关键词： 非肌层浸润性膀胱癌   肿瘤微环境   全身炎症指标物   SII   RFS  

摘要： 【背景】膀胱癌（Bladder Cancer,BC）是全球范围内第十大最常见的恶性肿瘤类型。膀胱癌根据肿瘤对肌层组织的侵犯程度可分为非肌层浸润性膀胱癌（Non-muscular invasive bladder cancer,NMIBC）和肌层浸润性膀胱癌（Muscular invasive bladder cancer,MIBC）。在临床上,大多数的膀胱癌类型表现为NMIBC,大约占总数的75%。对于NMIBC而言,首选经尿道膀胱肿瘤电切术（Transurethral resection of bladder tumor,TURBT）,术后进行常规的膀胱灌注。但患者术后复发率仍较高,并有部分患者进展为MIBC。因此,寻找出可靠、有效的生物标记物,用来作为NMIBC结局的预测指标物,以指导临床决策和患者咨询尤为重要。近期很多研究表明,肿瘤微环境（Tumor microenvironment,TME）与全身炎症反应存在一定的关系,并且靠着价格低廉、易于获得等优点,全身炎症指标物在众多预测指标中脱颖而出。【目的】探讨全身炎症指标物在NMIBC患者预后的价值【方法】选取2017年1月1日至2021年12月31日期间,在广州医科大学附属第二医院泌尿外科确诊为NMIBC并接受TURBT手术治疗的患者,根据纳入和排除标准最后纳入77例患者,最终随访时间截止为2023年1月。首先查阅病历系统收集患者相关临床资料,包括性别、年龄、身高（cm）、体重（kg）、身体质量指数（BMI,kg/m2）、吸烟情况、高血压情况、肿瘤的大小、肿瘤的数量、肿瘤的T分期以及肿瘤的病理分级。然后通过绘制受试者工作特征（receiver operating characterist,ROC）曲线,分别计算NLR、PLR、LMR和SII的曲线下面积（area under curve,AUC）,根据约登（Youden）指数最大值,选择最佳截断值,并根据最佳截断值对患者分别进行分组。其次采用Kaplan-Meier生存法绘制各临床因素无复发生存曲线,各组间差异比较采Log-rank检验;分别比较SII、NLR、PLR和LMR高、低水平组的无复发生存率（Relapse-free survival,RFS）的差异。最后根据Cox单因素及多因素分析SII、NLR、PLR和LMR是否是RFS的独立危险因素,P<0.05被认为具有统计学意义。【结果】1.本研究共纳入77例NMIBC患者,患者年龄中位数为68岁,平均年龄为66.36（53.16～79.56）岁,中位随访时间24个月,其中有22例患者在随访期间肿瘤复发。根据ROC曲线结果可得,SII、NLR、PLR、LMR的截断值分别为499.08、2.38、117.2、3.12,而各个指标ROC曲线下面积分别为0.730、0.734、0.618、0.674。2.对患者临床资料和病理特征与各全身炎症指标进行分析发现:高血压病史（P=0.004）、肿瘤大小（P=0.014）、肿瘤数量（P=0.001）、T分期（P=0.001）及危险度分组（P=0.036）在SII分组间分布上具有统计学差异;高血压病史（P=0.003）、肿瘤数量（P=0.002）、T分期（P<0.001）及病理学分级（P=0.035）在NLR分组间分布上具有统计学差异;肿瘤数量（P=0.021）和T分期（P=0.039）在PLR分组间分布上具有统计学差异;高血压病史（P=0.008）、肿瘤数量（P=0.001）及T分期（P=0.006）在LMR分组间分布上具有统计学差异。3.根据患者术后预后情况分为复发组（n=22）和未复发组（n=55）,分别将两组NMIBC患者的SII、NLR、PLR及LMR进行Mann Whitney U检验发现:不同预后患者的SII（P=0.001）、NLR（P=0.008）、LMR（P=0.049）差异有统计学意义;而不同预后患者的PLR未发现统计学差异（P=0.18）。4.将NMIBC患者预后情况与其临床资料及。病理特征进行Log-Rank检验发现:SII（P<0.001）、NLR（P=0.003）、肿瘤大小（P=0.001）、肿瘤数量（P=0.004）、T分期（P<0.001）、病理分级（P=0.001）和危险度分组（P=0.006）与患者术后RFS存在相关性,而PLR、LMR、性别、年龄、BMI、吸烟史以及高血压病史与患者术后RFS相关性无统计学意义。5.根据单因素分析表示,肿瘤大小（HR=4.328,P=0.001）、肿瘤数量（HR=2.644,P=0.027）、T分期（HR=6.429,P<0.001）、病理分级（HR=5.087,P=0.001）、危险度分组（HR=3.649,P=0.001）、SII（HR=5.275,P<0.00

关键词： 全身炎症总指数   比值   SYNTAX评分   主要不良心血管事件   冠心病  

摘要： 研究背景冠状动脉粥样硬化性心脏病,是常见的心血管疾病之一。冠心病的病理基础是动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS),而研究发现动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病。单一的炎症细胞,如单核细胞、淋巴细胞等,在动脉粥样硬化中的作用已经有许多研究。近年来学者们积极探索联合多种炎症细胞作为综合指标来评估机体的炎症状态。其中中性粒细胞淋巴细胞比值、血小板淋巴细胞比值等在心血管疾病方面已有众多研究。全身炎症总指数(The Aggregate Index of Systemic Inflammation,AISI)是最近提出的一种综合指标,在冠心病领域未见研究。故此本研究设计了回顾性研究探讨其与冠心病的关系及临床应用价值。研究目的本研究旨在探讨AISI是否在冠心病和非冠心病人群中存在差异,AISI是否为冠心病的独立危险因素,以及其与冠心病的严重程度及预后是否存在相关关系。研究方法本研究为回顾性研究,纳入1165例于2017年8月至2022年4月在南方医院、中山人民医院、广州市第一人民医院首次行冠状动脉造影的患者,分为非冠心病组(n=275),冠心病组(n=890),对冠心病组进行随访,分析两组间基线特征及AISI的差异。以中位数分为高低AISI组,探讨AISI与冠心病的严重程度、临床稳定性及预后的关系。研究结果***为冠心病的独立危险因素(P<0.001);2.绘制ROC曲线示AISI诊断冠心病的曲线下面积为0.686(95%CI 0.649-0.723),最佳截断值为234.2,灵敏度为78.7%,特异度为48.7%;诊断急性冠脉综合征的曲线下面积为0.700(95%CI 0.669-0.731),最佳截断值为387.67,灵敏度为54%,特异度为77.1%;3.高AISI为冠心病临床不稳定的危险因素,高AISI组发生急性冠脉综合征的比例更高,具有统计学意义(P<0.001);***与冠心病患者的Syntax评分呈正相关,r值=0.22(P<0.001);5.绘制ROC曲线示AISI预测Syntax评分中高危组的曲线下面积为0.581(95%CI0.541-0.621),最佳截断值为361.07,灵敏度为62.9%,特异度为53.2%;***为冠心病患者发生主要不良心血管事件的独立危险因素(P<0.001);7.绘制ROC曲线示AISI预测主要不良心血管事件的曲线下面积为0.569(95%CI 0.519-0.618),最佳截断值为589.42,灵敏度为40.9%,特异度为71.7%(P<0.05)。结论1.与非冠心病患者比,冠心病患者的AISI水平升高;***为冠心病的独立危险因素,与冠心病的严重程度、临床稳定性相关;***为冠心病患者发生MACE的独立危险因素,其水平越高发生主要不良心血管事件的风险越大。

关键词： 肥胖   痰湿证   温胆汤   自噬   慢性炎症   PI3K-Akt-mTOR信号通路   分子机制  

摘要： 目的观察温胆汤对肥胖痰湿证大鼠糖脂代谢、腹周脂肪细胞超微结构与自噬状态变化、自噬活性标志物、炎症细胞因子以及磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K-Akt-mTOR)信号通路关键分子mRNA和蛋白表达的影响,探讨肥胖痰湿证炎症状态形成的物质基础以及温胆汤干预肥胖痰湿证炎症状态的分子机制。方法(1)动物造模:将126只大鼠随机分成2组(造模组110只和空白组16只),空白组采用基础饲料喂养,造模组采用高脂饲料喂养,共8周,制作肥胖痰湿证动物模型。(2)分组及给药:造模成功后,视体质量情况,按顺序淘汰体质量过轻者,遴选出48只肥胖大鼠,并随机分成模型(MC)组、雷帕霉素(RAPA)组、奥利司他(ORLI)组、温胆汤低剂量(WDD-L)组、温胆汤中剂量(WDD-M)组、温胆汤高剂量(WDD-H)组,每组8只;另在空白组大鼠中随机选取8只设为正常(NC)组。RAPA 组、ORLI 组、WDD 低、中、高剂量组分别按 2 mg/kg、32.40mg/kg、4.45 g/kg、8.90 g/kg、17.80 g/kg剂量(以生药量计算)进行灌胃,MC组和NC组则均给予等量蒸馏水进行灌胃,每天1次,共6周。(3)样本取材和指标检测:麻醉处理前12 h禁食不禁水,麻醉后进行样本取材,检测并计算大鼠体质量、Lee's指数、脂体比和肥胖率。根据试剂盒要求采用全自动生化分析仪检测大鼠血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)以及空腹血糖(FBG)水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测空腹胰岛素(FINS),并计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用透射电镜下观察腹周脂肪细胞超微结构与自噬状态的变化;采用免疫组织化学二步法检测腹周脂肪细胞自噬活性标志物B细胞淋巴瘤2结合蛋白-1(Beclin1)、p62、Unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)、自噬相关基因5(Atg5)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ/Ⅱ的表达水平;采用ELISA检测腹周脂肪细胞促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测腹周脂肪细胞PI3K-Akt-mTOR信号通路关键分子Ⅰ类磷脂酰肌醇-3-激酶(class Ⅰ-PI3K)、磷脂酰肌醇-3-磷酸(PIP3)、Akt、mTORC1、ULK1、结节性硬化复合体1/2(TSC1/2)mRNA的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测腹周脂肪细胞PI3K-Akt-mTOR 信号通路关键分子 classⅠ-PI3K、PIP3、磷酸化 Akt 蛋白(p-Akt)、Akt、磷酸化 mTOR 蛋白 1(p-mTORC1)、mTORC1、磷酸化 ULK1 蛋白(p-ULK1)、ULK1、TSC1、TSC2蛋白的表达。(4)统计学处理与分析:采用SPSS22.00对实验数据进行统计分析,数据资料用 表示。服从正态分布时,两组数据比较,采用两独立样本T检验,多组数据比较,采用单因素方差分析,方差齐时,各组间采用LSD法,方差不齐性时,各组间采用Tamhane's T2检验,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果(1)造模结果:高脂饲料喂养成功制作了肥胖痰湿证大鼠模型,造模组大鼠肥胖率>20%,且与空白组比较,造模组体质量和Lee's指数显著升高(P<0.01),有形体肥胖、活动度下降、皮肤无光泽及蓬松、对外界反应能力下降、食欲减退、饮水量减少、便溏等痰湿证表现。(2)药物干预结果:与NC组比较,MC组大鼠有肥胖痰湿证表现,体质量、Lee's指数、脂体比、血脂、FBG、FINS和HOMA-IR水平、腹周脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、促炎细胞因子水平均不同程度改变(P<0.05,P<0.01),信号通路关键分子classⅠ-PI3K、Akt mRNA和信号通路关键分子classⅠ-PI3K、PIP3、p-Akt、Akt、p-mTORC1、mTORC1、p-ULK1、TSC1、TSC2 蛋白表达均显著下降(P<0.01),但 PIP3、mTORC1、ULK1、TSC1/2 mRNA 以及 ULK1 蛋白表达则呈显著升高(P<0.01)。与MC组比较,各用药组大鼠肥胖痰湿证表现均显著改善,体质量、脂体比、血脂(除WDD-L组外)、FBG(除WDD-L组外)、FINS(除RAPA组外)及HOMA-IR(除WDD-L组外)水平、腹周脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、促炎细胞因子水平均呈不同程度改善(P<0.05,P<0.01),信号通路关键分子classⅠ-PI3K、Akt mRNA 和信号通路关键分子 c

关键词： 内镜黏膜下剥离术   早期胃癌   非治愈性切除   全身免疫炎症指数  

摘要： 目的:近年来内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)已逐渐代替外科手术,成为早期胃癌(early gastric cancer,EGC)的标准治疗方法,但目前仍有近10%-30%的患者在ESD术后因被评估为非治愈性切除(non-curative resection,NCR)而面临追加胃切除术的可能。对于NCR的提前预测,无疑会在改善EGC患者预后及生存质量上提供巨大收益,全身炎症反应标志物,如中性粒细胞/淋巴细胞比率(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)、全身炎症反应指数(systemic inflammation response index,SIRI)以及血小板/淋巴细胞比率(platelet to lymphocyte ratio,PLR),全身免疫炎症指数(systemic immune-inflammation index,SII)等,已被证明在预测胃癌患者的总生存期(overall survival,OS)方面具有较高价值。本研究旨在探索并比较SII等全身炎症反应标志物对EGC患者ESD术后NCR的预测价值。方法:我们回顾型分析了于2013年—2021年于青岛大学附属医院消化内科行ESD的326名EGC患者的临床病理资料。计算患者的术前炎症指标,采用受试者工作(receiver operating curve,ROC)曲线比较SII与其他炎症指标对NCR的预测价值,使用Youden指数计算出SII等指标的最佳截断值,并分析SII与EGC患者临床病理特征的相关性。后将患者根据NCR与否分组,比较两组之间临床病理特征差异,将存在统计学差异的变量纳入二元Logistic分析以确定NCR的独立危险因素。后使用独立危险因素构建诺莫图,并通过ROC曲线、校准曲线、一致性指数等评估该模型的区分度与准确性,评价该模型对NCR的预测价值。结果:SII的最佳截断值为414.87,SII升高与肿瘤体积大、黏膜下浸润、住院费用高、e Cura分级高、非治愈性切除风险高有关。ROC分析显示SII的AUC值大于其他指标,提示SII更能有效的预测NCR。相对于NCR患者,非NCR的患者SII、PLR、NLR、SIRI值相对更高,肿瘤发生于胃上1/3部、肿瘤>3cm、低分化癌病理类型、黏膜下层浸润、溃疡存在、住院费用高等情况更易出现,将以上变量纳入多因素分析,提示SII(OR=2.707,P=0.001)、PLR(OR=2.302,P=0.024)、NLR(OR=3.169,P=0.035)、SIRI(OR=3.787,P=0.004)、肿瘤大小>3cm(OR=2.055,P<0.001)、胃上1/3部位肿瘤(OR=16.393,P<0.001)、病理为低分化癌(OR=29.754,P<0.001)、合并溃疡(OR=4.814,P=0.001)、黏膜下侵犯(OR=51.017,P<0.001)是影响NCR的独立危险因素。将以上变量结合起来,构建出预测NCR的诺莫图。诺莫图的验证包括区分度检验和校正,经验证后该模型具备良好的准确性与区分度。利用该诺莫图绘制预测NCR的ROC曲线,所得曲线的AUC(95%CI)为0.858,提示该诺莫图相较于单一炎症指标,对EGC患者的NCR具有较好的预测价值。结论:1、SII相对于SIRI、PLR、NLR等指标,对EGC患者ESD术后NCR有更高的预测价值;2、PLR、NLR、SIRI、溃疡、分化程度、肿瘤大小、肿瘤部位是ESD术后的EGC患者NCR的独立危险因素;3、运用SII等危险因素构建的诺莫图,经验证后表现出对NCR优秀的预测效能,可以作为ESD术后NCR的可靠、有效的预测模型。

关键词： 溃疡性结肠炎   全身炎症反应指数   严重程度  

摘要： 目的:溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是发生于结直肠黏膜的慢性非特异性炎症性疾病。既往评估UC患者严重程度的无创性指标主要依据粪钙卫蛋白、全血细胞计数等。全身免疫炎症指数(Systemic Immune Inflammation Index,SII)是评估宿主全身炎症和免疫应答之间平衡状态的客观标志,高水平的SII可能导致直肠癌、胃癌、胰腺癌等患者肿瘤的增殖和转移。近年来随着研究的不断深入,发现SII对UC患者的严重程度具有一定的预测作用,但相关研究极少。本研究旨在回顾性分析SII对评估UC严重程度的临床价值。方法:收集2014年2月-2021年10月就诊于青岛大学附属医院的224例UC患者和224例健康查体者作为研究对象。比较两组的性别、年龄、身体质量指数(Body Mass Index,BMI)、血红蛋白(Hemoglobin,Hb)、血小板(Platelet,PLT)、中性粒细胞(Neutrophil,NEU)、淋巴细胞(Lymphocyte,LYM)、单核细胞(Monocyte,MONO)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(Neutrophil-lymphocyte ratio,NLR)、血小板与淋巴细胞比值(Platelet-lymphocyte ratio,PLR)、淋巴细胞与单核细胞比值(Lymphocyte-monocyte ratio,LMR)、SII的差异。依据改良Truelove和Witts评分(Modified Truelove and Witts Criteria,TWC)、Mayo内镜评分(Mayo Endoscopic Score,MES)、溃疡性结肠炎肠道炎症负担程度(Degree of Ulcerative Colitis Burden of Luminal Inflammation,DUBLIN)、溃疡性结肠炎内镜下严重程度指数(Ulcerative Colitis Endoscopic Index of Severity,UCEIS)来评价UC严重程度,根据蒙特利尔分型评估肠道受累范围。采用卡方检验、秩和检验、Spearman’s相关分析比较SII、NLR、PLR、LMR间的差异及与UC严重程度、病变范围的相关性,通过ROC曲线和多因素回归分析评估SII、NLR、PLR、LMR预测UC严重程度的诊断效率。结果:1.在UC组和对照组中平均年龄均为49.5(37-62)岁,男女比分别为1:0.85和1:0.88,平均身高分别为1.68(1.6-1.73)m和1.67(1.6-1.73)m,两组在性别、年龄和身高方面无统计学差异(P>0.05)。与对照组相比,UC组的BMI、PLT、NEU、MONO、NLR、PLR、LMR、SII明显升高,Hb、LYM、LMR明显下降,差异均有统计学意义(P<0.001)。***组和对照组中,SII水平在女性和男性之间差异无统计学意义(P>0.05);在男性和女性组中,UC组的SII水平在较对照组明显升高且差异均有统计学意义(P<0.001)。UC组和对照组中,在≤30、30-50和≥50岁间的SII差异无统计学意义(P>0.05);在≤30、30-50和≥50岁组中,UC组的SII水平较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。对照组的SII在低体重、正常体重和超重组间无统计学差异(P>0.05)。UC组的SII在低体重、正常体重和超重组间差异具有统计学意义(P<0.05),进一步两两比较,与超重组相比,低体重与正常体重组的SII水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。***在E1、E2、E3组间无统计学差异(P>0.05),在DUBLIN、UCEIS组间差异有统计学意义(P<0.001)。SII在TWC和MES的轻、中、重度组间存在统计学差异,进一步两两比较发现,轻中度、中重度及轻重度组间的差异均有统计学意义(P<0.001)。***患者的SII、NLR、PLR分别与TWC、MES、DUBLIN、UCEIS评分呈正相关(r=0.405～0.633,P<0.001),LMR与TWC、MES、DUBLIN、UCEIS评分呈负相关(r=-0.301～-0.391,P<0.001),SII、NLR、PLR、LMR与蒙特利尔分型无相关性(r=-0.001～0.098,P>0.05)。5.采用ROC曲线比较SII、NLR、PLR、LMR对TWC评分界定中重度UC的预测价值,SII、NLR、PLR、LMR的AUC分别为0.84、0.78、0.79、0.74,其中SII的预测价值最大,最佳临界值为618.98×10～9/L,相应的灵敏度和特异度分别为78.57%和83.33%。6.采用ROC曲线比较SII、NLR、PLR、LMR对

关键词： 慢加急性肝衰竭   炎症反应   孟德尔随机化   细胞因子   基因预测  

摘要： 慢加急性肝衰竭（acute-on-chronicliverfailure,ACLF）是一种发生于慢性肝病基础上，由于各种诱因导致短期内出现急性严重肝功能障碍，从而出现器官衰竭的临床综合征。ACLF的发病机制复杂，目前并没有被完全阐明，同时治疗手段有限且预后极差。尽管ACLF的发病机制目前仍不明确，但全身炎症反应导致的细胞因子风暴在ACLF的疾病演变中发挥着至关重要作用，细胞因子风暴打破了机体中原有的促炎和抗炎稳态，从而进一步加重肝损伤甚至最终发生失代偿，但目前研究者和临床医生关于炎症对ACLF患者的影响的认识度还不够，因此对ACLF患者的发病机制进行研究，可以加深临床医疗人员对ACLF的认识，对改善ACLF预后具有重要意义。　　目的：　　系统性炎症反应导致的细胞因子风暴在ACLF的发生中发挥着关键作用，很多观察性研究都提示细胞因子在慢加急性肝衰竭的发病机制中发挥作用，但细胞因子与ACLF之间是否存在因果关系尚不清楚，且缺乏大规模试验数据验证。因此积极探索细胞因子和ACLF之间的因果关系对预防ACLF的发生及提高ACLF患者生存率均有重要意义。　　方法：　　采用双样本孟德尔随机化（MR）方法研究全身炎症调节因子与ACLF之间的因果关系。该研究分析了从全基因组关联研究（GWAS）荟萃分析数据库中提取的8293个个体中的41种细胞因子和炎症因子，该数据库涉及253个ACLF病例和456095个对照组。　　结果：　　我们的结果显示，较低的干细胞因子（SCF）水平、较低的碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）水平和较高的白介素-13（IL-13）水平与ACLF风险增加相关（OR=0.486,95%CI=0.264-0.892,p=0.020;OR=0.323,95%CI=0.107-0.972,p=0.044;OR=1.492,95%CI=1.111-2.004,p=0.008）。此外，基因预测的ACLF不影响全身炎症调节因子的表达。　　结论：　　IL-13是ACLF的致病危险因素，而bFGF和SCF则是其保护因素。然而，我们的MR研究没有发现基因预测的ACLF与全身炎症有因果关系的证据。我们的结果表明炎症因子在ACLF的发病机制中起着至关重要的作用。这些生物标志物能否用于预防和治疗ACLF还需要进一步的研究。

关键词： 维持性血液透析   微炎症状态   全身炎症反应指数   全身免疫炎症指数   中医证候  

摘要： 目的 本课题通过研究维持性血液透析(Maintenance hemodialysis,MHD)患者微炎症状态与全身炎症反应指数(Systemic inflammatory response index,SIRI)、全身免疫炎症指数(Systemic immune-inflammation index,SII)及中医证候的相关性,拟为早期识别MHD患者微炎症状态及中医药辨证施治提供客观化依据。 方法 本课题为横断面研究,收集成都中医药大学附属医院血液透析中心符合纳排标准的MHD患者。根据血清超敏C反应蛋白水平,将MHD患者分为微炎症组和对照组。收集患者基本信息、实验室指标(WBC、N、L、M、PLT、hs-CRP、Hb、Alb、UA、Ca、P、TC、TG、HDL、LDL、PTH)及中医四诊资料,分析基线资料,通过组间比较、单因素相关性分析,明确SIRI、SII与MHD患者微炎症状态及其中医证侯的相关性,绘制ROC曲线,比较SIRI、SII与NLR、PL R、MLR对MHD患者微炎症状态的诊断效能。 结果 1.本研究共纳入106例MHD患者,其中微炎症组有60例(56%),对照组有46例(44%)。 2.微炎症组与对照组的透析龄、WBC、N、L、M、NLR、PLR、MLR、SIRI、SII、hs-CRP水平组间差异具有统计学意义(P<0.05)。SIRI、SII与超敏C反应蛋白水平均呈正相关关系(P<0.001)。ROC曲线下面积比较:SIRI>MLR>NLR>SII>PLR>0.5,SIRI敏感度为80%,特异性为80.4%;SII的敏感度为48.3%,特异性为44%。 3.合并有微炎症状态的MHD患者正虚证以阴虚证+阳虚证为主,SIRI水平在各证型间差异有统计学意义(P<0.05),阴虚证+阳虚证的SIRI水平更高。标实证以血瘀证为主,SIRI、SII水平在各证型间差异有统计学意义(P<0.05),血瘀证的SII、SIRI水平高于非血瘀证。 结论 ***、SII可以反映MHD患者体内的微炎症状态。SIRI对MHD患者微炎症状态具有更好的诊断效能,且优于NLR、SII、PLR、MLR。 2.合并有微炎症状态的MHD患者本虚证以阴虚证+阳虚证为主;标实以血瘀证为主,且血瘀证SIRI、SII水平高于非血瘀证。

关键词： 卤代双酚A   炎症反应   分子机制   Jurkat细胞  

摘要： 六氟双酚A(Bisphenol AF,BPAF)和四氯双酚A(Tetrachlorobisphenol A,TCBPA)是双酚A(Bisphenol A,BPA)的卤化衍生物。目前,BPAF和TCBPA已在多种环境介质中被检测到,对人体存在广泛暴露。它们与BPA一样具有雌激素活性,能通过雌激素核受体(Estrogen receptor alpha,ERα)调控机体内源性雌激素的合成和分泌,也能通过雌激素膜受体(G protein coupled estrogen receptor,GPER1)途径发挥非基因组效应。而免疫系统与内分泌系统联系紧密,是雌激素作用的天然靶点。有研究表明具有雌激素活性的TCBPA和BPAF会对免疫系统产生影响,其毒性作用机制可能与内分泌激素受体激活有关,但具体机制还不清楚。本文以Jurkat免疫细胞为模型,以与免疫细胞炎症反应相关的指标为观察终点,以GPER1介导的PI3K/AKT和MAPK信号通路为切入点,结合分子生物学、转录组测序技术及信号靶点抑制剂实验,评估BPAF和TCBPA暴露对细胞免疫炎症反应的影响及分子机制。主要结果如下:(1)BPAF和TCBPA对Jurkat细胞炎症反应相关指标的影响。将Jurkat细胞暴露于不同浓度的BPAF和TCBPA下,暴露时间为24、48和72 h。BPAF浓度为50和100μM时显著降低了细胞存活率;当TCBPA的浓度为25、50和100μM时,细胞的存活率也显著降低;低浓度的BPAF和TCBPA能轻微的促进Jurkat细胞的增殖,且TCBPA暴露组促增殖效应更显著。此外BPAF和TCBPA暴露均可使细胞内ROS水平增高,其中BPAF和TCBPA暴露浓度分别为0.1μM和25μM时细胞ROS水平最高。BPAF在1μM处还促进了促炎因子IL-1、IL-8和TNF-α的分泌。蛋白表达检测显示BPAF和TCBPA使Jurkat细胞GPER1、p-AKT及促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白水平均出现了不同程度的上调,表明BPAF和TCBPA可能激活了经典雌激素信号通路PI3K/AKT信号通路且影响了细胞炎症反应相关指标。(2)转录组测序分析BPAF的主要毒性作用通路。为了探究BPAF的暴露是否影响了细胞炎症反应相关靶点,选择1μM浓度BPAF暴露下的Jurkat细胞进行转录组测序,测序结果经分析发现,差异基因注释的GO term多与刺激的响应、免疫系统调节和生物调节相关且通过KEGG分析发现差异基因较多富集在雌激素信号通路和MAPK信号通路上,说明细胞生物学功能的改变与雌激素信号通路和MAPK信号通路的激活有关。(3)BPAF和TCBPA对雌激素信号通路和炎症反应相关基因m RNA表达的影响。为了进一步确认雌激素信号通路对炎症反应发生的影响,选择经典雌激素信号通路PI3K/AKT、MAPK信号通路及炎症反应等相关基因作为靶点,发现BPAF和TCBPA均可以上调细胞中的大部分基因如GPER1、PI3K、AKT、MAPKs及炎症反应相关基因的m RNA表达水平,并能引起抗氧化酶基因的m RNA表达下调。表明基因层面上,BPAF和TCBPA在测试浓度范围内可能激活了PI3K/AKT和MAPK信号通路,并且对炎症反应及细胞的抗氧化能力相关靶点产生了影响。(4)雌激素信号靶点抑制剂对BPAF和TCBPA诱导的Jurkat细胞炎症反应相关靶基因m RNA表达变化的调控。为了检验雌激素信号GPER1在BPAF和TCBPA诱导的Jurkat细胞炎症反应相关靶点表达中的作用,通过抑制剂实验观察GPER1被抑制后炎症反应相关靶点的变化。结果发现加入GPER1抑制剂G15(10μM)预处理后,BPAF(1μM)与TCBPA(10μM)诱导的PI3K、AKT和MAPKs的m RNA表达上调被显著抑制,同时发现炎症反应相关指标TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-6等基因的m RNA表达上调也被显著降低。表明BPAF和TCBPA通过GPER1介导PI3K/AKT和MAPK信号通路的激活并可能进一步调控了炎症反应相关基因表达水平的变化。综上所述,在蛋白层面上,通过Western Blot实验结合文献查阅及生物学效应实验,推断GPER1调控的PI3K/AKT信号通路可能在BPAF和TCBPA诱导的炎症反应相关指标变化方面扮演了重要角色。在基因层面上,通过转录组测序发现炎症反应相关指标的变化可能与雌激素信号通路及MAPK信号通路的激活有关,经RT-q PCR技术检测发现GPER1调控的经典雌激素信号通路PI3K/AKT和MAPK信号通路及炎症反应相关靶点m RNA的表达发生了变化。通过加入雌激素受体抑制剂的方法发现GPER1介导了PI3K/AKT和MAPK通路的激活且GPER1也调控

关键词： 一氧化碳释放分子   TG-FeCORM   活性氧   Nrf2/HO-1   NF-κB   牙周炎  

摘要： 1.背景与目的牙周炎是在多种致病因素下发生的炎症性疾病。在牙周炎的发生发展过程中,病原微生物及其诱发的宿主免疫反应及各种局部和系统促进因素具有关键作用。活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)是含有未配对电子的含氧基团,具有强氧化性。牙周炎症微环境中过量的ROS可促进人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)炎性通路相关因子的过表达,破坏细胞器膜结构并引发细胞凋亡。Nrf2/HO-1通路是下调胞内ROS的重要途径之一,Nrf2转录因子通过激活下游抗氧化反应元件(antioxidant response element,AREs),上调包括HO-1在内的多种抗氧化酶表达以降低ROS总量。CO是一种具有潜在抗炎作用的气体分子。由于气态CO不便于储存和应用,现已开发出多种一氧化碳释放分子(carbon monoxide release molecule,CORM)。但多数CORM在溶液中稳定性差、半衰期较短。为解决这一问题,在本实验中采用了一种新型CORM分子——TG-FeCORM。TG-FeCORM是一种羰基金属络合物,由过渡金属元素核心和一氧化碳配基组成。其特点是采用羰基二铁结构,具有生物安全性高、易于制取、修饰结构丰富的特点,理论上具有较好的水溶性和缓释特征。本实验通过牙龈卟啉单胞菌超声提取物(Porphyromonasgingivalissonication extract,PgSE)诱导HGFs体外炎症模型,研究TG-FeCORM的抗氧化和抗炎作用以及对Nrf2/HO-1和NF-κB通路相关因子表达的影响。并在大鼠实验性牙周炎模型上验证TG-FeCORM的抗炎作用。2.材料与方法第一部分TG-FeCORM的CO体外释放研究实验中使用脱氧肌红蛋白羰基化法测定25 μMTG-FeCORM体外CO释放的性质。使用紫外-可见分光光度法测定25μM TG-FeCORM和25 μM CORM-3体外CO释放的速率。第二部分TG-FeCORM对牙龈卟啉单胞菌超声提取物诱导的人牙龈成纤维细胞活性氧水平及炎性因子的影响实验中以人牙龈成纤维细胞(HGFs)为模型(3～6代),以牙龈卟啉单胞菌超声提取物进行炎症诱导。使用细胞增殖-毒性试剂盒(cell-counting kit-8,CCK8)分别检测HGFs 在 25、50、100、200、400 μM 的 TG-FeCORM 或 0.1、1、10 μg/mL 的 PgSE 作用下,12、24 h和、48h后细胞增殖活性的变化。使用DCFH-DA胞内总活性氧荧光探针和Amplex Red过氧化氢检测试剂盒分别检测HGFs胞内和胞外活性氧水平。首先检测PgSE对HGFs总活性氧的影响,设置空白对照、PgSE组(0.1、1、10 μg/mL),处理3、6、9h后进行检测。随后检测TG-FeCORM对PgSE刺激下HGFs胞内和上清液活性氧水平的影响,设置空白对照组、PgSE组(1μg/mL)、PgSE+TG-FeCORM 组(25、50μM)。TG-FeCORM 预处理 3h,PgSE 处理 3 h后进行检测。使用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)法检测各组细胞的IL-6、IL-8、IL-1β炎性因子表达水平。设置空白对照组、PgSE组(1μg/mL)、PgSE+TG-FeCORM 组(10、25、50、100μM)。TG-FeCORM 预处理 3h,PgSE 预处理6h后进行检测。第三部分TG-FeCORM对牙龈卟啉单胞菌超声提取物诱导的人牙龈成纤维细胞Nrf2/HO-1及NF-κB通路相关因子表达的影响使用蛋白免疫印迹法(western blot)和qPCR法分别检测抗氧化通路Nrf2/HO-l和炎症通路NF-κB相关因子表达水平。设置空白对照组、PgSE组(1μg/mL)、PgSE+失活 TG-FeCORM 组(iTG-FeCORM,25 μM)和 PgSE+TG-FeCROM 组(25 μM、50 μM)。TG-FeCORM预处理3 h,PgSE处理3 h后进行检测。第四部分TG-FeCORM对实验性牙周炎大鼠牙周组织炎性反应及骨破坏的影响使用实验性大鼠牙周炎模型研究TG-FeCORM对组织破坏及改建的影响。设置正常组,实验性牙周炎组,TG-FeCORM处理组。利用上颌第一磨牙结扎法建立大鼠牙周炎模型,局部应用1mM TG-FeCORM羧甲基纤维素溶液处理。各组大鼠建模4周后处死,常规EDTA中性脱钙包埋后进行HE和Masson染色,

关键词： 枸杞糖肽   二十碳五烯酸   细胞焦亡   脊髓损伤  

摘要： 目的:本研究中我们旨在通过代谢组学和分子生物学实验阐述枸杞多糖(LBP)活性成份-枸杞糖肽(Lb Gp)促进体内合成二十碳五烯酸改善神经炎症微环境的作用机制。 方法:通过代谢组学方法分析Lb Gp的组成成份;构建SD大鼠脊髓T12半切模型,脊髓损伤后给予Lb Gp灌胃处理,通过分子生物学实验和代谢组学实验,进一步阐述Lb Gp在治疗SCI中的作用机制。 结果:分子生物实验学发现Lb GP在脊髓损伤后促进神经再生和功能恢复;Lb GP治疗组细胞焦亡通路相关蛋白NLRP3,ASC,Caspase-1,GSDMD,以及下游的炎性因子IL-1β和IL-18显著下降;体内代谢组学实验表明脊髓损伤后经Lb Gp干预,促进体内合成不饱和脂肪酸二十碳五烯酸(EPA);体外EPA通过抑制MAPKs/NF-k B通路和细胞焦亡途径改善炎症微环境。 结论:Lb Gp促进脊髓损伤后神经再生,促使体内生成不饱和脂肪酸EPA,EPA通过抑制MAPKs/NF-k B通路和细胞焦亡途径改善炎症微环境。