关键词： 炎症状态的牙髓干细胞   脂多糖   还原氧化石墨烯/壳聚糖三维支架   成骨能力  

摘要： 目的:本研究旨在明确炎症状态的牙髓干细胞(inflammatory dental pulp stem cells,iDPSCs)在rGO/CS三维支架上的黏附、增殖和成骨向分化能力,以评估iDPSCs作为组织工程种子细胞的潜力。 方法:采用改良Hummers法和化学还原法制备rGO/CS三维支架。通过扫描电镜和透射电镜、傅里叶红外光谱、拉曼光谱、X射线光电子能谱对GO、rGO以及rGO/CS三维支架进行表观形貌和官能团分析。使用LPS炎症建模法,模拟牙髓组织炎症状态,通过克隆形成能力检测、增殖检测、成脂成骨向分化检测评估不同浓度LPS对正常hDPSCs增殖与多向分化潜能的影响。将iDPSCs接种于rGO/CS三维支架上,通过细胞黏附率、扫描电镜和Calcein/PI染色的测定,判断细胞在支架上的黏附生长情况;再通过CCK-8和鬼笔环肽染色检测细胞增殖能力;最后通过检测ALP活性和茜素红染色来评估iDPSCs成骨向分化能力。研究中使用SPSS 26.0软件对实验数据进行统计分析。 结果:扫描电镜显示rGO表现出片层结构,褶皱比GO更紧密;傅里叶红外光谱结果显示羟基、羧基、环氧基等含氧基团的信号强度均明显减弱,位于1728cm-1处的C=O伸缩振动峰和1623 cm-1的-OH弯曲振动峰逐渐消失;X射线光电子能谱示C-O官能团消失,C=O结合能下降。扫描电镜显示rGO/CS支架为三维网状结构,表面凹凸不平,三维孔状结构清晰可见。傅里叶红外光谱分析rGO/CS支架的官能团,结果示C=O键的峰减弱,同时3000～3500 cm-1处的吸收峰变宽且强度变大。采用0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的LPS刺激hDPSCs模拟牙髓组织的炎性状态,结果显示:低浓度LPS(0.1μg/mL)对hDPSCs的克隆、增殖、成骨成脂向分化能力无显著影响(P>0.05);中浓度LPS(1μg/mL)条件下,hDPSCs的克隆、增殖、成骨成脂向分化能力显著降低(P<0.05);高浓度LPS(10μg/mL)条件下,hDPSCs克隆、增殖、成骨成脂向分化能力显著降低(P<0.01)。将1μg/mL LPS刺激的hDPSCs接种于rGO/CS三维支架上,16h黏附率为69.05±2.65%,对照组为78.95±1.73%,差异具有统计学意义(P<0.05);培养3天时,hDPSC和iDPSCs在支架上的增殖能力无显著差异;培养至第5-7天时,与hDPSCs相比,iDPSCs在支架上的增殖潜能降低,差异有统计学意义(P<0.05);成骨向诱导14天的ALP活性检测低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);28天的茜素红染色矿化结节数量显著低于对照组。 结论:轻度、中度、重度炎症的iDPSCs克隆形成能力、增殖及多向分化能力逐渐降低,提示炎症的严重程度与iDPSCs的成骨分化能力呈负相关。炎症状态影响iDPSCs在rGO/CS三维支架上的黏附、增殖和成骨向分化能力。我们的研究结果提示炎症状态的牙髓干细胞不应单独作为组织工程的种子。后期我们将进一步研究炎症状态牙髓干细胞自我更新和成骨向分化能力减弱的机制以及如何改善炎症对牙髓干细胞影响的措施,以期为炎症状态的组织工程修复拓展新思路。

关键词： 马流感病毒感染   M2蛋白   NLRP3炎症小体   致病机制  

摘要： 马流感病毒（Equine Influenza Virus，EIV）隶属于正黏病毒科流感病毒属，是引发马属动物病毒性急性呼吸道疾病的最主要病原。马流感病毒主要通过空气飞沫传播，在世界范围内曾多次爆发，引发大流行，具有较高的发病率和死亡率，是威胁马业健康的重要病原之一。马流感病毒感染马以咳嗽、发烧为典型的临床症状。重症马匹会出现呼吸困难、脱水等症状，甚至死亡。而导致感染马匹死亡的主要原因则是“炎症风暴”引起的单器官或多器官的衰竭。炎症小体是宿主调控炎症反应的重要组成部分，是一种多蛋白组成的复合物。其中 NLRP3 炎症小体因可识别体内多种损伤相关分子模式（DAMPs）和病原相关分子模式（PAMPs），而成为研究最为广泛的炎症小体。NLRP3炎症小体的激活会介导IL-1β和IL-18加工、成熟，调控宿主的炎症反应。已有报道发现流感病毒感染后可以激活NLRP3炎症小体，诱导IL-1β和IL-18的分泌。但A型流感病毒（Influenza A Virus, IAV）激活 NLRP3炎症小体的分子机制尚未完全阐释。对于该属病毒对炎症的调控机制仍存在诸多未知，且马流感在此方面的研究也尚无报道。因此，本研究拟将从马流感病毒诱导炎症小体的角度解析EIV感染过程中潜在的炎症反应机制，挖掘可精准调控炎症小体活化的潜在靶点。　　本研究首先建立了EIV的小鼠感染模型（BALB/c）。通过对小鼠体重、致死性、细胞因子水平以及肺脏病理的综合评估，以明确EIV诱导宿主炎症反应的特点。通过试验发现EIV感染小鼠可引起小鼠体重显著下降，甚至死亡。同时，受炎症小体调控的效应分子IL-1β呈现优势表达。这一结果提示EIV感染可以活化炎症小体，参与炎症反应及感染进程。其次，通过qPCR对EIV感染马巨噬细胞后多种炎症小体相关蛋白的mRNA水平进行检测。发现EIV感染主要引起eqnlrp3的mRNA转录水平上调，其他炎症小体并无明显变化。说明EIV感染是通过激活eqNLRP3炎症小体介导IL-1β的成熟和分泌的。随后，利用已建立的eqNLRP3炎症小体体外激活检测系统，筛选到EIV-M2可以诱导IL-1β的切割、成熟。同时，激光共聚焦试验显示转染EIV-M2可以诱导eqNLRP3形成炎症小体激活的典型“斑点”样结构。由此，明确了EIV-M2是活化eqNLRP3炎症小体的始动蛋白。在此基础上，进一步探讨EIV-M2激活eqNLRP3炎症小体的作用机制。首先，发现EIV-M2离子通道活性缺失突变和流感病毒M2离子通道抑制剂都不能完全抑制EIV-M2对eqNLRP3的激活作用，提示EIV-M2激活eqNLRP3炎症小体不完全依赖于其离子通道活性。共聚焦显微镜Z-Stack获得了eqNLRP3炎症小体的3D结构，发现EIV-M2可以被包装到eqNLRP3炎症小体中，定位于eqNLRP3炎症小体的两极，且主要定位于eqNLRP3和eqASC两层蛋白之间。这一结果提示EIV-M2可能与eqNLRP3和eqASC可能存在结合作用。免疫共沉淀试验证实EIV-M2可以与eqNLRP3结合，同时通过共聚焦显微镜发现EIV-M2可以诱导eqNLRP3在TGN （Trans-Golgi network, TGN）聚集。另外，EIV-M2 也可与eqASC 互作，诱导其转变为低聚化形态。进一步的免疫共沉淀实验也证实EIV-M2可增强eqNLRP3与eqASC的互作。由此可见，EIV-M2与NLRP3炎症小体中核心分子NLRP3和ASC发生结合，通过多种作用方式利于NLRP3的组装和聚集，从而产生激活效应。1）EIV-M2与eqNLRP3结合促进eqNLRP3在TGN上的聚集;2） EIV-M2与eqASC结合促进其形成低聚化状态;3）EIV-M2作为“桥梁分子”促进eqNLRP3和eqASC的结合。最后发现，不同毒株的人流感病毒的M2对huNLRP3和huASC具有相同的作用。提示，M2调控NLRP3炎症小体活化的作用机制可能是流感病毒M2的共性特征。　　综上所述，本研究系统的阐明EIV感染激活eqNLRP3炎症小体的分子细节。发现了EIV-M2不依赖离子通道激活 eqNLRP3 炎症小体新的作用机制。本研究结果不仅拓展了对流感病毒调控宿主炎症小体分子机制的认知，为阐释马流感病毒诱导的炎症风暴机制提供重要理论基础，同时可为马流感病毒免疫干预或预防性疫苗的设计提供重要靶点。

关键词： 射血分数保留型心力衰竭   全身性免疫炎症指数   心脏结构   心脏功能   炎症  

摘要： 【目的】本研究旨在研究射血分数保留型心力衰竭(Heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)的右心特征,以及探讨其与全身性免疫炎症指数(systemic immune-inflammation index,SII)的相关性。【方法】纳入2021年6月至2023年02月昆明医科大学第二附属医院心内科HFpEF患者52例为HFpEF组,同期住院心功能正常者38例为对照组,所有患者均行超声心动图检查。记录入组对象的一般临床资料、血常规、血生化、N端B型利钠肽原(NT-pro BNP)或B型利钠肽前体(PRO-BNP)、超声心动图参数等。通过记录血细胞分析里中性粒细胞绝对值(Neutrophil,NEUT)、血小板含量(platelet,PLT)、淋巴细胞绝对值(Lymphocyte,LYMPH),根据(SII=中性粒细胞绝对值*血小板计数/淋巴细胞绝对值)公式来计算SII值。探讨HFpEF右心功能及结构的超声特征,同时探讨SII值与HFpEF的相关性。【结果】(1)HFpEF组患者的年龄比对照组患者的年龄更大;(2)与对照组相比,HFpEF组中的SII值、尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)均较高,血红蛋白含量(Hemoglobin,HGB)、LYMPH、高密度脂蛋白胆固醇(High density leptin cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(Low Density leptin cholesterol,LDL-C)水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)HFpEF组患者与对照组患者相比,右心功能出现下降,右心扩大明显,三尖瓣返流(Tricuspid regurgitation,TR)、肺动脉收缩压(Systolic pulmonary artery pressure,PASP)、下腔静脉内径(Inferior Vena Cava,IVC)升高及二维右室面积变化分(Right ventricular area change fraction,RVFAC)、三尖瓣环收缩期位移(tricuspid annular plane systolic excursion,TAPSE)、下腔静脉塌陷率下降;右室基底段短径(RVDd base)、右室中间段短径(RVDd mid)、右室舒张末期面积(Right Ventricular End Diastolic Area,RVEDA)、右室收缩末期面积(Right Ventricular End Systolic Area,RVESA)、右室流出道内径(Right Ventricular Outflow tract diameter,RVOTd-1、RVOTd-2、RVOTd-3)、右房内径(Right Atrial Diameter,RADs)、右房收缩末期面积(Right Atrial End systolic area,RAESA)、肺主动脉(Main pulmonary artery,MPA)均增大,差异有统计学意义(P<0.05);(4)经Logistic回归分析提示SII(OR=4.636,95%CI:1.877-11.454,P<0.05)、PASP(OR=1.015,95%CI:1.006-1.025,P<0.05)、RVDd(OR=3.927,95%CI:1.602-9.625)、RADs(OR=10.924,95%CI:3.954-30.178)是HFpEF的危险因素;(5)据ROC曲线分析结果表示SII诊断HFpEF的特异性为65.8%,灵敏度为84.6%,最佳临界值为482.77,曲线下面积(Area under the curve,AUC)为0.745,95%可信区间(CI):0.634-0.857(P<0.05)。【结论】(1)HFpEF组患者的SII值较高,SII值升高可能是HFpEF的危险因素;(2)HFpEF组患者的右心功能较对照组患者下降,同时伴有右心扩大的结构改变;(3)RVDd、PASP、RADs可能是HFpEF的预测因素。

关键词： 上尿路腔内碎石术   全身炎症反应综合征   危险因素   列线图  

摘要： 目的:探讨上尿路腔内碎石术后全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)的危险因素,筛选出相关指标,并制定预测术后SIRS发生风险的列线图,以此为临床早期准确判断接受上尿路腔内碎石术患者的预后提供精简的方法。方法:本研究通过收集2020年6月至2021年12月在赣南医学院第一附属医院接受上尿路腔内碎石术包括经皮肾镜碎石术(percutaneous nephrolithotripsy,PCNL)、输尿管硬镜碎石术(ureteroscopic lithotripsy,URL)和输尿管软镜碎石术(flexible ureteroscopy lithotripsy,FURL)1020例患者为研究对象,收集患者的一般资料和各项临床数据,并将患者按照7:3比例随机分为训练集组和验证集组。根据训练集组患者术后是否发生SIRS分为发生SIRS组与未发生SIRS组,应用SPSS26.0对两组数据各项指标进行单因素分析及多因素logistic回归分析,以确定影响术后发生SIRS的独立危险因素,并根据这些因素构建列线图。最后绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)与临床决策曲线(decision curve analysis,DCA)以验证模型的准确性和评估其临床应用价值。结果:本研究纳入1020例患者,其中训练集组有714例,验证集组有306例。训练集组中上尿路腔内碎石术后发生SIRS患者91例,未发生SIRS患者623例,SIRS发生率为12.75%。单因素分析结果显示患者术前尿培养,结石数量,术前结石最大径,术前血小板,术前尿亚硝酸,术前尿白细胞,手术时长为上尿路腔内碎石术后发生SIRS的危险因素(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果发现术前尿培养阳性(OR=2.224,95%CI:1.310-3.776,P=0.003),术前结石最大径越大(OR=1.034,95%CI:1.014-1.056,P=0.001),术前尿亚硝酸盐阳性(OR=2.566,95%CI:1.172-5.620,P=0.018)为上尿路腔内碎石术后发生SIRS的独立危险因素。选取术前尿培养,术前结石最大径,术前尿亚硝酸盐三个指标建立列线图并对其进行验证,根据训练集组与验证集组的ROC曲线下面积,得出其AUC分别为0.678、0.681,表明模型具备一定的预测效能,在训练集组和验证集组中DCA决策曲线显示列线图具有临床实用性。结论:术前尿培养阳性,术前结石最大径越大,术前尿亚硝酸盐阳性为上尿路腔内碎石术后出现SIRS的独立危险因素,依据这三个独立危险因素而构建的列线图模型可以预估个体患者发生SIRS的风险概率,这可为临床医生提供一个简便有效的评估方式。

关键词： 社区获得性肺炎   严重程度   全身炎症反应指数   预测价值  

摘要： 目的:观察成人社区获得性肺炎(Community-acquired pneumonia,CAP)患者的临床特征、危险分层、预后情况,探讨全身炎症反应指数(Systemic inflammation response index,SIRI)在成人CAP严重程度中的预测价值。方法:1.回顾性收集2019年1月1日至2020年12月31日于遵义医科大学第三附属医院住院诊断的498例成人CAP患者的临床资料,作为训练队列。根据2016年中国成人CAP诊断和治疗指南分为重症CAP组(n=175)与非重症CAP组(n=323),根据CURB-65评分标准分为低危组(n=330)、中危组(n=118)、高危组(n=50),根据PSI评分标准分为低危组(n=287)、中危组(n=156)、高危组(n=55),比较各组的临床特征、预后情况。2.计算并比较重症CAP组与非重症CAP组的SIRI、NLR、MLR、PLR、SII。采用Spearman相关分析SIRI、NLR、MLR、PLR、SII与传统的CRP的相关性,进一步分析SIRI与WBC、ALB、D-D、CURB-65、PSI的相关性。以重症肺炎为结局,采用受试者工作特征曲线(ROC)计算出SIRI、NLR、MLR、PLR、SII、CRP、SO、CURB-65、PSI的曲线下面积、截断值、敏感度及特异度。根据ROC计算出SIRI、NLR、MLR、PLR、SII的截断值,联合年龄、性别、吸烟史、合并疾病采用多因素Logistic回归分析重症肺炎的独立影响因素。3.以SIRI截断值为界限对2021年1月1日至2022年6月30日于遵义医科大学第三附属医院住院诊断的273例成人CAP患者进行CAP重症的预测效能验证。结果:1.与非重症CAP组相比,重症CAP组年龄分布为75(65,81)岁,男性约为女性2倍;吸烟及合并高血压、冠心病、脑血管疾病、慢性阻塞性肺疾病者容易发展为重症(P<0.05);重症CAP组呼吸困难更明显,CRP、WBC、D-D、FIB更高,ALB、SO更低,病程更长,机械通气使用率更高,入住ICU人数更多,死亡人数更多(P<0.05)。以CURB-65、PSI为标准,与低危组相比,中高危组年龄更大,合并冠心病、脑血管疾病、慢性阻塞性肺疾病更多(P<0.05);CRP、WBC、D-D随危险分层增加呈递增趋势,ALB随危险分层增加呈递减趋势,机械通气使用率、死亡人数随危险分层增加呈递增趋势(P<0.05)。2.重症CAP组的SIRI、NLR、MLR、PLR、SII高于非重症CAP组(P<0.05);SIRI、NLR、MLR、PLR、SII与CRP相关性最高的为SIRI,其r值为0.63,进一步发现SIRI与WBC、ALB、D-D、CURB-65、PSI均有一定的相关性,其r值分别为0.8、-0.49、0.53、0.48、0.55(P<0.05)。进行ROC分析,以重症肺炎为结局变量,发现AUC最高的为SIRI,其AUC为0.935,约登指数为0.765,截断值为4.33,敏感度为88%,特异度为88.5%,其价值优于NLR、MLR、PLR、SII、CRP、SO、CURB-65、PSI(P<0.05)。进行Logistic回归分析发现:SIRI、NLR为重症肺炎的独立影响因素;SIRI≥4.33的人患重症肺炎的可能性是SIRI<4.33的人的16.086倍,NLR≥7.24的人患重症肺炎的可能性是NLR<7.24的人的7.831倍(P<0.05)。3.以SIRI截断值为4.33预测重症肺炎的敏感度、特异度、阴性预测值、阳性预测值、AUC分别为83.7%、84%、92%、71%、0.838。结论:以SIRI 4.33为截断值能较好地预测成人社区获得性肺炎严重程度。

关键词： 乳腺癌   新辅助化疗   全身免疫炎症指数   血红蛋白与红细胞分布宽度比值   全身炎症反应指数   病理完全缓解  

摘要： 目的:以中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)、血小板与淋巴细胞比值(platelet to lymphocyte ratio,PLR)、淋巴细胞与单核细胞比值(lymphocyte to monocyte ratio,LMR)、血红蛋白与红细胞分布宽度比值(Hemoglobin/Red Cell Distribution Width Ratio,HRR)、全身免疫炎症指数(systemic immune-inflammation index,SII)、全身炎症反应指数(systemic inflammation response index,SIRI)、泛免疫炎症值(pan-inmmune-inflammation value,PIV)为指标,探讨其对乳腺癌新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NAC)后病理缓解程度的预测效能。方法:回顾性分析2014年1月-2021年12月在我院接受NAC并行乳腺癌根治术的172例女性乳腺癌临床病理资料,以病理完全缓解(pathological complete response,pCR)作为NAC疗效的评判指标,化疗前NLR、PLR、LMR、SII、SIRI、PIV、HRR水平cut-off值通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线的约登指数来确定,并根据cut-off值,将各炎性指标分为高水平组和低水平组,并对其与pCR的相关性进行单因素分析和多因素logistic回归分析筛选出pCR的预测因子,预测效能采用受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:本研究共纳入172例接受NAC的患者,年龄段为28岁至72岁,中位年龄为52岁,pCR率为24.4%(42/172)。单因素分析显示:pCR与组织学分级、淋巴结状态、ER、PR、HER-2状态、NLR、PLR、LMR、SII、SIRI、PIV、HRR水平有显著相关性(P<0.05);低NLR组(<1.95)、低PLR组(<185.36)、低SII组(<634.04)、低PIV组(<251.81)的乳腺癌患者观察到较高的pCR率。多因素分析显示:组织学分级(OR:3.946,95%CI:1.130-13.785,P=0.031)、HER-2状态(OR:0.031,95%CI:0.02-0.435,P=0.010)、LMR水平(OR:5.448,95%CI:1.115-26.629,P=0.036)、SIRI水平(OR:0.133,95%CI:0.20-0.893,P=0.033)、HRR水平(OR:34.721,95%CI:4.377-275.435,P<0.001)是乳腺癌患者NAC后pCR的独立预测指标。组织学分级高、HER-2过表达、LMR高水平(≥3.9)、HRR高水平(≥3.09)、SIRI低水平(<0.76)的乳腺癌患者更易达到pCR。将影响pCR的指标纳入绘制logistic模型预测NAC后pCR的ROC曲线,得出AUC值为0.924,95%置信区间:0.876-0.971,特异度为83.8%,敏感度为90.5%。结论:1.在接受NAC的乳腺癌患者中,组织学分级、HER-2表达状态、LMR、SIRI、HRR水平是乳腺癌患者NAC后是否达pCR的独立预测因素(P<0.05),可作为乳腺癌患者NAC后预测PCR的有效参考指标。2.相较于其他指标,SIRI对pCR的预测效能更优。3.整合NAC前组织学分级、HER-2表达状态及LMR、SIRI、HRR水平可以更好的帮助预测NAC后pCR率。

关键词： 肝细胞癌   长链非编码RNA   自噬   列线图   预后标志   TCGA   ICGC   肝细胞癌   全身炎症标志物   微波消融   列线图   预后标志   长链非编码RNA   ZEB1-AS1   自噬   肝细胞癌   增殖  

摘要： 研究背景和目的:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,由于其高侵袭性等生物学特性,极易出现肝内和肝外复发和转移,HCC患者总体生存获益不容乐观。由于HCC存在高度异质性,患者容易出现化疗耐药和术后转移复发。所以,迫切需要探索HCC发生的分子机制,寻找早期诊断和治疗的精准靶点,以提高HCC患者的预后生存率。而探索发现可靠、准确的HCC预后生物标志物,提高风险预测能力和准确度,帮助临床医生制定个体化治疗方案,从而改善患者生存期就显得尤为迫切。自噬是一种多步骤的溶酶体降解过程,即细胞在环境压力刺激等条件下,形成自噬体通过溶酶体降解清除受损的细胞器、蛋白聚集物和细胞内的病原体,以达到满足自身代谢需要和细胞器更新作用,这一生理过程对细胞生存、分化、发育和调节维持细胞内环境稳定至关重要。自噬过程业已被证明参与多种疾病的病理生理过程,如神经退行性疾病,衰老和癌症。尤其是在癌症的晚期阶段,自噬的失调可促进肿瘤细胞的迅速增殖。越来越多的研究证据表明自噬失调与肝脏疾病(脂肪肝、肝硬化等)尤其是HCC的发病机理密切相关,特定的自噬相关基因可确立为癌症潜在的治疗靶点。此外,炎症反应已被公认为癌症特征,证据表明全身炎症反应在恶性肿瘤的发生、进展、转移和治疗抵抗中起着至关重要的作用,而且与肿瘤较差的预后相关。炎症反应可以通过促进血管生成、破坏DNA结构和抑制细胞凋亡等引起细胞因子和炎症介质上调,从而诱发肿瘤增殖和转移。HCC肿瘤微环境中炎性细胞浸润程度、肿瘤纯度与肿瘤的恶行侵袭及高复发风险密切相关。恶性肿瘤患者的全身炎症反应可表现为外周血细胞计数的变化,包括中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、血小板、球蛋白的数值变化等。而这些炎性反应标志物已被证明在各种恶性肿瘤中是独立的预后因素,可以用来预测HCC患者预后。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)被定义为长度超过200个核苷酸不能编码蛋白质的RNA转录本,其可参与多种信号传导调控过程,发挥支架作用(scaffold),诱饵作用(decoy),引导作用(guide)和信号作用(signal)等生物学功能,参与调控机体基因表达、RNA衰变、微小RNA调控和蛋白质折叠等。近年来,肿瘤领域的研究热点聚焦于lncRNA,人们发现多种lncRNA在肿瘤中具有差异性表达,lncRNA的异常表达与癌症的发生、进展和预后密切相关,在恶性肿瘤的发生、发展过程中参与了多种生物学过程的调控,甚至是关键点的调控,其中包括对自噬和炎症反应的影响。随着高通量RNA测序技术的快速进步,利用lncRNA作为生物标志物来辅助癌症检测、治疗或预测预后的潜力逐渐显现。本课题第一部分中我们首先分析并整合来自癌症基因组图谱(TCGA)和国际癌症基因组联盟(ICGC)数据库的微阵列数据,筛选并鉴定了四种与自噬相关的lncRNA(分别为BACE1-AS、SNHG3、MIR210HG和ZEB1-AS1)与HCC预后生存密切相关,并基于此构建肝癌预后生存预测模型,研究证实该模型可以准确预测HCC患者的临床结局且验证可靠。功能分析表明高危患者表达的lncRNA主要富集于自噬和癌症相关通路。ssGSEA分析显示HCC肿瘤微环境中炎性反应、免疫浸润、肿瘤纯度与肿瘤的恶性侵袭及高复发风险密切相关。虽然借助于生物信息学分析及分子基因技术能更好地评估HCC预后,但因存在有创性操作及实验室检测技术复杂难以推广,其临床价值在实践操作中往往受限。所以在本课题的第二部分中我们更多聚焦发现临床上获取简单、客观的术前指标来构建预测HCC预后生存的预测模型。HCC患者的全身炎症反应可表现为外周血细胞计数的变化,包括中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、血小板、白/球蛋白的数值变化等。基于这些细胞计数,外周炎症反应标志物包括白蛋白与球蛋白比率(AGR)、中性粒细胞与淋巴细胞比率(NLR)、淋巴细胞与单核细胞比率(LMR)和血小板与淋巴细胞比率(PLR)已被分别证明在恶性肿瘤中是独立的预后因素,可以用来预测HCC患者预后。然而,既往的研究中仅仅只关注其中一个或者两个炎症反应标志物,尚未有研究评估包括AGR在内的所有上述炎症标志物与HCC预后的临床意义,尤其是在接受微波消融(MWA)治疗的HCC患者。而基于多个独立危险因素建立的列线图是一种具有高可靠性的统计模型。所以,我们第二部分的临床研究综合探讨了术前全身炎症反应标志物AGR,NLR,LMR和PLR在HCC预后预测中的意义及准确性,并筛选出相关独立预测因素建立列线图以预测接受MWA治疗后HCC患者的总体生存期。本课题的第一、二部分分别依托生物信息学分析和临床实验室检查指标,基于自噬相关lncRNA与全身炎症反应标志物构建肝癌预后模型并予以验证。第三部分

关键词： 参附注射液   老年患者   髋部骨折   全身炎症   术后认知功能障碍  

摘要： 目的:探讨参附注射液影响全身炎症对椎管内麻醉下老年髋关节骨折患者术后认知功能障碍的临床疗效观察。方法:纳入2021年7月至2022年7月在山东中医药大学附属医院,实施椎管内麻醉下老年髋部骨折手术患者共100例,患者经中医辨证为阳气虚证。本实验已获得山东中医药大学附属医院伦理委员会批准,临床研究方案编号:SZYA20210603-A1/2021-6-3。采用随机数字表法将患者分为实验组(围术期应用参附注射液(SFI)组)和对照组(空白对照组),每组各50例。设定纳入标准、排除标准和脱落标准。患者入院后进行术前止痛,基础病治疗,术前抗凝等常规治疗。观察组:在常规治疗的基础上入手术室后,术中静脉滴注SFI 50ml,用5%葡萄糖注射液250ml稀释后使用,滴定速率以60滴/分。对照组:入手术室后,在常规治疗的基础上术中静脉滴注5%葡萄糖注射液300ml,速率保持一致。如果患者术前存在视听、认知、交流障碍者;合并重要脏器功能不全,如严重心脏和肺部疾病,肝、肾功能不全;有长期精神类疾病及用药史;;有麻醉药物过敏史或者参与其他临床试验。则不予纳入。术中患者:麻醉方式改变或围术期出现严重并发症或意外同样不予纳入。术后:病人依从性较差;观察期间因个人原因自愿退出者或失访,无法继续本研究者,则认为患者脱落,同样不予纳入。一般资料。统计并记录术前参与者的年龄、接受教育年限、已存在基础病、ASA分级、实验室检查结果指标等一般资料。记录术中手术时间、出血量以及药品使用情况。记录术后参与者7天内POCD发生率、7天内非术后认知功能障碍术后并发症、参与者住院时间、参与者30天全因死亡率、参与者出现的SFI相关不良反应(包括过敏反应,以及其他药物反应)。在术前1d,术后第1d、第3d、第7d评估所有参与者的术后VAS评分;检测并记录患者血清S-100β、NSE,外周血中炎性细胞因子(IL-1、IL-6、TNF-α),免疫细胞(中性粒细胞,白细胞,c反应蛋白)。统计学方法。使用Excel 2021将收集到的数据建立电子数据库。使用SPSS 25.0统计学软件进行数据处理,计数资料采用例数与百分比表示,计量资料进行正态性检验,符合正态分布的以(x±s)表示,不符合正态分布的以M(P25,P75)表示。计量资料的组间比较,正态分布的资料采用两独立样本t检验,非正态分布者采用秩和检验,计数资料的组间比较采用卡方检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:两组患者的性别、年龄、接受教育年限、ASA分级、手术时间及出血量差异无统计学意义,表明两组患者具有可比性。与术前相比,SFI组患者在术后第3天,MMSE评分降低,SFI组患者神经认知功能在术后第3天出现认知功能下降;对照组患者在术后第1天,术后第3天MMSE评分降低,对照组患者神经认知功能在术后第1天,第3天出现认知功能下降。与术前相比,SFI组患者和对照组患者术后第3天的IL-1,IL-6,TNF-α,白细胞,中性粒细胞,c反应蛋白水平均升高,表明SFI组患者和对照组患者术后炎症反应水平升高;与对照组相比SFI组患者,术后IL-1,IL-6,TNF-α,白细胞,中性粒细胞,c反应蛋白水平降低,表明SFI组患者使用SFI能比较合理的调控炎症反应水平。通过两组患者不同时间点IL-1、IL-6、TNF-α,白细胞,中性粒细胞和c反应蛋白水平的比较,表明SFI组在施行SFI干预之后,炎症因子数量比对照组患者明显减少。因此,SFI能够降低高龄髋部骨折患者POCD的发生率,促进患者的术后恢复,其机制可能与SFI降低术后全身炎症水平有关。结论:SFI能够降低椎管内麻醉下老年髋部骨折手术患者POCD的发生率,并减术后轻认知损害程度,其机制可能与降低全身炎症反应,缓解术后疼痛有关。

关键词： 主动脉夹层   高血压   机械牵张   基质金属蛋白酶9   炎症反应  

摘要： 背景:主动脉夹层（Aortic dissection,AD）是指主动脉内膜局部形成破口,高速血流冲击并使内膜/中膜剥离扩展,形成真假两腔的一种危重主动脉疾病。它的发病机制与高血压密切联系,目前普遍认为AD是基于动脉壁本身病变的内在因素,与一系列外因如高血压提供突然的机械应力等共同作用下形成。高血压引起血管发生机械牵张,进而刺激主动脉血管组织处于炎症环境,并且增加血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）中基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase 9,MMP-9）的分泌,降解细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）,使主动脉中膜发生退行性病变,为夹层的发生发展打下基础。有研究发现主动脉血管环的拉伸可上调组织内IL-6、TNF-α、MMP-9的表达水平,AD组织内的炎症因子表达水平上调与周围巨噬细胞浸润之间的关联性已有报道,但是VSMCs受到牵张后是否能上调炎性因子并影响MMP-9的表达水平,这之间的相关性尚未阐明。 目的:构建机械牵张VSMCs模型模拟高血压状态下主动脉血管组织内VSMCs的状态,探究病理性牵张条件下的VSMCs与炎症之间的相关性及同细胞水平炎性因子IL-6、TNF-α,与MMP-9之间的相互作用及可能存在的通路。 方法:（1）免疫组化、Western blot验证AD患者主动脉组织与移植供体主动脉组织上MMP-9的表达情况;运用Flexcell FX-5000TM细胞牵张拉伸应力加载培养系统使用不同拉伸力和拉伸时间干预VSMCs,Western Blot分析细胞MMP-9的表达。（2）免疫组化验证AD患者主动脉组织与移植供体主动脉组织上IL-6及TNF-α的表达情况,Western Blot和RT-q PCR分析VSMCs牵张后IL-6及TNF-α的表达。使用RT-q PCR验证IL-1、IL-12、IL-18、TGF-β、TNF-R2、AP-1。（3）String数据库预测IL-6、TNF-α、MMP-9之间的关系,使用外源性IL-6、TNF-α与牵张共同干预,采用Western Blot验证他们互相及对MMP-9的影响。（4）利用mRNA测序分析牵张后的VSMCs,使用KEGG和GO通路富集筛选通路及差异基因,使用RT-q PCR进行差异基因的验证。使用Fluo-4AM钙离子浓度荧光定量证明牵张开放VSMCs的钙离子通道。使用String数据库预测及生物信息学分析结果。 结果: （1）AD患者主动脉组织中MMP-9表达上调;使用20%拉伸率,频率1HZ可以成功构建牵张VSMCs细胞模型,牵张3h MMP-9蛋白表达量上升,牵张6h继续上调。 （2）AD患者主动脉组织中IL-6、TNF-α表达上调;VSMCs牵张后显著上调IL-6、TNF-α表达量及IL-1、IL-2、TGF-β、AP-1的mRNA表达量。 （3）IL-6与TNF-α能促进彼此在VSMCs上的表达,加入IL-6（300ng/m L）干预12h后牵张6h可上调MMP-9表达。 （4）mRNA转录组学发现氧化磷酸化通路激活,NDUFB7表达增加。Fluo-4AM钙离子浓度荧光定量证明牵张导致钙离子通道开放,氧化磷酸通路活化,NUDFB7 mRNA水平上调。 （5）String数据库分析发现NDUFB7可能通过MT-ND1调控IL-6、TNF-α的表达及激活炎症通路,进而影响MMP-9的表达。 结论:使用20%拉伸率,频率1HZ可以成功构建牵张VSMCs细胞模型,机械牵张开放VSMCs中的钙离子通道,造成胞内钙离子浓度的升高,影响线粒体氧化磷酸化功能,导致VSMCs持续分泌炎症因子,造成细胞周围炎症环境,炎症因子与牵张共同作用促进VSMCs分泌MMP-9。