关键词： IL-17-GFP转基因小鼠   牙周炎   转录组   腺相关病毒   Th17细胞   IL-17  

摘要： 目的:牙周炎是由菌斑微生物导致的牙周组织炎症疾病,其发生发展还与宿主的免疫反应密切相关。研究发现牙周炎的发生发展与Th17细胞及IL-17关系密切,慢性牙周炎患者牙龈组织中的Th17细胞数量和IL-17水平较健康人群明显升高,外周血Th17细胞的数量、IL-17和干扰素-γ表达水平在慢性牙周炎患者中也显著升高。文献报道Th17细胞的功能及其产生的细胞因子可能会随着环境的变化而改变,而在牙周炎症或牙周健康环境下Th17细胞的功能差异有待进一步阐明。因此,本研究旨在建立牙周炎IL-17-GFP转基因小鼠模型基础上,分选牙周健康小鼠和牙周炎小鼠体内的Th17细胞,通过高通量转录组测序分析Th17细胞的基因表达谱差异,并进一步验证筛选出的关键目的基因与Th17细胞功能变化及牙周炎发生发展的关系,以期为牙周炎治疗寻找新的潜在靶点。 方法:本实验利用IL-17-GFP转基因小鼠建立实验性牙周炎模型,通过Micro-CT和免疫荧光分别检测牙槽骨吸收及炎症因子表达情况。通过细胞流式分选出两组小鼠脾脏中的Th17细胞并进行高通量转录组测序及生信分析,结合信号通路富集分析及基因集富集分析筛选出牙周炎组相对健康组Th17细胞表达差异显著并有研究意义的目的基因。最后,通过RNA干扰技术及AAV病毒载体在牙周炎小鼠牙周局部抑制筛选的目的基因表达,结合免疫荧光、Micro-CT、H&E染色等分析病毒转染效率、目的基因沉默效率、牙槽骨吸收、牙周组织破坏及Th17细胞相关炎症因子表达。 结果: 1、成功构建IL-17-GFP转基因小鼠的实验性牙周炎模型,发现相比牙周健康组,牙周炎组小鼠的牙槽骨吸收明显,并且牙周组织中IL-17和GM-CSF表达显著升高,IL-10表达显著降低。 2、转录组测序及生信分析结果显示两组Th17细胞的基因表达谱差异明显:相较牙周健康组,牙周炎组964个基因表达显著升高,1710个基因表达显著降低。通过信号通路富集分析发现牙周炎组上调基因在“Th17细胞分化”“T细胞受体信号通路”“细胞因子-细胞因子受体相互作用”“Th1和Th2细胞分化”和“炎症性肠病”等通路富集。Reactome富集分析结果显示“Zap70易位至免疫突触”表达显著上调。进一步对“Th17细胞分化”通路进行基因及富集分析发现Zap70基因表达差异较大且具有研究意义。基于此,选择Zap70作为目的基因进一步验证其在Th17细胞功能变化和牙周炎发生发展中的作用。 3、局部牙周注射AAV均成功对牙周组织进行感染,且AAV-sh-Zap70组显著抑制Zap70表达。进一步分析发现沉默牙周组织Zap70表达可显著改善牙周炎小鼠的牙槽骨吸收,且IL-17、IL-23r和GM-CSF的表达亦明显降低。 结论: 1、实验性牙周炎小鼠牙周组织IL-17和GM-CSF表达明显升高,IL-10的表达降低,与临床牙周炎的免疫因子表达特征高度相似。 2、Th17细胞的高通量转录组测序和生信分析发现Zap70与Th17细胞功能变化可能存在联系。 3、通过AAV转染沉默牙周组织的Zap70可显著改善牙周炎小鼠的牙槽骨吸收、牙周组织破坏,抑制促炎因子表达,提示Zap70可作为牙周炎治疗的潜在靶点。

关键词： 糖尿病肾脏疾病   冠状动脉钙化   微炎症状态   中医证型  

摘要： 研究目的:探究微炎症状态的相关指标与DKD非透析患者并发CAC之间的关联,总结DKD非透析患者合并CAC中医证型的分布规律特点,寻找DKD合并CAC与微炎症状态及中医证型之间的联系。研究方法:本课题选取横断面调查方法,选取成都中医药大学附属医院肾病一科2021年12月至2022年12月的DKD非透析住院患者,根据MSCT结果采用Agats ton钙化评分进行分级,分为无钙化组、少量钙化组(1～10分)、轻度钙化组(11～100分,)、中度钙化组(101～400分)和重度钙化组(≥400分),记录患者的基本信息(年龄、性别、BMI、既往病史、吸烟史)、实验室指标(WBC、N、L、NLR、Plt、PLR、Hb、Hb A1c、hs-CRP、Ca、P、Mg、i PTH、AKP、Alb、Scr、BUN、UA、e GFR)及中医四诊资料,通过单因素差异性分析、logistic回归分析,研究DKD非透析患者CAC情况与微炎症状态指标及中医证型的相关性。结果:1.最终纳入103例DKD患者中,无钙化组44例,占比42.72%,有钙化组59例,占比57.28%,其中轻度钙化组16例(15.53%),中度钙化组22例(21.36%),重度钙化组21例(20.39%)。***非透析患者中,无钙化组、轻度钙化组、中度钙化组、重度钙化组的年龄、NLR、PLR、hs-CRP、P、i PTH、AKP组间差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归结果显示:年龄(OR=1.052,P=0.021);NLR(OR=1.972,P=0.002);hs-CRP(OR=1.263,P=0.002);P(OR=9.879,P=0.000)与DK D非透析患者CAC积分分级呈正相关关系。***非透析合并CAC的患者本虚证以气阴两虚证最为常见(26,44.07%),其后依次为阴阳两虚证(16,27.12%)、阴虚燥热证(11,18.64%)、脾肾气虚证(6,10.17%)。标实证以湿热证最多见(22,37.29%),其后依次为瘀血证(18,30.51%)、痰瘀证(16,27.12%)、寒湿证(3,5.09%)。钙化组中:气阴两虚证患者NLR、P水平与非气阴两虚证组差异存在统计学意义(P<0.05),阴阳两虚证患者hs-CRP水平与非阴阳两虚证患者差异具有统计学意义(P<0.05);痰瘀证患者血P、NLR水平与非痰瘀证患者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.年龄、NLR、hs-CRP、P与DKD患者CAC发生相关,微炎症状态指标中NLR、hs-CRP与CAC存在密切联系。***合并CAC的患者的本虚证以气阴两虚证为主,逐渐发展为阴阳两虚证,标实证以湿热证为主。气阴两虚证患者NLR、P水平高于非气阴两虚证,阴阳两虚证患者hs-CRP水平明显高于非阴阳两虚证患者;痰瘀证患者血P、NLR水平高于非痰瘀证患者。

关键词： 碳酸司维拉姆   血液透析   血磷   炎症因子  

摘要： 目前,对于因肾脏功能衰竭行血液透析治疗的人数呈逐年上涨的趋势,在治疗期间出现高磷血症及微炎症状态是引起血管钙化的关键性因素。近些年,在针对血磷水平及微炎症状态,部分患者在血液透析的基础上联合磷结合剂,血磷的控制效果仍达不到理想的效果。因此,考虑血液透析联合碳酸司维拉姆进一步探索其在调节血磷水平及微炎症状态方面的临床疗效。 目的:评估碳酸司维拉姆联合血液透析对血磷水平及微炎症状态的临床疗效,并进一步探究在一定时间内观察碳酸司维拉姆的治疗效果与治疗时间长短的关系。 方法:本研究选取2021年3月至2022年3月于河北大学附属医院肾脏内科血液净化中心的维持性血液透析患者100例,随机分为观察组51人(血液透析联合碳酸司维拉姆)和对照组49人(血液透析联合碳酸钙),对观察组及对照组患者进行6个月的相关药物治疗并随访,于疗程开始、第3个月、第6个月测定并记录患者血磷、CRP(C-反应蛋白)水平、NLR(中性粒细胞水平与淋巴细胞比值)、血钙、PTH(甲状旁腺素)水平及两组患者在治疗期间出现不良反应的发生情况。最后将所得的数据进行整理并使用SPSS Statistics 26进行统计学分析并得出结论。 结果:(1)两组患者试验前基线临床资料的比较:按随机数字表法分组后的两组受试对象在性别、年龄、体重指数、引起慢性肾衰竭原发病(高血压、糖尿病、慢性肾小球肾炎等疾病)等临床特征方面具有可比性,差异无统计学意义(P>0.05)。 (2)两组患者治疗前相关指标的比较:两组患者的血磷、CRP、NLR、血钙、PTH比较无显著性差异(P>0.05);治疗6月后比较:两组患者血磷、CRP、NLR、PTH水平均显著低于治疗前,观察组血磷、CRP、NLR、PTH水平显著低于对照组,观察组血钙水平较治疗前降低,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组治疗6月与治疗3月的血磷达标率及治疗有效率比较:治疗3月时的血磷达标人数为12人,达标率23.52%显著低于治疗6月时的血磷达标人数为23人,达标率45.10%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗3月的总有效率75.40%显著低于治疗6月92.15%,差异有统计学意义(P<0.05)。 (3)在分组治疗期间,两组患者的药物不良反应发生率无差异(P>0.05)。 结论:碳酸司维拉姆联合血液透析可有效降低维持性血液透析患者的血磷水平及改善微炎症状态,并且在本试验研究的时间范围内碳酸司维拉姆的临床疗效与治疗时间长短存在正相关。

关键词： 血脑屏障   神经炎症   全身炎症   中药  

摘要： 血脑屏障是介于血液和大脑之间的高度调节界面，对于维持大脑稳态、保护神经元至关重要。血脑屏障功能障碍与多种中枢神经疾病相关，尤其是神经退行性疾病，而神经炎症是许多神经退行性疾病的共有现象，其与血脑屏障有着复杂的调节关系，从而影响疾病的发展。不仅是神经炎症，血脑屏障同时也向大脑发出全身炎症的信号，二者相互影响。维护血脑屏障完整性、降低通透性一直是治疗神经退行性疾病的重要靶点，如阿尔茨海默病，越来越多的研究发现中药对此发挥良好作用。因此，本文将首先回顾血脑屏障的结构和功能，其次分别从神经炎症和全身炎症探讨炎症与血脑屏障的互作关系，最后阐述中药保护血脑屏障的机制信号通路。

关键词： 金葡菌   创伤   脓毒症   多器官功能衰竭   免疫   铁死亡   GPX4  

摘要： 目的: 脓毒症(Sepsis)是创伤常见的严重并发症,而金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,***)导致的脓毒症具有高的死亡率,但其作用机制仍不清楚。本研究拟探索金葡菌感染的创伤患者与脓毒症和多器官功能衰竭(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS)发病率之间的关系及其作用机制,为临床上脓毒症的早期诊断和针对性的免疫靶向治疗提供新策略和依据。 方法: 1.从“创伤患者生物样本资源库与临床研究数据库”中获得1574例创伤患者,分析脓毒症患者的分布一般特征。研究不同类型病原菌感染患者的脓毒症发生率与死亡情况。 2.构建金葡菌感染脓毒症小鼠模型,观察小鼠重要脏器损伤与炎症免疫反应情况。利用液态悬浮芯片技术对脓毒症模型小鼠外周血进行炎症因子的高通量检测,观察炎症因子的变化情况。并探索IL-6单克隆抗体在脓毒症小鼠中的靶向治疗作用,观察其对脓毒症小鼠的生存曲线和体重的影响。流式技术分析T淋巴细胞上的共刺激分子CD28在金葡菌诱导的脓毒症小鼠外周血中的表达变化。对CD3+CD28+的T细胞进行蛋白组学分析,观察差异蛋白的表达水平变化。 3.为了验证蛋白组学的结果,基于GEO数据集和体内实验探索了铁死亡在脓毒症多器官损伤中的作用。从GEO数据库下载4个脓毒症数据集[包括2个训练数据集(GSE26378和GSE26440)和2个验证数据集(GSE11755和GSE11281)]进行分析,并采用GO和KEGG通路富集分析进行功能注释。然后,构建蛋白-蛋白互作网络(PPI)和聚类分析,获得hub-铁死亡相关基因(hub-FRG)并使用ROC技术分析其诊断效能。通过一致性聚类分析获得脓毒症亚群,并研究hub-FRG与免疫调控之间的关系。 最后,利用脓毒症动物模型,检测小鼠外周血重要器官生化酶学及病理组织染色,通过West blot和免疫荧光实验验证hub-FRG在重要器官中的表达,以及使用ATP实验检测了重要器官中线粒体的功能。 结果: 1.根据临床数据分析发现金葡菌感染的患者较其他G+菌感染患者更易发展为脓毒症。金葡菌诱导的脓毒症较其他脓毒症的死亡率显著增高。金葡菌诱导的脓毒症患者所发生的多器官功能衰竭主要表现在肺脏(81.25%),肝脏(68.75%)和肾脏(37.5%)。 2.通过建立不同类型的脓毒症小鼠模型,观察发现金葡菌诱导的脓毒症小鼠的肺、肝和肾重要器官损伤较大肠杆菌组和LPS组脓毒症小鼠明显加重;炎症因子检测显示:与对照组(大肠杆菌组和LPS组脓毒症小鼠)比较,金葡菌诱导的脓毒症小鼠外周血中IL-6表达水平显著升高;IL-6单克隆抗体在不同脓毒症模型小鼠中的靶向治疗结果显示:IL-6单克隆抗体可以有效的分别提高金葡菌、大肠杆菌和LPS所诱导的脓毒症小鼠的生存时间,并可增加其体重。流式技术分析显示:CD3+的T淋巴细胞上的共刺激分子CD28在金葡菌诱导的脓毒症小鼠外周血中的表达升高显著;CD3+CD28+的T细胞蛋白组学结果分析显示:共有127个关键差异表达蛋白,Cytohubba软件计算出排名前10的重要关键差异表达蛋白(Key-DEPs),即:Gpx1、Hsp90b1、Gpx4、Hspa5、Ywhab、Atp2a2、P4hb、Glud1、Ywhag和Got2。此外,通过Cytoscape Clue GO观察Key-DEPs的生物学过程和KEGG分析,发现这些差异表达蛋白主要富集在铁死亡、谷胱甘肽代谢、溶酶体和内质网蛋白质加工等的生物调控过程。 ***数据集验证上述蛋白组学结果展示:在GSE26378和GSE26440数据集中共获得63个差异表达铁死亡相关基因(DE-FRGs)。GO和KEGG分析发现DE-FRGs显著富集在铁死亡、线粒体、自噬体和氧化还原酶活性。蛋白-蛋白互作网络发现3个重要模块(MCODE),并与差异表达线粒体功能相关基因(DE-MFRGs)交集获得4个Core-FRGs(FTH1、GPX4、ACSL1和ACSL6)。然后,通过验证集(GSE11755和GSE11281)筛选出Hub-FRG(GPX4),这些结果与蛋白组学分析一致。随后,ROC分析显示,GPX4在脓毒症的诊断中是一个具有良好应用价值的生物标志物。另外,无监督聚类分析获得4个铁死亡表达差异的亚型(Cluster),并对Cluster1(sepsis)和Cluster2(control)进行免疫细胞浸润和免疫检查点研究发现,与Cluster2相比,Cluster1中的免疫细胞群表达水平有7种显著上调,10种明显下调。且免疫检查点基因表达水平有2个显著上调(CD274 and HAVCR2)和1个显著下调(TIGIT)。Pearson相关性分析显示GPX4与免疫细胞中Neutr

关键词： 多发性骨髓瘤   全身炎症反应   肾损伤  

摘要： 目的全身炎症反应(Systemic Inflammation Response SIR)与新诊断多发性骨髓瘤(Newly diagnosed multiple myeloma NDMM)的肾功能损害的相关性。方法我们对2018年1月至2021年9月山西省肿瘤医院收治的175例MM患者进行了回顾性研究,所有患者分为肾损伤组(Renal Injury RI)和无肾损伤组(Non-Renal Injury non-RI),对于两组间各变量的比较,连续变量使用独立样本t检验或Kruskal-Wallis检验,分类变量之间的比较使用卡方检验,使用Logistic回归分析检验各炎症指数与肾功能不全的相关性,Spearman相关分析被用来证实炎症指数与各临床变量的相关性。线性回归分析确认NLR、SII与e GFR的线性相关关系,受试者工作曲线(ROC)被用来评价NLR、SII对肾功能不全的预测价值。P<为0.05(双侧)被认为差异有统计学意义。使用SPSS 26.0版本(IBM SPSS统计)进行统计分析。结果1.研究共纳入了175名患者,表1显示了RI组与non-RI组患者的特征。RI组患者白细胞计数、血红蛋白、中心粒细胞计数、淋巴细胞计数、β2-微球蛋白、白蛋白、NLR、SII显著高于non-RI(P<0.05);但是RI患者LMR水平显著低于non-RI(P<0.05);两组间在性别占比、血小板计数、单核细胞计数、Ca2+、PLR方面无显著差异(P>0.05)。2.表2通过单因素Logistic回归分析显示β2-Microglobular、NLR、SII与多发性骨髓瘤的肾损伤发生显著相关。多因素Logistic回归分析表明PLR、LMR不是多发性骨髓瘤肾损伤的危险因素,而β2-Microglobular(OR,1.57;95%CI:1.34-1.79,P<0.001)、NLR(OR,1.43;95%CI:1.16-1.77,P=0.001)、SII(OR,1.02;95%CI:(1.01-1.03),P=0.011)与多发性骨髓瘤肾损伤存在独立相关。3.表3通过相关性分析结果显示β2-Microglobular、NLR、SII与e GFR显著的负相关关系,其中β2-Microglobular与e GFR存在强相关。表4通过线性回归显示,在完全调整以后,NLR、SII与e GFR仍保持着线性负相关关系,NLR每升高1个单位,e GFR下降8.89(β:-8.89;95%CI:-11.01--6.73;P<0.001);SII每升高1个单位,e GFR下降0.02(β:-0.02;95%CI:-0.03--0.01 P<0.001)。4.表5进行ROC分析以β2-Microglobular、NLR、SII评估在检测MM患者中肾损伤的有用性,β2-Microglobular、NLR、SII的AUC分别为0.930(95%CI:0.891-0.969;Cut-of value:0.794;Sensitivity(%):70.3;Specificity(%):52.1)、0.720(95%CI:0.635-0.806;Cut-of value:1.834;Sensitivity(%):40.8;Specificity(%):89.2)、0.652(95%CI:0.567-0.738;Cut-of value:362.86;Sensitivity(%):45.3;Specificity(%):72.3),三个指标联合预测的AUC为0.940,(95%CI:0.904-0.976;Cut-of value:0.587;Sensitivity(%):77.4;Specificity(%):69.4)。结论NLR、SII可用于评估MM患者的肾损伤风险。NLR、SII较高的MM患者更有可能处于肾损伤高风险中,同时,NLR与MM患者肾损伤呈负相关,因此,在MM患者的检查中应更加重视NLR、SII指标。

关键词： 尿液金属   全身性免疫炎症   炎症标志物   联合暴露  

摘要： 目的:在中国,金属污染的主要原因是有色金属采矿和冶炼作业导致的工业污染。暴露于金属会引起炎症反应并破坏人体免疫系统。然而,很少有研究探索多种金属共同暴露对与人类免疫功能相关的炎症标志物的潜在影响。因此,本研究旨在监测冶炼场地(暴露区)及参照地区居民体内金属暴露水平及其影响因素,并探讨体内多金属混合暴露与炎症标志物的关联,揭示金属对全身免疫炎症的影响。 方法:本研究为横断面研究,收集了居住在冶炼地区以及参照地区居民的流行病学资料以及生物样本,通过电感耦合等离子体质谱联用仪测定尿液中16种金属的浓度,利用多元线性回归模型探讨研究人群尿液金属浓度水平的影响因素。利用全自动生化分析仪测定血中血小板计数、中性粒细胞计数以及淋巴细胞计数,并由此获得全身免疫炎症指数(Systemic immune inflammation index,SII)、血小板-淋巴细胞比值(Platelet-lymphocyte ratio,PLR)和中性粒细胞-淋巴细胞比值(Neutrophil-lymphocyte ratio,NLR)三种炎症标志物水平;采用多因素线性回归模型以及限制性立方样条图探讨尿中金属浓度与炎症标志物的关系,并使用Quantile g-computation和贝叶斯核机回归(Bayesian kernel machine regression,BKMR)模型探讨多金属混合暴露对炎症标志物的影响。 结果:1.本研究共纳入609名研究对象,其中暴露区396人,参照区213人。研究人群平均年龄为45.44岁,男性占比为57.14%。暴露组与参照组人群年龄、BMI分布无明显差异。研究人群尿液中有12种金属的检出率高于70%,锌的浓度最高,锑的浓度最低。暴露组人群尿液中钴、铅、砷、硒、镉、锌、锑、铊等8种金属浓度水平显著高于参照组人群(P<0.05)。年龄、性别、文化程度、经济水平、吸烟、饮酒、职业是影响体内金属浓度水平的主要因素。 2.单金属模型发现有9种金属与SII以及NLR水平存在正向关联,有7种金属与PLR水平存在正向关联。锶与SII、PLR和NLR均存在负向关联。多金属模型结果显示,位于锶第四分位数浓度的研究对象相对最低分位数,SII减少0.35(95%CI:-0.49,-0.21)。位于金属锑、铅最高四分位数的研究对象与最低四分位相比,SII分别升高0.39(95%CI:0.22,0.56),0.42(95%CI:0.23,0.61);在与PLR的关联中,与最低分位的研究对象相比,位于金属锑、铅最高四分位的研究对象PLR分别升高0.29(95%CI:0.18,0.40),0.14(95%CI:0.02,0.27),金属锶第四分位数相对最低分位数PLR减少0.15;在与NLR的关联中,金属锶第四分位数相对最低分位数NLR减少0.35(95%CI:-0.47,-0.21),硒、锑、铅第四分位数浓度相对最低分位数NLR分别增加0.16(95%CI:0.01,0.32),0.36(95%CI:0.20,0.51),0.39(95%CI:0.21,0.57)。 *** g-computation结果显示金属混合物对炎症标志物有显著的正向效应。金属混合物每增加一个四分位数,SII增加0.21(95%CI:0.13,0.28),PLR增加0.11(95%CI:0.06,0.15),NLR增加0.19(95%CI:0.12,0.25)。BKMR显示金属混合暴露与炎症标志物水平具有显著正向关联。 结论:冶炼地区居民广泛暴露于多种金属且内暴露水平较高。年龄、性别、文化程度、经济水平、吸烟、饮酒、职业是影响体内金属浓度水平的主要因素。金属暴露与炎症标志物存在显著正向关联,提示金属暴露会引起全身免疫炎症。

关键词： 去泛素化酶USP14   NOD2   炎症性肠病  

摘要： 目的:1.探讨克罗恩病患者肠道标本中去泛素化酶USP14的表达情况。 2.探讨去泛素化酶USP14通过调控NOD2通路对THP-1单核细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8的影响,并进一步探讨可能涉及的分子机制。 方法:1.收集南华大学附属长沙中心医院克罗恩病患者手术切除的结肠病理组织标本,通过免疫组化和荧光原位杂交技术检测USP14在克罗恩病患者结肠组织中的表达情况。 2.以THP-1单核细胞为研究对象,用不同浓度的USP14特异性抑制剂IU1预处理细胞,再使用TNF-α、Toll样受体1/2(TLR1/2)激动剂Pam3CSK4、NOD2配体MDP激活细胞,qRT-PCR检测三种促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的表达情况。 3.选取THP-1单核细胞培养,用不同浓度IU1预处理细胞,然后加入MDP处理不同时间,通过qRT-PCR检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录水平。 4.通过Western Blot检测MDP对静息状态下THP-1单核细胞MAPKs(ERK1/2、JNK、P38)和NF-κB p65磷酸化蛋白的影响。用不同浓度IU1预处理THP-1单核细胞,然后加入MDP,通过Western Blot检测在MDP诱导下THP-1单核细胞USP14、MAPKs和NF-κB p65磷酸化蛋白表达情况。 5.使用IU1、P38抑制剂、Erk1/2抑制剂、JNK抑制剂和NF-κB p65抑制剂预处理THP-1细胞,通过qRT-PCR检测在MDP单独处理时细胞时、MDP分别与各抑制剂联合处理细胞时,炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录水平。 结果:1.与正常结肠组织相比,CD患者结肠组织中USP14蛋白、USP14 mRNA表达增加。 2.抑制去泛素化酶USP14可以上调TNF-α、Pam3CSK4、MDP诱导的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录水平。 3.抑制USP14活性可以上调MDP诱导的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的表达,且呈剂量和时间依赖性。 ***可诱导THP-1单核细胞中ERK1/2、JNK、P38和NF-κB p65磷酸化蛋白表达,并且具有时间和剂量依赖性,但对USP14蛋白表达无影响。IU1与MDP共处理可使p-ERK1/2、p-JNK蛋白表达升高。 5.u0126(ERK1/2抑制剂)、sp600125(JNK抑制剂)对MDP和IU1共处理下炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录有抑制作用,u0126尤为明显。 结论:去泛素化酶USP14在克罗恩病(CD)患者肠道组织中的表达增加。去泛素化酶USP14通过ERK1/2、JNK MAPK通路负调控MDP诱导的炎症因子。

关键词： 单细胞RNA测序   慢加急性肝衰竭   单核细胞   全身炎症   免疫机制  

摘要： 目的:慢加急性肝衰竭(Acute-on-Chronic Liver Failure,ACLF)中单核细胞在免疫中的独特功能和亚群异质性尚未完全阐明,本研究旨在用单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,sc RNA-seq)研究ACLF疾病中具有特异性的单核细胞亚群及其在炎症反应中的免疫机制。方法:本论文通过对3例健康对照者(Health Controls,n=3)和6例ACLF患者(其中包括3例ACLF存活组(Survival ACLF)和3例ACLF死亡组(Death ACLF))的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)进行sc RNA-seq,使用聚类和注释分析来识别健康对照组、ACLF存活组、ACLF死亡组单核细胞亚群及ACLF疾病进展的特点。结果:最终获得5个单核细胞亚群,分别是促炎性单核细胞(Pro-inflammatory Monocytes)、CD16单核细胞(CD16 Monocytes)、HLA单核细胞(HLA monocytes)、巨核细胞样单核细胞(Megakaryocyte-like Monocytes)以及NK细胞样单核细胞(NK-like Monocytes)。分别比较ACLF患者和健康对照组的单核细胞,基因变化量最显著的是促炎性单核细胞亚群,其中与炎症反应、补体级联和细胞代谢相关基因表达显著增加,而与细胞周期进展相关的基因显著减少。在ACLF疾病组对比中,相对于ACLF存活组,发现ACLF死亡组中促炎性单核细胞中促炎细胞因子及其受体(如IL-6及IL1B)、趋化因子(如CCL4、CCL3、CXCL2)以及炎性诱导因子(HES4)进一步升高。通过sc RNA-seq和流式细胞分析,发现促炎性单核细胞亚群中THBS1高表达,此外TNF-α、IL-6、IL-1β等促炎因子表达均升高。机制上,THBS1通过激活TGF-β/NK-κB信号通路,导致信号转导因子SMAD2、SMAD3的蛋白磷酸化,进而刺激免疫细胞分泌促炎因子,促进全身炎症反应的发展,表明炎症加剧可能是ACLF疾病的进展和不良预后的影响因素。结论:通过ACLF来源的PBMCs图谱,揭示了具有独特促炎功能的促炎性单核细胞亚群与疾病的进展密切相关,同时发现了凝血酶敏感蛋白1(Thrombospondin-1,THBS1)具有特异性的转录特征,证实了THBS1作为ACLF疾病进展的生物标志物的特异性和潜力,为降低ACLF的死亡率提供新的诊断和治疗靶点。

关键词： 全身免疫炎症指数   寻常型银屑病   PASI  

摘要： 目的:本研究通过分析全身免疫炎症指数(SII)与寻常型银屑病的关系,比较SII及其他炎症指标评价疾病严重程度的效能,旨在找到低成本和简单易行的反映银屑病严重程度的客观指标,为银屑病的诊疗提供新的实验室诊疗依据,加强对寻常型银屑病发病机理的进一步认识,为今后该类疾病患者的综合管理提供帮助。方法:收集2022年3月至2022年12月符合纳入和排除标准,在江西省皮肤病专科医院门诊就诊及住院的寻常型银屑病患者110例作为病例组,同期在江西省皮肤病专科医院皮肤美容外科就诊的性别和年龄与病例组无显著性差异的健康人群85例作为对照组。对病例组和对照组进行登记和相关实验室检查,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对病例组46例患者及对照组29例健康人群血清白介素-17(IL-17)及白介素-23(IL-23)进行检测及对比分析。结果:1.本研究病例组共收集寻常型银屑病患者110例,其中,门诊患者42例,住院患者68例,男87例,女23例,男女比例为3.78:1,年龄18-89岁,平均年龄49.15±16.26岁,平均首发年龄37.15±15.07岁,最常见的首发部位为头皮,大多就诊患者病情为中重度;2.110例病例组患者白细胞计数、中性粒细胞计数、单核细胞计数及红细胞分布宽度标准差均高于对照组;淋巴细胞计数、平均血小板体积、血小板分布宽度均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);46例病例组患者血清中IL-17表达水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),IL-23表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);轻中度组和重度组患者血清IL-17、IL-23表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);110例病例组患者全身免疫炎症指数(SII)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)值均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);重度组SII、NLR、PLR值明显高于轻中度组,差异有统计学意义(P<0.05);3.经Pearson相关性分析,病例组SII值与NLR及PLR值呈显著正相关(P<0.05);SII、NLR、PLR值与体表受累面积(BSA)评分无相关性(P>0.05);SII和PLR值与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)评分无相关性(P>0.05),但NLR值与PASI评分呈显著正相关(P<0.05);SII、NLR、PLR值与C反应蛋白及血沉呈显著正相关(P<0.05);SII、NLR值与IL-17、IL-23的表达水平不相关(P>0.05),但PLR值与IL-17的表达水平呈负相关(P<0.05),PASI评分与IL-17、IL-23的表达水平不相关(P>0.05);经Spearman相关性分析,SII、NLR值均与病情严重程度呈显著正相关(P<0.05);4.经ROC曲线分析,SII值为368.290时,对重度寻常型银屑病(PASI>10)的诊断效能最高,此时AUC(曲线下面积)为0.650,敏感度和特异度分别为0.634、0.679(P<0.05);NLR值为2.189时,对重度寻常型银屑病(PASI>10)的诊断效能最高,此时AUC为0.713,敏感度和特异度分别0.610,0.821(P<0.05)。结论:寻常型银屑病患者外周血变化与寻常型银屑病有一定相关性,其中基于SII与NLR、PLR、C反应蛋白及血沉等炎症指标均呈正相关且重度组高于轻中度组,SII可考虑作为反映银屑病严重程度的一个客观参考指标。但是否可作为量化寻常型银屑病全身性炎症的单一指标及作为生物制剂使用的评价指标仍存在挑战,建议还是需要参考和对比多种不同的炎症指标综合分析。