境被破坏。炎性介质在椎间盘退变过程中发挥着重要的作用。炎症因子在椎间盘退变过程中通过引起炎症反应、诱导细胞凋亡，破坏椎间盘的组织结构。研究证明，TNF-α、白细胞介素-1β(Interlukin-1β，IL-1β)、白介素17(Interlukin-17，IL-17)、前列腺素E2(Prostaglandin GE2)、环氧化酶-2(COX-2)、一氧化氮(NO)等炎症因子在椎间盘退变进程中起重要作用。炎症因子主要通过引起炎症反应、诱导细胞凋亡等途径，促进椎间盘退变;同时椎间盘组织内炎症因子相互作用发生级联反应，进一步加剧椎间盘组织的炎症反应，加速椎间盘退变。　　IL-9最初被认为是一种T淋巴细胞生长因子，主要由活化的CD4+Th9细胞分泌，此外肥大细胞、嗜酸性细胞、中性粒细胞、其他淋巴细胞亚群也可以少量分泌。研究表明，IL9在炎症反应中能够趋化炎症细胞，促进炎症因子表达，加剧炎症反应。目前，越来越多的证据表明Th9细胞和IL-9可能与人体炎症反应和自身免疫炎性疾病的发病机制相关。IL-9在多种自身免疫炎症疾病，如哮喘、免疫性脊髓炎、骨性关节炎及炎症性肠炎中发挥了重要作用。研究表明，IL-9可以促进IL-4介导B细胞分化及IgE的表达，此外IL-9还能够促进活化T细胞和肥大细胞增殖，从而促进过敏反症的发生。IL-9作为一种细胞因子可以通过调节嗜酸粒细胞的成熟和聚集，促进支气管上皮细胞表达T细胞趋化因子，从而促进过敏性哮喘的发展。在自身免疫性炎性反应方面，Nowak等在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)小鼠模型中发现，IL9能够影响中枢神经系统IL-17A和IL-6的表达。体外试验证明，IL-9促进股骨头坏死患者的关节软骨细胞表达、释放TNF-α、COX2等炎性因子，IL-9以浓度依赖和时间依赖方式促进关节软骨细胞分泌大量TNF-α、PGE2等炎症因子，进一步放大髋关节局部的免疫炎症反应。在退变椎间盘组织中，IL-9是否诱导髓核细胞TNF-α的表达及PGE2的产生，并通过二者发挥致炎作用，导致椎间盘内炎症反应，尚无明确研究。IL-9在椎间盘组织内作用的具体作用机制也不明确　　本研究主要分为两部分:第一部分主要探索IL-9及TNF-α在退变椎间盘的表达情况，明确IL-9及TNF-α是否参与椎间盘炎性退变的病理生理过程;第二部分主要通过体外实验探讨IL-9调控退变髓核细胞分泌TNF-α和PGE2的影响，进一步明确IL-9的在椎间盘自身免疫炎症反应中的作用机制。　　第一部分:IL-9、TNF-α在退变椎间盘组织及血清表达的研究　　研究目的:椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)是导致腰背痛和腰椎间盘突出的最常见原因。近年来，突出或脱出的退变椎间盘组织所诱发的炎症反应和自身免疫反应导致神经根炎性疼痛的观点受到重视。前期研究表明辅助性T淋巴细胞9(T helper9，Th9)细胞及其相关细胞因子IL-9在自身免疫性疾病中发挥重要作用。本研究通过检测椎间盘突出患者椎间盘组织中IL-9和TNF-α的表达，明确IL-9及TNF-α是否参与椎间盘炎性退变的病理生理过程。　　研究方法:选取2012年10月-2015年10月在山东大学齐鲁医院骨外科住院、同时经临床表现、体格检查和影像学检查明确诊断为腰椎间盘突出症患者。40例患单节段椎间盘突出症病人的椎间盘组织以及5例脊柱外伤病人的椎间盘组织，根据影像学检查和临床表现分为突出组(Group P)、脱出组(Group E)和正常对照组(Control Group)。免疫组织化学(Immunohistochemistry，IHC)染色检测各组退变椎间盘组织中IL-9和TNF-α的表达，观察上述指标在各组退变椎间盘的表达变化及定位;蛋白印迹法(Western blot)检测各组退变椎间盘组织IL-9和TNF-α蛋白表达水平;应用实时定量荧光聚合酶链式反应(real-time PCR)观察各组椎间盘组织中IL-9和TNF-α mRNA含量变化。收集患者外

关键词： 炎症性肠病   分子机制   结肠炎相关性结肠癌   PIAS3   肠纤维化   髓源性抑制细胞  

摘要： 炎症性肠病（Inflammatoryboweldisease，IBD）是一种慢性、反复的，且病因不清楚的肠道自身免疫性疾病，包含溃疡性结肠炎(Ulcerativecolitis，UC)和克罗恩病(Crohn''sdisease，CD)两种。近年来，IBD在我国的发病率逐年上升，其所致的恶性转化疾病如结肠炎相关性结肠癌(Colitis-associatedcolorectalcancer，CAC)和IBD反复炎症所致肠纤维化(Intestinalfibrosis)引发的肠梗阻(Intestinalobstruction)发病率也显著上升，这些疾病严重影响着人们的生活质量和生命健康，且现有的治疗手段很难将其根治。针对肠道炎症恶性转化和纤维化的研究越来越受重视，已成为当今医学的研究热点。　　IBD患者持续的慢性炎症会增加癌变的风险。与散发性结直肠癌(SporadicCRC)相比，CAC发展更迅速，其对抗癌药物的耐受性增强并导致更高的死亡率。研究表明，转录因子NF-κB和STAT3以及相关的信号通路在结肠炎-癌转化过程中异常活化，并促进结肠炎-癌转化的发生。PIAS3(ProteininhibitorsofactivatedSTATs，PIAS3)蛋白最初作为STAT家族的抑制剂而被发现的，PIAS3蛋白可以抑制STAT3的磷酸化，也可以作为类泛素蛋白修饰分子E3连接酶，与NF-κB相互作用来抑制其活性。至今为止，PIAS3在CAC中的作用和分子调控机制尚未阐明清楚。本文中，我们首先在CAC和CRC病人结肠样本以及AOM/DSS模型小鼠的结肠组织中，应用免疫组化，qRT-PCR以及westernblotting方法分别检测PIAS3、miR-18a水平以及NF-κB和STAT3转录活性，发现伴随着炎-癌转化发生，NF-κB和STAT3转录活性显著增加，PIAS3水平降低，miR-18a水平则升高。体外细胞实验发现miR-18a结合在PIAS3的3''-UTR区域抑制PIAS3的表达，PIAS3可以显著抑制NF-κB与STAT3的转录活性，而NF-κB与STAT3又是miR-18a重要的转录因子。基于这些研究结果，我们设想在结肠炎-癌转化过程中存在PIAS3介导的正反馈环路(PIAS3/NF-κB/miR-18a与PIAS3/STAT3/miR-18a)。我们进一步通过CCK-8实验证实PIAS3介导的正反馈环路的存在，并且发现该正反馈环路可调控细胞增殖。结合琼脂糖克隆侵袭实验以及裸鼠异位瘤生长模型发现PIAS3介导的环路可促进结肠肿瘤的生长。此外，在建立AOM/DSS小鼠模型过程中，我们通过PIAS3过表达慢病毒或者miR-18a低表达(anti-miR-18a)慢病毒升高结肠部位PIAS3表达，发现PIAS3过表达可以抑制结肠肿瘤生长。反之，PIAS3低表达会促进结肠肿瘤的生长。综上，我们的研究阐释了PIAS3蛋白在结肠炎-癌症转化过程中的表达情况以及生物学功能。该研究有助于进一步了解结肠慢性炎症向癌症转化新的分子机制，PIAS3/NF-κB/miR-18a与PIAS3/STAT3/miR-18a正反馈环路为CAC的临床治疗提供新的干预靶点与治疗思路。　　IBD反复炎症所致肠纤维化是其常见而严重的并发症之一，肠纤维化导致肠梗阻症状，严重影响人们的生活质量。髓源性抑制细胞(Myeloid-derivedsuppressorcells，MDSCs)在多种器官纤维化如肝纤维化，肺纤维化以及肾纤维化过程中发挥重要作用，然而MDSCs在肠纤维化中的作用和具体的分子机制尚不清楚。本文中，我们首先利用TNBS来诱导小鼠肠纤维化模型，流式检测发现MDSCs含量在肠纤维化小鼠体内明显升高。接着，在建立小鼠肠纤维化模型过程中对小鼠分别进行MDSCs体内回输与体内MDSCs敲除处理，结果发现MDSCs体内回输可以减轻肠纤维化，而MDSCs的敲除可以加重肠纤维化。通过qRT-PCR与ELISA检测发现TGF-β，TNF-α，IL-10，IL-17A，Col1a1以及Col3a1等基因表达变化明显。通过将MDSCs与肠上皮下肌成纤维细胞(Intestinalepithelialmyofibroblasts，ISEMFs)共培养，发现MDSCs分泌IL-10来抑制肌成纤维细胞增殖、活化以及胶原产生。这些结果表明MDSCs可通过分泌IL-10来抑制肌成纤维细胞的活性，从而抑制肠纤维化过程。研究MDSCs在肠纤维化过程中的作用以及分子机制，为临床治疗肠纤维化提供新的治疗靶点和策略。

关键词： 脊髓损伤   生酮饮食   氧化应激   Ⅰ型HDACs   NLRP3炎症小体  

摘要： 脊髓损伤(SCI)往往会导致永久性残疾或死亡,给家庭及社会造成沉重负担。SCI从病理角度可分为原发性和继发性损伤两个阶段。原发性损伤主要由机械刺激直接损伤,导致轴突、血管和神经细胞等的破坏,难以干预治疗。继发性损伤包括电解质紊乱、活性氧自由基(ROS)形成、缺血、水肿、炎症和凋亡等,是可施加治疗的关键因素。生酮饮食(KD)最早被用于治疗难治性癫痫,近年研究表明其在多种神经系统退行性病变及神经损伤的治疗中有一定作用。酮体主要成分β羟基丁酸(βOHB)在肾脏组织中被证实是一种内源性Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂,在骨髓源性巨噬细胞中,βOHB也被证实可抑制NLRP3炎症小体的激活,从而调节炎症反应。在脊髓组织中βOHB对Ⅰ型HDACs和NLRP3炎症小体的影响尚缺乏研究,有望进一步阐明KD治疗SCI的分子机制。因此,本研究旨在观察KD对大鼠SCI后神经功能的保护作用,探讨βOHB在脊髓组织中通过抑制Ⅰ型HDACs调节氧化应激,以及通过抑制NLRP3调节炎症反应的分子机制。KD或标准饮食(SD)预处理两周后,进行大鼠C5半侧挫伤模型建立,损伤后第1天、3天和7天取材检测蛋白表达。持续监测KD治疗对大鼠前肢运动功能及电生理指标恢复的影响。结果表明,与SD组比较,KD提高血浆酮体水平,并显著促进SCI后大鼠行为学和电生理指标的恢复。KD降低SCI后脊髓组织氧化应激指标和ROS产物,下调Nox2和Nox4的表达,上调Foxo3a、MnSOD和Catalase的表达。KD也抑制SCI后脊髓组织NLRP炎症小体的激活,促进小胶质细胞向M2亚型转化,降低组织中炎症反应。使用PC12细胞进行体外实验,表明βOHB显著降低H202诱导的细胞内氧化应激水平,并且抑制HDAC1、HDAC2和HDAC3的表达,对HDAC8未见显著影响。使用siRNA技术沉默HDAC1或者HDAC2基因,可以明显上调抗氧化应激蛋白Foxo3a的表达,下调Nox2和Nox4的表达。BV2细胞体外实验证实βOHB可以抑制LPS和ATP联合诱导的小胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活,减低LPS引起的细胞中炎症因子的释放。使用βOHB、MCC950和siNLRP3抑制NLRP3的表达,均可促进小胶质细胞由Ml向M2亚型极化。综上所述,本研究表明KD可促进SCI后大鼠前肢运动功能和电生理指标的恢复。并阐明了在神经细胞中βOHB通过抑制HDAC1和HDAC2,调节氧化应激相关蛋白表达,降低SCI后氧化应激水平的分子机制。证实了 βOHB可通过抑制小胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活,促进SCI后小胶质细胞由M1向M2亚型转化,从而减低SCI后炎症反应。本研究为KD治疗SCI提供了新的理论支持。

关键词： 褪黑素   脂肪细胞   生物钟节律   细胞增殖   炎症反应   细胞焦亡  

摘要： 脂肪组织在动物体内能量代谢和免疫应答中起重要作用。褪黑素是一种主要由松果体分泌调控中枢系统和外周组织生物钟节律的神经激素。研究表明生物钟节律基因参与脂肪细胞增殖、分化、脂代谢和细胞凋亡等生物学过程调控,生物钟节律紊乱也与脂肪组织稳态失衡密切相关,但褪黑素在其中的调控作用尚不清楚。本研究利用褪黑素(Melatonin)处理小鼠脂肪组织和原代脂肪细胞,探究其对脂肪细胞增殖和生物钟节律的影响,阐明Melatonin调控脂肪细胞和巨噬细胞间互作的外泌体途径,解析Melatonin调控脂肪细胞炎症反应和细胞焦亡的分子机制。获得以下主要研究结果:1.褪黑素通过调控脂肪细胞生物钟节律促进脂肪细胞增殖。Melatonin显著提高生物钟节律基因Bmal1和Clock等表达和节律性振幅,增加EDU阳性细胞比例,促进细胞增殖关键基因c-Myc和Cyclin E节律性表达;同时,Melatonin提高Clock结合c-Myc启动子区E-box结构,转录调控c-Myc进而促进脂肪细胞增殖;此外,Clock、c-Myc和HDAC3形成蛋白复合体,在Melatonin促进脂肪细胞增殖中也发挥重要作用;Melatonin通过调控Clock等生物钟节律基因缓解高脂肥胖和节律紊乱中的脂肪细胞增殖抑制。2.褪黑素促进脂肪细胞外泌体中α-酮戊二酸(α-KG)传递,抑制脂肪细胞炎症反应。Melatonin抑制肥胖引起的脂肪细胞IL-6、TNFα和IL-1β等炎症因子表达,提高TCA循环中关键中间产物Citrate和α-KG含量;转录组测序结果表明TCA循环中关键基因Idh2参与Melatonin抑制脂肪组织炎症,Melatonin促进Idh2表达和活性、增加脂肪细胞内α-KG水平,激活Tet双加氧酶家族介导的DNA去甲基化过程,抑制脂肪细胞炎症反应;此外,Melatonin提高脂肪细胞外泌体中α-KG含量传递至巨噬细胞,促进M2巨噬细胞极化,缓解脂肪细胞炎症;利用生物钟节律紊乱模型发现Melatonin缓解节律紊乱引起的脂肪组织炎症反应。3.褪黑素抑制炎症反应引起的脂肪细胞焦亡。转录组解析Melatonin调控脂肪细胞炎症的相关基因,发现NLRP3炎性小体信号和NF-κB信号通路显著富集;Melatonin抑制NLRP3、ASC和Caspase1、IL-1β等炎症因子表达,减少LPS诱导的细胞死亡;Melatonin降低Caspase1介导的TUNEL阳性细胞比例和LDH分泌,此过程不依赖Caspase3活化;Melatonin抑制细胞焦亡关键因子GSDMD表达,缓解脂肪细胞焦亡;Melatonin抑制NF-κB信号通路激活及核转位,进而抑制下游炎症关键因子IRF7表达。综上所述,本研究探明了褪黑素通过生物钟节律基因和Clock/HDAC3/c-Myc信号促进脂肪细胞增殖的分子机制,解析了褪黑素激活α-KG介导的DNA去甲基化及外泌体传递途径缓解脂肪细胞炎症的作用机制,揭示了褪黑素抑制NLRP3炎性小体信号和GSDMD介导的细胞焦亡的调控机制,最终阐明褪黑素维持脂肪细胞正常生物学功能的重要作用,为深入研究脂肪组织生物钟节律调控奠定分子基础,为新品种选育和肉品质改良提供重要理论基础。

关键词： 缺血-再灌注损伤   缺血后处理   凋亡   炎症反应   补体   心肌细胞   缺血-再灌注损伤   缺血后处理   凋亡   热休克蛋白90   补体   心肌细胞   缺血后处理   mi R-499   HSP90   补体   凋亡   心肌细胞  

摘要： 补体系统激活是心肌缺血-再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,IRI)的重要特征。补体系统激活后除通过攻膜复合体直接造成心肌细胞损伤外,也可激活NF-κB、JNK、ERK1/2等信号转导通路,诱导TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症细胞因子表达,诱发免疫炎症反应并引起心肌细胞凋亡、坏死。我们的前期研究发现,缺血后处理(ischemic postconditioning,IPC)以及缺氧后处理(hypoxia postconditioning,HPC)能够上调热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)表达,减轻缺血-再灌注(缺氧/复氧)引起的心肌细胞凋亡、坏死[1,2]。然而,尚不清楚后处理是否对补体系统具有调节作用。另外,有研究报道缺血后处理能够上调mi R-499表达,减轻缺血-再灌注引起的心肌细胞凋亡[3]。HSP90和mi R-499在缺血后处理中的保护作用是否存在某种联系,目前尚不清楚。我们假设,缺血后处理通过上调HSP90表达,抑制缺血-再灌注引起的补体活化,减轻补体介导的心脏免疫炎症反应和细胞凋亡,而mi R-499通过调节HSP90表达,参与缺血后处理中HSP90对心脏补体系统及免疫炎症反应的调节。为验证以上假设,我们建立了心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤模型和大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型,实施HPC和IPC,探讨后处理对补体活化、免疫炎症反应以及细胞凋亡的影响。研究发现,HPC和IPC可显著抑制缺血-再灌注(缺氧/复氧)引起的补体C3/C5a、NF-κB、IL-1β、TNF-α表达,降低心肌细胞凋亡率。以上结果提示后处理能够减轻补体介导的心脏免疫炎症反应和细胞凋亡。为探讨后处理抑制补体激活和免疫炎症反应的机制,我们在后处理基础上应用HSP90特异性抑制剂-格尔德霉素(Geldanamycin,GA),观察其对补体C3/C5a、NF-κB、IL-1β、TNF-α表达以及心肌细胞凋亡的影响。研究结果显示,后处理能够上调HSP90表达,并减少缺血-再灌注(缺氧/复氧)诱导的补体C3/C5a、NF-κB、IL-1β、TNF-α表达以及心肌细胞凋亡,而应用格尔德霉素之后这种效应被抵消。以上结果提示,HSP90介导了后处理对补体介导的心脏免疫炎症反应的抑制作用。最后,我们探讨了mi R-499在心肌缺血后处理中的作用及其与HSP90的关系。我们发现,缺血(缺氧)后处理能够显著上调mi R-499表达,并减少心肌细胞凋亡。为进一步探讨mi R-499在心肌缺血后处理中的作用机制,我们构建了mi R-499过表达和抑制表达病毒载体,对mi R-499过表达和抑制表达后的心肌细胞和大鼠心肌进行后处理。检测结果发现过表达mi R-499可显著上调后处理过程中心肌细胞和组织HSP90表达,同时显著增强后处理对补体C3/C5a、IL-1β、TNF-α、NF-κB表达以及心肌细胞凋亡的抑制,而抑制mi R-499表达后上述作用被显著减弱。以上研究结果提示,在缺血后处理中mi R-499通过上调HSP90表达减轻补体介导的心脏免疫炎症反应和细胞凋亡。第一部分缺血(缺氧)后处理对补体介导的心脏免疫炎症反应的影响及机制目的探讨缺血(缺氧)后处理对补体介导的心脏免疫炎症反应的影响及机制。方法研究分为细胞实验和动物实验两个部分。(1)细胞实验:建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,将细胞分为三组:对照组(正常培养9小时)、H/R组(缺氧3小时,再复氧6小时)、HPC组(缺氧3小时后行3个循环复氧/缺氧处理,每个循环5分钟,然后复氧6小时)。应用Hoechst 33258染色检测心肌细胞凋亡,Western blot检测心肌细胞补体C3/C5a、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β表达。(2)动物实验:建立大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型。32只SD大鼠随机分为3组(每组8只):假手术(sham)组(前降支只穿线,不结扎)、I/R组(前降支结扎30分钟后再灌注2小时)、IPC组(前降支结扎30分钟后行3个循环再灌注/缺血处理,每个循环30秒,然后再灌注2小时)。采用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,Western blot检测大鼠心肌组织C3、C5a、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β表达。结果(1)与对照组比较,H/R组心肌细胞C3、C5a、NF-κB、TNF-α、IL-1β表达以及细胞凋亡显著增多;与H/R组比较,HPC组心肌细胞C3、C5a、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β表达以及细胞凋亡显著减少。(2)与sham组比较,I/R组C3、C5a、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β表达以及细胞凋亡显著增多;与I/R组比较,

关键词： 丙氨酰谷氨酰胺   老年肠梗阻   急性炎症反应   免疫功能  

摘要： 目的:分析丙氨酰谷氨酰胺对老年肠梗阻患者急性炎症反应及免疫功能的影响.方法:随机将我院收治的55例老年肠梗阻患者分成两组,给予A组27例老年患者实施常规肠外营养支持干预治疗,给予B组28例老年患者在A组基础上加用丙氨酰谷氨酰胺治疗,对比两组的治疗效果差异.结果:两组老年肠梗阻患者治疗后的IL-6、TNF-α、IgA、IgG、CD4+、CD8+及治疗有效率存在显著差异(<0.05),有统计学意义.结论:针对老年肠梗阻患者实施丙氨酰谷氨酰胺治疗的疗效明显,能改善患者炎症反应及免疫功能,促进患者预后.