关键词： 穿心莲内酯   肾毒性   炎症   纤维化   衰老   分子机制  

摘要： 背景穿心莲内酯(Andrographolide,Andro)是从我国传统中草药爵床科植物穿心莲提取出来的主要有效活性成分之一,被誉为天然抗生素,临床上常用于治疗上呼吸道感染、痢疾等多种感染性疾病,尤其在细菌性及病毒性上呼吸道感染和痢疾的治疗上有特殊疗效。但随着这些中药注射剂在临床上广泛的应用,其所表现出的不良反应也愈来愈多,常见的不良反应有皮疹、头晕、胃肠道反应,较为严重的会出现肾损伤,严重的可出现过敏性休克、急性肾衰竭等,其中肾损害的不良反应引起国内医药界广泛关注。穿心莲内酯类药物毒性已经成为制约其临床应用的重要障碍,现有的研究多集中在对穿心莲内酯及其衍生物的药效学及临床研究,对其肾毒性、肾脏炎症反应、纤维化和衰老及其分子机制研究并不多,因此有必要对此进行深入研究,以期为更好的开发和应用穿心莲内酯及其衍生物提供重要的依据。目的在体外肾脏NRK-52E细胞研究穿心莲内酯是否诱导肾脏炎症、纤维化和衰老,进一步探讨其作用机制;在c57BL/6J小鼠体内研究穿心莲内酯在体内诱导肾脏炎症、纤维化和衰老的影响。方法(1)通过Real-time PCR检测不同浓度穿心莲内酯对NRK-52E细胞炎症反应、纤维化和细胞衰老的影响;通过Western Blot法检测不同浓度穿心莲内酯对NRK-52E细胞纤维化的影响;通过p16免疫荧光试剂盒检测不同浓度穿心莲内酯对NRK-52E细胞衰老的影响;通过DCFH-DA荧光探针法活性氧检测试剂盒检测不同浓度穿心莲内酯对NRK-52E细胞活性氧的影响;采用γ-H2AX免疫荧光试剂盒检测不同浓度穿心莲内酯对NRK-52E细胞DNA损伤的影响;通过β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒检测穿心莲内酯对NRK-52E细胞衰老相关β-半乳糖苷酶的活性;(2)通过Real-time PCR检测穿心莲内酯对NRK-52E细胞中不同作用时间不同浓度穿心莲内酯对NRK-52E细胞中SIRT3的m RNA表达的影响;采用Western Blot法检测不同作用时间不同浓度穿心莲内酯对NRK-52E细胞中SIRT3的蛋白表达的影响;采用试剂盒检测不同浓度穿心莲内酯对NRK-52E细胞中SIRT3的酶活性的影响;(3)通过Real-time PCR实验检测穿心莲内酯对NRK-52E-Vector和NRK-52E-SIRT3细胞炎症相关因子的m RNA表达水平;通过Real-time PCR和Western Blot法检测穿心莲内酯对NRK-52E-Vector和NRK-52E-SIRT3细胞纤维化的影响;通过Real-time PCR实验检测穿心莲内酯对NRK-52E-Vector和NRK-52E-SIRT3细胞衰老相关因子p16的m RNA表达水平;通过p16免疫荧光试剂盒检测穿心莲内酯对NRK-52E-Vector和NRK-52E-SIRT3细胞衰老的影响;通过DCFH-DA荧光探针法活性氧检测试剂盒检测度穿心莲内酯对NRK-52E-Vector和NRK-52E-SIRT3细胞活性氧的影响;采用γ-H2AX免疫荧光试剂盒检测穿心莲内酯对NRK-52E-Vector和NRK-52E-SIRT3细胞DNA损伤的影响;通过β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒检测穿心莲内酯对NRK-52E-Vector和NRK-52E-SIRT3细胞衰老相关β-半乳糖苷酶的活性;通过免疫共沉淀法和Western Blot实验检测穿心莲内酯对SIRT3和p53相互作用的影响;(4)采用试剂盒检测穿心莲内酯体内对小鼠肾脏中血清肌酐(CR)和尿素氮(BUN)等生化指标的影响;采用H&E染色和Masson染色检测小鼠肾脏组织病理变化;通过Real-time PCR实验检测小鼠体内SIRT3的蛋白表达水平;利用试剂盒检测小鼠血清炎症因子的表达;采用Real-time PCR和Western Blot法检测穿心莲内酯对小鼠体内纤维化相关基因的表达;通过Real-time PCR实验检测穿心莲内酯对小鼠体内衰老相关因子p16的m RNA表达水平。结果通过Real-time PCR实验、Western Blot实验和免疫荧光实验可以看出,穿心莲内酯能诱导NRK-52E细胞的炎症反应、纤维化和衰老;通过试剂盒、Real-time PCR实验和Western Blot可得出,穿心莲内酯能抑制SIRT3的活性,且呈现剂量依赖性和时间依赖性;通过稳转细胞株过表达SIRT3后,利用Real-time PCR实验、Western Blot、试剂盒和免疫荧光实验,可证明穿心莲内酯能通过调控SIRT3从而影响NRK-52E细胞的炎症、纤维化和衰老;通过免疫共沉淀和Western Blot实验可得出,SIRT3与p53之间存在相互作用,且穿心莲内酯能影响SIRT3和p53的相互作用;给c57BL/1

关键词： 全身炎症反应指数   急性冠脉综合征   光学相干断层成像   易损斑块   预后研究  

摘要： 目的:探讨全身炎症反应指数(SIRI)与急性冠脉综合征(ACS)患者短期预后的相关性,并研究全身炎症反应指数(SIRI)水平与基于光学相干断层成像技术(OCT)确定的ACS患者罪犯病变斑块稳定性之间的关系。方法:选取2013年1月至2021年12月就诊于新疆医科大学第一附属医院心脏中心,行冠脉造影术,并明确诊断ACS的998例患者,对上述患者进行回顾性分析,根据SIRI水平将患者分为两组:低SIRI组:SIRI<1.60(n=562);高SIRI组:SIRI≧1.60(n=436)。随访所有患者MACE事件,分别在两组之间进行比较,分析SIRI水平与不良预后的关系。同时,根据SIRI水平对200例完善OCT检查患者进行分组,低SIRI组:SIRI<1.60(n=142);高SIRI组:SIRI≧1.60(n=58),比较两组之罪犯病变处斑块特征,分析SIRI水平与冠脉斑块易损性的关系。结果:998例患者中216例发生MACE及全因死亡,两组的***曲线分析显示,高SIRI组发生MACE及全因死亡的风险高于低SIRI组。随着SIRI水平上升,患者的预后越差。COX多因素回归分析显示,高SIRI水平是急性冠脉综合征患者短期出现MACE的独立危险因素(HR:1.433,95%CI:1.269-1.617,P<0.001)。ROC曲线分析提示最佳截断值为1.60,AUC为0.678,敏感性、特异性均可。行OCT检查的ACS患者中高SIRI组薄纤维帽粥样硬化斑块发生率显著高于低SIRI组(P=0.031)。结论:高水平的SIRI是ACS患者短期内出现MACE及全因死亡的一个独立预测指标,随着SIRI水平的升高,ACS患者预后越差,并且高SIRI组患者罪犯病变处易损斑块概率更高。

关键词： TRPA1   氧化应激   凋亡   牙周炎   内质网应激  

摘要： 研究背景: 牙周炎发生发展过程中常伴随着不可逆的软硬组织破坏及牙周稳态的失衡,是成年人牙齿脱落的主要原因。牙周炎影响全球近35亿人口,在我国30岁以上的人群牙周病的患病率超过40%。它不仅危害口腔健康,还与糖尿病、心血管疾病、早产及低体重儿、阿尔兹海默症等全身疾病密切相关。 牙周炎发生发展过程中,不同程度的氧化应激与牙周软硬组织的不可逆性损伤有着密切的关系并可互相促进。研究显示,氧化应激和细胞凋亡在牙周炎发生的早期阶段就已经出现,在牙周炎进展期显著增加,并在牙周炎的有效治疗后显著改善。氧化应激会加剧细胞的脂质过氧化、蛋白质错误折叠和功能障碍、DNA损伤和细胞器应激及损伤,加速细胞凋亡。在牙周炎的活动期,过度的氧化应激及随之而来的细胞凋亡进一步加剧了牙周组织的破坏和牙周稳态的失衡。因此,保护牙周组织或细胞免受氧化应激和氧化应激导致的细胞凋亡可能是牙周炎早期干预和治疗的有效方式。 瞬时感受器电位离子通道蛋白Ankyrin1（Transient Receptor Potential Ankyrin1,TRPA1）是瞬时感受器电位离子通道蛋白（Transient receptor potential cation channels TRPs）超家族中最大的非选择性的可透性Ca2+通道。可被冷、热、机械刺激及多种化学刺激激活。TRPA1在吸呼道炎性疾病、慢性关节炎、视网膜损伤、肥胖和糖尿病的炎症反应中发挥重要作用,其主要作用机制是通过控制细胞Ca2+内流,一方面调节Ca2+依赖的相关蛋白分子及信号通路的功能;另一方面直接影响对钙浓度敏感的细胞器的功能,如内质网应激或线粒体氧化应激启动细胞凋亡或死亡及炎症促炎细胞因子的释放。在这些炎症相关的疾病中,TRPA1作为这些疾病新的治疗靶点,其部分拮抗剂已经进入II期临床试验。因此,TRPA1拮抗剂在抗氧化应激、抗凋亡、抗炎等相关疾病的治疗中有潜在的积极意义。 TRPA1在多种牙源性细胞中表达,TRPA1在正常的牙周膜组织和细胞中具有热敏感和机械敏感特性,在炎症性疼痛、机械性痛感中发挥关键作用。但TRPA1作为与炎性疾病密切相关的离子通道,其在牙周炎中的作用尚不明确。本研究旨在探索TRPA1在牙周炎组织中的表达规律及其与牙周炎进程中的牙周组织或细胞氧化应激的关系、通过体外实验研究其对炎性牙周膜细胞的氧化应激的影响机制、通过动物实验初步探索其对牙周炎小鼠牙周局部及全身的影响及机制,为进一步探讨TRPA1在牙周炎发生发展及治疗中的临床意义提供初步的理论依据。 研究目的: 1.检测TRPA1在临床牙周炎患者和健康人群的牙周膜组织和细胞中的差异表达模式,并分析其与氧化应激和细胞凋亡的关系。 2.探索TRPA1在炎症作环境对牙周膜细胞（Periodontal ligament cells,PDLCs）氧化应激及凋亡的影响机制,主要研究对钙离子浓度敏感的内质网应激介导的细胞氧化应激过程中相关的分子机制。 3.研究TRPA1抑制剂对牙周炎小鼠牙周炎进展的影响及其可能的分子机制,及其对牙周炎小鼠的全身影响以评价其安全性,为进一步探讨TRPA1在牙周炎治疗中的临床意义提供初步的理论依据。 研究方法: 1.收集健康人群和牙周炎患者的牙周膜细胞（Periodontal ligament cells from health or periodontitis,H/P-PDLCs）,在转录水平及蛋白水平分别检测氧化应激及凋亡相关标记分子（如Caspase3,Caspase9,Bax,Bcl-2,GRP78,SOD1,SOD2）在两组之间的差异表达水平,采用流式细胞术鉴定两组牙周膜细胞的凋亡的比例。在转录水平检测两组细胞中TRPs亚家族（如TRPV1,TRPV4,TRPM8,TRPA1）的表达情况,并在蛋白水平进一步验证。采用HE染色、免疫荧光染色及免疫组化染色,鉴定健康人群和牙周炎患者的牙周膜组织（Periodontal ligament tissues from health or periodontitis,H/P-PDLTs）中,氧化应激、凋亡标记分子（PERK,CHOP,HSP70,Caspase3,Tunel）的表达,及TRPA1在两组中的表达情况,明确TRPA1与牙周炎及氧化应激的关系。 2.1.采用不同浓度的P.g LPS及TRPA1抑制剂HC030031对牙周膜细胞进行分组干预,通过荧光酶标仪检测细胞内Fura-2/AM标记的钙离子浓度变化,确定TRPA1响应P.g LPS刺激的最适浓度,及HC030031发挥作用的最适浓度。采用1ug/ml的P.g LPS刺激牙周膜细胞构建炎性牙周膜细胞,用TRPA1抑制剂对炎性牙周膜细胞进行干预,共分为3组:空白对照组（CON组）,P.g LPS组（

关键词： 大豆皂苷A1   炎症   胆固醇稳态   Toll样受体4   固醇调节元件结合蛋白-2  

摘要： 研究背景和目的最近的研究发现,植物化学物大豆皂苷A1(SS-A1)能够抑制免疫细胞中TLR4/MyD88信号通路和炎症。肝脏是机体调控胆固醇稳态的核心器官,SS-A1也被发现能够降低肥胖小鼠肝脏中胆固醇含量。有研究表明炎症和胆固醇代谢之间可能通过TLR4/MyD88信号通路相互关联。SS-A1是否可以通过调控TLR4/MyD88信号通路降低炎症状态下肝细胞中的胆固醇水平?尚不清楚。本研究运用体内外肝细胞炎症模型,探讨SS-A1对肝细胞TLR4/MyD88信号通路以及胆固醇含量调节相关蛋白的影响,旨在弄清SS-A1经调控TLR4/MyD88信号通路降低炎症状态下肝脏胆固醇的作用与机理,为合理利用大豆皂苷类植物化学物防治慢性非传染性疾病提供科学理论依据。方法1.75只雄性ICR小鼠随机分为5组(n=15)。第1组为对照,尾静脉注射生理盐水8周后,再用生理盐水灌胃8周。第2～5组尾静脉注射脂多糖(LPS)8周,随后分别用生理盐水、阿司匹林、10和20μmol/kg SS-A1灌胃8周。实验结束后收集肝脏。2.125只雄性C57BL/6J小鼠分为2组。第1组为对照(n=25),饲喂AIN-93G饲料,第2组(n=100)饲喂高脂饲料(HFD),共18周。随后随机选取对照组15只小鼠继续以AIN-93G饲喂8周,选取第2组中经鉴定为肥胖的60只小鼠,将其分为4组(n=15),分别饲喂HFD、HFD+阿司匹林、HFD+10μmol/kg SS-A1和HFD+20 μmol/kg SS-A1,共8周。实验结束后收集肝脏。3.用1 μg/mLLPS或200 μmol/L棕榈酸(PA)分别处理HepG2肝细胞0 min、10 min、30min、1 h、3 h、6h、12h、24 h 和 48 h。用 10、20、40 μmol/LSS-Ai或20 μmol/L MyD88抑制剂(ST2825)预孵育HepG2肝细胞2 h,再根据上述实验确定的处理条件,进行LPS或PA处理。4.建立过表达MyD88的HEK293T细胞模型,用ST2825(20μmol/L)孵育 6h或 12h,或用 SS-A1(20、40μmol/L)孵育 12h。5.用化学试剂盒检测肝组织、HepG2肝细胞和HEK293T细胞中的总胆固醇(TC)浓度,用Filipin染色法检测细胞中的游离胆固醇含量。6.用western blot检测肝组织、HepG2肝细胞或HEK293T细胞的总蛋白以及脂筏、细胞核或生物膜中TLR4/MyD88信号通路相关蛋白(TLR4、MD-2、MyD88、p-IRAK1、TRIF、TRAF6 或 NF-κB p65 磷酸化)、炎症标记物(iNOS、COX-2、TNF-α或IL-6)和SREBP-2的表达,并检测HepG2肝细胞内HMGCR、ABCA1和LDLR的蛋白表达。7.实验数据运用SPSS统计软件进行两独立样本T检验或多组单因素方差分析,结果用mean±SD表示,p<0.05为统计差异显著。结果1.在LPS刺激的小鼠肝脏组织和炎症HepG2细胞模型中,SS-A1抑制了(p<0.05)TLR4/MyD88信号通路相关蛋白和SREBP-2蛋白的表达。2.在HFD刺激的小鼠肝脏组织中,SS-A1抑制了(p<0.05)p65磷酸化、炎症标记物产生以及SREBP-2蛋白的表达,且降低了(p<0.05)脂筏中TLR4和MyD88的蛋白水平。3.在LPS或PA刺激的HepG2肝细胞和过表达MyD88的HEK293T细胞中,ST2825抑制了(p<0.05)TLR4/MyD88信号通路相关蛋白和SREBP-2蛋白的表达。4.在LPS或PA刺激的炎症HepG2肝细胞模型中,SS-A1抑制了(p<0.05)HMGCR的表达,并增加了 ABCA1和LDLR的表达。结论***-A1可在体内外炎症肝细胞模型中抑制TLR4/MyD88信号通路的激活以及SREBP-2的表达,从而降低肝细胞中的炎症反应和胆固醇含量。***或PA可通过增加MyD88的表达,影响SREBP-2调控的肝细胞胆固醇含量。***-A1可通过抑制炎症状态下MyD88的表达,降低SREBP-2的水平,降低LPS或PA诱导的胆固醇含量。

关键词： 糖尿病   牙周炎   hsa＿circ＿0084054   miR-508-3p   磷酸酶和张力蛋白同源物  

摘要： 牙周炎是以牙周组织破坏为特征的慢性感染性疾病,是成年人失牙的首要原因。牙周炎作为口腔常见病和多发病,严重威胁着人民群众的口腔健康乃至全身健康。糖尿病是一种常见的由胰岛素抵抗或胰岛β细胞功能障碍引起的代谢性疾病。流行病学调查显示,截止2017年我国糖尿病患者约为1.298亿,并且患病率有逐渐上升趋势。大量研究显示糖尿病是牙周炎重要危险因素,牙周炎被称为糖尿病的第六大并发症。与非糖尿病人群相比,糖尿病患者发生牙周炎的风险增加3-4倍。而伴有糖尿病的牙周炎患者相比单纯牙周炎患者,往往表现为更严重的炎症反应、更显著的牙周组织破坏与更快速的病变进展;其防治难度大,治疗周期长,治疗费用高,治疗效果也更加不确定。 高血糖可导致全身微血管病变、口腔局部菌斑变化及局部糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)累积,使得牙周膜细胞和免疫细胞的炎症因子(如IL-1β、IL-6、TNF-α等)表达增加;活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平升高,氧化应激反应增强,进而引发牙周膜细胞和成骨细胞凋亡,牙槽骨修复减少,加重牙周组织破坏,加速牙周炎进程。然而,现有研究对糖尿病加重加速牙周炎发生发展的具体机制,特别是基因层面的分子调控机制并不明晰。 环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类没有5,帽子和3,poly(A)尾巴的共价闭合RNA,它的发现揭示了转录后基因表达调控的新层面。circRNA在真核生物中广泛存在,并且具有多种功能,如作为小RNA(micro RNA,miRNA)海绵调节下游靶基因表达,通过与蛋白质结合调节蛋白质功能,翻译蛋白或多肽,调节转录等。牙周炎患者的牙龈组织中存在许多差异表达的circRNA,它们在牙周炎发生发展中起着重要作用。同时,circRNA调控网络也参与糖尿病及其并发症的发生发展,如糖尿病、妊娠期糖尿病、糖尿病心肌病、糖尿病肾病等。因此,circRNA可能在伴糖尿病牙周炎中发挥着重要的调控作用,而对此尚未见报道。 本研究拟通过构建伴糖尿病牙周炎体外模型,采用高通量RNA测序筛选高糖炎症状态下人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)差异表达的circRNA,然后在hPDLCs中敲低目的circRNA表达研究其功能和作用,并进一步探究高糖炎症状态下circRNA调控hPDLCs生物学功能的分子机制。 研究方法: 1、首先分离培养hPDLCs,通过在细胞培养液中加入高糖(30 mmol/L葡萄糖)和/或牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(1μg/ml)诱导构建高糖组、炎症组、高糖炎症组的hPDLCs体外模型,并检测高糖与炎症对hPDLCs增殖、成骨分化、炎性因子表达、氧化应激水平和细胞凋亡的影响。 2、其次提取对照组、炎症组、高糖炎症组的hPDLCs circRNA样本进行高通量测序,分析筛选差异表达circRNA,并进行RT-q PCR验证,最终得到在高糖炎症组和炎症组、对照组之间差异表达最显著的hsa＿circ＿0084054。 3、收集健康人、牙周炎和伴糖尿病牙周炎患者的牙周膜(periodontal ligament,PDL)组织临床样本,检测hsa＿circ＿0084054在hPDLCs和PDL组织中表达情况,并鉴定hsa＿circ＿0084054的分子特性。 4、利用siRNA在hPDLCs中敲低hsa＿circ＿0084054,通过RT-q PCR检测hPDLCs炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达水平;试剂盒法检测ROS、总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况,从而探究hsa＿circ＿0084054在高糖炎症状态下对hPDLCs的影响。 5、利用生物信息学数据库分析hsa＿circ＿0084054下游miRNA/m RNA信号通路,通过双荧光素酶报告基因检测、RNA免疫共沉淀、RT-q PCR、Western blot等方法验证hsa＿circ＿0084054与下游靶基因miR-508-3p,以及miR-508-3p与PTEN之间的结合和调控作用,进一步探究hsa＿circ＿0084054/miR-508-3p/PTEN信号轴在高糖炎症状态下对hPDLCs生物学功能的调控机制。 研究结果: 1、成功分离培养并鉴定hPDLCs。高糖、*** LPS刺激后,hPDLCs单克隆数量减少、细胞增殖

关键词： 冷冻象鼻支架   胸腹主动脉置换术   主动脉重塑   Stanford A型主动脉夹层   胸腹主动脉置换术   半身体外循环   常温自体转流   亚组分析   倾向性评分匹配法   腹主动脉瘤   生物信息学   枢纽基因   免疫炎症反应   实时荧光定量聚合酶链式反应  

摘要： 第一部分:Stanford A型主动脉夹层象鼻支架术后主动脉重塑对于二期胸腹主动脉置换术的影响目的:部分 Stanford A 型主动脉夹层(Stanford type A aortic dissection,AAD)患者接受冷冻象鼻技术(frozen elephant trunk,FET)治疗后,由于术后主动脉直径持续增大而导致远端主动脉重塑不完全,仍存在二次干预的风险。本研究旨在探索AAD术后患者的主动脉重塑情况对于二期胸腹主动脉置换术(thoracoabdominal aortic repair,TAAR)早期结果的影响。方法:在2012年10月至2018年12月期间,58例行TAAR手术的患者纳入本次研究,所有患者既往均因AAD接受FET植入术。我们通过测量主动脉FET远端平面、腹腔干开口平面以及肾下主动脉最大径三个层面的主动脉直径、假腔与主动脉管腔面积比以及假腔通畅性三个参数评估主动脉重塑情况。在早期死亡患者与存活患者中比较主动脉重塑的区别,根据结果进行亚组分析,并通过逻辑回归分析影响TAAR早期结果的危险因素。在本研究中,早期死亡定义为住院期间或术后30天内因各种原因导致的患者死亡,不良事件定义为术后发生永久性脑卒中、永久性截瘫或需要透析的永久性肾功能衰竭。结果:本研究纳入男性患者48例,女性患者10例,平均年龄41.19±10.21岁。FET远端平面主动脉平均直径为50.28±23.25毫米,腹腔干开口平面主动脉平均直径为41.85±8.84毫米,肾下主动脉最大径的平均直径为39.89±17.55毫米。在FET远端平面,早期死亡组患者的主动脉平均直径显著大于存活组患者(87.85±26.21 毫米 vs.45.96±18.75 毫米,P=0.01,校正后的 P=0.01)。受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,R0C)分析显示,主动脉直径在预测术后早期死亡方面的最佳阈值为65毫米。亚组分析显示FET远端直径<65毫米组患者的早期疗效显著优于FET远端直径≥65毫米组,包括:术中出血量更少(1432.79±867.60 毫升 vs.2413.33± 1422.71 毫升,P=0.003);呼吸机使用时间更短(30.51±23.02小时vs.70.13±127.72小时,P=0.05);术后住院时间更短(17.21±7.53天vs.11.07±10.28天,P=0.02);术后第一天的引流量更少(646.74±449.98 毫升 vs.1615.33±2112.33 毫升,P=0.01);早期死亡率更低(0 vs.40%,P<0.001);不良事件发生率更低(2.3%vs.26.7%,P=0.02);肺部感染更少(23.3%vs.60%,P=0.02);以及因出血而二次开胸止血患者更少(2.3%vs.26.7%,P=0.02)。多因素回归分析表明年龄≥50岁和FET远端主动脉直径≥65毫米是TAAR早期死亡的独立危险因素,FET远端主动脉直径≥65毫米是术后发生不良事件的独立危险因素。结论:对于AAD术后需要接受二期TAAR的患者,FET远端主动脉直径≥65毫米提示早期结果较差。此外,FET远端主动脉直径扩张是TAAR手术早期死亡以及不良事件发生的独立危险因素。对于此类患者,应尽快进行二期TAAR,从而减少因主动脉扩张而带来的手术风险。第二部分:半身体外循环与常温自体转流技术在胸腹主动脉置换术中的应用目的:本研究旨在探究常温自体转流以及半身体外循环技术在胸腹主动脉置换术(thoracoabdominal aortic repair,TAAR)中早期结果的差异,从而指导面对不同患者时对手术策略的制定。方法:本研究纳入2012年10月至2018年12月于我中心行TAAR的患者。入组标准包括:①患者因慢性主动脉夹层行TAAR;②TAAR手术范围包括Crawford Ⅱ、Ⅲ型。排除标准包括:①采用深低温停循环灌注方式;②急诊手术;③真性动脉瘤患者。本研究的主要终点事件为早期死亡,包括住院期间或术后30天内因各种原因导致的患者死亡。次要终点为不良事件,包括永久性脑卒中、永久性截瘫和需要透析的永久性肾功能衰竭。采用倾向性评分匹配法进行分析,并根据第一部分研究结果,对近端主动脉直径≥65毫米患者进行亚组分析。结果:本研究共纳入121例患者,其中男性89例,女性32例。19例患者采用半身体外循环技术,102例患者采用常温自体转流技术。半身体外循环组的早期死亡率显著高于常温自体转流组(26.3%vs.4.9%;P=0.01),不良事件发生率未见显著差异(26.3%vs.11.8%,P=0.14)。进行倾向性评分匹配法分析后,两组之间早期死亡率未见显著差异(16.7%vs.2

关键词： 鞘氨醇激酶1   微炎症状态   肾间质纤维化   慢性肾脏病  

摘要： 目的:本研究旨在探索鞘氨醇激酶1(Sph K1)在人体肾组织中的表达水平及其与微炎症状态、肾间质纤维化(RIF)的相关性,为CKD的治疗提供新靶点。方法:本研究共纳入67例在陕西省人民医院行肾活检并确诊慢性肾脏病(CKD)的患者。收集患者一般临床资料,包括:年龄、性别、身体质量指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、胱抑素-C(Cys-C)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、尿素(UA)、白蛋白(Alb)、血红蛋白(Hb)、24小时尿蛋白定量(Upro)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、补体C1q(C1q)、C反应蛋白(CRP)等指标。依据估算肾小球滤过率(e GFR)将患者分为4组:e GFR≥90为CKD1期组,e GFR 60-89为CKD2期组,e GFR 30-59为CKD3期组,e GFR≤29为CKD 4-5期组;按照CRP 5-20mg/L和CRP<5mg/L依次分为:微炎症状态组、非微炎症状态组;根据肾小管间质纤维化分级标准分为:无纤维化组、轻度纤维化组、中重度纤维化组。采用免疫组织化学(IHC)染色法检测肾组织中Sph K1、α-SMA、CTGF的表达水平。分析Sph K1在各组间的表达差异,分析Sph K1与α-SMA、CTGF的相关性。结果:1肾组织中Sph K1的表达水平与微炎症状态的相关性分析1.1 CKD1期组、CKD2期组、CKD3期组、CKD4-5期组之间的Sph K1的表达水平存在差异(P<0.05),且随着CKD分期的增高,肾组织中的Sph K1表达水平逐渐升高。1.2微炎症状态组Sph K1的表达水平高于非微炎症状态组(P<0.05)。1.3 Sph K1表达水平与BUN、Scr、UA、Cys-C、RBP、NGAL、PCT、NEU呈正相关关系(r>0),与Hb、LYM、MPV呈负相关关系(r<0),与年龄、性别、BMI、SBP、DBP、C1q、Upro、Alb、TC、TG、HDL-C、LDL-C、ESR、NT-pro BNP无相关关系。1.4 CKD1期组、CKD2期组、CKD3期组、CKD4-5期组之间的年龄、性别、BMI、SBP、DBP、UA、C1q、Upro、Alb、TC、TG、HDL-C、LDL-C、MPV均无统计学差异(P>0.05),而BUN、Scr、Cys-C、RBP、NGAL、PCT、ESR、NT-pro BNP、Hb、NEU、LYM有统计学差异(P<0.05)。2肾组织中Sph K1水平与肾间质纤维化的相关性分析2.1无纤维化组、轻度纤维化组、中重度纤维化组之间Sph K1的表达水平存在差异(P<0.05),随着纤维化分期的加重,肾组织中的Sph K1表达水平逐渐增高。2.2无纤维化组、轻度纤维化组、中重度纤维化组之间α-SMA、CTGF的表达水平存在差异(P<0.05),随着纤维化分期的加重,肾组织中的α-SMA、CTGF表达水平逐渐增高。2.3 Sph K1表达水平与α-SMA、CTGF表达水平呈正相关关系(r=0.717、r=0.751)。2.4无纤维化组、轻度纤维化组、中重度纤维化组之间的年龄、性别、BMI、SBP、DBP、UA、C1q、Upro、Alb、TG、HDL-C、PCT、NT-pro BNP、Hb、NEU无统计学差异(P>0.05),而BUN、Scr、Cys-C、RBP、NGAL、TC、LDL-C、ESR、LYM、MPV有统计学差异(P<0.05)。结论:1.肾组织中Sph K1的表达水平随着CKD分期的增高而升高。CKD微炎症状态Sph K1的表达水平高于CKD非微炎症状态。2.肾组织中Sph K1、α-SMA、CTGF的表达水平随着RIF程度的加重而升高。肾组织中Sph K1与纤维化指标α-SMA、CTGF呈正相关关系。

关键词： 糖皮质激素   免疫抑制   巨噬细胞   青蒿琥酯   糖皮质激素受体   亮氨酸拉链蛋白  

摘要： 目的:阐明青蒿琥酯(artesunate,AS)增强糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)抑制的小鼠腹腔巨噬细胞(mouse peritoneal macrophages,PMs)释放前炎症细胞因子的作用及其分子机制,为研究AS的免疫调节作用机制、拓宽AS的新用途奠定基础。方法:一、糖皮质激素诱导的免疫抑制巨噬细胞模型的建立和AS对模型细胞释放前炎症细胞因子的影响1.采用不同浓度的醋酸泼尼松龙(prednisoloe acetate,PA)(5.6～450 ng/m L)处理PMs 0.5 h后给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(100 ng/m L)处理PMs 4h,酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测细胞培养上清中TNF-α含量,并采用细胞活力检测试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞活力,筛选出PA诱导建立的糖皮质激素免疫抑制细胞(简称GC巨噬细胞)模型浓度;***(100 ng/m L)处理PMs 0.5 h后加入不同浓度AS(0.83、2.5、7.5、20μg/m L)和LPS(100 ng/m L)作用4 h,并采用ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α含量,明确AS的最佳工作浓度;***(100 ng/m L)处理PMs 0.5 h后加入AS(7.5μg/m L)和LPS(100ng/m L),作用4 h后收集细胞培养上清ELISA法检测TNF-α、IL-6的含量,2 h收集细胞,实时荧光定量PCR(quantitative real-time,PCR)检测Tnf-α、Il-6、Il-1b、Il-10、Cox-2 m RNA的表达,蛋白免疫印迹(Western Blotting,WB)法检测COX-2蛋白的表达情况。二、AS对GC巨噬细胞中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白(glucocorticoid-induced leucine zipper,GILZ)及其相互作用蛋白的影响***(100 ng/m L)处理PMs 0.5 h后加入AS(7.5μg/m L)和LPS(100ng/m L)作用2 h,提取总蛋白WB法检测GR蛋白的表达情况,并采用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取胞核蛋白检测GR核蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察GR的分布情况;***(100 ng/m L)处理PMs 0.5 h后加入AS(7.5μg/m L)和LPS(100ng/m L)作用2 h,PCR、WB、免疫荧光(Immunofluorescence,IF)技术检测GR下游靶基因GILZ的表达;***(100 ng/m L)处理PMs 0.5 h后加入AS(7.5μg/m L)和LPS(100ng/m L),作用2 h,WB法检测NFκB p65的表达,并采用激光共聚焦显微镜观察NFκB p65的核转位;***(100 ng/m L)处理PMs 0.5 h后加入AS(7.5μg/m L)和LPS(100ng/m L),作用2 h,WB法检测AP-1的表达;***(100 ng/m L)处理PMs 0.5 h后加入AS(7.5μg/m L)和LPS(100ng/m L)作用2 h,WB法检测GILZ调控的MAPK、PI3K/AKT信号通路中关键分子蛋白的表达。结果:一、糖皮质激素诱导的免疫抑制巨噬细胞模型的建立和AS对模型细胞释放前炎症细胞因子的影响1.采用100 ng/m L PA处理PMs建立了GC诱导的免疫抑制的巨噬细胞模型;2.明确AS的工作浓度为7.5μg/m L,该浓度的AS能显著提高GC巨噬细胞释放TNF-α的能力;***可以显著提高GC巨噬细胞中前炎症细胞因子Tnf-α、Il-6、Il-1b m RNA的表达,对抗炎细胞因子Il-10 m RNA无明显影响;***可以显著提高GC巨噬细胞中炎症相关介质Cox-2 m RNA和蛋白质的表达。二、AS对GC巨噬细胞中GR、GILZ及其相互作用蛋白的影响***参与GC巨噬细胞模型的形成,同时AS能抑制GC巨噬细胞GR的核转位;***能抑制GR下游靶基因GILZ的高表达,增加NFκB p65活化和AP-1蛋白水平;***能增加GILZ调控的MAPK信号途径JNK、p38磷酸化,PI3K/AKT信号途径PI3K、AKT磷酸化。结论:AS可显著提高GC巨噬细胞释放前炎症细胞因子的能力,该作用不仅与抑制GR核转位、降低GILZ表达从而增加转录因子NFκB p65的活化和AP-1的蛋白水平有关,且与增加GILZ调控的MAPK信号途径JNK、p38磷酸化、PI3

关键词： 多囊卵巢综合征   白介素-22   炎症   凋亡   类固醇合成  

摘要： 目的:多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)是一种育龄期女性常见的代谢性紊乱疾病,病因不明。目前大量研究表明其发病机制与慢性炎症密切相关。白细胞介素22(Interleukin 22,IL-22)在调节炎症性疾病方面发挥重要作用。然而IL-22是否影响卵巢颗粒细胞功能及其与PCOS的关系尚不明确。本研究旨在了解PCOS患者卵泡液中IL-22水平的变化,确定其受体IL-22受体1(IL-22 receptor 1,IL-22R1)在卵巢颗粒细胞的表达定位,探究IL-22在炎症条件下对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡和类固醇激素生成相关基因的影响及相关信号通路变化,为探索PCOS的病因提供新的理论依据。 方法:从2021年3月至2021年7月于重庆医科大学附属第一医院生殖中心收集了15名PCOS患者及15名对照组患者的卵巢颗粒细胞和卵泡液。通过酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测两组患者卵泡液中IL-22的表达水平。通过逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫荧光染色-激光共聚焦成像实验,观察IL-22受体1(IL-22R1)在颗粒细胞中的表达和定位。使用人重组蛋白IL-22(Recombinant human IL-22 protein,rh IL-22)和或LPS处理人类卵巢颗粒细胞瘤细胞系(Human ovarian granulosa tumor cell line,KGN)细胞,通过CCK-8试剂盒和Ed U试剂盒评估其对细胞增殖的影响;通过流式细胞术探究其对细胞凋亡的影响。通过Western Blot评估凋亡相关基因(BAX、BCL-2、Caspase3、Cleaved-Caspase3)和类固醇生成相关的基因(St AR、CYP11A1、CYP19A1)蛋白水平的表达变化。也通过Western Blot评估JAK2和STAT3信号因子的磷酸化水平。 结果:(1)PCOS患者卵泡液中IL-22含量低于对照组(P<0.05);(2)IL-22R1表达于人颗粒细胞且主要定位于细胞膜;(3)rh IL-22单独处理可以显著促进KGN细胞增殖;在炎症状态下,它能够有效减弱LPS诱导的细胞增殖抑制(P<0.05)。(4)rh IL-22单独处理对KGN细胞凋亡没有明显影响;但在炎症状态下,它可以有效地抑制LPS诱导的KGN细胞凋亡,同时还可以抑制KGN细胞BCL-2(P<0.05)蛋白表达,促进BAX和Cleaved Caspase-3(P<0.01)蛋白的表达;(5)Western Blot结果显示,LPS会导致激素合成相关基因St AR(P<0.001)、CYP11A1(P<0.05)和CYP19A1(P<0.05)的表达下调,而rh IL-22能逆转LPS对St AR(P<0.001)、CYP11A1(P<0.05)和CYP19A1(P<0.05)的这一作用。(6)Western Blot结果显示rh IL-22能激活KGN细胞中的JAK2/STAT3信号通路,后者与凋亡、增殖、和炎症相关。 结论:我们的结果表明IL-22在PCOS患者卵泡液中表达下调,其表达水平异常可能与PCOS的发生有关;IL-22受体IL-22R1主要定位于卵巢颗粒细胞膜,表明卵泡液中IL-22水平异常可能会导致卵巢颗粒细胞功能异常。进一步研究发现IL-22能促KGN细胞增殖,抑制炎症诱导的细胞凋亡;同时,IL-22能上调炎症状态下受抑制的类固醇激素合成基因的表达且IL-22能激活JAK/STAT3通路。综上所述,我们的研究从分子水平对炎症相关因素在PCOS发病机制方面的作用提供了新的理论依据。