关键词： 血管紧张素转换酶2   P38促分裂原活化蛋白激酶   脂多糖   肝细胞炎症   分子机制  

摘要： 目的 探讨血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme, ACE）2 通过抑制 P38 促分裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase, MAPK）/ 激活蛋白（activator protein, AP）-1 通路改善脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的肝细胞炎症反应的分子机制。方法 培 养永生化大鼠BRL 肝细胞，随机分为5 组：对照组、LPS（10 μg/mL）组、LPS＋ 重组（recombinant, r）ACE2 （LPS 处理前30 min 予5、10、20 ng/mL rACE2） 组、LPS＋ACE2 抑制剂MLN-4760（LPS 处理前30 min 予10-7，10-6，10-5 mmol/L MLN-4760） 组、LPS＋ rACE2（LPS 处理前30 min 予20 ng/mL rACE2）＋P38MAPK 抑制剂SB203580（LPS 处理前30 min 予10-5 mmol/L SB203580）组。于 LPS 处理后6、12、24 h 应用Western blot 方法检测ACE2、P38MAPK、磷酸化（p）- P38MAPK、 AP-1 蛋白表达。实时定量PCR 方法检测P38MAPK、AP-1、肿瘤坏死因子-α（TNF-α） mRNA 表达。结果 与对照组相比，LPS 处理后ACE2、P38MAPK、AP-1 蛋白表达呈时间依赖性激活， 均于12 h 达峰值（均P〈0.05）。与LPS 组相比，rACE2 组AP-1、P38MAPK、p-P38MAPK、肿瘤 坏死因子α 表达明显下降（均P〈0.05），20 ng/mL 浓度的rACE2 对AP-1（0.12±0.002 vs. 0.04±0.005, P〈0.01）、P38MAPK（0.17±0.02 vs. 0.02±0.002，P〈0.01）、p-P38MAPK（0.29±0.01 vs. 0.02±0.01， P〈0.01）的抑制作用最强。MLN-4760 组上述因子表达明显升高（均P〈0.05），并呈剂量依赖性。 SB203580 去除了rACE2 对AP-1、TNF-α 表达的抑制作用。结论 rACE2 通过下调P38MAPK/ AP-1 信号通路改善LPS 诱导的肝细胞炎症。

关键词： 右美托眯啶   炎症   免疫   细胞  

摘要： 目的评价右美托咪定对后路腰椎椎体间植骨融合术病人围术期炎症反应和细胞免疫功能的影响。 方法择期行后路腰椎椎体间植骨融合术的病人80例，性别不限，年龄40～60岁，ASA分级Ⅰ或Ⅱ级，采用随机数字表法分为2组（n＝40）：右美托咪定组（D组）和对照组（C组）。D组于麻醉诱导前10 min时静脉输注右美托咪定负荷量0.5 μg/kg，随后以0.5 μg·kg－1·h－1的速率输注至手术结束前15 min。分别于麻醉诱导前、手术开始30 min及术后1 h、1、3、5 d（T1-6）时抽取动脉血样，检测血浆CD42a＋/CD14＋比值、HLA-DR＋/CD14＋比值、C反应蛋白（CRP）浓度和白细胞计数。 结果与T1时比较，C组T2-6时CD42a＋/CD14＋比值升高，T3-6时HLA-DR＋/CD14＋比值降低，T4-6时血浆CRP浓度升高，T3-5时白细胞计数升高，D组T6时CD42a＋/CD14＋比值升高，T3-5时HLA-DR＋/CD14＋比值降低，T2-5时血浆CRP浓度升高（P〈0.05）。与C组比较，D组T2-4时CD42a＋/CD14＋比值降低，T4-5时HLA-DR＋/CD14＋比值升高，T2-5时血浆CRP浓度和白细胞计数降低（P〈0.05）。 结论右美托咪定可降低后路腰椎椎体间植骨融合术病人围术期炎症反应，改善细胞免疫功能。

关键词： 腹腔镜子宫肌瘤剔除术   炎症反应   免疫功能   应激激素   卵巢功能  

摘要： 目的:探讨腹腔镜子宫肌瘤剔除术对患者炎症反应、免疫功能、应激激素及卵巢功能的影响。方法:选取符合研究筛选标准的82例子宫肌瘤患者作为研究对象,依据随机数据表法平均分为对照组(n=41)和观察组(n=41),对照组患者接受传统开腹子宫肌瘤剔除术治疗,观察组患者给予腹腔镜子宫肌瘤剔除术治疗。比较两组治疗前后(手术前及手术1d后)炎症反应、免疫功能、应激激素及卵巢功能等指标水平。结果:经比较可知,治疗前组间TNF-α、CRP、CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+、COR、NE、LH、FSH、E2水平差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组TNF-α、CRP、CD8^+、COR、NE、LH、FSH水平均显著升高,且治疗后对照组水平显著高于观察组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+、E2水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:腹腔镜子宫肌瘤剔除术可有效减轻患者手术产生的炎症反应及应激反应,对机体免疫功能及卵巢功能的影响较小,更有利于术后康复。

关键词： 消化系统炎症性疾病   参附注射液   药理作用  

摘要： 本文分为以下两个部分进行探讨：　　第一部分 参附注射液通过抑制JNK/Nox4和JNK/NFκB途径来保护棕榈酸诱导的肝AML12细胞损伤　　目的：非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic steatohepatitis，NASH）包括脂肪变性、肝炎、肝细胞损伤和纤维化。在本研究中，我们拟探讨一种传统中药-参附注射液（ShenFu preparation，SF）在体外肝脂肪变性模型中的保护作用和潜在机制。　　方法：建立棕榈酸（Palmitic acid，PA）诱导鼠肝细胞损伤模拟离体NASH模型，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（Terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL）和甘油三酯比色测定法（TG Colorimetric Assay）对细胞凋亡和细胞内甘油三酯水平（Intracellular triglyceride，iTG）进行评估;分别采用DCF（Dichlorofluorescein，二氯荧光素）和JC-1（5,5‘,6,6’-四氯-1,1‘,3,3’-四乙基苯酸盐-咪唑羰基花青素）测定活性氧（Reactive oxygen species，ROS）和线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential，MMP）水平;使用酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）评估细胞因子水平;用免疫印迹法（Immunoblot）检测JNK（C-Jun N-terminal kinase，c-Jun氨基末端激酶）、Nox4（NADPHoxidase4，NADPH氧化酶4）和NFκB（Nuclear factor kappa B，核因子kappa B）的表达变化。　　结果：参附注射液减轻了棕榈酸诱导的细胞凋亡，以及降低了IL-6（白细胞介素-6）、IL-8（白细胞介素-8）和iTG的表达。经过棕榈酸处理的细胞中，添加参附注射液，可以降低Nox4和ROS的水平，同时MMP、MnSOD（锰超氧化物歧化酶）和过氧化氢酶的表达升高，表明线粒体功能障碍的发生。应用Nox4抑制剂-GKT137381抑制了由棕榈酸诱导产生的ROS和细胞凋亡的增加，同时降低了iTG的量，但并没有影响IL-8和IL-6的水平。参附注射液可以抑制棕榈酸诱导的磷酸化氨基末端激酶的上调。JNK抑制剂-SP600125抑制了由棕榈酸诱导的Nox4、IL-8、IL-6和iTG的增加。应用参附注射液后，可以阻断棕榈酸处理过的细胞中检测到的NFκB/p65核转位。BAY11-7082，一种IκB（Inhibitor of NF-κB）降解抑制剂，降低了由棕榈酸诱导的IL-8、IL-6以及iTG的量，而它只是轻微地降低了ROS含量，对细胞凋亡没有影响。　　结论：参附注射液通过减少氧化应激和细胞因子的产生以及抑制JNK/Nox4和JNK/NFκB途径，在预防肝细胞损伤过程中发挥了至关重要的作用。　　第二部分 参附注射液能显著改善脂多糖诱导的肠道上皮细胞损伤　　目的：肠道上皮细胞在肠道屏障功能的维护中起着至关重要的作用，而潜在的损伤机制还没有完全阐明。本研究拟对一种传统中药-参附注射液（ShenFu preparation，SF）在脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导的肠道上皮细胞损伤中的保护作用和分子机制进行系统探讨。　　方法：采用HIEC-6细胞（Human intestinal epithelial cell，人肠上皮细胞系），单独应用LPS或LPS与SF联合应用来进行实验。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（Terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL）对细胞凋亡进行评估。活性氧（ROS）水平是用DCF（Dichlorofluorescein，二氯荧光素）测定法测定的。经transwell培养板培养的单层人肠上皮细胞-6，通过FITC-albumin influx assay分析其渗透性。应用即时聚合酶链反应（Real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）来对细胞因子IL-1β（白介素-1β）、IL-6（白介素-6）和TNF-α（肿瘤坏死因子-α）进行定量分析。蛋白质印迹法（Western blot）用于测定胞浆IκBα（核因子κB抑制因子α）和核NFκB/p65亚基的含量。　　结果：在脂多糖处理的细胞中发现了细胞凋亡、ROS和细胞因子的产生，以及NFκB/p6

关键词： 巨噬细胞极化   牙周炎症   慢性牙周炎   牙龈组织   免疫荧光  

摘要： 【背景】慢性牙周炎是一种以牙周支持组织进行性破坏为特点的口腔慢性感染性疾病。越来越多的研究证实牙周炎症的发生是机体免疫系统与口腔致病微生物之间相互作用的结果。现阶段临床上的牙周治疗手段多局限于机械性地清除牙菌斑而忽视了对宿主免疫系统的关注,因此治疗效果往往因人而异,且长期效果尚不稳定,因此新的牙周治疗理念亟待研究发现。骨免疫是近年来提出的新概念,是因为有学者在其研究中发现机体骨骼系统和免疫系统之间不仅紧密相关,还会相互作用相互影响。由于考虑到免疫系统对骨骼系统具有重要影响,可以试图通过调节机体的免疫系统影响牙槽骨的吸收或再生从而达到治愈牙周炎的目的,因此越来越多的学者开始关注免疫系统对牙周炎症发生发展过程中的作用。单核巨噬细胞是机体固有免疫系统的重要成员之一。它不仅在炎症反应的初始阶段促进炎症细胞的募集和病原体的吞噬,亦在随后激活机体获得性免疫反应及炎症后期调控骨吸收或再生的过程中有重要作用。因此,巨噬细胞免疫防御功能和免疫调节功能的平衡对牙周组织的炎症进程至关重要。巨噬细胞在机体的免疫防御过程中可以发挥不同的作用是因为其在特定的组织微环境下可以极化为两种功能不同的表型。通过经典途径在辅助性T细胞1(Th1)相关的细胞因子如干扰素(IFN-γ)或脂多糖(LPS)的刺激下极化产生的巨噬细胞为M1型巨噬细胞。活化后的M1型巨噬细胞在炎症反应的早期阶段能有效地吞噬病原体,并通过分泌大量炎性细胞因子促进机体的炎症反应,增加机体的免疫防御功能,但同时也有可能引起间接性的组织损伤。M2型巨噬细胞是在辅助性T细胞2(Th2)型细胞因子,如白细胞介素(IL-4或13)刺激下通过选择性途径诱导产生。与M1型巨噬细胞不同的是,M2型巨噬细胞可以通过产生IL-10和TGF等抗炎型细胞因子抑制炎症反应的进程,调节机体免疫平衡,并在炎症反应的后期阶段促进局部组织的修复及再生。巨噬细胞的多形性决定了其在免疫反应中的重要作用,活化后的不同表型在机体对抗入侵病原体的免疫防御过程中通过其各自不同的作用共同影响着局部牙周组织的稳态平衡。也就是说,促炎M1型巨噬细胞与抗炎M2型巨噬细胞在牙周组织中存在的比例可能会很大程度上决定着牙周炎症的发展进程。现阶段关于巨噬细胞及其表型在人慢性牙周炎发生发展中具体作用机制的研究还尚未清晰,曾有一国外文献报道称当给实验小鼠用免疫调节药物去除体内大多数的巨噬细胞后再感染牙龈卟啉单胞菌,其牙周炎症状态明显轻于未去除巨噬细胞的小鼠。随后有人对实验性牙周炎大鼠的牙龈组织进行免疫荧光及免疫组织化学检测牙周组织发现,与对照组相比,牙周炎组大鼠的牙周组织中M1/M2比值明显增加。这些研究证实了巨噬细胞及其表型在动物实验性牙周炎的发生发展过程中确实起到了重要的作用,然而关于巨噬细胞表型在人牙周炎症组织中的表达的研究却少有报道,值得我们进行进一步研究。此外,巨噬细胞除了可以在极化为M1型或M2型巨噬细胞后通过自身直接吞噬、中和组织内的病原微生物或炎症代谢产物,还可以通过其分泌的促炎或抗炎细胞因子扩大或终止炎症进程。也就是说巨噬细胞的极化及其在免疫反应过程中的促炎抗炎功能及免疫调控作用需要在多种与巨噬细胞相关的细胞因子共同完成,因此研究巨噬细胞相关细胞因子在人炎症牙周组织中的表达状况也尤为重要。本研究以慢性牙周炎及慢性龈炎患者的牙龈组织作为实验组,牙周健康志愿者的牙龈组织作为对照组,通过观察M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞在不同牙周健康状下的牙龈组织中的表达,以及检测巨噬细胞相关细胞因子(IL-4,IL-10,IL-12,IFN-γ,TNF-α,IL-6)在三组牙龈组织中表达的差异,了解牙周炎症状态与人牙龈组织中巨噬细胞极化和功能的相关性,从而进一步验证巨噬细胞的极化过程对慢性牙周炎发生发展的影响。【目的】通过比较慢性牙周炎,慢性龈炎及牙周健康受试者的牙龈标本中M1/M2的表达情况,并检测巨噬细胞相关细胞因子(IL4、IL-10、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α)在三组受试者牙龈组织中的表达差异,探究牙周炎症状态与局部牙周炎症组织中巨噬细胞极化和功能的相关性,从而探究巨噬细胞极化在慢性牙周炎发生发展过程中的作用。【方法】1、牙周炎症状态对牙龈组织中巨噬细胞极化的影响在临床诊疗过程中随机将符合分组纳入条件的受试者分为慢性牙周炎组(P)、慢性龈炎组(G)及牙周健康组(H)。随后将从三组受试者口内获得的牙龈组织固定、切片处理后进行HE染色和免疫荧光染色观察。2、牙周炎症状态对牙龈组织中巨噬细胞相关细胞因子表达的影响将上述三组受试者的牙龈组织标本进行进行免疫组织化学颜色,观察IL4、IL-10、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α在牙龈组织中的表达。3、牙周炎症状态下的牙周指数、巨噬细胞极化及巨噬细胞相关细胞因子表达的相关性分析在分组后对

关键词： 颅内动脉瘤   分子机制   基因   RNA   慢性炎症  

摘要： 颅内动脉瘤是颅内常见的血管畸形,目前颅内动脉瘤手术率大大提高。通常认为直径≥0.6cm有较高的破裂风险,而且死亡率很高。对于高破裂风险者,有创手术或者血管内干预都是有效的治疗方法,但具有神经损伤的风险。目前,由于动脉瘤的相关分子机制尚不明确,所以为寻找更有效的治疗措施造成了难题,因而迫切需要阐明动脉瘤的相关分子学机制。在过去十多年以来,基因学和分子生物学的发展推动了动脉瘤相关研究的进展。本文将从以下几个方面阐述颅内动脉瘤的相关机制:(1)分子机制方面:髓过氧化物酶(MPO)、Kruppel样因子(KLF2)、PINCH蛋白、一磷酸鞘氨醇 1 型(Sphigosine-1-phosphate S1P1)受体激动剂ASP4058;(2)基因方面:常见的基因有1p34.3-p36.13,7q11,19q13.3,Xp22 等;(3)RNA:长的非编码 RNA(LncRNA)、环状RNA(circRNA);(4)慢性炎症与颅内动脉瘤的关系。

关键词： 脱细胞血管材料   胰酶法   巨噬细胞   免疫炎症反应   原子火焰法   脂肪间充质干细胞   脂联素   血管生长因子   脂肪细胞   工程血管   脱细胞血管   细胞片   钙化  

摘要： 第一部分异种与同种动脉脱细胞血管材料在大鼠体内的免疫反应及钙化表现目的:先天性心脏病（Congenital Heart Disease,CHD）是最常见的先天性出生缺陷,随着我国放开二胎政策以及产检、手术水平的增加,预计先心病患儿数量逐年增多。CHD常需要应用不同材质、不同口径的血管材料进行手术治疗,然而目前市面上的血管或瓣膜材料都会在患者体内产生炎症反应从而钙化衰败。本研究期望探索有效的脱细胞血管材料的建造方法。通过大鼠皮下模型,来评价同种脱细胞血管材料和异种脱细胞血管材料在动物体内的炎症反应,以及钙化情况,从而初步了解两种材料引起机体免疫反应及钙化的相关性。方法:取供体大鼠的颈动脉材料约5cm,以及猪颈动脉5cm,将血管材料裁剪成0.5×0.5cm的血管片。用胰酶法对血管材料进行脱细胞处理,并且对脱细胞水平进行鉴定。将符合标准的血管材料冻干保存。用胰酶法制作猪颈动脉和大鼠降颈动脉脱细胞血管材料,并且对脱细胞水平进行鉴定。实验组在6周龄SD大鼠皮下植入同种脱细胞血管材料（N=6）;对照组6周龄SD大鼠皮下植入猪颈动脉脱细胞血管（N=6）,每只四个位点。两组内取材时间分别为血管移植后2周和4周。通过HE染色、天狼星红染色、免疫荧光染色、免疫组化以及Von Kossa硝酸银法检查材料于动物体内移植后的再细胞化及钙化情况是否有差异。结果:（1）脱细胞镜下结果显示,胰酶法脱细胞处理的血管材料没有细胞核残余,血管材料外观形态基本正常。猪脱细胞血管DNA平均光密度值为（4.59±0.49）,未经脱细胞血管处理的猪血管DNA光密度值（564.35±26.13）。同种脱细胞血管DNA平均光密度值（5.45±0.24）,处理前的同种血管DNA光密度值（497.1±7.12）。表明该处理方法可以有效去除血管组织中的细胞成分。（2）天狼猩红染色显示2h胰酶的处理的血管组织绿色弹性纤维缺失断裂明显,表明血管外膜、中膜弹性纤维有明显损害。胰酶处理1h,Ⅰ、Ⅲ型弹力纤维波浪状结构保存相对完好。0.05%胰酶浓度37℃处理1h的血管材料能够有效去除细胞成分,并且保留较好的血管弹性纤维形态。（3）两周后从大鼠体内取出血管,血管移植物基本保持原有形状外观,没有分解的征象,外边可见包裹的纤维组织。HE染色可见大量的自体细胞渗入脱细胞血管的纤维蛋白支架内。每个时间点两组血管细胞渗入数量均有明显差异（二周P=0.023,四周P=0.019）。宿主细胞通过血管两侧的断裂位置渗入的程度更深,数量更多。在远离断端的靠近血管壁中心的位置,细胞渗入主要发生在内外膜（行进方向为血管横截面方向）,渗入速度较血管断端慢。4周的皮下植入,可以见到包裹血管的纤维组织中有滋养血管生长,包裹血管材料周围的纤维组织内也布满自体细胞,自体组织与移植血管组织没有明显界限,需要通过移植组织的弹性纤维条状形态进行区分。（4）细胞免疫荧光染色发现,同种脱细胞血管中引起的巨大多核巨噬细胞的数量少于异种脱细胞血管。二周时同种脱细胞血管镜下的多核巨噬细胞渗入个数为 1.60± 1.70 个/7.6*104μm2,异种脱细胞血管为 2.14±1.64 个/7.6*104μm2,两组没有显著性差异（P=0.055）。四周时,多核巨噬细胞渗入增多,同种材料中6.58±2.72个/7.6*104 μ m2,异种材料中7.85±3.15个/7.6*104 μ m2,两组有显著性差异（P=0.012）。镜下可见,巨大多核的巨噬细胞多出现于血管材料表面,难以渗入血管材料内部。CD68免疫组化染色的巨噬细胞明显聚集于血管内外膜接触表面,提示血管与自体组织接触表面发生着巨噬细胞介导的炎症反应。（5）钙化染色结果发现,4周时,两组的钙化镜下未见明显差异,原子火焰法检测钙化2周时同种脱细胞血管钙化为1.08±0.34μg/mg,异种脱细胞血管钙化为1.23±0.32μg/mg（P=0.44）;4周时同种脱细胞血管钙化为1.75±0.34μg/mg,异种脱细胞血管钙化为3.06±0.30μg/mg（P<0.01）。同种脱细胞血管的钙化程度两周、四周时均明显轻于异种血管组。结论:通过0.05%胰酶、SDS、Triton的化学消化法可以制作脱细胞率达99%以上的细胞外基质。同种或异种脱细胞血管支架,虽然去除了 99%以上的细胞成分,在动物体内实验仍然引起以巨噬细胞为主的炎症细胞聚集。同种脱细胞血管支架在动物体内引起多核巨噬细胞的数量明显少于异种脱细胞血管支架。同种脱细胞血管支架在动物体内4周引起的钙化程度明显小于异种脱细胞血管支架。脱细胞血管的钙化反应与巨噬细胞介导的免疫炎症反应明显相关,然而具体机制仍需要进一步探究。第二部分脂肪干细胞体外分化得到的脂肪细胞分泌功能的鉴定目的:种子细胞的应用在血管组织工程里十分普遍,他们可以通过自身

关键词： TGR5   炎症   CREB   β-arrestin2   NF-κB信号途径  

摘要： 炎症是一种常见的病理现象,与多种疾病的发生发展有关,慢性炎症可发展成恶性肿瘤,因此研究炎症的分子机制至关重要。研究已发现多条炎症信号通路和关键信号因子,基于这些重要分子为靶点的抗炎药物被广泛关注。NF-κB通路是一条重要的炎症通路。G 蛋白胆汁酸偶联受体 5(Takeda G-protein-coupled receptor 5,TGR5),在胆汁酸代谢、糖和能量代谢、炎症和癌症中起重要调控作用。TGR5可通过多种信号通路抑制炎症,已有研究发现TGR5可通过抑制IκBα磷酸化、p65易位、NF-κB的结合转录活性等抑制NF-κB介导的炎症。但TGR5诱导炎症的具体分子机制仍有待研究。cAMP反应元件结合蛋白(CREB),是一种细胞核内调控因子,TGR5可调控PKA/CREB途径。β-arrestin2属于Arrestin家族,是视觉抑制蛋白的一种,它负责调节G蛋白偶联受体信号的转导,通过和活化的G蛋白偶联受体结合使其失去与其他配体结合的能力。研究发现TGR5的激活可增强IκBα和β-arrestin2的相互作用。TGR5通过介导IκBα和β-arrestin2之间的相互作用抑制NF-κB通路。本实验进一步探究TGR5在炎症通路中的分子机制,研究了TGR5在CREB、β-arrestin2基因编码受抑制的情况下对炎症因子和NF-κB通路的影响。分别在小鼠巨噬细胞和人胃癌细胞中用TGR5的INT-777等激活剂激活TGR5,通过siRNA干扰的方式沉默CREB和β-arrestin2基因的表达。结果表明TGR5可通过NF-κB通路抑制p65和LPS诱导的巨噬细胞炎症和胃炎。而CREB和β-arrestin2的敲低使TGR5对NF-κB通路及炎症的抑制作用降低。

关键词： 支气管哮喘   金黄色葡萄球菌   肺泡巨噬细胞   Toll样受体2   磷脂酰肌醇3-激酶  

摘要： 研究背景支气管哮喘是以气道炎症为主要病理特征的气道疾病之一。近20年来,支气管哮喘的发病率持续增加,全球支气管哮喘患者人数已逾3亿。金黄色葡萄球菌(简称金葡菌,staphylococcus aureus,SA)作为自然界中最常见的革兰氏阳性病原体,已经成为哮喘等慢性气道炎症性疾病最主要的危险因素之一。此外,研究发现Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)信号通路调控自噬和炎症因子的释放,参与了哮喘的发病机理。因此,我们采用金葡菌刺激小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,在细胞水平观察TLR2对金葡菌诱导肺泡巨噬细胞自噬和炎症反应的影响。研究目的探讨肺泡巨噬细胞表面受体TLR2在金葡菌诱导巨噬细胞自噬和炎症反应中的潜在分子机制。研究方法1.检测巨噬细胞受到不同时间金葡菌刺激后自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7受到不同时间金葡菌刺激后,通过Western blot和ELISA方法检测巨噬细胞受到刺激后自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达水平;通过激光共聚焦扫描显微镜观察巨噬细胞内自噬溶酶体的数量。***干扰TLR2对金葡菌诱导巨噬细胞自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白表达的影响检测用金葡菌刺激TLR2 si RNA干预的RAW264.7巨噬细胞2h后,通过Western blot和ELISA方法检测TLR2 si RNA干预的巨噬细胞受到金葡菌刺激后自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达水平;通过激光共聚焦扫描显微镜观察巨噬细胞内自噬溶酶体的数量。3.特异性抑制PI3K信号通路对金葡菌诱导巨噬细胞自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白表达的影响检测用金葡菌刺激PI3K特异性抑制剂3-MA干预的RAW264.巨噬细胞2h后,通过Western blot和ELISA方法检测3-MA干预的巨噬细胞受到金葡菌刺激后自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达水平;通过激光共聚焦扫描显微镜观察巨噬细胞内自噬溶酶体的数量。研究结果1.金葡菌诱导巨噬细胞自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞受到不同时间的金葡菌刺激后,TLR2、My D88、PI3K和p-NF-κBp65信号通路蛋白的表达随时间依赖性的方式显著增加;与此同时,自噬蛋白Beclin-1、LC3-II和促炎症因子TNF-α和IL-6的表达以及巨噬细胞中自噬溶酶体的表达数量也随时间依赖性的方式显著增加。***2对金葡菌诱导巨噬细胞自噬蛋白和促炎症因子以及多种信号通路蛋白的表达至关重要金葡菌刺激TLR2 si RNA干预的RAW264.巨噬细胞2h后,TLR2、My D88、PI3K和p-NF-κBp65信号通路蛋白的表达显著受到抑制;与此同时,自噬蛋白Beclin-1、LC3-II和促炎症因子TNF-α和IL-6的表达以及巨噬细胞中自噬溶酶体的表达数量也明显受到抑制。***3K信号通路对金葡菌诱导巨噬细胞自噬蛋白和促炎症因子以及NF-κB信号通路蛋白的表达至关重要用金葡菌刺激PI3K特异性抑制剂3-MA干预的RAW264.巨噬细胞2h后,PI3K和p-NF-κBp65信号通路蛋白的表达显著受到抑制;与此同时,自噬蛋白Beclin-1、LC3-II和促炎症因子TNF-α和IL-6的表达以及巨噬细胞中自噬溶酶体的表达数量也明显受到抑制。研究结论1.金葡菌能够诱导巨噬细胞活化自噬和炎症反应。***2信号通路能够调控金葡菌诱导巨噬细胞活化自噬和炎症反应。***2能够通过PI3K信号通路调控金葡菌诱导巨噬细胞活化自噬和炎症反应。