关键词： 输尿管软镜钬激光碎石术   泌尿系结石   全身炎症反应综合征   危险因素   预测模型  

摘要： 目的:探讨输尿管软镜钬激光碎石术后全身炎症反应综合征（Systemic Inflammatory Response Syndrome,SIRS）的危险因素并建立预测模型。运用Logistic多因素回归分析筛选出接受输尿管软镜钬激光碎石术的上尿路结石患者术后发生SIRS的独立危险因素,为医护人员提供客观依据,最后构建预测模型及数据可视化处理,评估患者术后发生SIRS的概率,为医护评估和病情观察提供积极的指导,降低输尿管软镜钬激光碎石术后SIRS发生率。方法:本研究采用回顾性资料建立预测模型的研究设计。收集分析2021年1月至2021年12月在河南大学淮河医院泌尿外科行输尿管软镜钬激光碎石术的患者临床病例资料,符合纳入标准的患者共225例,根据术后有无发生SIRS分为两组,发生SIRS的患者共18例和未发生SIRS的患者共207例。根据国内外研究及我院临床经验,本研究纳入以下与输尿管软镜钬激光碎石术后发生SIRS有紧密关系的因素,包括年龄、性别、既往泌尿系手术史、饮酒史、吸烟史、体重指数（Body Mass Index,BMI）、糖尿病、手术时间、结石最大直径、结石数量、结石位置、结石负荷、尿白细胞、尿亚硝酸盐、术前中段尿培养、术前血小板计数、术前嗜酸性粒细胞计数17个相关危险因素。运用SPSS25.0统计学软件,首先单因素logistic回归分析上述所有因素,以P<0.1为标准,并结合文献记录和临床经验对变量进行初步筛选,筛选出与输尿管软镜钬激光碎石术后发生SIRS有统计学意义的变量。其次,采用多因素logistic回归分析上述有统计学意义的变量,得出输尿管软镜钬激光碎石术后发生SIRS的独立危险因素,P<0.05表示差异有统计学意义,将结果代入方程建立预测模型并构建列线图。最后构建受试者工作特征曲线、校准曲线、决策分析曲线对列线图模型进行验证,评价其临床应用价值。结果:经过单因素Logistic回归分析得出:年龄、性别、糖尿病、结石最大直径、结石C T值、手术时间（min）、术前中段尿培养阳性均与输尿管软镜钬激光碎石术后发生SI RS密切相关（P<0.1）。多因素分析Logistic回归分析得出:性别（OR=5.474,95%CI:1.383-21.672,P=0.015）,糖尿病（OR=7.882,95%CI:1.752-35.457,P=0.007）,结石最大直径（OR=1.207,95%CI:1.004-1.452,P=0.045）,术前中段尿培养（OR=6.027,95%CI:1.546-23.497,P=0.01）,术前血小板计数（×109/L）(OR=1.009,95%CI:1.001-1.017,P=0.021)等指标均为输尿管软镜钬激光碎石术后发生SIRS的独立危险因素（P<0.05）。本研究所构建的预测模型为Logit（P）=﹣12.388+1.700X1+2.065X2+0.188X3+1.796X4+0.009X5。其中,X1为性别（女性）,X2为糖尿病（有）,X3为结石最大直径,X4为术前中段尿培养（细菌、阳性）,X5为术前血小板计数。最后,对预测模型进行评估:受试者工作特征曲线下面积为0.911。Hosmer-Lemeshow检验该模型成立,且预测效能较好（P>0.05）。决策分析曲线说明该模型具有良好的应用价值。结论:性别（女性）、糖尿病（有）、结石最大直径、术前中段尿培养（细菌、阳性）、术前血小板计数是输尿管软镜钬激光碎石术后发生SIRS的独立危险因素。基于上述5项指标构建的预测模型并数据可视化处理,能够在一定程度上为医护人员对存在高危因素的患者做好充分的术前准备提供指导。在临床工作中,对于拟行输尿管软镜钬激光碎石术并伴有上述危险因素的患者,术前做好充分的准备,术后做到早发现、早处理,降低输尿管软镜钬激光碎石术后SIRS发生率,防止SIRS发生后进一步发生更严重的并发症。

关键词： 慢性阻塞性肺疾病急性加重   炎症   骨骼肌肌力  

摘要： 背景及目的慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种进行性的不可逆的慢性气道炎症性疾病,具有高患病率和高死亡率的特点。反复的慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）不仅给患者带来极大的经济负担,而且严重影响患者生活质量,增加患者住院率及死亡率。有研究表明AECOPD患者全身炎症水平的升高与其骨骼肌功能障碍的发生发展有关。在AECOPD患者的临床诊疗中,呼吸系统和肌肉骨骼系统之间的相互作用常常被忽略,且急性加重后患者康复的介入时机及后续管理尚无统一标准。本研究旨在观察COPD患者急性加重后全身炎症与骨骼肌肌力（包括呼吸肌及肢体肌肉）的变化情况,并探究其相关性,为AECOPD患者骨骼肌功能障碍的早期干预及康复提供临床证据。方法选取2022年4月至2023年2月在四川省人民医院住院治疗的AECOPD患者,按急性加重严重程度将住院AECOPD患者分为轻度、中度、重度。收集并记录入组患者的一般资料,分别于患者入院36小时内及入院后第5天对其进行床旁肺功能、呼吸肌肌力及上下肢肌力测量,同时通过住院病历系统获取上述时间点内入组患者的白细胞计数（WBC）、淋巴细胞计数（LYMPH）、中性粒细胞计数（NEUT）、中性粒细胞百分比（NEUT%）及超敏C反应蛋白（Hs-CRP）指标,并计算中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）。结合所获数据,对急性加重严重程度与人口学特征、实验室指标、物理测量指标进行相关性分析,对AECOPD患者治疗前后实验室指标、物理测量指标进行差异性分析,并探究COPD患者急性加重严重程度的预测因素及其诊断价值。结果1 AECOPD患者的人口学特征本研究共纳入AECOPD患者40例,平均年龄为（73.0±8.8）岁,平均体重指数（BMI）为（24.11±3.57）kg/m,以男性患者为主,男性患者共33例,占比82.5%,大部分患者有吸烟史及心血管、消化系统等合并症,本研究入组患者不包含病毒感染诱发急性加重的AECOPD患者。2 AECOPD患者急性加重程度与人口学特征、首次实验室及物理测量指标的相关性分析COPD急性加重严重程度分级与AECOPD患者近一年急性加重次数呈显著正相关,与股四头肌最大主动收缩力（QMVC）显著负相关;急性加重严重程度分级与AECOPD患者首次实验室指标无显著相关性。3 AECOPD患者首次实验室指标与物理测量指标的相关性分析AECOPD患者第一秒用力呼气容积/用力肺活量（FEV/FVC）与Hs-CRP呈显著负相关;动脉血二氧化碳分压（Pa CO）与第一秒用力呼气量（FEV）最佳值、第一秒用力呼气量占预计值百分比（FEV%pred）、呼气流量峰值（PEF）、最大呼气压（MEP）呈显著负相关。4 AECOPD患者治疗前后实验室指标、物理测量指标的差异分析AECOPD患者入院后第5天,NEUT%、NLR显著降低,LYMPH、PEF显著增高,差异有统计学意义,而其余实验室及物理测量指标虽有变化,但差异无统计学意义。5不同急性加重严重程度的AECOPD患者间各指标的差异性分析不同急性加重严重程度的AECOPD患者间近一年急性加重次数存在明显差异,且差异具有统计学意义;不同急性加重严重程度的AECOPD患者的基线FEV最佳值存在明显差异,差异具有统计学意义;而其余人口学特征、初始实验室指标及物理指标在不同急性加重程度的AECOPD患者中无明显差异。6不同急性加重严重程度的AECOPD患者肌力下降的差异性分析以《2019亚洲肌少症诊断与治疗共识》中肌肉力量下降的截点值为界（握力值男性<28kg,女性<18kg）,按不同急性加重严重程度分组,对两组患者肌力下降情况进行统计分析,卡方检验结果显示,两组患者间肌力下降占比存在差异,但差异无显著统计学意义。7 AECOPD患者急性加重严重程度的预测因素将具有潜在预测意义的参数纳入到多因素二元Logistic回归分析,结果显示,近一年急性加重次数≥2是COPD患者发生中度急性加重[OR=17.74,95%CI=（1.86,169.32）,P<0.05]的独立预测因素;QMVC是COPD患者发生中度急性加重[OR=17.74,95%CI=0.817（0.669,0.997）,P<0.05]的独立预测因素。8 AECOPD患者急性加重程度的预测因素的诊断价值近一年急性加重次数的ROC曲线下面积AUC=0.707（95%CI=[0.546,0.867],P<0.05）,QMVC的AUC=0.701（95%CI=[0.532,0.871],P<0.05）,最佳截断值12.48 kg,其敏感度为72%,特异度为73.3%。结论（1）AECOPD患者入院时机体炎症反应增加,并可能对肺功能产生负面影响;入院后第5天患者NEUT%、NLR显著下降,PEF显著升高,提示急性加重后随着机体炎症反应的减轻

关键词： 普拉德-威利综合征   CD16+单核细胞   炎症   scRNA   CyTOF  

摘要： 研究背景普拉德-威利综合征(Prader-Willi syndrome,PWS),俗称小胖威利综合征是一种罕见、复杂的多系统综合征,发病率约为1/10000至1/30000,并于1956年首次由Prader等报道。从遗传学上讲,PWS是一种印记基因病,由父系染色体15q11-q13区域的5-6Mb基因表达缺失引起。该区域基因表达缺失主要通过以下三种机制:父源性15q11-q13区域的缺失(65-75%)、母源性单亲二体(20-30%)或印记缺陷(1-3%)。该综合征表现出广泛的临床特征,包括低肌张力、发育迟缓、认知障碍、精神异常、睡眠呼吸障碍和肥胖等。慢性炎症是指一种低级别持续性的非感染性炎症状态,其主要特征是免疫细胞的异常激活。系统性慢性炎症导致的慢性炎症相关的疾病,例如心血管疾病、2型糖尿病(type 2 diabetesmellitus,T2DM)、精神性疾病等,已被认为是当今世界上最重要的死亡原因。多项研究表明PWS与匹配相同的身体质量指数(body mass index,BMI)人群相比,患炎症相关疾病的风险增加,这也是PWS患者最常见的死因之一。Alice Clerc的研究指出,与一般人群相比,PWS成年人中有20%患有T2DM,而一般人群的患病率为5-7%。最近,日本和韩国的研究团队发现,50%的PWS患者在18岁之前就发展为T2DM。多种精神相关的疾病也在PWS普遍存在,临床研究发现PWS患者中超过20%的被明确诊断为重度抑郁症,16%至32%的患者经历过精神分裂发作。此外,有研究显示PWS患动脉粥样硬化的风险增加,且年轻化。部分研究发现PWS与匹配相同的BMI人群相比,循环中炎症标志物浓度增加,如白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)和 C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)。上述细胞因子如IL-1β和TNF在介导T2DM、心血管疾病和精神障碍的发展中起到核心作用。另有研究发现PWS患者血清中IL-1β和白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)水平与PWS多种精神症状严重程度相关。PWS患者外周循环中炎症标志物与特定的免疫细胞活化标志物水平相关。有专家提出在PWS患者中,外周免疫系统激活,可能参与外周循环中细胞因子水平增加,引起全身性炎症,似乎在这些PWS炎症相关疾病的发展中起着关键的作用,这促使了我们将注意力转向PWS外周免疫细胞的变化。然而,由于外周免疫细胞具有明显的异质性且功能复杂,导致PWS中外周免疫细胞的详细特征尚不清楚。单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)提供了一种无偏见、综合全面的方法,可根据细胞个体的转录组特征来定义细胞类型和状态,并被广泛用于揭示免疫细胞的异质性和多样性,寻找疾病相关的细胞亚群。在本研究中,我们不仅利用高通量方法对PWS患者免疫系统进行多个血清炎症标志物检测和研究,还首次利用scRNA-seq技术构建PWS患者外周免疫细胞图谱,寻找PWS关键致病性亚群,并通过质谱流式单细胞蛋白组学(mass cytometry,CyTOF)进一步验证,为之后PWS患者免疫研究及免疫相关靶向治疗提供理论支持。研究目的1.利用高通量多因子检测明确PWS血清细胞因子变化。2.探索血清细胞因子与PWS免疫细胞的相关性。3.利用scRNA-seq构建PWS外周免疫细胞图谱,明确PWS外周免疫细胞特征及其在PWS高炎症状态的作用。4.深度剖析与PWS密切相关细胞亚群在疾病中的作用,以期寻找致病的细胞亚群以及致病分子、通路。5.探索PWS外周免疫的改变与15q11-q13区域基因关系,并进一步利用公共数据库挖掘PWS相关的单基因与炎症的关系。研究方法(技术路线见图1)(一)研究对象本研究包括PWS患者和健康个体,所有研究对象均在山东第一医科大学附属山东省立医院通过义诊方式于2019-2021年招募。本研究得到了山东省立医院伦理委员会的批准。所有研究对象均获得父母或法定监护人的书面知情同意。PWS的诊断由基因检测证实,且所有受试者均未服用任何药物。所有受试者均无癌症、自身免疫性疾病、糖尿病、感染或类固醇使用史。记录所有研究对象年龄、性别、身高、体重和诊疗等信息,并对PWS患者进行甲基化敏感的多重连接探针扩增技术(methylation sensitive multiplex ligation dependent probe amplification,MS-MLPA)检测。所有受试者在晚上12时后禁食,次日上午8-10点采集空腹血。(二)多组学检测与分析1.高通量多因

关键词： 生物信息学分析   PCSK9   缺血性脑卒中   免疫炎症反应  

摘要： 目的:创建枯草溶菌素转化酶9(PCSK9)高表达细胞株,筛选差异基因并探讨PCSK9在PC12细胞中潜在的生物学功能。方法:通过质粒转染获得PCSK9高表达的PC12细胞株,利用Western-blot(蛋白免疫印迹实验)及PCR进行验证,将PCSK9高表达细胞株与对照组细胞株制备RNA-seq文库,并进行高通量测序。利用R生物导体包edge R筛选差异表达基因(DEGs)并进行GO和KEEG富集分析其生物学功能。结果:(1)Western blot及PCR结果均显示PCSK9在PC12细胞中显著过表达,从而证实获得了PCSK9高表达的细胞系。(2)将高通量测序结果进行差异基因筛选,共鉴定出330个DEGs,其中209个表达上调,121个表达下调。(3)差异基因的GO功能富集分析结果表明,209个上调的差异基因主要参与免疫反应,细胞迁移,病毒防御反应等生物过程;高度富集于KEGG通路的包括趋化因子信号通路、TNF信号通路、p53信号通路等生物学通路。(4)通过分析筛选出8个显著差异表达的基因(Ccl2、Ccl7、Cxcl1、Il1rl1、Irf9、Irf7、Ccl24、Cxcl11),RT-q PCR的验证结果提示除Ccl24外,余基因均在PCSK9高表达PC12细胞株中高表达。结论:本研究结果提示PCSK9的高表达会激活细胞中的免疫反应,PCSK9可以促进免疫和炎症相关基因的上调表达,且具有非常强的特异性和富集性,包括Ccl2、Ccl7、Cxcl1、Il1rl1、Irf9、Irf7、Cxcl11等。说明PCSK9的高表达可能会引发一系列的免疫炎症响应,从而可能在缺血性脑卒中的发病后脑损伤中发挥重要功能。

关键词： 糖尿病心肌病   4-O-甲基和厚朴酚   NF-κB   免疫炎症反应  

摘要： 研究背景:2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一种由于机体的胰岛素分泌缺陷和/或其功能受损所导致的代谢性疾病,以长期高糖血症和代谢紊乱为特征。糖尿病最严重的并发症为糖尿病性血管病,可分为两种亚型:微血管病变和大血管病变。其中大血管病变主要影响心脏(例如,缺血性心脏病和充血性心力衰竭)导致糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy,DCM)。免疫炎症反应在DCM的发病机制中起到的作用越来越引起人们的关注。目前,尚未发现可以阻止或逆转糖尿病引起的心脏损害的有效药物。4-O-甲基和厚朴酚(4-O-Methylhonokiol,MH)是从木兰茎皮中提取的生物活性成分之一。研究表明,MH可以显著降低海藻酸诱导的小鼠脑细胞丙二醛含量增加,并消除细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS),具有显著的抗氧化和神经保护作用。另一方面,MH还通过抑制核转录因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)来抑制肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的产生,具有抗炎作用。我们以前的研究已经证实,MH通过激活核因子2(Nrf2)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt/PKB,Akt)信号转导来预防高脂饮食(HFD)诱导的小鼠心脏病。目的:在这项研究中,我们旨在阐明用MH治疗是否可以改善T2D鼠模型中糖尿病心脏病的进展,如果是,MH的保护作用是否与抑制NF-κB介导的免疫炎症反应有关。研究方法:选用7周龄雄性C57BL/6J小鼠给予正常脂肪饮食(Normal fat diet,ND)或高脂饮食(High fat diet,HFD)喂养3个月以诱导胰岛素抵抗,然后腹膜内注射链脲霉素(STZ,100mg/kg)建立2型糖尿病小鼠模型,进而发展为DCM小鼠模型,通过检测血糖(Blood glucose,GLU)水平,评价2型糖尿病小鼠模型的成功与否;设置相同周龄的雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射STZ溶剂—柠檬酸钠盐(p H4.5,0.1mol/L)溶液,作为STZ溶剂对照组。注射STZ 7天后,高血糖(空腹3小时血糖≥220 mg/d L)的HFD/STZ小鼠被视为T2D。将40只小鼠,分为如下4组,分别进行不同的给药处置:(1)Ctrl组:对照小鼠给予二甲基亚砜(DMSO)灌胃;(2)Ctrl+MH组:对照小鼠给予MH溶液(每周5天以1.0 mg/kg的剂量连续3个月给药)灌胃;(3)T2D组:2型糖尿病小鼠给予DMSO灌胃;(4)T2D+MH组:2型糖尿病小鼠给予MH溶液(每周5天以1.0 mg/kg的剂量连续3个月给药)灌胃。同时分别继续喂养小鼠ND或HFD。完成3个月的MH治疗后,将每组的5只小鼠处死作为3个月时间点。其余的小鼠继续分别给予ND或者HFD继续喂养3个月,处死每组中的剩余小鼠作为6个月时间点。在3个月和6个月时间点治疗结束后,麻醉并处死实验小鼠,取小鼠心脏组织,从心脏组织中提取蛋白、m RNA或进行组织切片。通过无创心脏超声评价活体小鼠心脏功能和结构。利用天狼星红染色的方法观察检测心脏的纤维化改变,利用油红染色观察检测肾脏脂质聚集改变,用Western blot方法在蛋白水平检测心脏组织纤维化水平(FN、Laminin)、促炎症因子(TNF-α、IL-1β、ICAM)、氧化应激水平(3-NT、4HNE、SOD2、HO-1)、脂质代谢(CPT1B、CD36)等多种信号转导通路上各相关因子的水平改变,进一步检测免疫炎症反应通路NF-κB/PAI1激活水平及GSK-3β激活水平。通过数据比较和分析,得出结论。研究结果:(1)MH治疗不影响糖尿病小鼠或对照组小鼠的血糖水平和体重。在6个月期间,T2D小鼠与Ctrl组相比,血糖水平始终高于Ctrl组小鼠。在给予MH治疗后,小鼠的血糖水平未发生明显改变。与Ctrl组小鼠相比,T2D小鼠体重高于Ctrl组,MH治疗对小鼠体重无明显影响。其次,在6个月期间,各组小鼠胫骨长度平均值没有显著性差异。MH治疗未导致小鼠心脏重量与胫骨长度之比值的改变。(2)MH治疗增加左室射血分数,缓解了2型糖尿病对心功能的损伤应用超声心动图测量显示,T2D小鼠在3个月及6个月时间点时左室EF和FS值都显著降低,收缩末期(LV vol;s)左室容积显著增大。左心室后壁舒张末期壁厚(LVPW;d)在6个月时间点显著增加,提示左心室肥厚。左心室后壁收缩末期壁厚(LVPW;s)在6个月时间点显著降低。MH治疗后,在3个月时间点,MH显著降低了T2D小鼠左心室收缩末期容积的升高,抑制了EF和FS的下降。在6个月时间点,MH治疗显著抑制了EF、FS的下降

关键词： 伪狂犬病病毒   TLR2/MyD88   NF-κB   MAPKs   AKT  

摘要： 伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）是一种可在多种哺乳动物如反刍动物、啮齿动物和肉食动物中引起神经性炎症的α疱疹病毒。因猪是其自然宿主,所以PRV给全世界养猪业造成了巨大的经济损失。而近几年关于PRV感染人的报道也持续引发人们的关注。Toll样受体作为细胞表面固有的模式识别受体（PRRs）,在宿主抵抗病原体的侵袭中发挥重要作用。TLR2已被证明在抵抗如人类单纯疱疹病毒（HSV）、水痘-带状疱疹病毒（VZV）等一些疱疹病毒的感染中发挥重要作用。本实验室前期研究证明PRV感染小鼠巨噬细胞后可引起多种炎性因子如IL-1β、IL-6、TNF-α等的产生与分泌。然而,对于在PRV感染并激活促炎细胞因子产生的过程中,TLR2及其下游分子通路怎样发挥作用尚不清楚。本试验以野生型小鼠（WT）和TLR2缺失型(TLR2-/-)小鼠为研究对象,用PRV感染后进行体内外试验,旨在对TLR2及其下游信号在PRV感染中发挥的作用进行探究。1、PRV感染易感宿主后诱导体内炎症反应的相关研究用5×10～5 TCID50的PRV JS-2012腹腔感染WT小鼠,对感染后的小鼠体重变化和症状变化进行3天记录。小鼠攻毒1天、3天后取肺组织和脾组织进行拍照和HE染色,切片观察肺和脾组织的炎症病理变化。为探究TLR2/MyD88在PRV感染小鼠后引起的炎症以及致病性中是否发挥作用,攻毒1天、3天后取肺、脑干和三叉神经进行研磨,q PCR检测这些组织中炎性因子、TLR2、MyD88的表达量以及病毒的含量;用5×10～5TCID50的PRV腹腔感染WT和TLR2-/-小鼠后,记录它们的生存情况。结果显示:小鼠攻毒后,病症逐渐严重,体重逐渐下降,且到第三天与原始体重有显著性差异;攻毒三天后,小鼠肺组织和脾组织与未攻毒组比发生了严重的炎症病理变化:间质增生、炎性细胞浸润、脾小节萎缩等;攻毒三天后小鼠肺、脑干中IL-1β、IL-6的表达量与未攻毒组比显著升高而在三叉神经中它们的表达量与未感染组比没有差异;与未攻毒组比,在肺中,TLR2的表达量于攻毒后第一天明显升高,而在脑干中,TLR2的表达量在攻毒第一天和第三天均明显升高,但在三叉神经中未见明显变化;攻毒三天后,MyD88的表达量在脑干中明显升高,而在肺和三叉神经中无明显变化;与未攻毒组比,只有脑干中的病毒含量在第三天明显升高,而肺和三叉神经中的病毒含量没有明显变化;感染病毒10天后,与WT小鼠相比,TLR2-/-小鼠的存活率更高为80%,而WT小鼠的存活率为20%。以上结果表明:PRV感染小鼠后,可在肺、脾、脑干中引起严重炎症并且病毒主要集中在脑干部位。而TLR2/MyD88也跟PRV在小鼠中引起的炎症和致病性相关。2、TLR2/MyD88-NF-κB在PRV诱导宿主炎症反应中的作用研究用PRV感染WT小鼠腹腔巨噬细胞,通过RT-PCR检测TLR2和MyD88的m RNA表达情况,结果显示,PRV感染后TLR2和MyD88的表达量明显升高。为探究TLR2/MyD88在PRV诱导机体产生促炎性细胞因子及诱发炎症过程所发挥的作用,用PRV感染WT和TLR2-/-小鼠巨噬细胞,RT-PCR检测细胞因子m RNA表达情况。结果显示,TLR2-/-小鼠与WT小鼠相比,IL-1β、IFN-β等众多细胞因子的m RNA表达量显著性降低。进一步用ELISA检测了IL-1β、IL-6、IFN-β的产生情况,结果显示,缺失TLR2基因后,这三个因子的产生水平显著下降。同样,在沉默MyD88后对这三个因子进行ELISA检测,si-MyD88组IL-1β、IL-6、IFN-β的产生情况与si-Con组相比显著降低。进一步,用PRV感染WT和TLR2-/-以及沉默MyD88后的小鼠巨噬细胞,通过Western blot检测相关蛋白的变化情况。结果显示,在缺失TLR2或沉默MyD88以后,P-65、IRF3蛋白几乎不会发生磷酸化。综上所述,我们的结果显示,PRV感染巨噬细胞后,在缺失TLR2/MyD88基因的情况下,不会有NF-κB通路的激活以及IRF3的磷酸化,相应的也不会有IL-1β、IL-6、IFN-β等细胞因子的产生,表明PRV感染巨噬细胞后诱导的炎症反应依赖于TLR2/MyD88的激活。3、MAPKs和AKT信号通路介导PRV诱导的炎症激活分子机制研究为探究MAPK和AKT信号通路在PRV感染巨噬细胞中诱导炎症激活的作用,在PRV感染WT小鼠巨噬细胞模型中,使用NF-κB通路抑制剂（BAY11-7082）、AKT通路抑制剂（Wortmannin）、JNK通路抑制剂（SP600125）、ERK通路抑制剂（FR180204）和P38通路抑制剂（SB203580）预处理细胞1 h后,用PRV进行感染,首先通过Western

关键词： 急性心肌梗死   临床不良事件   全身炎症反应指数   血细胞计数   预测价值  

摘要： 【背景】　　急性心肌梗死（acutemyocardialinfarction,AMI）是多种原因导致冠脉血流中断，心肌细胞持续缺血缺氧，最终引起心肌细胞坏死的心血管急症。而冠状动脉粥样硬化斑块破裂或糜烂是导致AMI最常见的原因，并且AMI常合并恶性心律失常、休克、心力衰竭、猝死等严重发症。大量研究表明急性心肌梗死时患者体内炎症过度激活是导致不良预后的重要机制。前期有研究数据显示基于1-2种血细胞计数参数指标在预测急性心肌梗死的不良预后有良好的价值，如中心粒细胞计数、淋巴细胞–单核细胞比率（lymphocytetomonocyteratio,LMR）、中性粒细胞–淋巴细胞比率（neutrophiltolymphocyteratio,NLR）等炎性指标。近期有研究者基于患者外周血常规开发出一项综合3种血细胞计数的新型综合炎症指标，称全身炎症反应指数（SystemicInflammationResponseIndex,SIRI）。它是根据患者外周血的中性粒细胞计数、单核细胞计数以及淋巴细胞计数的绝对值计算而得，其计算公式为SIRI=（中性粒细胞计数×单核细胞计数）/淋巴细胞计数。目前研究发现SIRI预测多种肿瘤、心力衰竭发生不良预后有良好价值。但在急性心肌梗死患者人群中，研究较少。因此SIRI与急性心肌梗死患者的临床不良事件是否有明确关系，目前仍不清楚。故本研究进一步探究SIRI这一新型综合炎症指标是否与急性心肌梗死患者发生临床相关不良事件及不良预后相关，旨在为临床工作提供一些思路。　　【目的】　　本研究为探讨全身炎症反应指数（SystemicInflammationResponseIndex,SIRI）作为一项新型综合炎症指标对AMI患者发生不良临床结局的预测价值。　　【方法】　　本研究回顾性收集华中科技大学协和深圳医院2020年8月至2021年8月共96例确诊为AMI患者。并按疾病类型分为2组，即ST段抬高型心肌梗死（ST-segmentelevationmyocardialinfarction，STEMI）组和非ST段抬高型心肌梗死（non-ST-segmentelevationmyocardialinfarction，NSTEMI）组。在观察为期12个月期间，将严重心脑血管不良事件（majoradversecardiovascularandcerebrovascularevents,MACCE）作为临床终点。并收集所有患者人口学相关资料、既往相关病史、生命体征、验血数据、心功能参数、冠心病药物使用情况、冠状动脉血管病变情况等指标，并进行下述分析：1.按照收集数据分析2组患者基线特征情况，并绘制三线表呈现数据特征;2.绘制受试者工作特征曲线（receiveroperatingcharacteristiccurve,ROC），并同时计算出SIRI的最佳界值;3.根据SIRI最佳界值将患者分为低SIRI组和高SIRI组，采用生存分析（Kaplan-Meier法和log-rank检验）对不同组患者生存情况进行分析，最后采用COX回归模型方法分析SIRI在预测急性心肌梗死患者随访12个月内发生临床不良事件的价值以及分析其发生不良临床事件的影响因素。　　【结果】　　1.根据MACCE事件作为本研究的终点，将SIRI绘制ROC曲线，根据约登指数计算可以得到SIRI的最佳界值为0.53×109/L，其敏感性为66.70%，其特异性为86.70%。　　2.根据Kaplan-Meier生存曲线分析得知，SIRI值越高，AMI患者发生MACCE事件的风险则越高（log-rank检验为P＜0.05）。　　3.根据COX回归分析得知，SIRI是预测AMI患者发生MACCE事件（风险比[harzardratio,HR]=3.97,95%可信区间[confidenceinterval,CI]=1.32~11.90,P＜0.05）的独立预测因子。　　【结论】　　***是急性心肌梗死患者随访12个月内发生MACCE事件的独立预测因子，且SIRI值越高的AMI患者其发生临床相关不良事件的风险越高。　　***是一项简单、易获得、可预测AMI患者发生MACCE事件的指标。

关键词： 溃疡性结肠炎   全身炎症反应指数   严重程度  

摘要： 目的:溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是发生于结直肠黏膜的慢性非特异性炎症性疾病。既往评估UC患者严重程度的无创性指标主要依据粪钙卫蛋白、全血细胞计数等。全身免疫炎症指数(Systemic Immune Inflammation Index,SII)是评估宿主全身炎症和免疫应答之间平衡状态的客观标志,高水平的SII可能导致直肠癌、胃癌、胰腺癌等患者肿瘤的增殖和转移。近年来随着研究的不断深入,发现SII对UC患者的严重程度具有一定的预测作用,但相关研究极少。本研究旨在回顾性分析SII对评估UC严重程度的临床价值。方法:收集2014年2月-2021年10月就诊于青岛大学附属医院的224例UC患者和224例健康查体者作为研究对象。比较两组的性别、年龄、身体质量指数(Body Mass Index,BMI)、血红蛋白(Hemoglobin,Hb)、血小板(Platelet,PLT)、中性粒细胞(Neutrophil,NEU)、淋巴细胞(Lymphocyte,LYM)、单核细胞(Monocyte,MONO)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(Neutrophil-lymphocyte ratio,NLR)、血小板与淋巴细胞比值(Platelet-lymphocyte ratio,PLR)、淋巴细胞与单核细胞比值(Lymphocyte-monocyte ratio,LMR)、SII的差异。依据改良Truelove和Witts评分(Modified Truelove and Witts Criteria,TWC)、Mayo内镜评分(Mayo Endoscopic Score,MES)、溃疡性结肠炎肠道炎症负担程度(Degree of Ulcerative Colitis Burden of Luminal Inflammation,DUBLIN)、溃疡性结肠炎内镜下严重程度指数(Ulcerative Colitis Endoscopic Index of Severity,UCEIS)来评价UC严重程度,根据蒙特利尔分型评估肠道受累范围。采用卡方检验、秩和检验、Spearman’s相关分析比较SII、NLR、PLR、LMR间的差异及与UC严重程度、病变范围的相关性,通过ROC曲线和多因素回归分析评估SII、NLR、PLR、LMR预测UC严重程度的诊断效率。结果:1.在UC组和对照组中平均年龄均为49.5(37-62)岁,男女比分别为1:0.85和1:0.88,平均身高分别为1.68(1.6-1.73)m和1.67(1.6-1.73)m,两组在性别、年龄和身高方面无统计学差异(P>0.05)。与对照组相比,UC组的BMI、PLT、NEU、MONO、NLR、PLR、LMR、SII明显升高,Hb、LYM、LMR明显下降,差异均有统计学意义(P<0.001)。***组和对照组中,SII水平在女性和男性之间差异无统计学意义(P>0.05);在男性和女性组中,UC组的SII水平在较对照组明显升高且差异均有统计学意义(P<0.001)。UC组和对照组中,在≤30、30-50和≥50岁间的SII差异无统计学意义(P>0.05);在≤30、30-50和≥50岁组中,UC组的SII水平较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。对照组的SII在低体重、正常体重和超重组间无统计学差异(P>0.05)。UC组的SII在低体重、正常体重和超重组间差异具有统计学意义(P<0.05),进一步两两比较,与超重组相比,低体重与正常体重组的SII水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。***在E1、E2、E3组间无统计学差异(P>0.05),在DUBLIN、UCEIS组间差异有统计学意义(P<0.001)。SII在TWC和MES的轻、中、重度组间存在统计学差异,进一步两两比较发现,轻中度、中重度及轻重度组间的差异均有统计学意义(P<0.001)。***患者的SII、NLR、PLR分别与TWC、MES、DUBLIN、UCEIS评分呈正相关(r=0.405～0.633,P<0.001),LMR与TWC、MES、DUBLIN、UCEIS评分呈负相关(r=-0.301～-0.391,P<0.001),SII、NLR、PLR、LMR与蒙特利尔分型无相关性(r=-0.001～0.098,P>0.05)。5.采用ROC曲线比较SII、NLR、PLR、LMR对TWC评分界定中重度UC的预测价值,SII、NLR、PLR、LMR的AUC分别为0.84、0.78、0.79、0.74,其中SII的预测价值最大,最佳临界值为618.98×10～9/L,相应的灵敏度和特异度分别为78.57%和83.33%。6.采用ROC曲线比较SII、NLR、PLR、LMR对

关键词： 肺炎链球菌   YWHAZ   巨噬细胞   炎症反应   自噬   感染  

摘要： 目的:YWHAZ(Tyrosine3-monooxygenase/Tryptophan5-monooxygenase activation zeta)是重要的细胞内信号通路调控分子,其在细菌感染中的效应和机制尚未完全阐明。本研究拟探讨YWHAZ在肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,***)感染所致的炎症反应中的效应和机制,为细菌感染防治提供新的思路。方法:1.分别使用PBS和***裂解液处理小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用WB技术检测蛋白裂解液YWHAZ、p-YWHAZ水平,对比分析表达差异;为了验证细胞实验结果,分别使用PBS和*** D39菌株鼻腔滴注感染C57BL/6J小鼠,利用免疫组化检测小鼠肺组织中YWHAZ表达水平,WB检测小鼠肺组织中YWHAZ、p-YWHAZ蛋白水平,明确***感染与YWHAZ表达的相关性。2.分别使用PBS和***裂解液处理小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用WB技术检测p-YWHAZ、炎症小体相关蛋白NLRP3、IL-1β以及炎症信号通路相关蛋白P65、pP65、ERK、p-ERK、P38、p-P38水平;利用ELISA检测细胞上清液炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18分泌水平;添加小分子抑制剂BV02抑制YWHAZ表达,WB检测上述炎症相关蛋白水平,ELISA检测细胞上清液炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18分泌水平。3.分别使用PBS和***裂解液处理小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用WB技术检测p-YWHAZ、自噬相关蛋白p62、Beclin1及LC3II/I蛋白水平,TEM技术观察自噬小体数目的变化,免疫荧光技术观察自噬相关蛋白LC3B荧光强度变化;添加小分子抑制剂BV02抑制YWHAZ的表达,WB技术检测上述自噬相关蛋白水平,TEM技术观察自噬小体数目的变化,免疫荧光技术观察自噬相关蛋白LC3B荧光强度变化;添加小分子抑制剂TAK-242抑制TLR4的表达,WB检测p-YWHAZ表达水平变化。4.分别使用PBS和*** D39菌液鼻腔滴注感染C57BL/6J小鼠,腹腔注射BV02抑制YWHAZ的表达,24 h后取肺组织,利用HE染色观察肺组织炎症情况,利用WB检测p-YWHAZ、炎症相关蛋白NLRP3、IL-1β、P65、p-P65、ERK、p-ERK、P38、p-P38以及自噬相关蛋白p62、Beclin1及LC3II/I蛋白表达水平,利用ELISA检测BALF及肺匀浆中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18的水平,通过菌落计数小鼠BALF及眼球血中的细菌载量。结果:1.与PBS处理的对照组相比,***裂解液刺激细胞后,YWHAZ总蛋白未见明显差异,但p-YWHAZ蛋白明显增高;小鼠肺炎模型中,与对照组小鼠相比,*** D39感染小鼠肺组织中YWHAZ总蛋白未见明显差异,而p-YWHAZ蛋白表达显著升高。2.与PBS处理的对照组相比,***裂解液刺激细胞后,p-YWHAZ、炎症小体相关蛋白NLRP3、IL-1β及炎症信号通路相关蛋白P65、p-P65、ERK、p-ERK、P38、pP38表达水平明显增高,细胞上清液中的炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18分泌水平明显增多;抑制YWHAZ后,与***裂解液刺激组相比,炎症小体相关蛋白NLRP3、IL-1β及炎症信号通路相关蛋白P65、p-P65、ERK、p-ERK、p-P38表达水平明显减低,细胞上清液中的TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18分泌水平明显减少。3.与PBS处理的对照组相比,***裂解液刺激细胞后,p-YWHAZ、自噬相关蛋白p62表达增高,Beclin1及LC3II/I蛋白表达水平明显减低,TEM观察到自噬小体数目明显减少,免疫荧光结果显示LC3B荧光强度明显减弱;抑制YWHAZ后,自噬相关蛋白p62表达减少,Beclin1及LC3II/I蛋白表达水平增高,TEM观察到自噬小体数目明显增多,免疫荧光结果显示LC3B荧光强度明显增强;抑制TLR4后,p-YWHAZ水平明显降低。4.小鼠肺炎模型中,与对照组小鼠相比,*** D39感染小鼠肺组织中,小鼠肺部炎症明显加重,炎症相关蛋白NLRP3、IL-1β、P65、p-P65、ERK、p-ERK、P38、pP38及自噬相关蛋白Beclin1、LC3II/I表达水平明显增高,小鼠BALF及肺匀浆中的炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18分泌水平明显增多,小鼠BALF及眼球血中的细菌载量明显增加;抑制YWHAZ后,小鼠肺部炎症明显减轻,炎症相关蛋白NLRP3、IL-1β、P65、p-P65、ERK、p-ERK、p-P38及自噬相关蛋白Becli