关键词： 高通量透析   维持性血液透析   微炎症   Toll样受体4   热休克蛋白70   白介素  

摘要： 目的探究在维持性血液透析(Maintained hemodialysis,MHD)患者中热休克蛋白70(Heat shock protein,HSP70)与微炎症的关系。观察高通量血液透析(High flux hemodialysis,HFHD)与低通量血液透析(Low flux hemodialysis,LFHD)两种不同模式的透析方式对MHD患者体内毒素的清除能力,为改善患者的微炎症状态,延缓血液透析并发症的发展,选择更加合理及优质的血液净化模式。方法选择沈阳医学院血液净化中心透析时间超过6个月的MHD病人67例,其中随机分为LFHD组34例,HFHD组33例。2组患者分别在首次透析前、首次透析后及透析治疗3个月后透析前,通过酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测HSP70、核转录因子(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、血清白介素6(Interleukin-6,IL-6)、β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、超敏C反应蛋白(High-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)的水平。同时在我院检验科测定两组患者首次透析前、首次透析后及透析治疗3个月后透析前的血肌酐(Serum creatinine,Scr)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)及甲状旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH)的水平。结果***患者血液透析前HSP70与TLR4、IL-6、Scr呈正相关(r=0.4934,0.313,0.533,P<0.05),TLR4与IL-6呈正相关性(r=0.4495,P<0.05),Scr与IL-6具有正相关性(r=0.2722,P<0.05),HSP70与NF-κB相关性不显著(r=0.109,P>0.05)。HFHD组三个月后HSP70与IL-6呈正相关(r=0.4522,P<0.05)。***组、HFHD组的Scr与BUN首次透析后、透析3个月后透析前分别与首次透析前相比,Scr及BUN差异有统计学意义(P<0.05)。***组的β2-MG、PTH、hs-CRP、IL-6首次透析后及透析3个月后与首次治疗前相比,LFHD组的指标差异无统计学意义(P>0.05)。HFHD组首次透析后与首次透析前相比β2-MG、PTH差异有统计学意义(P<0.05),hs-CRP、IL-6差异无统计学意义(P>0.05)。HFHD组透析3个月后透析前与首次透析前相比β2-MG、PTH、hs-CRP、IL-6差异有统计学意义(P<0.05)。***组HSP70、NF-κB、TLR4首次治疗后与首次治疗前相比,HSP70差异有统计学意义(P<0.05),余指标无统计学意义(P>0.05),3个月透析治疗后与首次治疗前相比各指标无统计学意义(P>0.05)。HFHD组HSP70、NF-κB、TLR4首次治疗后与首次治疗前相比HSP70差异有统计学意义(P<0.05),余指标无统计学意义(P>0.05),3个月透析后与首次治疗前相比各指标有统计学意义(P<0.05)。结论***患者存在微炎症状态。***70与TLR4、IL-6呈正相关,考虑HSP70可以通过HSP70/TLR4/IL-6通路引起炎症反应。***可以清除Scr、BUN为代表的小分子毒素,对于以β2-MG、PTH、IL-6、hs-CRP、HSP70、TLR4为代表的中大分子毒素的清除能力不佳。长时间LFHD治疗对MHD患者的微炎症状态的改善效果不佳。***对小分子及中分子毒素均有一定的清除能力,且通过HFHD治疗3个月后对HSP70为代表的大分子也有有一定的改善效果。提高透析时间后,HFHD可以进一步清除HSP70降低IL-6炎症因子水平。HFHD对缓解血液透析患者的微炎症状态有一定作用,优于LFHD。

关键词： 多囊卵巢综合征   白介素-22   炎症   凋亡   类固醇合成  

摘要： 目的:多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)是一种育龄期女性常见的代谢性紊乱疾病,病因不明。目前大量研究表明其发病机制与慢性炎症密切相关。白细胞介素22(Interleukin 22,IL-22)在调节炎症性疾病方面发挥重要作用。然而IL-22是否影响卵巢颗粒细胞功能及其与PCOS的关系尚不明确。本研究旨在了解PCOS患者卵泡液中IL-22水平的变化,确定其受体IL-22受体1(IL-22 receptor 1,IL-22R1)在卵巢颗粒细胞的表达定位,探究IL-22在炎症条件下对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡和类固醇激素生成相关基因的影响及相关信号通路变化,为探索PCOS的病因提供新的理论依据。 方法:从2021年3月至2021年7月于重庆医科大学附属第一医院生殖中心收集了15名PCOS患者及15名对照组患者的卵巢颗粒细胞和卵泡液。通过酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测两组患者卵泡液中IL-22的表达水平。通过逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫荧光染色-激光共聚焦成像实验,观察IL-22受体1(IL-22R1)在颗粒细胞中的表达和定位。使用人重组蛋白IL-22(Recombinant human IL-22 protein,rh IL-22)和或LPS处理人类卵巢颗粒细胞瘤细胞系(Human ovarian granulosa tumor cell line,KGN)细胞,通过CCK-8试剂盒和Ed U试剂盒评估其对细胞增殖的影响;通过流式细胞术探究其对细胞凋亡的影响。通过Western Blot评估凋亡相关基因(BAX、BCL-2、Caspase3、Cleaved-Caspase3)和类固醇生成相关的基因(St AR、CYP11A1、CYP19A1)蛋白水平的表达变化。也通过Western Blot评估JAK2和STAT3信号因子的磷酸化水平。 结果:(1)PCOS患者卵泡液中IL-22含量低于对照组(P<0.05);(2)IL-22R1表达于人颗粒细胞且主要定位于细胞膜;(3)rh IL-22单独处理可以显著促进KGN细胞增殖;在炎症状态下,它能够有效减弱LPS诱导的细胞增殖抑制(P<0.05)。(4)rh IL-22单独处理对KGN细胞凋亡没有明显影响;但在炎症状态下,它可以有效地抑制LPS诱导的KGN细胞凋亡,同时还可以抑制KGN细胞BCL-2(P<0.05)蛋白表达,促进BAX和Cleaved Caspase-3(P<0.01)蛋白的表达;(5)Western Blot结果显示,LPS会导致激素合成相关基因St AR(P<0.001)、CYP11A1(P<0.05)和CYP19A1(P<0.05)的表达下调,而rh IL-22能逆转LPS对St AR(P<0.001)、CYP11A1(P<0.05)和CYP19A1(P<0.05)的这一作用。(6)Western Blot结果显示rh IL-22能激活KGN细胞中的JAK2/STAT3信号通路,后者与凋亡、增殖、和炎症相关。 结论:我们的结果表明IL-22在PCOS患者卵泡液中表达下调,其表达水平异常可能与PCOS的发生有关;IL-22受体IL-22R1主要定位于卵巢颗粒细胞膜,表明卵泡液中IL-22水平异常可能会导致卵巢颗粒细胞功能异常。进一步研究发现IL-22能促KGN细胞增殖,抑制炎症诱导的细胞凋亡;同时,IL-22能上调炎症状态下受抑制的类固醇激素合成基因的表达且IL-22能激活JAK/STAT3通路。综上所述,我们的研究从分子水平对炎症相关因素在PCOS发病机制方面的作用提供了新的理论依据。

关键词： 低氧   自噬   NEU1   ATG5   唾液酸化   巨噬细胞  

摘要： 研究背景 在动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）疾病进程中,斑块内的氧气供需不匹配会导致局部缺氧,进一步促进脂质的积累和炎症反应的发生。有研究表明,在动脉壁中的低氧区域内富含巨噬细胞与泡沫细胞,并伴随细胞内自噬的过度激活。而自噬是一种细胞的稳态过程,可增加细胞对多种应激源（氧化应激、低氧）的耐受性。自噬相关基因（Autophagy-related genes,ATGs）受到多种翻译后修饰（Post-translational modifications,PTMs）的调节。在动脉粥样硬化中,低氧能诱导细胞炎症的增加,但其是否受到自噬水平的调控尚不清楚,具体机制仍有待探究。因此,本研究将采用体外诱导巨噬细胞低氧模型,研究低氧诱导巨噬细胞炎症的可能机制,为动脉粥样硬化发病机制的研究提供更多的理论支撑。 研究目的 建立体外巨噬细胞低氧模型,探究自噬是否参与低氧诱导的巨噬细胞炎症及其具体机制,为动脉粥样硬化的研究提供更多的方向。 研究方法 1)构建体外RAW264.7巨噬细胞低氧模型 在低氧工作站中对RAW264.7细胞进行低氧（1%O2）处理,采用蛋白印迹（Western blot,WB）、免疫荧光及实时定量PCR（quantitative real-time Polymerase Chain Reaction,q-PCR）检测RAW264.7细胞的低氧诱导因子（Hypoxia-Inducible Factor 1-Alpha,HIF-1α）水平,验证巨噬细胞低氧模型是否构建成功。在光学显微镜的白光模式下观察细胞形态变化以及CCK-8分析低氧对巨噬细胞活力的影响;采用WB、免疫荧光及q-PCR方法检测低氧条件下炎症因子的变化。 2)探索低氧诱导的RAW264.7细胞炎症与自噬的关系 RAW264.7细胞进行低氧处理后,采用WB方法分析自噬相关蛋白、自噬标记物LC3和自噬关键调节蛋白Beclin1的表达;免疫荧光检测LC3的荧光水平;转染m Cherry-GFP-LC3质粒后分析荧光变化;TEM分析自噬溶酶体的产生。自噬抑制剂Baf A1和3-MA联合低氧处理巨噬细胞后,通过免疫荧光分析LC3的荧光变化,WB分析LC3及炎症因子的表达情况。 3)探究低氧诱导巨噬细胞自噬的分子机制 构建巨噬细胞ATG5敲除模型,通过WB方法验证ATG5在低氧诱导巨噬细胞自噬及炎症中的关键作用。巨噬细胞低氧处理后,通过co-IP实验分析ATG5的唾液酸化水平,并采用q-PCR及WB分析唾液酸酶及唾液酸转移酶的表达。构建ST6GAL过表达质粒,通过WB验证转染效率;co-IP实验检测ATG5唾液酸化变化。通过分子对接软件初步分析NEU1与ATG5相互作用的蛋白构象,并通过co-IP、WB实验进一步验证NEU1与ATG5的结合。为了探究NEU1的作用,建立si RNA瞬时干扰NEU1巨噬细胞模型及添加唾液酸酶抑制剂,通过co-IP、WB、免疫荧光、TEM、等实验检测ATG5的唾液酸化水平、自噬相关蛋白及炎症因子的表达。 研究结果 1)与常氧组相比,低氧显著上调RAW264.7细胞HIF-1α的水平,同时CCK-8实验及光学显微镜结果表明低氧并不影响巨噬细胞的形态及活力,但炎症因子的水平在低氧条件下显著上调。 2)低氧显著上调自噬相关蛋白、自噬标记物LC3、自噬关键调节因子Beclin1的水平,且在自噬晚期抑制剂Baf A1干预后,LC3水平相比于单独加Baf A1组显著上升。与低氧组相比,低氧联合自噬早期抑制剂3-MA干预后,细胞的自噬水平及炎症因子水平显著降低。 3)RAW264.7细胞在低氧条件下转染si ATG5后,自噬及炎症水平显著降低。Co-IP结果显示ATG5在低氧下发生去唾液酸化,促进ATG5-ATG12-ATG16L自噬复合物形成,且q-PCR及WB结果显示低氧下唾液酸酶NEU1显著升高,ST6GAL水平显著降低。低氧条件下转染ST6GAL过表达质粒后,ATG5的唾液酸化水平降低,但自噬水平反而上升。分子对接及co-IP结果表明NEU1与ATG5存在相互作用,低氧联合si NEU1及唾液酸酶抑制剂处理细胞后,自噬及炎症水平显著降低。 研究结论 1)低氧激活RAW264.7细胞自噬,促进细胞炎症反应的发生。 2)低氧诱导唾液酸酶NEU1与ATG5发生相互作用,介导ATG5去唾液酸化,促进自噬复合体ATG12-ATG5-ATG16L的形成,激活细胞自噬及炎症。

关键词： 去泛素化酶USP14   NOD2   炎症性肠病  

摘要： 目的:1.探讨克罗恩病患者肠道标本中去泛素化酶USP14的表达情况。 2.探讨去泛素化酶USP14通过调控NOD2通路对THP-1单核细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8的影响,并进一步探讨可能涉及的分子机制。 方法:1.收集南华大学附属长沙中心医院克罗恩病患者手术切除的结肠病理组织标本,通过免疫组化和荧光原位杂交技术检测USP14在克罗恩病患者结肠组织中的表达情况。 2.以THP-1单核细胞为研究对象,用不同浓度的USP14特异性抑制剂IU1预处理细胞,再使用TNF-α、Toll样受体1/2(TLR1/2)激动剂Pam3CSK4、NOD2配体MDP激活细胞,qRT-PCR检测三种促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的表达情况。 3.选取THP-1单核细胞培养,用不同浓度IU1预处理细胞,然后加入MDP处理不同时间,通过qRT-PCR检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录水平。 4.通过Western Blot检测MDP对静息状态下THP-1单核细胞MAPKs(ERK1/2、JNK、P38)和NF-κB p65磷酸化蛋白的影响。用不同浓度IU1预处理THP-1单核细胞,然后加入MDP,通过Western Blot检测在MDP诱导下THP-1单核细胞USP14、MAPKs和NF-κB p65磷酸化蛋白表达情况。 5.使用IU1、P38抑制剂、Erk1/2抑制剂、JNK抑制剂和NF-κB p65抑制剂预处理THP-1细胞,通过qRT-PCR检测在MDP单独处理时细胞时、MDP分别与各抑制剂联合处理细胞时,炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录水平。 结果:1.与正常结肠组织相比,CD患者结肠组织中USP14蛋白、USP14 mRNA表达增加。 2.抑制去泛素化酶USP14可以上调TNF-α、Pam3CSK4、MDP诱导的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录水平。 3.抑制USP14活性可以上调MDP诱导的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的表达,且呈剂量和时间依赖性。 ***可诱导THP-1单核细胞中ERK1/2、JNK、P38和NF-κB p65磷酸化蛋白表达,并且具有时间和剂量依赖性,但对USP14蛋白表达无影响。IU1与MDP共处理可使p-ERK1/2、p-JNK蛋白表达升高。 5.u0126(ERK1/2抑制剂)、sp600125(JNK抑制剂)对MDP和IU1共处理下炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录有抑制作用,u0126尤为明显。 结论:去泛素化酶USP14在克罗恩病(CD)患者肠道组织中的表达增加。去泛素化酶USP14通过ERK1/2、JNK MAPK通路负调控MDP诱导的炎症因子。

关键词： 鼻敏康合剂   变应性鼻炎   最轻持续性炎症   BCL11B   ILC2可塑性  

摘要： 目的变应性鼻炎的发病是环境暴露对先天遗传背景影响的结果。天然淋巴样细胞（Innate lymphoid cells,ILCs）相互转化可能是最轻持续性炎症存在和变应性鼻炎反复发生的关键细胞基础,其中尤以ILC2可塑性变化为前提。基于《内经》理论以“和利阳气”为治疗原则的院内制剂-鼻敏康合剂临床收效良好,但控制最轻持续性炎症作用机制尚不明确。分析鼻敏康合剂对最轻持续性炎症期炎症状态的调控及作用机制,明确转录因子B细胞白血病/淋巴瘤11B（B-cell leukemia/lymphoma11B,BCL11B）对ILC2可塑性的调控作用,探讨鼻敏康合剂干预BCL11B调控ILC2可塑性在最轻持续性炎症状态下的变化,揭示鼻敏康合剂控制炎症状态、减少复发几率的具体机制是本研究的主要目的。方法1.鼻敏康合剂对阳气虚型变应性鼻炎患者最轻持续性炎症状态下ILCs标志性炎性因子和转录因子的调控及作用机制。通过高通量转录组mRNA测序技术对临床健康志愿者、阳气虚型变应性鼻炎发作期、最轻持续性炎症期以及鼻敏康合剂治疗后患者鼻黏膜组织细胞进行检测,通过分析差异表达基因,明确阳气虚型变应性鼻炎不同发病时期的病理机制,根据基因定量分析变应性鼻炎发作期、最轻持续性炎症期以及鼻敏康合剂干预后ILCs代表性炎性因子和转录因子的基因表达水平,明确鼻敏康合剂对最轻持续性炎症期患者气道黏膜炎症的调控及作用机制。2.鼻敏康合剂对最轻持续性炎症模型小鼠炎症水平的影响。建立变应性鼻炎和最轻持续性炎症小鼠模型,分析不同发病时期小鼠气道组织病理学改变及血清炎性因子表达,明确鼻敏康合剂对模型小鼠炎症变化的影响。3.鼻敏康合剂干预BCL11B对最轻持续性炎症模型小鼠ILCs亚群的影响。采用RT-qPCR检测变应性鼻炎、最轻持续性炎症模型小鼠肺脏中BCL11B及ILC2、ILC3亚群相关基因表达水平,采用FACS检测模型小鼠鼻黏膜、肺脏中BCL11B+ILC及ILC2、ILC3亚群比例变化,明确BCL11B的表达与ILC2、ILC3亚群的相关性。采用RT-qPCR检测鼻敏康合剂对最轻持续性炎症模型小鼠肺脏中BCL11B及ILC2、ILC3亚群相关基因表达水平的影响,利用FACS检测鼻敏康合剂对模型小鼠鼻黏膜和肺脏中BCL11B+ILC及ILC2、ILC3亚群比例的影响,明确鼻敏康合剂通过干预BCL11B对ILC2和ILC3亚群的影响。通过RT-qPCR检测鼻敏康合剂干预最轻持续性炎症模型小鼠肺脏中BCL11B对ILC1相关因子基因表达水平的影响,利用FACS检测鼻敏康合剂干预模型小鼠鼻黏膜和肺脏中BCL11B对ILC1及ILC1/ILC2双阳性亚群比例的影响,探讨鼻敏康合剂干预BCL11B调控ILC2向ILC1转化的可能。采用RT-qPCR、ELISA检测鼻敏康合剂干预后最轻持续性炎症模型小鼠肺脏中IL-12和IL-18基因、蛋白表达水平的变化,利用FACS检测鼻敏康合剂干预后模型小鼠肺脏中IL-18Rα+IL-13+ILC、12Rβ2+IL-13+ILC的比例,明确鼻敏康合剂干预BCL11B调控ILC2可塑性向ILC1转化。结果1.阳气虚型变应性鼻炎发作期、最轻持续性炎症期以及鼻敏康合剂干预最轻持续性炎症期的机制变化及ILCs标志性炎性因子、转录因子基因表达的差异。通过高通量转录组mRNA测序发现,变应性鼻炎发作期、最轻持续性炎症期及鼻敏康合剂干预后差异表达基因主要具有调控转录因子、催化受体等分子功能,利用细胞因子或受体间相互作用,调节趋化因子、细胞黏附分子的表达,影响细胞迁移能力,通过Th1、Th2和Th17细胞分化、IL-17、Toll-like样受体、NF-κB和JAK-STAT等通路信号转导参与全身免疫系统的调节。进一步分析变应性鼻炎发作期、最轻持续性炎症期以及鼻敏康合剂干预后患者鼻黏膜组织细胞中ILCs关键性炎性因子和转录因子的基因表达水平,发现变应性鼻炎发作期ILC2分泌Th2类炎性细胞因子IL-5、IL-13和ILC3分泌Th17类炎性因子IL-17A呈上调趋势,最轻持续性炎症期IL-17A和转录因子转录本RORC上调趋势明显,鼻敏康合剂干预后,Th17类炎性因子下调,相反ILC2分泌Th2类炎性因子IL-5和ILC1分泌Th1类炎性因子IFNG上调明显。2.鼻敏康合剂对最轻持续性炎症小鼠模型炎症水平的影响。通过气道组织病理学染色发现,与Control组相比,AR组小鼠鼻黏膜和肺脏组织结构复杂、紊乱,表现出黏膜重塑特征,杯状细胞重度肥大、增生（P<0.001）,鼻腔及黏膜下见大量嗜酸性粒细胞（P<0.001）,肥大细胞浸润明显（P<0.001）;MPI组小鼠鼻黏膜和肺脏仍存在大量炎症浸润,杯状细胞肥大（P<0.01）,鼻腔及固有层仍可见嗜酸性粒细胞（P<0.001）

关键词： 内质网应激   PM2.5/细颗粒物   气道炎症   细胞凋亡  

摘要： 目的:本研究旨在探讨内质网应激反应在可吸入细颗粒物(Fine particulate matter,PM2.5)诱导人气道上皮细胞炎症和凋亡中的分子机制及作用,以期提供有效治疗靶点。方法:本实验分为临床组织标本验证和体外细胞实验两部分:1.临床组织标本验证:收集24例行肺部手术切除患者的多余组织标本(经免疫组化确认无肿瘤细胞),其中慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary diseases,COPD)患者(以下简称慢阻肺)14例,对照组(无慢阻肺病史组)10例;通过免疫组织化学法观察人支气管肺组织中葡萄糖调节蛋白78(Glucose response protein 78,GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PKR-like ER kinase,PERK)蛋白的表达。2.体外细胞实验:体外培养人气道上皮细胞系16-HBE,予以不同浓度的PM2.5溶液刺激,观察细胞刺激前后的生长和增殖情况,CCK8法测定各组细胞存活率,并选取合理的刺激浓度与刺激时间。以不加处理的气道上皮细胞16-HBE为空白组对照,设立PM2.5刺激组和PM2.5+选择性PERK抑制剂GSK2606414组。先予选择性PERK抑制剂GSK2606414组预处理细胞,再以PM2.5刺激。采用Western blot法检测干预前后内质网应激相关蛋白GRP78、PERK、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、磷酸化PERK(Phosphorylation of PKR-like ER kinase,p-PERK)、真核生物起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor 2 alpha,e IF2α)和磷酸化e IF2α(Phosphorylation of eukaryotic translation initiation factor 2,p-e IF2α)表达量;ELISA检测干预前后炎性因子肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-α、白介素(Interleukin,IL)-6及黏蛋白(Mucin,MUC)5AC相对含量;免疫荧光化学法观察干预前后内质网标志蛋白GRP78和MUC5AC的表达情况;以流式细胞仪检测干预前后各组细胞凋亡情况。结果:1、临床组织标本验证结果显示:在无COPD病史患者手术支气管肺组织标本中,检测到GRP78、PERK蛋白的表达。而COPD病史患者组的支气管肺组织标本中,上述蛋白的表达较非COPD患者组的表达明显增加。2、细胞实验结果:(1)选取100μg/m L的PM2.5染毒24小时为最适作用浓度及时间,分不同组处理细胞。检测到PM2.5刺激24小时后,细胞活性氧含量、细胞凋亡率及细胞上清中TNF-α、IL-6和MUC5AC蛋白相对含量较空白组均有明显增加(P<0.05);免疫荧光检测到GRP78和MUC5AC蛋白表达较空白组增强;内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP、p-PERK、p-e IF2α的表达也较空白组增加(P<0.05)。(2)使用抑制剂GSK干预后均使上述内质网应激相关蛋白表达降低,活性氧含量减少,细胞凋亡率降低,细胞上清中炎症因子、MUC5AC表达下降,GRP78和MUC5AC蛋白荧光表达减弱(P<0.05)。结论:PM2.5可通过内质网应激促进气道上皮的氧化应激、凋亡、炎症和粘液高分泌。此外,内质网应激相关信号通路PERK/e IF2α可能在调节气道上皮氧化应激、凋亡、炎症和粘液高分泌等方面发挥重要作用。

关键词： 肺炎支原体肺炎   支气管肺泡灌洗液   细胞因子   细胞学分类   炎症反应  

摘要： 研究背景及目的肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)占儿童社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)的20-40%,是常见的影响学龄前和学龄期儿童的呼吸系统疾病。近年来,重症肺炎支原体肺炎(severe mycoplasma pneumoniae pneumonia,SMPP)的患病率呈逐年升高趋势,治疗不及时或无效时可引起严重并发症。本研究旨在分析SMPP患儿全身及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)炎症指标特点,探讨其对并发症的预测价值,为早期识别SMPP并发症,提供个体化、精准炎症调控治疗提供临床依据。研究方法选取山东大学齐鲁医院儿科在2021年10月至2022年1月期间收治的重症肺炎患儿127例进行回顾性分析。收集患儿性别、年龄、症状与体征(发热、咳嗽、咳痰、肺部啰音)、影像学检查;外周血;中性粒细胞(NEU)、淋巴细胞(LYM)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、降钙素原(PCT)、乳酸脱氢酶(LDH)、D-二聚体(D-Di)、免疫球蛋白 E(IgE)、淋巴细胞亚群;BALF:白介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12p70、IL-17、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、液基薄层细胞制片细胞学分析、mNGS检查。根据是否肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)感染分为:SMPP组(n=103)、细菌组(n=24);根据病原学结果将SMPP组分为:单一MP组(n=51)、MP+细菌组(n=34)、MP+病毒组(n=18);根据支气管镜下表现SMPP组分为:塑型性支气管炎(plastic bronchitis,PB)组(n=22)、非PB组(n=81);根据是否合并胸腔积液将SMPP组分为:胸腔积液组(n=32)、非胸腔积液组(n=71);根据病程(从发病至出院)将SMPP组分为:病程≤9d组(n=61)、病程>9d组(n=42)。研究结果1.单一 MP组、MP+细菌组、MP+病毒组、细菌组四组间比较:(1)与MP+细菌组、MP+病毒组、细菌组相比,单一 MP组患儿发病年龄显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与细菌组相比,MP+细菌组、MP+病毒组大叶性肺炎比例显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与细菌组相比,单一 MP组、MP+细菌组、MP+病毒组的NLR、IL-1β水平显著升高,BALF的巨噬细胞水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与细菌组相比,MP+细菌组、MP+病毒组的IL-6、TNF-α水平,MP+细菌组LDH、IFN-γ水平,MP+病毒组D-Di水平均显著升高,单一 MP组LYM水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与细菌组相比,单一 MP组、MP+细菌组、MP+病毒组患儿BALF的中性粒细胞水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),但组间两两比较无统计学差异(P>0.05);(3)性别、症状与体征、肺不张、胸腔积液、塑型性支气管炎比例、NEU、CRP、ESR、IgE、CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+T及BALF的IL-2、IL-4、IL-10、IL-12p70、IL-17水平,在4组间差异无统计学意义(P>0.05)。***组、非PB组比较:(1)与非PB组相比,PB组胸腔积液比例高,NEU、NLR、CRP、PCT、D-Di、LDH、IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高,LYM 水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);(2)年龄、性别、大叶性肺炎比例、ESR 及 BALF 的 IL-2、IL-4、IL-10、IL-12p70、IL-17、中性粒细胞、巨噬细胞和上皮细胞水平,在2组间差异无统计学意义(P>0.05);与非PB组相比,PB组肺不张比例、IFN-γ水平升高,但差异无统计学意义(P>0.05);(3)NLR、D-Di和IL-1β预测SMPP合并PB的ROC曲线下面积分别为0.741、0.767、0.732。3.胸腔积液组、非胸腔积液组比较:(1)与非胸腔积液组相比,胸腔积液组塑型性支气管炎比例高,NEU、NLR、CRP、PCT、D-Di、LDH水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)年龄、性别、LYM、ESR及BALF的IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12p70、IL-17、中性粒细胞、巨噬细胞、上皮细胞水平,在2组间差异无统计学意义(P>0.05);与非胸腔积液组相比,胸腔积液组BALF的TNF-α、IFN-γ水平升高

关键词： 脓毒症   IL-6反式信号传导通路   细胞免疫   体液免疫   炎性因子   血脑屏障  

摘要： 第一部分抑制IL-6反式信号转导通路抑制脓毒症小鼠炎性反应和调节免疫细胞目的:探讨IL-6反式信号传导通路对脓毒症小鼠免疫炎性反应的调节作用。方法:将80只小鼠随机分为假手术组（sham,n=15）、脓毒症组（CLP,n=30）及脓毒症+抑制剂sgp130Fc组（CLP+sgp130Fc,n=20）、sgp130Fc组（sgp130Fc,n=15）。采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症模型。Sham组除不行盲肠结扎及穿孔外,其他操作同脓毒症组;sgp130Fc组除不使用盲肠结扎及穿孔外,其他操作同CLP+sgp130Fc组。于造模1 h后腹腔注射sgp130Fc 0.5 mg/kg。于假手术或CLP后1～10 d记录生存情况和体重。造模后24 h,用ELISA检测血浆IL-6、IL-10、MCP-1及TNFα的浓度;收集外周血液并制备单细胞悬液,用流式细胞测量术进行白细胞分选。结果:与假手术组比较,脓毒症组小鼠术后生存率和体重下降,24 h血浆炎性因子IL-6、IL-10、MCP-1及TNFα水平上升（P<0.05）;血液中CD3+CD4+T淋巴细胞比例明显降低,CD3+CD8+T淋巴细胞比例明显升高,CD45+CD19+B淋巴细胞比例明显降低（P<0.05）。与脓毒症组比较,脓毒症+抑制剂sgp130Fc组小鼠术后生存率和体重上升,24 h血浆炎性因子IL-6、IL-10、MCP-1及TNFα水平降低,CD3+CD4+T淋巴细胞比例显著升高,CD3+CD8+T淋巴细胞比例显著降低,CD45+CD19+B淋巴细胞比例明显升高（P<0.05）。结论:抑制IL-6反式信号传导通路能降低脓毒症小鼠死亡率,可能与其调控免疫细胞失衡和抑制炎性反应有关。第二部分IL-6反式信号传导通路抑制剂sgp130Fc通过减轻血脑屏障受损改善脓毒症小鼠认知功能障碍目的:评价抑制IL-6反式信号转导通路对脓毒症小鼠认知功能和神经行为学的影响。方法:健康雄性C57BL/6J小鼠80只,8～10周龄,体重22～24 g,采用随机数字表法将小鼠分为4组:假手术组（n=10）、CLP组（n=35）、CLP+sgp130Fc组（n=25）和sgp130Fc组（n=10）。采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症模型。Sham组除不行盲肠结扎及穿孔外,其他操作同CLP组;sgp130Fc组除不使用盲肠结扎及穿孔外,其他操作同CLP+sgp130Fc组。于假手术或CLP后1 h,sgp130Fc组与CLP+sgp130Fc组腹腔注射sgp130Fc 0.5 mg/kg。于假手术或CLP后1～10 d进行神经功能评分,每组取4只于假手术或CLP后24 h采用Western blot法测定海马组织occludin表达水平。每组取5只于假手术或CLP术后第4天开始,采用Morris水迷宫测定认知功能。结果:与Sham组比较,CLP组术后2～10 d神经功能评分降低,海马组织occludin表达下调,穿越原平台所在区域次数和目标象限活动时间减少（P<0.05）,sgp130Fc组上述指标比较差异无统计学意义（P>0.05）;与CLP组比较,CLP+sgp130Fc组CLP术后2～10 d神经功能评分升高,海马组织occludin表达上调,穿越原平台所在区域次数和目标象限活动时间增加（P<0.05）。结论:抑制IL-6反式信号转导通路可减轻血脑屏障受损,减轻小鼠认知功能障碍。

关键词： SIRI   射血分数保留的心力衰竭   再住院不良事件   中医药治疗  

摘要： 研究目的: 1.分析HFpEF患者不同SIRI水平的基线资料、理化检查、超声心动图等指标差异,探析SIRI与各理化指标、超声心动图等指标的相关性,寻找影响SIRI水平的影响因素。 2.初步探究中医药干预对HFpEF患者住院前后SIRI水平的影响。 3.查找不同SIRI水平的HFpEF患者再住院不良事件发生率及其影响因素。 研究方法: 1.采集符合纳排标准的HFpEF患者的入院基础信息、理化指标、超声心动图、住院用药,建立回顾性数据库,根据SIRI中位数水平分为SIRI低水平组（SIRI<1.26）和SIRI高水平组（SIRI≥1.26）,观察两组相关指标差异、中医药使用情况以及中医药干预前后SIRI的变化。 2.纳入HFpEF患者于2022年12月统一随访,记录两组再住院不良事件发生情况,绘制生存曲线,寻找影响HFpEF患者预后的因素,观察中医药干预对HFpEF患者预后的价值。 研究结果: 1.临床基线资料 共纳入HFpEF患者415例,其中SIRI低水平组208例,男性61例,占29.3%,女性147例,占70.7%,中位年龄77岁;SIRI高水平组207例,男性80例,占38.6%,女性127例,占61.4%,中位年龄78岁。两组女性患者中绝经期女性均占100%。患者入院时性别、年龄、收缩压、舒张压、心率等方面两组之间均无明显差异（P>0.05）。两组均以女性、高血压占比最多。低水平组NYHA心功能Ⅱ级多于高水平组,高水平组NYHA心功能Ⅲ、Ⅳ级多于低水平组（P<0.05）。 2.理化指标 与SIRI低水平组相比,SIRI高水平组BNP、血钾、尿素氮、肌酐、糖化血红蛋白、FT4、D-二聚体水平更高,血钠、血氯、白蛋白、e GFR、TG及GNRI更低,差异均有统计学意义（all P<0.05）,红细胞、血红蛋白、血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、TC、HDL-C、LDL-C、TSH、T3、T4、FT3等指标两组之间均无统计学差异（all P>0.05）。 3.炎症指标 与SIRI低水平组相比,SIRI高水平组白细胞、中性粒细胞、单核细胞、NLR、PLR、LMR、SII及CRP水平更高,淋巴细胞水平更低,差异均有统计学意义（all P<0.05）。血小板、嗜酸性粒细胞、尿酸及乳酸水平两组之间比较均无统计学差异（all P>0.05）。 4.超声心动图指标 与SIRI低水平组相比,SIRI高水平组LVPWd、RVD更小,差异具有统计学意义（P<0.05）,其余心脏结构及功能指标均无统计学差异（all P>0.05）。 5.相关性分析 5.1与基线资料相关性 SIRI与年龄（r=0.107,P=0.029）、NYHA心功能分级（r=0.263,P=0.000）呈正相关,SIRI与收缩压、舒张压未见相关性（all P>0.05）。 5.2与理化指标相关性 SIRI与BNP（r=0.106,P=0.031）、血钾（r=0.103,P=0.036）、尿素氮（r=0.130,P=0.008）、肌酐（r=0.157,P=0.001）、FT4（r=0.137,P=0.008）、D-二聚体（r=0.213,P=0.000）呈正相关,与血钠（r=-0.159,P=0.001）、血氯（r=-0.347,P=0.000）、白蛋白（r=-0.119,P=0.015）、GNRI（r=-0.128,P=0.009）、e GFR（r=-0.103,P=0.036）、T3（r=-0.161,P=0.012）呈负相关,与糖化血红蛋白未见明显相关性（P>0.05）。 5.3与炎症指标相关性 SIRI与白细胞（r=0.494,P=0.000）、血小板（r=0.117,P=0.017）、中性粒细胞（r=0.661,P=0.000）、单核细胞（r=0.658,P=0.000）、NLR（r=0.790,P=0.000）、PLR（r=0.421,P=0.000）、LMR（r=0.843,P=0.000）、SII（r=0.696,P=0.000）、CRP（r=0.328,P=0.000）呈正相关,与淋巴细胞（r=-0.362,P=0.000）呈负相关。 ***的独立影响因素 年龄对SIRI的影响有统计学差异（b=0.024,t=2.492,P=0.013）,白细胞对SIRI的影响有统计学差异（b=0.372,t=10.836,P=0.000）,CRP对SIRI的影响有统计学差异（b=0.043,t=10.500,P=0.000）。 7.中医药治疗对SIRI水平的影响 415例HFpEF患者出院时共有239例复查SIRI水平。在常规西医治疗基础加用中医药疗程<7天及仅加用中药静脉制剂治疗≥7天后SIRI水平呈上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。单联中草药、

关键词： 全身炎症反应指数   纤维蛋白原与白蛋白比值   肾癌   预后  

摘要： 目的:研究外周血中全身炎症反应指数(SIRI)及纤维蛋白原与白蛋白比值(FAR)对肾恶性肿瘤患者临床及病理特征的影响,将两者及其联合重新分组,探索与肾癌预后的价值。 方法:选取2013年1月至2018年11月在重庆医科大学附属第一医院泌尿外科进行肾癌手术治疗且病理确诊为肾恶性肿瘤的患者临床资料及随访数据。利用回顾性分析方法分析最终纳入的200例患者的临床数据。利用SPSS26.0统计软件对纳入患者的临床资料进行分析,利用ROC曲线确定术前外周血中SIRI及FAR的最佳截点值,分别为1.30;0.10。T分期,高截点评分、高SIRI、高FAR与预后OS显著相关(p<0.05),是影响肾癌术后患者预后的危险因素;而高血压,糖尿病,性别,体质指数等与OS无关(P>0.05); 结果:肾癌患者是否是肾透明细胞癌,T分期,截点评分、SIRI、FAR与预后OS显著相关(p>0.05),是影响肾癌术后患者预后的危险因素;而高血压,糖尿病,性别,体质指数等与OS无关(P大于0.05),进行Cox回归多因素分析,统计分析结果显示,在FAR,SIRI,截点评分中,只有FAR是肾癌患者OS的独立危险因素(p=0.004,HR-7.94(95CI:0.97-32.05)。结论:高纤维蛋白原与白蛋白比值是肾癌预后不良的危险因素,与全身炎症反应指数相比价值更高。