关键词： 维持性血液透析   微炎症状态   中医证型   因子分析   DNA甲基化  

摘要： 目的:调查维持性血液透析(MHD)患者微炎症状态中医症状,分析MHD微炎症状态中医证型分布规律;探索基于DNA甲基化的MHD微炎症状态常见中医证型的客观物质基础;为MHD微炎症状态中医辨证论治提供中医及现代医学依据。方法:1.制定MHD微炎症状态中医临床症状调查量表,调查陕西省中医医院及陕西中医药大学附属医院血液透析室91例微炎症患者中医症状,采用因子分析的方法,总结归纳MHD患者微炎症状态中医证型特点及分布规律;2.采用全基因组甲基化测序及转录组测序方法,研究6例MHD微炎症状态患者两种常见中医证型的外周血白细胞DNA甲基化及基因表达结果,分析MHD微炎症状态患者常见中医证型的DNA甲基化特征及有表达改变的DNA甲基化基因。结果:***微炎症状态的中医症状出现频率>10%的有倦怠乏力、气短懒言、畏寒肢冷、恶心、呕吐等24个症状,运用主成分法进行因子分析,经最大方差旋转后取得9个公因子,累计贡献率为69.32%,得出MHD微炎症患者虚证主要以脾肾气虚证、脾肾阳虚证为主,占36.26%,实证以血瘀证为主,占10.99%。***患者基因组DNA甲基化主要发生在CG序列的C位点,甲基化水平达74%以上,本研究主要分析CG序列的DNA甲基化情况。样品间甲基化水平的相关性分析提示组内样本相关性好(r>0.99,p<0.01)。差异DNA甲基化区域(DMR)分析提示,与MHD微炎症非脾肾阳虚证组比较,MHD微炎症脾肾阳虚证组筛选出了有明显差异的DMR(校正P<0.05),位于基因启动子区的DMR数目为2017。启动子区域DMR基因的GO、KEGG分析提示,与MHD微炎症非脾肾阳虚证组比较,微炎症脾肾阳虚证组共富集到有显著性差异的38条GO功能条目和1条KEGG通路(校正P<0.05),GO功能涉及蛋白结合、DNA结合的转录因子活性、外泌体、跨膜转运及蛋白质磷酸化等,KEGG通路涉及神经活性配体与受体相互作用通路。启动子区域DMR基因与表达有差异基因(DEG)联合分析提示,与MHD微炎症非脾肾阳虚证组比较,微炎症脾肾阳虚证组获得获得2个启动子区低DNA甲基化,同时基因表达增高的基因:ABO、GNAS。结论:***微炎症状态患者的中医证型有脾肾阳虚证、脾肾气虚证、肝肾阴虚证、血瘀证、湿热证、湿浊证,虚证以脾肾阳虚证、脾肾气虚证居多,实证以血瘀证居多。***微炎症状态可以从DNA甲基化角度进行中医证型的物质基础研究,DNA甲基化在不同的MHD微炎症状态中医证型方面,具有不同的改变,并可能参与不同中医证型的形成,基因ABO、GNAS启动子的低甲基化可能作为MHD微炎症状态患者脾肾阳虚证的客观物质基础。

关键词： 迟发性脑缺血   动脉瘤性蛛网膜下腔出血   全身炎症反应指数   列线图   预测价值  

摘要： 目的:明确入院早期全身炎症反应指数(Systemic inflammatory response index,SIRI)与动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aneurysmal subarachnoid hemorrhage,a SAH)术后继发迟发性脑缺血(delayed cerebral ischemia,DCI)的相关性,探究a SAH患者术后继发DCI的独立影响因素,构建a SAH患者术后继发DCI的预测模型,以帮助临床医师用一种简单、易得、廉价、准确的方式对a SAH患者术后继发DCI的风险进行评估。 方法:根据纳入和排除标准收集2015年1月1日至2022年7月30日期间在我院接受开颅夹闭术或介入栓塞术治疗的1136名a SAH患者的临床资料,包括患者一般资料、神经功能评分和住院期间血液中的各项炎症标志物,并提取各项炎症标志物的第一次检验值(发病后48h内)和计算入院后1周内各项炎症标志物的平均值。采用单因素分析、多因素分析来确定与DCI相关的独立影响因素,使用机器学习算法建立预测模型,绘制ROC曲线、DCA决策曲线、列线图校准曲线评价和验证模型的分类效果。 结果:在单因素分析中,DCI组和非DCI组在白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、NLR、PLR、SII、SIRI、中性粒细胞平均值、淋巴细胞平均值、NLR平均值、SII平均值、SIRI平均值、红细胞压积平均值、血红蛋白平均值、纤维蛋白、凝血酶时间、年龄、高血压、收缩压、糖尿病、手术时限、意识障碍、Fisher分级、Hunt-Hess分级、脑室出血、去骨瓣、癫痫、颅内感染、脑积水、消化道出血、静脉血栓、低蛋白血症、电解质紊乱、肺炎、贫血这35个因素存在显著差异(P<0.05)。经线性相关性分析,纳入16个变量进行多因素分析发现:年龄[P<0.01,比值比(odds ratio,OR)=1.74,95%可信区间(confidence interval,CI)1.3-2.329]、收缩压(P<0.01,OR=1.583,95%CI 1.16-2.161)、Fisher分级(P<0.05,OR=1.372,95%CI 1.002-1.879)、SIRI指数(P<0.05,OR=1.023,95%CI1.002-1.044)、凝血酶时间(P<0.05,OR=1.093,95%CI 1.003-1.19)这5个指标是DCI的独立危险因素。通过机器学习算法构建预测模型,绘制ROC曲线并计算曲线下面积,发现5个指标联合诊断的预测能力(AUC=0.89)好于5个危险因素中的任一个因素。在本研究DCI发病率26.4%的阈值下,决策曲线位于None线和All线的上方,因此该模型具有临床实用性。最后将这5个独立危险因素以列线图的形式展现,该模型的C指数=0.885(0.874-0.895),再使用拟合优度检验进行校准度评价,P>0.05,模型拟合度较好。 结论:1.入院早期SIRI指数与a SAH患者术后继发DCI具有显著相关性;***指数>5.73、年龄≥60岁、入院时收缩压≥140mm Hg、凝血酶时间>16.9s、Fisher≥3级是a SAH患者发生DCI的独立危险因素;3.基于SIRI指数构建的预测模型对a SAH患者术后继发DCI具有较准确的预测性能和临床实用性。

关键词： 稳定性冠心病   多支病变   全身免疫炎症指数   甘油三酯葡萄糖指数  

摘要： 目的:　　探讨全身免疫炎症指数（SII）、甘油三酯葡萄糖（TyG）指数与稳定性冠心病（SCAD）及合并冠脉多支病变（MVD）的关系，以及对SCAD及合并MVD的诊断和预测价值。　　方法:　　选取2021年07月至2022年07月就诊于山西医科大学附属太原市中心医院被疑诊为SCAD,并且接受冠状动脉造影术（CAG）的患者386例。将入组患者依据CAG结果分成SCAD组和非CAD组，再依据冠状动脉病变支数将SCAD组分为SCAD合并MVD组和SCAD合并单支病变组两个亚组。收集患者的基本资料（年龄、性别、体重、身高、入院首次血压及心率、糖尿病史、高血压病史、吸烟饮酒史等）、实验室检测指标（中性粒细胞计数、血小板计数、单核细胞计数、淋巴细胞计数、肌酐（Cr）、尿酸（UA）、尿素（UREA）、空腹血糖（FBG）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、甘油三酯（TG）、纤维蛋白原（FIB）、血清白蛋白（ALB）、血清球蛋白（GLB））以及左心室射血分数（LVEF）。运用SPSS27.0进行数据分析，比较SCAD组与非CAD组以及SCAD亚组间的基本资料、实验室检查结果、SII及TyG指数有无统计学差异，行二元Logistic回归分析获得SCAD及合并MVD的影响因素。运用受试者工作特征曲线（ROC）评价SII、TyG指数对SCAD及合并MVD的诊断和预测价值。　　结果:　　***组与非CAD组一般资料比较:两组患者的入院首次血压及心率、身体质量指数（BMI）、TC、ALT、AST、ALB、GLB、UA、Cr、UREA、LVEF比较无统计学差异（P＞0.05）。SCAD组患者年龄、男性占比、糖尿病史占比、高血压病史占比、吸烟史占比、饮酒史占比、FBG、TG、LDL、FIB、单核细胞计数、中性粒细胞计数、血小板计数、SII、TyG指数高于非CAD组（P＜0.05）;非CAD组患者HDL、淋巴细胞计数高于SCAD组患者（P＜0.05）。　　2.多因素Logistic回归分析:性别、年龄、LDL、FIB、SII、TyG指数是SCAD发生的独立危险因素（P＜0.05）。　　***曲线分析结果显示:SII预测SCAD的ROC曲线下面积（AUC）为0.817[95％CI（0.792,0.872）],最佳临界值为594.47,对应的灵敏度为73.0％、特异度为79.5％（P＜0.001）;TyG指数预测SCAD的AUC为0.832[95％CI（0.793,0.873）],最佳临界值为9.01,对应的灵敏度为74.5％、特异度为76.8％（P＜0.001）;SII联合TyG预测SCAD的AUC为0.886[95％CI（0.855,0.918）],对应的灵敏度为73.5％、特异度为87.9％（P＜0.001）。SII联合TyG指数比单一的SII或者TyG指数预测SCAD的AUC更大，且有统计学差异（P＜0.001）。　　***合并MVD与合并单支病变两亚组间的一般资料比较:两亚组间的性别、年龄、糖尿病史占比、高血压病史占比、吸烟史占比、饮酒史占比、入院首次血压及心率、BMI、TC、LDL、HDL、ALT、ALB、GLB、FIB、UA、Cr、UREA、单核细胞计数、淋巴细胞计数、LVEF无统计学差异（P＞0.05）。SCAD合并MVD组的FBG、TG、AST、中性粒细胞计数、血小板计数、SII、TyG指数较SCAD合并单支病变组更高（P＜0.05）。　　5.多因素Logistic回归分析:ALT、SII、TyG指数是SCAD合并MVD的独立危险因素（P＜0.05）。　　***曲线分析结果显示:SII预测SCAD合并MVD的ROC曲线下面积（AUC）为0.745[95％CI（0.674,0.816）],最佳临界值为683.94,对应的灵敏度为79.2％、特异度为60.5％（P＜0.001）;TyG指数预测SCAD合并MVD的AUC为0.720[95％CI（0.646,0.794）],最佳临界值为9.42,对应的灵敏度为54.2％、特异度为78.9％（P＜0.001）;SII联合TyG指数预测SCAD合并MVD的AUC为0.799[95％CI（0.735,0.864）],其相应的灵敏度为77.5％、特异度为72.4％（P＜0.001）。SII联合TyG指数比单一的TyG指数预测SCAD合并MVD的AUC更大,且有统计学差异（P＜0.001)。虽然SII联合TyG指数比单独的SII预测SCAD合并MVD的AUC更大，但是差异无统计学意义（P＞0.05）。　　结论:　　1.性别、年龄、LDL、FIB、SII、TyG指数是SCAD的独立危险因素;***、SI

关键词： 胞外ATP   炎症   Notch1   二硫键   EGCG  

摘要： 三磷酸腺苷(ATP)是一种主要的促炎分子,能够调节多种细胞活动。在细胞坏死、组织应激或损伤等条件下,细胞破裂释放胞内高浓度ATP到细胞外,短时间使胞外环境中的ATP浓度提升到较高水平,激活NLRP3炎症小体,对周围细胞产生不良影响。Notch1信号通路作为炎症的基本通路之一,参与了巨噬细胞免疫应答过程,调节巨噬细胞炎症响应及巨噬细胞表型变化,并与NLRP3炎症小体、NF-κB信号通路之间存在紧密联系。本文深入研究胞外ATP(eATP)活化Notch1信号通路诱发炎症的分子机制,为未来以Notch1通路作为抗炎靶点的药物开发与利用提供科学依据。为了探讨eATP诱导巨噬细胞产生的炎症影响,本文以未加入eATP细胞组为对照组,以加入eATP诱导细胞不同时间为处理组(5 min、10 min、15 min、30 min、45 min、60min),检测了巨噬细胞炎症因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)含量及其m RNA的转录水平以及巨噬细胞NLRP3炎症小体蛋白表达水平。结果表明:与对照组相比,在诱导巨噬细胞15min时IL-1β含量极显著(P<0.001),在诱导巨噬细胞10min时TNF-α、IL-6含量极显著(P<0.001),在诱导巨噬细胞45min时IL-1β、TNF-α、IL-6的m RNA转录水平极显著(P<0.005),在10min时巨噬细胞NLRP3炎症小体蛋白表达水平显著增加,差异极显著(P<0.001)。总之,eATP短时间处理巨噬细胞,能够显著增加巨噬细胞炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的分泌及其m RNA的表达,激活NLRP3炎症小体,诱导细胞急性炎症发生。为了进一步探讨eATP诱导巨噬细胞炎症响应的机制,本文检测了P2X7受体蛋白表达情况。结果表明:ATP诱导巨噬细胞60min内P2X7表达无变化,差异不显著,表明ATP促进巨噬细胞急性炎症可能存在其他潜在的炎症受体。基于此,我们探讨了eATP对Notch1通路的影响,结果表明:ATP诱导巨噬细胞60min内,增加了巨噬细胞内Cleaved-Notch1、HES-1以及NF-κB p-P65蛋白表达,差异极显著(P<0.005),表明短时间内ATP诱导激活了巨噬细胞内Notch1信号及其下游通路。为了探究ATP激活巨噬细胞Notch1信号的分子机制,本研究观察ATP与Notch NRR1区域的结合情况以及对二硫键的影响,结果表明:ATP与Notch NRR1区域有结合,同时能够影响二硫键并具有浓度梯度性。进一步以DTNB作为二硫键抑制剂,预处理巨噬细胞后,观察Notch1信号的活化状况。结果表明:Cleaved-Notch1、HES-1蛋白的表达均显著减少(P<0.005),eATP可能通过与Notch1蛋白NRR1区域二硫键作用,从而激活了Notch1信号通路。最后,本文探究食品功能性成分EGCG、α-倒捻子素(α-MG)对eATP诱导的巨噬细胞急性炎症的响应。结果表明:EGCG处理能够有效降低ATP诱导产生的TNF-α的分泌(P<0.01)、α-MG处理能够显著降低NLRP3蛋白的表达(P<0.001);确证了EGCG、α-MG均可以显著下调Cleaved-Notch1、HES-1蛋白的表达(P<0.001),抑制ATP诱导的巨噬细胞Notch1信号的激活。结论:本文首次阐明了eATP与巨噬细胞Notch信号NRR1区域二硫键相互作用,激活Notch1信号通路,从而诱导巨噬细胞炎症因子的释放,上调了NLRP3炎症小体,诱导急性炎症的发生。

关键词： 动脉粥样硬化   肝脏   线粒体自噬   炎症   益脉颗粒  

摘要： 目的:采用高脂喂养的方法,使用APOE基因敲除(Apo E-/-)小鼠建立动脉粥样硬化(AS)模型,观察高脂喂养对于Apo E-/-小鼠肝脏的影响,探究高脂喂养影响Apo E-/-小鼠肝脏线粒体自噬与炎症的分子机制;观察益脉颗粒对AS小鼠脂质代谢紊乱的影响;探究益脉颗粒调控AS小鼠肝脏线粒体自噬与炎症的分子机制。材料与方法:选取SPF级C57/BL小鼠32只和Apo E-/-小鼠56只,使用普通饲料适应性喂养一周后,Apo E-/-小鼠改为高脂饲料喂养,自由饮食饮水。分别于4周、8周各取C57/BL小鼠10只作为control组,Apo E-/-小鼠10只作为model组,摘取眼球取血后断脊处死,留取血清及肝脏。8周后采用随机数字表法将剩余Apo E-/-小鼠分为模型组,益脉颗粒组及阿托伐他汀组,C57/BL小鼠作为空白对照组。按照成人推荐给药剂量,根据小鼠与人的等效剂量换算公式,计算出小鼠给药量如下:(1)control组及model组给予等体积0.9%生理盐水(2)YMKL组给予19.474g/kg浓缩药液;(3)Atorvastatin组给予10mg/kg浓缩药液,空白对照组及模型组给予等体积0.9%生理盐水,每日一次,灌胃给药,持续4周。4周后采用摘眼球取血法,取血清后断脊处死,分离小鼠主动脉及肝脏。采用全自动生化分析仪检测高脂喂养条件下,不同时间点各组AS小鼠血脂变化情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测高脂喂养条件下,不同时间点各组AS小鼠血清IL-1β变化情况;采用蛋白免疫印迹法(westernbloting法)检测不同时间点AS小鼠肝脏炎症及线粒体自噬相关蛋白表达情况;采用主动脉HE染色,观测12周各组小鼠主动脉斑块状况;采用肝脏HE染色,观察12周各组小鼠肝脏病理形态;采用油红O染色,观察12周各组小鼠肝脏脂质代谢情况;采用免疫组化法检测12周各组AS小鼠肝脏炎症及线粒体自噬相关蛋白表达情况。结果:1、探究高脂喂养影响Apo E-/-小鼠肝脏线粒体自噬及炎症的分子机制:(1)血脂四项水平结果显示:各时间点model组LDL-C、TG、TC水平均高于control组,HDL-C水平均低于control组(P<0.05);不同时间点model组LDL-C及TG随时间增加呈上升趋势,HDL-C随时间增加呈下降趋势,TG随时间增加,呈先上升再下降趋势;(2)血清炎症因子水平结果显示:各时间点model组IL-1β含量均高于control组(P<0.01),不同时间点model组比较,IL-1β总体呈上升趋势,4周与8周以及4周与12周model组对比均有显著差异(P<0.05);(3)检测炎症相关蛋白结果显示:各时间点model组NLRP3、p NF-κB/NF-κB、caspase-1蛋白表达量均高于control组(P<0.05),不同时间点model组比较,NLRP3、p NF-κB/NF-κB、caspase-1蛋白表达量总体呈上升趋势(P<0.05);(4)检测线粒体自噬相关蛋白结果显示:各时间点model组p62蛋白表达量均高于control组(P<0.05),4周时,PINK1及LC3B蛋白表达量均高于control组(P<0.05),8周及12周时,PINK1及LC3B蛋白表达量均低于control组(P<0.05);不同时间点model组比较,p62蛋白表达量总体呈上升趋势(P<0.05);PINK1蛋白表达量总体呈下降趋势(P<0.05),LC3B蛋白表达量总体呈先上升在下降趋势,组间比较存在统计学差异(P<0.05)。2、益脉颗粒通过NF-κB/p62信号通路调控AS小鼠肝脏线粒体自噬及炎症的分子机制:(1)主动脉形态学检测结果显示:与control组相比,model组主动脉管腔内可见明显粥样斑块,细胞排列紊乱,可见明显平滑肌细胞迁移泡沫细胞及脂质沉积;与model相比较,YMKL组主动脉管腔内可见斑块缩小,细胞排列紊乱,可见明显脂质沉积及泡沫细胞;Atorvastatin组可见斑块显著减小。(2)肝脏形态学检测结果显示:与control组相比model组肝脏细胞有明显肿胀,细胞质内可见明显脂肪空泡;与model组相比,YMKL组小鼠肝脏细胞质内脂肪空泡减少,细胞肿胀程度减轻;Atorvastatin组脂肪变性程度显著减轻,脂肪空泡显著减少,细胞体积基本接近正常。(3)肝脏脂质代谢检测结果显示:与control组比较,model组小鼠肝脏脂质沉积明显,肝细胞排列紊乱,镜下视野内可见弥漫性脂滴分布;YMKL组及Atorvastatin组肝脏脂质沉积减少,细胞肿胀减轻,肝脏细胞内脂滴含量有所减少;(4)肝脏组织线粒体自噬及炎症相关蛋白表达情况检测结果显示:与control组比较,model组N

关键词： 全身免疫炎症指数   急性缺血性卒中   炎症   列线图   预后  

摘要： 目的:全身免疫炎症指数(SII)是一种基于血小板、中性粒细胞及淋巴细胞得出的新的指数,已有研究提示SII与静脉窦血栓及癌症预后相关,然而它在急性缺血性卒中(AIS)中的应用较少见。因此,本研究旨在讨论入院时的SII水平与患者发病3个月的预后关系,并绘制列线图来预测AIS患者出现不良预后的概率。方法:回顾性连续纳入2020年1月至2020年12月期间于桂林医学院附属医院住院的首次发病24小时内的AIS患者,共208例。收集患者的一般资料及临床资料,入院24小时内采集患者的血样并进行分析,根据中性粒细胞、血小板和淋巴细胞计数计算SII值。记录3个月后的改良Rankin评分(MRS),MRS≥3定义为预后不良。使用R Studio将患者随机分为训练集(3/4;n=156)和验证集(1/4;n=52),使用多变量Logistic模型构建列线图。结果:ROC曲线结果显示SII最佳截断值为802.8,灵敏度为70.9%,特异度为58.2%(曲线下面积:0.657,95%置信区间0.572-0.742)。列线图包含年龄、性别、SII、NIHSS评分、高血压及冠心病6个变量,列线图的C指数为0.802。训练集和验证集的ROC曲线下面积分别为0.826、0.836。训练集和验证集的校准曲线平均误差分别为0.021和0.034。决策曲线(DCA)分析表明该列线图能带来临床获益;结论:SII与AIS患者短期不良预后相关,列线图可以为AIS患者提供风险评估。

关键词： 溃疡性结肠炎   全身免疫炎症指数   疾病活动度  

摘要： 目的:探讨全身免疫炎症指数(systemic immune inflammatory index,SII)与溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)疾病活动度的相关性。方法:采用回顾性研究方法,纳入2018年6月至2022年6月于山西医科大学第一医院住院治疗的212例UC患者,以及127位同期在该院健康管理中心体检的健康者作为研究对象。收集UC患者入院时的临床资料和实验室生物化学检查结果,采用改良Mayo评分评估疾病活动度。根据血常规检查结果计算SII,采用Spearman等级相关检验分析SII与各临床指标之间的相关性。采用ROC曲线评估SII判断UC疾病活动度和病情严重程度的效能。结果:与健康者相比,UC患者的SII水平较高,2组比较差异具有统计学意义(P<0.001);中度UC组和重度UC组SII水平均显著高于临床缓解期组和轻度UC组,重度UC组SII水平显著高于中度UC组,差异均有统计学意义(P均<0.05);UC患者的病变范围越广,其SII水平越高(P<0.001);相关性分析结果显示,SII水平与C反应蛋白水平、红细胞沉降率、改良Mayo评分均呈正相关(r=0.604、r=0.518、r=0.509,P均<0.001),与血红蛋白水平呈负相关(r=﹣0.390,P<0.001);ROC曲线分析结果显示,SII判断UC疾病活动度的最佳截断值为403.5,敏感度为72.1%,特异度为62.1%,曲线下面积(AUC)为0.735;SII判断重度UC的最佳截断值为638.9,敏感度为77.5%,特异度为68.6%,AUC为0.786。结论:UC患者外周血中SII水平较高,其判断UC疾病活动度和病情严重程度的效能较高,该结论具有一定的临床应用价值。

关键词： 丹白颗粒   盆腔炎性疾病后遗症   TLR-4/p38 MAPK/NF-κB信号通路   网络药理学   免疫炎症反应  

摘要： 目的1客观评价盆腔炎性疾病后遗症(SPID)的研究现状,探索研究热点及发展趋势。2探究丹白颗粒治疗湿热瘀结型SPID的临床疗效及安全性。3通过网络药理学及分子对接技术探讨丹白颗粒治疗SPID的作用机制。4探讨丹白颗粒治疗SPID的分子机制,对上述网络药理学预测结果进行验证。方法1文献回顾:基于2000年1月至2022年12月中国知网、万方、维普三大数据库的北大核心期刊、CSCD期刊、CSSCI期刊文献数据,筛选主题为中医药治疗SPID的相关文章,采用VOSviewer和CiteSpace软件对文献进行可视化分析,从而对SPID的研究现状进行客观评价,并探索未来的学术前沿及发展趋势。2临床研究:采者前瞻性、多中心、单臂、患者自身治疗前后对照的研究方法,对门诊收集的208例符合纳入标准的SPID患者予丹白颗粒治疗,连续用药2个月经周期(经期停药),观察治疗前后患者的中医证候积分、局部体征评分、视觉模拟评分(VAS)、DASS-21情绪评分、阴道分泌物清洁度、不良反应及治疗前后肝肾功、血常规等安全性指标,用统计学方式进行分析及判定。3网络药理学分析:采用网络药理学对丹白颗粒治疗SPID的作用机制进行分析,并运用分子对接技术对结果进行初步验证,具体方法是从公共数据库中收集丹白颗粒组方的生物活性化合物及其所对应的靶点,并收集SPID的疾病相关靶点,通过R语言得到丹白颗粒治疗SPID的潜在靶点,String数据库构建PPI网络,利用clusterProfiler包完成基因GO和KEGG富集分析,找到丹白颗粒治疗SPID的潜在生物过程和途径,最后用Autoduck软件进行分子对接,计算前六个靶点和前十个化合物之间的结合活性。4实验研究:以SD雌性大鼠为实验对象,采用苯酚胶浆注射+机械损伤+高脂高糖饮食+湿热气候的方法,制备湿热瘀结型SPID动物模型。将42只大鼠随机分为空白对照组,模型组,丹白颗粒低、中、高剂量组,康妇炎胶囊组。干预14天后取材,对大鼠进行形态学观察后,HE染色对子宫组织进行病理学观察,通过ELISA法测各组大鼠血清中IL-6、IL-10、IL-4、TNF-α水平,Western Blot法及RT-PCR法及检测子宫组织中TLR-4/p38 MAPK和NF-κB通路相关蛋白及mRNA的表达水平,并进行统计学分析。结果1中医药治疗SPID的知识图谱分析1.1年发文量分析:近五年来整体发文量不高,表明高质量的学术研究仍需探索;1.2作者合作网络分析:核心作者之间形成了以魏绍斌、周丽、魏丽惠、龚云、曾倩等为代表的研究团队;1.3关键词共现分析:得到排名前30位的关键词如盆腔炎性疾病后遗症、中药保留灌肠、中医药疗法、抗生素、中西医结合、炎症因子、临床观察等;1.4关键词聚类分析:中医药治疗盆腔炎性疾病的研究热点大致分为7类,主要在疾病、机制研究、治疗方式、研究类型、中医治法、疗效评价等方面;1.5关键词时线图分析:近十年年研究热点包括Toll样受体4、氧化应激、信号通路、子宫微循环、随机对照试验、VAS评分、T淋巴细胞亚群等内容;1.6关键词突现分析:近年来的突现词有血液流变学、T淋巴细胞亚群、湿热瘀结、疗效、炎症因子、康妇炎胶囊、生活质量、慢性盆腔痛等,是未来研究方向及热点。2丹白颗粒对湿热瘀结型SPID的临床观察2.1总有效率:总有效率达91.35%,临床疗效显著;2.2中医证候积分:208例患者在治疗1个月后、治疗2个月后与治疗前的中医证候积分相比较,经t检验,差异具有统计学意义(P<0.01);2.3分项证候积分:下腹疼痛、腰骶疼痛、带下量多、带下色黄、带下异味、脘闷纳呆、低热、月经不调、经行腹痛、经期或劳累或同房后腹痛加重、便干、便黏腻、舌质、舌苔等此14项分项证侯同治疗前相比较,经t检验,差异具有统计学意义(P<0.01);便溏、小便色黄等2项证候在治疗前后差异不明显(P>0.05);2.4局部体征:208例患者治疗后与治疗前的局部体征评分相比较,经t检验,差异具有统计学意义(P<0.01);2.5 VAS评分:208例患者治疗后与治疗前的下腹疼痛、腰骶疼痛VAS评分相比较,经t检验,差异具有统计学意义(P<0.01);2.6 DASS-21评分:208例患者治疗后与治疗前的DASS-21评分严重程度相比较,经χ2检验,差异具有统计学意义(P<0.05);2.7阴道分泌物清洁度:208例患者在治疗后,阴道分泌物清洁度有所改善,与治疗前相比较,经χ2检验,差异具有统计学意义(P<0.01);2.8不良反应:在服药期间,有4例患者出现头晕头痛症状,有2例患者出现恶心症状,调整药物后症状消失,无中途被迫停药者;2.9近期随访复发评价:对146例痊愈及显效的湿热瘀结型SPID患者,停药8周后进行随访,8例患者因熬夜、劳累后再次出

关键词： NLRP3炎症小体   USP5   MARCH7   自噬-溶酶体途径   去泛素化酶  

摘要： 研究表明,核苷酸结合寡聚结构样蛋白3(NLR family pyrin domain containing 3,NLRP3)炎症小体(Inflammasome)介导的炎症可在糖尿病、神经退行性疾病和心血管疾病等各种高度流行的人类疾病中加重,因此需要严格控制其激活。尽管NLRP3炎症小体信号参与了多种疾病的病理过程,但目前对其信号转导机制的生化和分子基础还知之甚少。蛋白质翻译后修饰(Post-translational modifications,PTMs)尤其是泛素化修饰(Ubiquitination)是调节炎症小体激活的关键分子开关,但目前关于泛素化修饰的研究较少,且其在炎症小体激活调控中的具体机制仍不明确。近年来,人们越来越清楚地认识到泛素系统在NLRP3炎症小体激活进程中的重要作用。蛋白质泛素化的动态平衡主要依靠E3泛素连接酶(E3 ubiquitinligase)及去泛素化酶(Deubiquitinases,DUBs)来实现。E3泛素连接酶可将泛素转移至底物蛋白,而DUBs可以从底物蛋白中切割泛素链,并处理泛素前体,以维持蛋白表达的动态平衡。E3泛素连接酶可通过蛋白酶体或自噬-溶酶体途径调控NLRP3的表达,与此同时,虽然已经报道了一些DUBs可以通过蛋白酶体途径调控NLRP3的表达,但DUBs是否可以通过自噬-溶酶体途径调控NLRP3的表达,仍鲜有报道。本研究中,我们通过筛选发现了 DUBs成员USP5(Ubiquitin specific peptidase 5)具有明确的溶酶体定位,鉴于NLRP3在炎症小体激活后可转移至自噬体和溶酶体,我们推测USP5可能参与NLRP3的自噬降解。为探讨USP5是否参与到NLRP3炎症小体通路的激活,我们首先使用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)及白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)刺激小鼠腹腔巨噬细胞(Peritoneal macrophages,PMs),结果显示,在LPS及IL-1β刺激后,USP5的mRNA及蛋白表达被明显诱导。NLRP3炎症小体主要由NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis associated speck-likeproteincontaining a CARD,ASC)及半胱氨酸氨基转移酶-1(Caspase-1)组成,其激活可分为两个阶段,第一阶段核因子-kappaB(NF-κB)通路被激活并释放肿瘤坏死因子α(Tumornecrosis factor,TNFα)及白细胞介素 6(Interleukin-6,IL-6);第二阶段前体IL-1β被切割,并释放成熟的IL-1β。为进一步明确USP5在该通路中的功能,我们合成了Usp5的小干扰RNA,并用各种炎症小体激活剂刺激PMs,检测TNFα,IL-6及IL-1β的分泌。结果表明,Usp5敲低后,加入黑色素瘤缺乏因子2(Absent in melanoma 2,AIM2)及包含 CARD 结构域的 NLR 家族成员蛋白 4(NLR-family CARD-containing protein 4,NLRC4)炎症小体激活剂刺激后,TNFα,IL-6及IL-1β的分泌均没有明显变化;而加入NLRP3炎症小体激活剂刺激后,TNFα及IL-6的分泌量虽无明显变化,IL-1β的分泌量却明显升高。以上结果说明,敲低Usp5可特异性促进NLRP3炎症小体第二阶段的激活。为探究USP5的靶分子,我们进行了免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)及免疫荧光(Immunofluorescence)实验,结果表明USP5仅与NLRP3有特异性的结合及共定位。为寻找两者相互作用的结构域,我们构建了一系列截断体质粒,并检测到USP5的USP结构域与NLRP3的PYD结构域有明显的结合作用。紧接着,我们检测了USP5对NLRP3蛋白稳定性的影响。首先,外源过表达及慢病毒感染实验均证明USP5可特异性降解NLRP3蛋白,而对ASC,Caspase-1,NLRC4及AIM2蛋白的表达无明显影响。此外,我们在小鼠PMs中转染了Usp5的小干扰RNA,结果表明,Usp5敲低后,内源NLRP3蛋白的表达明显升高。综上结果表明,USP5可靶向NLRP3并促进其降解。为进一步探究USP5通过何种途径降解NLRP3,我们分别使用了蛋白酶体途径及自噬-溶酶体途径的抑制剂处理细胞。结果表明,只有自噬抑制剂才能拯救USP5对NLRP3的降解。此外,ATG5是经典自噬途径的关键基因,在ATG5敲除的HEK293T细胞中,USP5对NLRP3的降解也受到明显抑制。同时,我们发现炎症小体激活后,在自噬体和溶酶体中均检测到了 NLRP3和USP5的共定位。综上结果,USP5通

关键词： 前列腺癌诊断   全身炎症指标   PSA   PSA衍生指标  

摘要： 【背景】前列腺癌（Prostate Carcinoma,PCa）是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤之一,是目前全球发病率第二高的恶性肿瘤,居男性死因的第五位,2020年全球约有141万新发的前列腺癌患者,占癌症发病人数的7.3%,随着人口老龄化、生活习惯的改变和针对前列腺癌筛查的普及,未来我国罹患前列腺癌的人数将持续增加。目前我国对前列腺癌的筛查主要手段是先测定前列腺特异性抗原（Prostate Specific Antigen,PSA）,随后对PSA异常的患者进行影像学检查,必要时将进行前列腺活检明确诊断。作为前列腺癌诊断的金标准,前列腺穿刺操作方便,所需设备简单,能快速明确前列腺穿刺组织的病理类型。但是,越来越多的研究表明,在PSA小于10ng/m L时,前列腺穿刺的阳性率并不高,有数据显示,当PSA水平分别为≤4 ng/m L、4～10 ng/m L、10～20 ng/m L和>20 ng/m L时,穿刺检查的阳性率分别为21.7%、38.4%、47.6%和81.9%,因此单纯依靠PSA不可避免的出现一些穿刺病理结果阴性的结果。目前有一些新的辅助检查来协助诊断PCa,比如新型前列腺癌抗原3（Prostate Cancer Antigen 3,PCA 3）,聚集素,多参数MRI（Multiple Parameter Magnetic Resonance Imaging,mp MRI）等,但是出于筛查成本等方面问题考虑,前列腺癌筛查中国专家共识尚不推荐将PCA3检测、mp MRI检查等作为前列腺癌筛查的常规手段。因此,本研究收集了自2018年1月至2023年1月以来在广州医科大学附属第二医院行前列腺穿刺活检或经尿道前列腺切除术（Transurethral Resection of Prostate,TURP）并具有明确术后病理报告的患者。回顾性分析前列腺癌患病的临床资料,通过对患者的PSA、前列腺体积、PSA衍生指标和全身炎症指标进行相关性分析研究,寻找前列腺癌患病的风险因素,为临床前列腺癌诊断提供参考,减少不必要的穿刺的同时,提高前列腺活检的诊断准确性。【目的】分析全身炎症指标、PSA及其衍生指标在前列腺癌诊断中的作用。【方法】选取广医二院2018年1月至2023年1月以来接受经直肠前列腺穿刺活检和TURP的患者,排除有可能影响全身炎症指标的患有自身免疫性或其他炎症性疾病史的患者、急性感染的患者、有化疗、放疗史的患者。收集纳入研究患者的年龄、PSA水平、前列腺体积、前列腺癌患者Gleason评分、中性粒细胞计数和淋巴细胞计数等数据。其中,中性粒细胞计数除以淋巴细胞计数计算出NLR;外周血血小板计数除以淋巴细胞计数计算出PLR;外周血淋巴细胞计数除以单核细胞计数等于LMR。若患者同时罹患良性前列腺增生和前列腺癌,则归纳至前列腺癌组。根据患者病理结果,将患者进一步分为前列腺增生组和前列腺癌组,回顾性分析全身炎症指标、PSA及其衍生指标与前列腺穿刺术后病理结果的相关性。正态分布的连续数据以均数±标准差（SD）表示,偏态资料以中位数及四分位数间距表示;分类变量用频率和百分比表示;连续变量以独立样本t检验或方差分析进行比较,对分类变量进行卡方检验;不符合正态分布时应用秩检验（Mann-Whitney U或Kruskal-Wallis H检验）进行统计分析;应用ROC曲线及AUC分析PSA、全身炎症指标以及PSA联合全身炎症指标对预测前列腺癌患者的病理结果的效能,然后根据约登指数最大值,选取最佳截断值对数据进行进一步分层分析,在所有分析中,P<0.05则认为具有统计学意义。【结果】1、PCa与BPH患者相比,前列腺癌患者的年龄（72.4±7.99 vs 69.7±7.68岁）、单核细胞计数（0.60±0.23 vs 0.65±0.22）要更高（P>0.05）,而前列腺体积（66.1579±38.18 vs 49.33±31.17cm3）要更小（P<0.05）。2、PCa与BPH患者相比,PCa患者的NLR值（2.67±1.79 vs 2.55±1.32）和PLR值（140.50±62.28 vs 143.88±62.59）在两组中无明显差异（P>0.05）。3、BPH组和PCa组间LMR值、纤维蛋白原、D-二聚体均存在显著差异（P<0.05）,PCa组的LMR值（3.33±1.35 vs 2.94±1.49）显著低于BPH组,PCa组的纤维蛋白原（3.22±1.01 vs 3.60±1.15 g/L）,D-二聚体（0.64±1.18 vs 1.53±4.35mg/L）显著高于BPH组。4、LMR值、纤维蛋白原、D-二聚体与Gleason评分,危险分级,危险分组中无明显关系。5、BPH组和PCa组间PSA、PSAD、PSAM、PSAMR均