关键词： CKD   Th17   IL-17   微炎症状态  

摘要： 【目的】研究辅助性T细胞17(Th17)及白介素-17(IL-17)与慢性肾脏病(CKD)微炎症状态的相关性,从而明确Th17及IL-17是否能够作为CKD的早期炎症指标,从而达到治疗CKD延缓肾功能进展目的。【方法】本研究实验组入组2021年6月至2022年2月云南省第一人民医院肾内科住院患者52例,根据肾小球滤过率(GFR),按照肾脏病饮食改良(MDRD)简化公式计算,将实验组分为CKD2-3期组17例、CKD4期组14例和CKD5期组21例,根据C反应蛋白(CRP)分为微炎症组和非微炎症组,当CRP在8-15mg/L时为微炎症状态,当CRP<8mg/L为非微炎症组。对照组选自健康志愿者30例。检测其全血Th17采用流式细胞术、血清IL-17采用酶联免疫吸附法,收集生化、血常规、原发病、年龄、性别、等临床资料进行分析比较。【结果】1.一般情况临床资料:52例CKD患者,其中女性22例(42.3%),年龄男性30例(57.7%)。原发性肾小球肾炎41例(78.9%),糖尿病肾病9例(17.3%),高血压肾病2例(3.8%)。30例健康人,其中女性18例(60%),男性12例(40%)。各组性别比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.实验室指标:三组实验组GFR、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)比较,差异有统计学意义(P<0.05),年龄、CRP、白细胞(WBC)、中性粒细胞(NEUT)、淋巴细胞(LYMPH)、微炎症与非微炎症例数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CKD2-3期组、CKD4期组与CKD5期组血沉(ESR)比较,差异有统计学意义(P<0.05),而CKD2-3期组与CKD4期组ESR则差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比:三组实验组、实验组、实验组微炎症组、实验组非微炎症组Th17均差异有统计学意义(P<0.05);CKD2-3期组、CKD5期组、实验组非微炎症组IL-17,差异有统计学意义(P<0.05);CKD4期组、CKD2-5期组、实验组微炎症组IL-17,差异无统计学意义(P>0.05)。CKD2-3期组、CKD4期组微炎症组与非微炎症组Th17、IL-17,差异无统计学意义(P>0.05)。CKD5期组微炎症组与非微炎症组Th17差异无统计学意义(P>0.05),但IL-17差异有统计学意义(P<0.05)。3.相关关系:实验组Th17与IL-17、Scr、BUN、CRP、ESR、WBC、NEUT、LYMPH无明显相关关系(P>0.05)。实验组IL-17与Scr、BUN、CRP、ESR、WBC、NEUT、LYMPH无明显相关关系(P>0.05)。三组实验组Th17、IL-17与CRP均无明显相关关系(P>0.05)。【结论】1、Th17及IL-17在CKD患者中表达水平升高,可能参与CKD的微炎症状态的形成。2、随着CKD分期的加重,IL-17表达水平增加,可能参与CKD的进展。3、在CKD2-3期、CKD5期患者中存在明显的Th17免疫反应,其效应细胞因子IL-17也显著增加。

关键词： 全身免疫炎症指数   全身炎症反应指数   脑出血   预后  

摘要： 目的1、探讨入院后全身免疫炎症指数(SII)及全身炎症反应指数(SIRI)与自发性脑出血(SICH)患者3个月临床预后的相关性;2、探讨影响SICH短期预后的相关因素;3、研究影响SII及SIRI的因素。方法回顾性收集2020年1月至2021年10月于大理大学第一附属医院神经内科收治的SICH患者共124例,记录其姓名等一般临床资料,是否有高血压、糖尿病等既往史,吸烟、饮酒等个人史,相关实验室及影像学资料,在3个月后通过电话及门诊随访患者及陪护家属,通过国际改良Rankin量表(mRS)对SICH患者进行评分,mRS≤2分为预后良好组(对照组),mRS≥3分、植物状态及死亡为预后不良组(实验组),预后良好组(n=61)和预后不良组(n=63),对其进行统计学分析,将上述收集的相关指标进行单因素分析,并将单因素有意义的变量纳入多因素logistic回归分析,最终保留P<0.05的自变量。采用ROC曲线分析有统计学意义的自变量的预测效果,探究SICH短期预后的独立危险因素。最后采用Pearson相关分析及一般线性回归分析SII和SIRI的影响因素。结果 在预后良好组及预后不良的单因素分析中,预后不良组的NIHSS、GCS、ICH评分、NLR、SII、SIRI、入院时mRS、出院mRS、舒张压、白细胞计数、中性粒细胞计数、单核细胞计数、血小板计数、血肿体积显著高于预后良好组,预后不良组的脑室受压数量也明显高于预后良好组,有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果表明,SII、SIRI、GCS评分及血肿体积可独立预测SICH 3个月预后不良(P<0.05)。在ROC曲线中,血肿体积的AUC为0.671,SII、SIRI及GCS的AUC均大于0.7,SII的最佳截断值为1.445,敏感度为0.651,特异度为0.869;SIRI的最佳截断值为2.255,敏感度为0.873,特异度为0.705;GCS的最佳截断值为14.483分,敏感度为0.810,特异度为0.705;血肿体积的最佳截断值为7.073ml,敏感度为0.651,特异度为0.869。Pearson相关分析及一般线性回归分析结果表明,入院时的SII与SIRI、NLR、GCS、白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、血小板计数相关,对SII影响最显著的指标是NLR;入院时的SIRI与SII、NLR、GCS、白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、出院时mRS相关,对SIRI影响最显著的是指标是单核细胞计数。结论1、SII、SIRI、血肿体积及GCS是SICH患者3个月预后的独立危险因素;2、入院后高SII值、高SIRI值、大的血肿体积及低GCS评分预示着SICH患者3个月的预后不良;3、入院时的SII与SIRI、NLR、GCS、白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、血小板计数相关,对SII影响最显著的指标是NLR;4、入院时的SIRI与SII、NLR、GCS、白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、出院时mRS相关,对SIRI影响最显著的是指标是单核细胞计数。

关键词： 饲鸽者肺   大鼠模型   B淋巴细胞   Th1/Th2失衡   Notch信号通路  

摘要： 目的:饲鸽者肺的发病机制、肺组织病理学特点等尚未完全明确,本研究通过分析饲鸽者肺患者的临床特点以提高对该病的认识,同时探讨不同病理时期动物模型的造模方法,并通过动物模型进行肺纤维化机制研究,为阻断过敏性肺炎炎症损伤和肺纤维化进展提供新靶点。方法:本研究主要从四个方面进行:（1）总结分析饲鸽者肺患者临床及实验室检查特点;（2）分析纤维化期患者外周血Breg细胞比例、α-SMA、TGF-β1及Notch信号通路关键蛋白的表达特点;（3）利用鸽子脱落物蛋白冻干粉构建不同病理分型的饲鸽者肺大鼠模型,探讨过敏性肺炎的造模方法并认识其病理学特点;同时用免疫组化检测纤维化期大鼠Notch信号通路关键蛋白的表达特点;（4）利用气道滴入致敏原构建纤维化期饲鸽者肺大鼠模型,并通过基因敲除技术干预B淋巴细胞和DAPT干预Notch信号通路,观察肺组织纤维化情况、免疫学特点,阐明干预B淋巴细胞或抑制Notch信号通路影响饲鸽者肺Th1/Th2失衡、肺纤维化形成的分子机制。结果:第一部分:本研究共纳入80例PBL患者,年龄28～75岁,中位年龄50.41±11.22岁,40岁以上中老年人占比96.25%,男性患者约是女性患者的两倍;63.75%的患者有长期接触鸽子病史（5年以上）。PBL的主要症状包括咳嗽咳痰、胸闷气短,少数患者可有发热、体重减轻等表现;主要体征可有发绀、肺部湿啰音或爆裂音、杵状指等。PBL患者胸部CT检查均提示异常,其中非纤维化型患者51例,纤维化患者29例;其中32.50%的患者肺CT可见双肺可见斑片状磨玻璃、片絮、索条影,呈弥漫性分布;38.75%的患者肺CT可见双肺弥漫性细小结节和树芽征改变;20.00%的患者肺CT可见气体陷闭或马赛克征;33.75%的患者肺CT有网格网格及蜂窝影表现,少部分患者肺CT可有小叶间隔增厚（5例）和牵张性支气管扩张的表现（6例）。肺功能分析提示83.75%的患者呈现弥散功能障碍,81.25%的患者呈现限制性通气功能障碍,少部分患者表现为阻塞或混合型通气功能障碍。血气分析提示78.75%的PBL的患者存在低氧血症（P02<80mm Hg）,18.75%的患者存在呼吸衰竭（P02<60mm Hg）。BALF细胞学分析提示91.25%的患者淋巴细胞比例增高>40%,8.75%的患者淋巴细胞比例增高>20%。PBL的诊断需要结合暴露史、肺部影像学、病理学及相关实验室检查等综合确诊,避免抗原暴露和激素治疗是PBL患者治疗的主要措施。第二部分:本研究共收集纤维化期PBL患者20例和健康对照组20例,两组研究对象均无吸烟史,病例组中男性患者13例,女性患者7例,平均年龄52.24±13.68岁。对照组男性和女性各10例,平均年龄51.66±10.74。纤维化型饲鸽者肺患者血清IL-10水平与对照组相比明显增高（P<0.05）,IL-17水平与对照组相比显著降低（P<0.05）,IL-35水平与对照组相比明显增高（P<0.05）;纤维化期PBL患者外周血Breg细胞比例较对照组降低,差异有统计学意义（P<0.05）;纤维化型饲鸽者肺患者存在Notch信号通路关键蛋白高表达,同时存在α-SMA、TGF-β1的高表达。第三部分:采用雾化法吸入致敏原时,4周可见以淋巴细胞为主的炎症渗出,1h/d雾化组炎症病变较明显;8周时观察0.5h/d时雾化组仍以渗出病变为主,可见少量松散的肉芽肿病变,1h/d雾化组肺泡壁增厚,肉芽肿病变明显;12周时0.5h/d雾化组可见少量松散肉芽肿形成,1h/d雾化组肺泡壁增厚,肉芽肿病变明显;造模至20W及40W仍以肉芽肿改变为主,未见到纤维化型改变。采用气道滴入的方式造模至20W,组1（低剂量+2次/周）、组2（中剂量+2次/周）可见肉芽肿改变,但未出现纤维化改变;组3（高剂量+1次/周）、组4（高剂量+2次/周）在第20周均出现了明显的肺纤维化改变,但组4大鼠死亡显现严重;再次采用组3（高剂量+1次/周）的方式构建动物模型,至4W时肺部炎症渗出明显,8W、12W均出现典型的肺部肉芽肿病变,未出现纤维化改变。同时肺组织免疫组化检测提示纤维化期大鼠存在α-SMA、TGF-β1、Notch通路受体及配体蛋白高表达。第四部分:正常大鼠滴注鸽子脱落物冻干粉混悬液20周后可成功复制纤维化型过敏性肺炎大鼠模型,伴有肺组织纤维化标记物α-SMA明显增高,CD19-/-大鼠及Notch信号通路抑制剂组大鼠可见肉芽肿病变,但未出现明显纤维化改变;纤维化型过敏性肺炎大鼠肺组织Notch信号通路关键蛋白Notch1、Notch2、Jag1、Jag2、DLL1、DLL4均高于正常对照组（P<0.05）,应用CD19-大鼠抑制B淋巴细胞功能后上述因子明显下降（P<0.05）;纤维化型过敏性肺炎大鼠肺组织Th1/Th2

关键词： 孕妇   炎症标志物   超敏C反应蛋白   炎症状态  

摘要： 背景 妊娠期是女性经历的一个特殊时期,炎症与妊娠的关系备受关注。既往多关注症状明显的孕期感染所致严重炎症反应对不良妊娠结局的影响,但孕期亚临床炎症也不容忽视。目前研究表明妊娠期亚临床炎症状态可能对孕妇妊娠结局和胎儿宫内发育产生潜在危害。超敏C反应蛋白（hs-CRP）是反映机体炎症状态的高度灵敏的炎症标志物,研究表明hs-CRP是妊娠期糖尿病、妊娠期高血压、早产等不良妊娠结局的危险因素之一。然而,无明显感染症状的孕妇hs-CRP水平以及非感染性影响因素有待探讨。目的 了解无明显感染症状的孕妇孕期血清hs-CRP水平,探讨其hs-CRP水平的非感染性影响因素。方法 选取2020年12月2021年12月于安徽省某三级医院产科门诊进行产检的无明显感染症状的孕妇,使用一般资料调查问卷收集孕妇社会人口学资料、妊娠相关资料、生活行为资料（孕期压力情况、被动吸烟、饮酒情况、体力活动水平等）,使用膳食频率问卷收集孕妇膳食摄入情况并分析营养素每日摄入量。采集孕妇空腹血清,使用酶联免疫吸附测定分析检测血清hs-CRP水平。通过单因素分析和多因素Logistic回归分析,分析孕妇hs-CRP水平的非感染性影响因素。结果 （1）本研究共纳入664名无明显感染症状的孕妇,孕早期孕妇154例（23.2%）、孕中期孕妇320例（48.2%）,孕晚期孕妇190例（28.6%）。孕妇血清超敏C反应蛋白水平为1.9053（0.896～3.620）mg/L,其中有225例（33.89%）孕妇血清hs-CRP水平超出正常范围（≥3mg/L）。（2）单因素分析结果显示:社会人口学和妊娠相关指标中,孕妇血清hs-CRP正常组与偏高组组间比较,文化程度、家庭人均月收入、孕期、孕前BMI、是否初产妇、是否计划妊娠情况差异具有统计学意义（P<0.05）,年龄、居住地、职业情况组间差异无统计学意义（P>0.05）。生活行为指标两组间比较结果显示,孕期压力情况、体力活动、被动吸烟、饮酒情况、是否服用叶酸补充剂情况组间差异无统计学意义（P>0.05）。膳食营养素摄入量指标两组间比较结果显示,孕期每日膳食脂肪、维生素C摄入量组间差异具有统计学意义（P<0.05）,每日膳食能量摄入、蛋白质、碳水化合物、胆固醇、硫胺素、维生素E、膳食纤维、视黄醇、核黄素、叶酸摄入量组间差异无统计学意义（P>0.05）。（3）多因素Logistic回归分析结果显示,初产妇（OR=0.556,95%CI:0.387～0.799）、此次妊娠为计划妊娠（OR=0.493,95%CI:0.349～0.696）、文化程度本科及以上（OR=0.384,95%CI:0.200～0.738）、家庭人均月收入较高（>4000元）(OR=0.154,95%CI:0.053～0.450)、膳食维生素C摄入量较高（OR=0.997,95%CI:0.995～0.999）为孕期血清hs-CRP水平偏高的保护因素,孕期进程（OR=9.973,95%CI:6.074～16.374）、孕前BMI较高（OR=1.234,95%CI:1.160～1.313）、膳食脂肪摄入量较高（OR=1.009,95%CI:1.003～1.014）为孕期血清hs-CRP水平偏高的危险因素。结论 本研究得出以下结论:（1）无明显感染症状的孕妇部分存在血清hs-CRP偏高,应引起孕期保健关注。（2）初产妇、此次妊娠为计划妊娠、文化程度本科及以上、家庭人均月收入较高（>4000元）、膳食维生素C摄入量较高为孕期血清hs-CRP水平偏高的保护因素,孕期进程、孕前BMI较高、膳食脂肪摄入量较高为孕期血清hs-CRP水平偏高的危险因素。

关键词： 全身免疫炎症指数   中晚期肝癌   中性粒细胞   淋巴细胞   血小板   索拉非尼  

摘要： 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种常见的恶性肿瘤,在全球范围内有着极高的发病率并且致死率也逐年升高,HCC由于其起病隐匿和非特异性症状,常在疾病的中晚期被诊断,对于中晚期的患者经导管动脉化疗栓塞术(Transcatheter arterial chemoembolization,TACE)为其首选治疗方法。然而,TACE可导致肿瘤组织缺氧,最终诱导血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等细胞因子分泌表达,促使肿瘤血管生成,从而介导肿瘤生长或转移。此外,反复进行TACE手术使肝功能损伤逐渐加重,加重肝硬化,所以仅采用TACE治疗患者获益明显受限,而索拉非尼、卡瑞利珠单抗等新型抗肿瘤药物的出现,为TACE的联合治疗提供了新的思路。近年来研究认为,机体炎症反应在癌症的起始、促进和转移中起着重要作用,全身炎症反应,可以通过炎症性生物标志物来评估,全身免疫炎症指数(systemic immune inflammation index,SII)是近年来研究火热的炎症生物标志物,能够反映HCC患者的预后情况,可以帮助临床医生更好地对患者进行分层和制定个性治疗计划,有助于改善患者的预后。目的探讨中晚期肝癌患者单纯行TACE治疗、TACE联合靶向及TACE联合免疫加靶向治疗中SII与治疗预后的相关性。方法回顾性收集2019年6月至2021年12月在威海市中心医院综合介入科接受单纯TACE治疗、TACE联合索拉非尼及TACE联合卡瑞利珠单抗和阿帕替尼的中晚期肝癌患者的临床病例资料及随访资料。按照纳入及排除标准,共135例患者纳入本次研究。其中,45例患者接受单纯TACE治疗,45例患者接受TACE联合索拉非尼治疗,45例患者接受TACE联合卡瑞利珠单抗和阿帕替尼治疗,总生存期(overall survival,OS)的差异在各组之间进行比较。受试者工作特性曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)及曲线下面积(area under curve,AUC)被用来评估SII对中晚期HCC患者在不同治疗方式治疗后的疗效的预测能力。结果***分析显示,单纯TACE组患者SII最佳临界值367,SII≤367患者29例,SII>367患者16例,其对应的曲线下面积为0.751,敏感度为48.3%。术前SII≤367的患者平均OS时间为11.1个月,显著长于术前>367的5.8个月,差异有统计学意义(P<0.05);单因素分析显示:治疗前SII>367(P<0.01)、是否存在肝硬化(P<0.05)、BCLC分期(P<0.05)与术后OS具有相关性(P<0.05)。多因素分析显示:术前SII、肝硬化、BCLC分期是OS显著的独立影响因素(P<0.05)***分析显示,索拉非尼联合组患者SII最佳临界值317,SII≤317患者23例,SII>317患者22例,其对应的曲线下面积为0.751,敏感度为71.9%。术前SII≤317的患者平均OS时间为16.2个月,显著长于术前>317的11.8个月,差异有统计学意义(P<0.05);联合治疗前SII>317(P<0.05)、肿瘤大小(P<0.05)、BCLC分期(P<0.05)与术后OS具有相关性(P<0.05)。多因素分析显示:术前SII、肿瘤大小、BCLC分期是OS显著的独立影响因素(P<0.05)***分析显示,卡瑞利珠单抗联合组患者SII最佳临界值343,SII≤343患者28例,SII>343患者17例,其对应的曲线下面积为0.660,敏感度为43.8%。术前SII≤343的肝癌患者的平均OS时间为17.8个月,显著长于术前SII>343的13.4个月,差异有统计学意义(P<0.05);单因素分析结果显示:联合治疗前SII>343(P<0.05)、BCLC分期(P<0.05)与术后OS具有相关性(P<0.05)。多因素分析显示:术前SII、BCLC分期是OS显著的独立影响因素(P<0.05)。4.索拉非尼联合组患者平均OS为13.5个月,中位OS为14个月,单纯TACE组患者平均OS为9.5个月,中位OS为9个月。索拉非尼联合组患者OS明显高于单纯明显单纯TACE组患者(P<0.05);索拉非尼联合组中位TTP也长于单纯TACE组(11月vs 8月,P<0.001),详见图8及表12。5.卡瑞利珠单抗联合组患者的平均OS为16.7个月,中位OS为17个月,索拉非尼联合组患者的平均OS为13.5个月,中位OS为14个月。卡瑞利珠单抗联合组患者OS高于索拉非尼联合组患者(P<0.001),卡瑞利珠单抗联合组中位TTP也长于索拉非尼联合组(13月v

关键词： 生血宝合剂   肾性贫血   微炎症状态   氧化应激  

摘要： 目的:通过运用生血宝合剂联合rHuEPO对MHD肾性贫血患者的治疗,探讨生血宝合剂对MHD肾性贫血患者的氧化应激、微炎症状态及血管内皮功能的影响,进一步挖掘生血宝合剂对肾性贫血的多靶点的治疗作用,为生血宝合剂联合rHuEPO改善MHD肾性贫血患者的氧化应激及微炎症状态提供理论依据。方法:选取60例符合纳入标准的患者,按照随机数字表法将其分配到对照组和生血宝组,两组各有30例。两组均给予基础治疗,对照组采用rHuEPO注射液皮下注射治疗,生血宝组在对照组基础上采用生血宝合剂口服治疗,两组连续治疗8周。观察两组治疗前后RBC、Hb、HCT、SF、TSAT、hs-CRP、IL-6、MDA、SOD、ALB、ET-1和中医症候积分指标,监测安全性指标及记录药物的不良反应。并对所收集的数据资料进行统计学分析。结果:***、Hb、HCT、SF、TSAT:两组治疗前比较RBC、Hb、HCT、SF、TSAT水平,差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗前后的RBC、Hb、HCT、SF、TSAT水平差异有统计学意义(P<0.05);治疗后的生血宝组的RBC、Hb、HCT、SF、TSAT水平升高更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。***、中医症候积分及贫血疗效:两组治疗前比较ALB、中医症候积分,差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗前后的中医症候积分和生血宝组ALB水平差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后的生血宝组的中医症候积分下降更明显,且总体有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。***-CRP、IL-6:两组治疗前比较hs-CRP、IL-6水平,差异无统计学意义(P>0.05);生血宝组治疗前后的hs-CRP、IL-6水平差异有统计学意义(P<0.05);治疗后的生血宝组的hs-CRP、IL-6水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。***、SOD:两组治疗前比较MDA、SOD水平,差异无统计学意义(P>0.05);对照组治疗前后的MDA水平差异有统计学意义(P<0.05),对照组治疗前后的SOD及生血宝组治疗前后的MDA、SOD差异均没有统计学意义(P>0.05);两组治疗后比较MDA、SOD水平,差异无统计学意义(P>0.05)。***-1:两组治疗前、治疗前后及治疗后比较ET-1水平,差异均无统计学意义(P>0.05)。6.安全性指标:两组在治疗过程中无明显不良事件发生和药物不良反应出现,安全性良好。结论:1.生血宝合剂联合rHuEPO能够明显升高RBC、Hb、HCT、TS、TSAT水平,改善患者贫血状况;2.生血宝合剂联合rHuEPO能够明显改善患者营养状况和中医症候,提高贫血治疗的总有效率;3.生血宝合剂联合rHuEPO能够降低hs-CRP、IL-6炎症因子水平,改善患者微炎症状态;4.生血宝合剂联合rHuEPO未能改善患者氧化应激状态及血管内皮功能;5.生血宝合剂联合rHuEPO治疗过程中,无明显药物不良反应及不良事件发生,安全性良好。

关键词： 透析浓缩液   供水管路   热消毒   微炎症   降钙素原  

摘要： 目的:观察承德市中心医院血液透析室通过改良浓缩液供液联合供水管路热消毒技术对维持性血液透析(Maintenance hemodialysis,MHD)患者机体微炎症状态的影响,探索减轻MHD患者机体微炎症状态的血液净化方法,进一步提升血液透析质量,预防相关并发症的发生,改善MHD患者的整体预后。方法:选择2020年6月-2021年5月在承德市中心医院新、旧血液透析室规律行MHD治疗的患者为研究对象。分别于透析室改良前及改良满6月后收集(1)患者基本资料:姓名、性别、年龄、导致终末期肾病的病因、透析龄、血管通路、血液净化方式等;(2)分别于改良前、后抽取空腹静脉血检测:血常规、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、降钙素原(Procalcitonin,PCT)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、血细胞沉降率(Erythrocyte sedimentation rate,ESR)、血生化指标、全段甲状旁腺激素(intact Parathyroid hormone,i PTH)、铁蛋白(Ferritin,FER)、血清铁(Serum creatinine,s Fe)等。按标准操作规程取样,检测改良前、后血液透析用水水质、透析液内毒素、细菌培养等项目。比较改良前、后MHD患者基础资料、微炎症状态指标变化。分别以透析龄、年龄、病因进行分组,比较改良前后PCT水平差异。自身前后比较采用配对样本t检验或配对样本Wlicoxon符号秩和检验;组间比较采用单因素ANOVA检验。结果:1入选病例情况本研究共纳入MHD患者125例,剔除不符合入选标准的MHD患者12例,最终有效统计MHD患者113例。113例MHD患者中,平均年龄(59.19±12.68)岁,年龄在27-91岁之间,其中男性58例(占51.3%)。中位透析龄为[30(15,75)]月。2 MHD患者改良前、后基础资料比较本组MHD患者改良后Hb、ALB、Scr、Ca、s Fe水平较改良前均有提升,且差异有统计学意义(P<0.05)。本组MHD患者改良后血P、i PTH水平较改良前下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。其他基础指标中TG、TC改良前、后差异无明显统计学意义(P>0.05)。3 MHD患者改良前、后微炎症指标比较本组患者血清IL-6改良前中位数[13.72(10.06,16.55)]pg/ml,改良后中位数为[11.26(7.93,14.46)]pg/ml,改良前、后患者总体血清IL-6分布存在统计学差异(t=3.929,P<0.001)。改良前,ESR总体均数为(35.75±14.29)mm/h,CRP总体均数为(0.93±0.31)mg/dl,PCT总体均数(0.71±0.21)ng/ml,改良后,ESR总体均数为(31.83±14.14)mm/h,CRP总体均数为(0.82±0.28)mg/dl,PCT总体均数为(0.55±0.20)ng/ml。本组患者ESR、CRP、PCT总体均数改良前、后存在统计差异(t=2.339,P=0.021;t=3.144,P=0.002;t=9.796,P<0.001)。血WBC、NEUT%、FER水平改良前、后差异无统计学意义(P>0.05)。4不同分组患者改良前、后血PCT水平比较4.1不同透析龄组患者改良前、后血PCT水平比较透析龄<24月组患者PCT平均下降0.18ng/ml(P<0.001);透析龄在24-59月之间组患者PCT平均下降0.17ng/ml(P<0.001);透析龄在60-95月之间组患者PCT平均下降0.12ng/ml(P=0.001);透析龄≥96月组患者PCT平均下降0.10ng/ml(P=0.043)。各透析龄组组内比较改良后较改良前PCT平均水平均下降,差异具有统计学意义。各透析龄组改良前、后PCT差值进行组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4.2不同年龄组患者改良前、后血PCT水平比较年龄<45岁组PCT平均下降0.12ng/ml(P=0.014);年龄在45-59岁之间组PCT平均下降0.15ng/ml(P<0.001);年龄在60-74岁之间组PCT平均下降0.16ng/ml(P<0.001);年龄≥75岁组PCT平均下降0.15ng/ml(P=0.002);不同年龄组组内比较PCT水平改良后较改良前均下降,差异有统计学意义。不同年龄组改良前、后PCT差值进行组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4.3不同病因组患者改良前、后血PCT水平比较糖尿病肾病组患者PCT平均下降0.22ng/ml(P<0.001),慢性肾小球肾炎组患者PCT平均下降0.13ng/ml(P<0.001),其他病因组患者PCT平均下降0.12ng/ml(P<

关键词： 奶牛瘤胃上皮细胞   PEPT1   NOD2   RIPK2   ERK1/2   炎症反应  

摘要： 奶牛生产中,为提高产奶量,在日粮中添加高精料日粮,但长时间饲喂高精料会诱发瘤胃内革兰氏阴性菌大量死亡和崩解,一些抗原肽从细菌表面脱落,在瘤胃内产生大量脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、细菌二肽和细菌三肽(合称细菌小肽),引发一些营养代谢性疾病和系统性促炎症反应,如瘤胃炎、肝脓肿、蹄叶炎、间歇性腹泻等,并导致产奶量下降,给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。之前的研究报道,主要集中在LPS和短链脂肪酸(Short chain fatty acid,SCFA)对瘤胃上皮炎症的影响,以及证明PEPT1负责转运和吸收细菌小肽进入小肠细胞,进而引起小肠急速炎症反应和严重的结肠炎。然而,PEPT1能否介导细菌小肽调控奶牛瘤胃上皮细胞(Bovine rumen epithelial cells,BRECs)的炎症反应还未有研究。因此,本研究旨在通过荧光定量PCR、基因敲除、转录组分析、Western blots、免疫荧光等方法,深入探讨PEPT1调控BRECs炎症反应的分子机制,为研究BRECs炎症反应和免疫应答提供理论依据。第2章高精料瘤胃液对奶牛瘤胃上皮细胞炎症反应的影响本试验旨在研究高精料瘤胃液对奶牛瘤胃上皮细胞炎症反应的影响。试验分为两个组:对照组瘤胃液组(即正常饲喂组)(Control,Con)和高精料瘤胃液组(High concentrate rumen fluid,HCRF),各自培养细胞6 h,每组6个重复。培养6 h之后,细胞被收集提取细胞总RNA和细胞总蛋白。结果表明,与对照组相比,高精料日粮瘤胃液极显著提高(P<0.05)BRECs促炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达量。此外,高精料日粮瘤胃液能显著促进(P<0.05)BRECs的CCL2、CCL20、-CXCL2、CXCL3、CXCL8和CXCL9趋化因子表达。高精料日粮瘤胃液显著降低(P<0.05)TLR2和TLR4表达量,但并末改变TLR4接头蛋白CD14、MD2和MyD88以及下游信号通路IRAK1和TRAF6表达量。值得注意的是,高精料日粮瘤胃液显著上调BRECs PEPT1的表达量(P<0.05),暗示PEPT1可能转运高精料瘤胃液中的细菌小肽进入细胞,引起炎症反应。高精料日粮瘤胃液显著促进(P<0.05)BRECs的MDA和H2O2上调,然而,SOD、GSH-Px和T-AOC含量被极显著减少(P<0.05)。结果表明,高精料日粮瘤胃液能够促进瘤胃上皮细胞的炎症反应以及加强免疫应答。此外,高精料日粮瘤胃液对奶牛瘤胃上皮具有损伤作用。第3章转录组分析PEPT1敲除的BRECs mRNA差异基因表达本试验旨在利用转录组测序技术来研究PEPT1敲除后的BRECs的mRNA差异基因表达。通过CRISPR/Cas9系统获得稳定敲除PEPT1的BRECs。经过TA克隆并进行测序,结果显示PEPT1敲除获得3个亲本,其中,两个亲本为有效敲除。通过Western blots检测,与野生型对比,敲除型BRECs几乎不表达PEPT1,说明敲除成功。试验分为两个组:野生型BRECs和PEPT1敲除型BRECs。通过全转录组分析野生型BRECs和PEPT1敲除型BRECs转录水平的差异基因表达规律。结果表明,与野生型BRECs相比,PEPT1敲除型BRECs的IL-6促炎症因子表达量被极显著下调(P<0.001),CCL2和CCL5趋化因子表达量被极显著下调(P<0.001)。值得注意的是,大部分CXCL型的趋化因子表达量都被下调,其中CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL9、CXCL12和CXCL16趋化因子表达量被极显著下调(P<0.001)。以上结果暗示,PEPT1能够调控BRECs的炎症反应。与野生型对比,PEPT1敲除型BRECs,涉及炎症反应信号通路中关键信号分子IRAK4激酶(P<0.05)和IRF1转录因子(P<0.005)表达量被显著下调,但PEPT1和IRAK4激酶、IRF1转录因子的表达并不呈显著正相关。此外,涉及模式识别受体的NOD2被显著下调(P<0.05),但并未改变NOD1受体的表达量。NOD2受体信号通路下游的关键激酶RIPK2表达量也极显著下调(P<0.001),但并未改变RIPK1和RIPK3激酶的表达量。PEPT1敲除没有改变BRECs的ERK2、ERK3、ERK4、ERK5激酶表达量,但ERK1的表达量被极显著下调(P<0.01)。此外,NF-κB1转录因子被极显著下调(P<0.001)。更为重要的是,PEPT1与ERK1激酶和NF-KB1转录因子呈极显著正相关(P<0.01)。结果表明,PEPT1调控BRECs炎症反应可能通过MAPK信号通路中ERK1激酶和NF-κB1转录因子介导实现的。第4章PEPT1介导

关键词： 支气管扩张症   细胞外DNA   AIM2   IL-26   IL-1β  

摘要： 背景:支气管扩张症是由多种病因导致慢性气道炎症性疾病,以支气管树不可逆的病理性扩张为特征,常伴有慢性咳嗽、异常分泌的浓痰,反复发生的肺部感染以及咯血。然而,目前中国70%以上的支气管扩张患者的病因尚未明确。 核酸,特别是脱氧核糖核酸(DNA),是一种常见的先天性免疫反应激活物质,已被证实参与多种炎症性疾病的发生与发展。支扩症患者的气道内细胞外DNA的浓度显著升高,与气道内促炎性因子IL-1β浓度呈正相关。研究表明,细胞外DNA通过巨噬细胞内黑色素瘤缺失因子2(AIM2)炎性小体,导致巨噬细胞发生细胞焦亡,引起IL-1β的大量分泌,并最终参与炎症反应。然而,细胞外DNA与AIM2炎症小体在支扩症中的作用尚未明确。 目的:探索支气管扩张症患者气道内细胞外DNA与疾病严重程度和促炎细胞因子IL-1β之间的关系,以及其介导IL-1β成熟和分泌的分子机制,阐明细胞外DNA参与调控支气管扩张症气道炎症反应的重要作用。 方法:根据支气管扩张症诊断指南,于2020年7月-2021年12月从中国武汉协和医院招募稳定期支气管扩张症患者和健康受试者。收集受试者痰液,检测痰液上清中细胞外DNA以及黑色素瘤缺失因子2(AIM2)炎症小体相关蛋白的表达水平。根据支气管扩张严重程度指数(BSI)将支气管扩张症患者分为三组,BSI评分0-4分为轻度组,5-8分为中度组,9-分为重度组,进一步探究气道内细胞外DNA与疾病严重程度、肺功能、AIM2炎症小体相关蛋白的之间关系。采用人单核细胞系(THP-1)来源的巨噬细胞进行体外实验,探讨e DNA激活AIM2炎性小体和诱导IL-1β分泌的机制。 结果:(1)支气管扩张症患者痰液上清中细胞外DNA含量升高,并与AIM2炎症小体激活有关。(2)细胞外DNA可激活巨噬细胞内AIM2炎症小体,但需要DNA转运分子的协助。(3)支扩症患者气道内IL-26表达升高,与气道内细胞外DNA结合免疫复合体。(4)IL-26与DNA结合保护DNA分子防止其被DNA酶降解。(5)气道内IL-26主要由巨噬细胞表达,也可由CD4+T细胞和CD8+T细胞分泌。(6)IL-26可携带细胞外DNA分子进入细胞。(7)细胞膜表面类肝素硫酸蛋白聚糖介导IL-26-DNA复合物内吞进入巨噬细胞。(8)胞质内白介素-26-DNA复合物与AIM2蛋白结合。(9)巨噬细胞内IL-26-DNA复合物可激活AIM2炎症小体。 结论:支气管扩张症患者气道内细胞外DNA和IL-26浓度显著升高。细胞外DNA与IL-26可在支扩症患者的气道内形成IL-26-DNA免疫复合物。IL-26-DNA复合物可被巨噬细胞内化并激活胞质内AIM2炎症小体通路,引起促炎症因子IL-1β的大量释放,导致气道炎症反应的恶化。因此,干预IL-26-DNA复合物形成的方法可能有助于缓解支气管扩张症的气道炎症。

关键词： 阿尔茨海默病   视神经蛋白   AIM2   炎症小体   受体互作丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1   靶向自噬  

摘要： 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种渐进性的认知功能下降和记忆力衰减为主要临床表现的神经退行性疾病。目前,AD的主要病理特征是由细胞外β-淀粉样蛋白(β-amyloidprotein,Aβ)沉积形成的淀粉样斑块(β-amyloidplaques,APs)和细胞内微管相关蛋白tau(Microtubule associated protein tau,MAPT)过度磷酸化导致的神经原纤维缠结(Neurofibrillary tangles,NFTs)。由于自噬不足等原因,Aβ和过度磷酸化的tau蛋白往往引起继发性慢性炎症。并且大量研究表明Aβ和NFTs可以激活AD患者脑内小胶质细胞,分泌大量炎症因子和细胞毒素,从而加速AD病程。已有研究表明,由于自噬在AD发病早期的缺失加剧了 AD的病理进程。 本研究以小鼠小胶质细胞BV2细胞和原代小胶质细胞为体外模型,通过给予Aβ寡聚体(Aβ oligomers,Aβo)处理,结合基因沉默或基因过表达,探索视神经蛋白(Optineurin,OPTN)在AD发病过程中对神经炎症的调控作用。体内模型以C57BL/6和APP/PS1转基因小鼠为研究对象,通过腺相关病毒(Adeno-associatedvirus,AAV)病毒注射过表达相关基因,结合形态学及分子生物学等实验手段,探讨OPTN在AD发病过程中对神经炎症的调控作用。 为探讨其内在机制,首先整合分析了基因表达数据库(Gene expression omnibus,GEO)中正常人和AD患者脑组织转录组数据,发现黑素瘤缺乏因子2(Absent in melanoma 2,AIM2)炎症小体相关基因均被上调。进一步通过qPCR和Western blot技术,确证AIM2炎症小体相关基因在C57BL/6和APP/PS1转基因小鼠脑组织中的表达差异。结果表明AIM2、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis associated speck like protein containinga CARD,ASC)、剪切后的 caspase1 及分泌在胞外的白介素(Interleukin,IL)-1β在APP/PS1转基因小鼠的大脑皮层和海马部位均明显升高,表明AIM2炎症小体在AD模型小鼠中被激活。在BV2和原代小胶质细胞中,Aβo处理同样可以激活AIM2炎症小体。为了进一步确证OPTN对AIM2的调控作用,在BV2细胞中沉默OPTN。发现在Aβo的刺激下,OPTN沉默组的AIM2炎症小体活性相对于对照组明显上调。反之在OPTN过表达组中发现,随着OPTN表达量的逐渐增加,明显抑制AIM2炎症小体的活性。这些结果表明OPTN抑制AIM2炎症小体介导的炎症反应。 基于上述研究,进一步对GEO数据库中正常人和AD患者脑组织转录组数据进行GSEA分析,发现Toll样受体(Tolllikereceptor,TLR)和受体互作丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 1(Receptor-interacting serine/threonine-proteinkinase 1,RIPK1)信号通路被明显激活。鉴于此,在APP/PS1转基因小鼠的皮层和海马中,同样发现RIPK1的表达在转录水平和蛋白水平均明显上调。为了进一步探究OPTN在调控RIPK1介导炎症反应中的重要作用,首先在BV2细胞中沉默OPTN,然后检测RIPK1信号通路活性。结果表明,OPTN敲低后,RIPK1的蛋白水平以及IκBα的磷酸化水平明显增加,导致NF-κB的入核,进而促进IL-1β的转录。双荧光素酶实验结果也表明,NF-κB的结合活性显著上调。通过ELISA实验,发现IL-1β的分泌也明显增加。反之在OPTN过表达的BV2细胞中,RIPK1蛋白水平及其所介导的信号通路明显受到抑制。但在OPTN沉默组或过表达组RIPK1的转录水平均没有显著差异。因此,OPTN可能通过自噬或泛素蛋白酶体途径调控RIPK1信号通路活性。为验证此假设,在OPTN过表达的BV2细胞中,分别用MG132和巴佛洛霉素A1(Bafilomycina1,Bafi A1)处理,结合Western blot检测,发现只有MG132能够抑制RIPK1的表达。为进一步验证上述结果,在过表达Flag-RIPK1的BV2细胞中沉默或过表达OPTN,结合Flag-RIPK1免疫沉淀,利用泛素化抗体检测RIPK1的泛素化水平。结果发现,OPTN的表达量与RIPK1的泛素化呈现正相关性。该结果进一步证实OPTN通过泛素蛋白酶体途径负调控RIPK1的蛋白丰度。 基于以上结果,OPTN与RIPK1很可能存在直接的蛋白互作。为此,首先通过计算生物学的方法,预测OPTN和RIPK1的蛋白结构以及各自的活性氨基酸位点。进一步使用H