关键词： 肝片吸虫   呼伦贝尔短尾羊   流行病学调查   蛋白组学   诊断标识  

摘要： 肝片吸虫病(Fascioliasis hepatica)是一种由肝片吸虫引起的人兽共患寄生虫病,在世界上广泛流行。在我国,该病被列为国家三类动物疫病,广泛分布于以畜牧业为支柱产业的内蒙古、西藏、宁夏和新疆等省区,同时人间感染也呈散发流行,是畜牧生产中需重点防控的寄生虫病之一。对畜牧养殖大区呼伦贝尔市来说,对短尾羊肝片吸虫感染情况不清,有关其早期诊断方法缺乏,限制了该病的有效防治。为此,实验预对呼伦贝尔市短尾羊肝片吸虫感染情况进行调查,并筛选其早期诊断标识。具体研究结果如下: (1)为明确呼伦贝尔短尾羊肝片吸虫的感染现状,于2023年1月-2024年1月之间,对鄂温克族自治旗、陈巴尔虎旗、新巴尔虎左旗、新巴尔虎右旗等4各旗(县)的6个地区呼伦贝尔短尾羊进行了肝片吸虫流行病学调查。结果显示,呼伦贝尔地区呼伦贝尔短尾羊肝片吸虫感染率约为10.1%,通过直肠采粪,水洗沉淀法、镜检形态学观察,发现阳性感染率呈季节性变化,自然放牧较舍饲养殖感染率高,为17.3%;转场放牧的呼伦贝尔短尾羊感染数量最多,由于牧民圈养期间配合驱虫预防,舍饲相对纯自然放牧下的肝片吸虫感染率较低,为6.9%,雨水较为充沛的夏季呼伦贝尔短尾羊感染率较其他季节高,秋季粪检阳性率达到最高为22%。通过对巴彦塔拉乡200份粪检样品随机抽样发现,不同性别、不同年龄段对肝片吸虫病感染无显著影响。通过对呼伦贝尔短尾羊肝片吸虫病的流行病学调查,确定了肝片吸虫在呼伦贝尔草原地区的感染率和季节动态及其危害,为基层肝片吸虫病防治提供了基础数据。 (2)对感染和未感染肝片吸虫的呼伦贝尔短尾羊血清样本进行了DIA定量蛋白质组学研究,筛选获得了显著差异蛋白质,进而对所鉴定到的蛋白质作了系统的生物信息学分析,并对所有差异表达蛋白进行了功能富集及蛋白互作网络分析。结果共筛检出151个差异蛋白,通过对蛋白功能及信号通路的研究,获得了差异蛋白的相关信息,最终筛选了5个具有诊断潜力的差异蛋白,分别是肌动蛋白相关蛋白2和肌动蛋白相关蛋白3复合体的肌动蛋白、磷脂酰肌醇转运蛋白、组织蛋白酶S、组织蛋白酶D和维生素K依赖蛋白Z,为后续有关肝片吸虫病早期诊断方法研究提供了基础信息,对于肝片吸虫病的防治具有重要意义。

关键词： 诺如病毒   全基因组序列   分子流行病学   基因重组   动态进化  

摘要： 目的对2015-2022年间宁夏地区诺如病毒所致感染性腹泻展开监测,了解本地区诺如病毒流行病学分布特征及基因分型情况。从GⅡ型诺如病毒中挑选部分优势流行株及罕见毒株进行全基因组测序,基于全基因组序列进行系统进化分析及重组分析,以期阐明本地区诺如病毒分子进化特点及遗传变异情况。并对宁夏与其他省份2015-2022年间流行的的同型别毒株基因序列进行生物信息学分析,进一步了解诺如病毒的基因特征及进化趋势。 方法 1.收集2015-2022年间于宁夏10-15家哨点监测医院门诊就诊的所有年龄段腹泻患者的粪便标本,并采集病例信息。通过实时荧光定量聚合酶链式反应法（Realtime Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-q PCR）检测诺如病毒（Norivirus,NoV）,结合病例信息对宁夏地区NoV的流行特征进行分析。通过逆转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）,对CT值≤30的NoV阳性样本进行聚合酶区（Rd Rp）和衣壳区（VP1）扩增,将扩增阳性产物进行核苷酸序列测定和型别鉴定。 2.从宁夏地区优势流行株GⅡ.4 Sydney＿2012[P16]、GⅡ.3[P12]及GⅡ.4 Sydney＿2012[P31]中挑选部分毒株,结合本地区罕见基因型GIX.1[GⅡ.P15]及GⅡ.22[P22]毒株一同进行全基因组序列测定。基于全基因组序列,通过MEGA 7、Bio Edit、Simplot软件进行系统进化分析、氨基酸变异位点分析及重组分析。 3.结合2015-2022年间我国其他省份检测到的GⅡ.4[P16]及GⅡ.4[P31]毒株的全基因组序列,通过Bio Edit软件进行熵值计算。对该时期内宁夏与其他省份检测到的GⅡ.4[P16]、GⅡ.3[P12]及GⅡ.4[P31]型毒株,使用MEGA 7软件分别对其Rd Rp区和VP1区基因进行系统进化分析,通过Weblogohttps://***/***查看上述基因序列氨基酸变异情况,并使用BEAST 1.8.2软件包对其进行起源时间及进化速率的推算。 结果 1.2015-2022年间共收集腹泻患者粪便样本10098份,检出NoV阳性样本1333份,GI型阳性样本114份（8.55%）,GⅡ型阳性样本1219份（91.45%）,总阳性检出率为13.20%。0-2岁年龄组阳性检出率最高,为17.75%,其次为3-5岁年龄组（14.76%）。发病高峰为1-4月,在宁夏5个地市中以固原市阳性检出率最高（18.66%）。共检出6种GI型及11种GⅡ型NoV,以GⅡ.4 Sydney＿2012[P16]、GⅡ.3[P12]以及GⅡ.4Sydney＿2012[P31]为主要基因型。2015-2016年优势流行株由GⅡ.17[P17]型转为GⅡ.3[P12]型,2017年以GⅡ.2[P16]型毒株为主要优势流行株,2018-2020年优势流行株为GⅡ.4 Sydney＿2012[P31],2021-2022年则被GⅡ.4 Sydney＿2012[P16]毒株取代,成为新一轮的优势流行株。 2.共获得20株GⅡ型NoV全基因组序列,其中GⅡ.4 Sydney＿2012[P16]7株,GⅡ.3[P12]6株,GⅡ.4 Sydney＿2012[P31]5株,GIX.1[GⅡ.P15]和GⅡ.22[P22]各1株,基因组全长皆在7500bp左右。重组分析结果显示GⅡ.4 Sydney＿2012[P16]型为GⅡ.2[P16]和GⅡ.4 Sydney＿2012[P31]重组株,GⅡ.3[P12]型为GⅡ.4[P12]和GⅡ.3[P21]重组株,GⅡ.4Sydney＿2012[P31]型为GⅡ.2[P31]和GⅡ.4 Sydney＿2012[P4]重组株,重组位点皆位于ORF1区。 3.基于全基因组氨基酸位点变异分析发现,宁夏地区毒株及国内外同型别参考毒株均存在多处位点突变情况,变异位点主要位于ORF1区和VP2区,其中以VP2区占比最高。此外,仅在宁夏毒株中出现的变异位点则主要出现在ORF1区及VP1区,其中PL-22-014及PL-20-047分别在VP1区的aa412、aa413处发生发生N→S、T→I突变（E抗原表位）。 4.与已报道的GⅡ.4 Sydney＿2012型NoV原始毒株相比,GⅡ.4 Sydney＿2012[P31]型与GⅡ.4 Sydney＿2012[P16]型毒株均在VP1区的A抗原表位出现突变,此外GⅡ.4Sydney＿2012[P31]型毒株在B、H及E抗原表

关键词： 烧伤   流行病学   病原菌  

摘要： 目的 研究院内烧伤患者的流行病特征和感染的病原菌分布特征。方法 分析2019—2022年安徽医科大学第一附属医院所收治的符合入选标准的2 434例住院烧伤患者病历资料，包括患者性别、年龄、致伤因素、烧伤部位、烧伤严重程度、烧伤季节分布，以及感染的病原菌类型、组织/体液来源和其耐药情况。采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(matter-assisted laser desorption time-of-flight mass spectrometry,VITEK-MS)鉴定病原菌种类，并用VITEK 2 Compact测定排在前三位病原菌的药物敏感度。采用SPSS 27.0和WHONET 5.6统计软件对数据进行分析。结果 本研究共纳入2 434例烧伤患者，男女比例为2.29:1，平均年龄（29.8±25.95）岁。成人和老人夏季最易发生烧伤，儿童多见于春季。热水烫伤是主要致病原因。共收集952株感染病原菌，且均为非重复首次分离株，前五位的病原菌依次为铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌。从创面分泌物中分离出的病原菌数量最多，占83.93%(799/952)。铜绿假单胞菌对一、二代头孢耐药率为100%，但对氨曲南、妥布霉素、哌拉西林等耐药率有下降趋势。鲍曼不动杆菌对多黏菌素B、米诺环素和替加环素耐药率均为0，对其它试验的抗生素耐药率均≥50.0%。对青霉素，金黄色葡萄球菌的耐药率超出90.0%，但对万古霉素、利奈唑胺、替加环素和氨苄西林/舒巴坦完全敏感。结论 基于年龄段划分，患者在性别、受伤原因、院前是否处理、烧伤严重程度和烧伤部位这些方面存在明显差异。烫伤是主要的受伤原因，四肢是最容易烧伤部位，病患在夏季最为常见。烧伤患者感染的主要病原菌是铜绿假单胞菌，主要来源于创面分泌物。

关键词： 心房颤动   流行病学   房颤危险因素   脑卒中   抗凝治疗  

摘要： 目的: 心房颤动是临床上最常见的心律失常,有较高的致残率和致死率。心房颤动的管理一直是一项热门和具有挑战性的课题。本文旨在通过对我院心房颤动住院患者的临床资料进行回顾性分析,来了解心房颤动住院患者在性别、年龄、房颤类型等基本流行病特征的分布情况,分析不同危险因素及合并症在房颤患者中的分布以及性别差异,分析得出房颤患者发生缺血性脑卒中的危险因素并了解目前房颤患者的治疗现状。进一步为房颤的预防和治疗提供科学的依据,以推动东北地区房颤管理水平的提升。 方法: 采取回顾性病例分析的方法,选取2022年12月至2023年4月期间于我院各科室住院患者进行调查。收集相关的一般资料,危险因素及并发症、血脂、尿酸、肌酐等实验室检验指标、心脏彩超指标、治疗情况(包括抗血小板治疗、抗凝治疗、心室率控制、节律控制、导管消融手术)等,并对其进行统计分析,采用SPSS 29.0统计软件对所收集的数据进行分析和处理。正态分布的计量资料用均数±标准差表示,若方差齐行独立样本t检验,对于不符合正态分布要求的计量资料,使用中位数及第25、75百分位数[M(P25,P75)]来进行统计描述,采用曼-惠特尼分析。计数资料采用构成比或率进行表示,组间比较采用卡方检验。将单因素分析中具有统计学意义的结果纳入多因素Logistic回归分析中,计算出OR值和95%CI(置信区间)。P<0.05具有统计学意义。 结果: 1.纳入的772例房颤住院患者中,心内科住院病人占比最多(71.6%)。全部患者男女比例为1.77:1,平均年龄为68.83±11.98岁(20-96岁),女性患者的平均年龄大于男性患者(71.15±11.73岁vs 67.51±11.93岁)。老年患者所占比例(78.1%)明显高于中年患者(18.9%)和青年患者(3.0%)。在中年患者中,男性所占比例多于女性(21.9%vs 13.6%,P=0.005)。在老年患者中,女性所占比例多于男性(84.6%vs 74.4%,P=0.001)。 2.772例房颤患者中常见的三种的危险因素及合并症分别为老年(78.1%),心衰(56.0%),高血压(54.4%)。女性合并高血压、甲状腺功能亢进的患者和瓣膜性房颤患者的比例比例高于男性,合并吸烟史、饮酒史的患者以及孤立性房颤患者的比例低于男性(P<0.05)。女性患者的年龄、TC、HDL-C、LDL-C、BNP、LVEF大于男性,尿酸、肌酐、LVD小于男性(P<0.05)。持续性房颤患者中合并心力衰竭、心肌病以及瓣膜性房颤患者比例高于阵发性房颤,合并冠心病的患者比例低于阵发性房颤(P<0.05)。持续性房颤患者的BNP、LAD、LVD大于阵发性房颤,而空腹血糖、TG、LVEF小于阵发性房颤(P<0.05)。 3.772例房颤患者中合并缺血性脑卒中的患者占比为17.6%,平均年龄为72.76±10.68岁。脑卒中组中老年患者和合并高血压、糖尿病、饮酒史的患者以及持续性房颤的患者比例高于非脑卒中组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示年龄、持续性房颤、饮酒是房颤患者患缺血性脑卒中的危险因素(P<0.05)。 4.在646例高卒中风险评分患者中,总体抗凝率为83.0%。其中抗血小板联合抗凝治疗共266例,合并冠心病的患者所占比例为62.0%。在126例低卒中风险的患者中,抗凝率为88.1%。全部772例患者中,单独控制心室率治疗的患者占比最多(40.4%)。所调查的所有科室中,抗凝率排名前三的科室分别为心内科(91.5%)、ICU(79.3%)、呼吸内科(78.4%)。肿瘤内科未行任何抗栓治疗的患者比例最多(75.0%),其次为外科科室(60.0%)。神经内科、肿瘤内科、外科科室未行任何抗心律失常治疗的患者占大多数,心内科、呼吸内科、干部病房主要行心室率控制治疗。 结论: 1.随着年龄的增长,房颤的患病人数呈现逐步上升的趋势。在性别分布上,男性房颤患者的数量明显高于女性。女性房颤患者的平均年龄大于男性。 2.房颤患者最常见的三种危险因素及合并症分别为心力衰竭、高血压、冠心病。在危险因素的分析中,男性群体往往更容易伴随吸烟、饮酒等不良生活习惯的情况,而女性群体则更倾向于合并高血压、甲亢、瓣膜病等疾病。与阵发性房颤相比,持续性房颤对心功能的损害更为显著。 3.年龄、持续性房颤、饮酒是房颤患者合并缺血性脑卒中的危险因素。 4.房颤患者的总体抗凝率已有显著提升,但在低卒中风险评分的房颤患者中,抗凝率仍较高。在房颤抗心律失常治疗方面,单独控制心室率是目前最常用的策略。部分非心血管专科的科室仍需进一步加强房颤的规范治疗。

关键词： 猪流行性腹泻病毒   流行病学   细胞系  

摘要： 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪群发生腹泻的重要病毒性病原之一,临床上不同阶段的猪群均能感染该病毒,给国内外养猪业造成了严重的经济损失。由于PEDV遗传变异快、混合感染和分离难度大,PEDV的防控难度高。本文通过对福建地区的病毒性腹泻病原的流行情况进行研究,分析PEDV主要优势基因型及遗传变异情况。同时,利用慢病毒表达载体构建表达pAPN的Vero细胞系,为PEDV的分离及疫苗的研究奠定了基础。 1.2021～2022年福建省猪病毒性腹泻监测及PEDV S基因的遗传特性分析 本研究采用PCR对2021～2022年实验室收集的86份腹泻病料进行检测,并对其中 5 个 PEDV 毒株(FJ202201、FJ202202、FJ202204、FJLY2022、NDXT2022)对其S基因进行测序分析。结果显示,PEDV的检出率为48.84%(42/86),PKoV的检出率最高,为74.41%(64/86),其余病毒的检出率在1.16%～48.84%之间,TGEV和PoRV未检出,两种病毒和三种病毒的混合感染率最高分别为36.05%、13.95%,哺乳仔猪和育肥猪较为易感。5个PEDV毒株S基因序列与PEDV其他参考毒株核苷酸同源性在93.4%～99.0%之间,氨基酸同源性在82.8%～91.8%之间。该实验5个毒株都与GⅠ群的HLJBY毒株亲缘关系最远,其中 FJ202201、FJ202202、FJ202204 以及 FJLY2022 与 GⅡa 群的JX2020毒株亲缘关系最近,NDXT2022与GⅡa群的CH/GDGZ/2012亲缘关系最近,根据PEDV S基因遗传进化结果分析,本试验5个PEDV毒株均为GⅡa群。为福建地区防控病毒性腹泻以及研究PEDV提供参考。 2.过表达pAPN基因Vero细胞系构建及其对PEDV增殖的影响 本研究在猪肠道提取pAPN基因,经同源重组进入慢病毒表达载体 PLVX-MCMV-ZsGreen1-puro,再将重组质粒 PLVX-pAPN-MCMV-ZsGreen1-puro 与包装质粒 pLP1、pLP2、pLP-VSVG 共转染至 HEK-293T细胞中,再将收集的重组慢病毒侵染Vero细胞,经嘌呤霉素和单克隆技术筛选后可获得能够表达pAPN的Vero细胞。取P1、P10和P15代次的Vero-pAPN细胞进行pAPN基因的PCR检测。PEDV分别接种Vero和Vero-pAPN细胞系,测定感染病毒后PEDV的载量、TCID50以及PEDV N蛋白的表达量,分析Vero和Vero-pAPN细胞系对PEDV增殖的影响。结果表明Vero-pAPN细胞系比普通Vero更能促进PEDV增殖,为PEDV的分离以及疫苗的研究提供了参考细胞系。

关键词： 猫   杯状病毒感染   流行病学   抗体免疫压力   基因变异  

摘要： 猫杯状病毒（Feline Calicivirus，FCV）是一种可引起多种猫科动物呼吸道系统疾病的病原，具有高度传染性。FCV 通常会引起眼鼻分泌物增多、支气管炎等上呼吸道症状;严重情况下会导致重症肺炎、溃疡性皮炎、流产、黄疸、跛行乃至死亡。随着FCV 在各地的广泛传播与流行以及疫苗的广泛使用，其在免疫压力下不断变异进化。当前不仅有可导致猫致死性系统性疾病（Virulent systemic disease，VSD）为主的 FCV高致病性变异株（Virulent systemic feline calicivirus，VS?FCV），还有与传统疫苗株遗传距离明显较远的基因 Ⅱ型毒株。因此，开展FCV毒株的分子流行病学调查，以及深入研究抗体压力下病毒的遗传变异趋势，对猫杯状病毒的防控工作具有重要的指导意义。基于此本文展开了两个方面的研究：　　1、FCV的分子流行病学调查　　本研究在 2022 年共收集了 117 份有上呼吸道感染症状的临床样本，对其进行了FCV的分离鉴定，鉴定出14份阳性样本，阳性检出率为11.9%。扩增VP1基因序列并进行遗传进化分析，发现有13株为GI型，1株为GⅡ型。在综合比较VS毒株特征性差异氨基酸位点后，选择其中 5 株进行全基因组序列测定。结果显示，成功获得 5 株FCV全基因组序列，将其依次命名为 XA13株、XA15株、XA20 株、SJ14 株和 SJ17株。遗传进化分析结果显示， 5 株 FCV 分离株与国内外参考毒株的同源性在76.3%~86.7%之间，其中 XA20株与日本，韩国的 GⅡ型毒株亲缘关系较近。重组分析结果显示 SJ14株、SJ17株和 XA15株中存在着潜在的重组事件，且都是发生在 GI型毒株之间。上述研究丰富了 FCV 的分子流行病学内容，尤其是对其的进化趋势预测及后续的预防具有参考价值。　　2、不同FCV毒株在抗体选择压力下的变异规律　　选择本次分离的 GI 型 XA13 株、GⅡ 型 XA20 株以及实验室保存的 VS 型的SH2014株，在 FCV特异性血清持续存在的条件下进行 60次传代，同时设置未添加血清的对照组。然后选取第 30 代和 60 代毒株测定其病毒生长滴度、空斑大小和血清中和能力以及全基因组序列。结果显示，传代病毒增殖速度与亲本株相比更快，但有血清组与对照组相比有减弱的趋势。空斑实验结果表明随传代次数的增加，FCV 在细胞上形成的空斑直径变小，尤其是实验组的空斑数量与亲本相比明显减少。血清中和效价结果显示，随着传代次数的增加，对照组血清效价也逐渐下降;但有血清的实验组与对照组想比，其中和效价呈明显下降趋势。全基因组序列测定分析表明，相对于对照组传代株，XA13株、SH2014株与 XA20株在传代后，分别有 10个、6个和 3个氨基酸突变且多数分布于 VP1蛋白的 E区。上述结果表明，FCV在抗体压力下进行连续传代时，可能会通过随机突变，产生新的抗原表位，并且能够逃避抗体的中和作用，使其发生免疫逃逸，增强对环境的适应性。　　综上所述，本研究共分离到 14株 FCV并扩增了 5株代表性毒株的全基因组序列。选择了三株不同基因型的毒株在抗体压力作用下进行连续传代，发现实验组的中和效价有明显下降趋势，且其均在 VP1的 E区出现不同氨基酸位点的突变。这表明以上突变位点可能为潜在的抗原中和位点，突变后能诱导病毒抗原性发生改变，从而有助于逃避中和抗体的识别。

关键词： 候鸟   病原细菌   分子流行病学   弯曲杆菌   人兽共患病  

摘要： 目的 候鸟,因其广泛的地理分布特性以及与人类社会的紧密互动,在生态上及流行病的传播中扮演着病菌携带者和耐药性细菌传播媒介的关键角色。中国是鸟类迁徙路线上的重要越冬地和中转站。本文以中国重要候鸟迁徙线上的候鸟为研究对象,检测与肠道、呼吸道和血流感染相关的致病细菌及耐药基因。针对弯曲杆菌,这种广泛存在于鸟类等温血动物的肠道内、引起全球范围内胃肠炎的主要病原细菌,评估中国候鸟携带弯曲细菌的流行程度,分析其毒力和遗传特征;并通过分子手段,建立高效的多重弯曲杆菌的检测方法;进而结合候鸟种类、采样地区和采样时间等信息进行流行病学分析,评估候鸟携带病原对人的健康风险。 方法 本研究采集了2019年9月至2024年1月期间中国西藏、青海、宁夏、内蒙古、黑龙江、河北、福建、湖北、云南和山东等地区候鸟栖息地各种鸟类粪便或肛拭子样本共971份。利用广泛应用的DNA条形码技术,通过线粒体细胞色素氧化酶亚基I（COI）基因扩增和测序鉴定部分候鸟种类。采用多重实时荧光定量聚合酶链反应（Multiplex real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,q PCR）和Taq Man微流体芯片（Taq Man Array Card,TAC）方法对所有样本进行病原体和耐药基因检测。结合候鸟粪便样本的采样地点和迁徙路线等信息,分析相关病原细菌的分子流行病学特征。通过PCR对弯曲杆菌阳性样本16S r RNA、atp A、gro EL以及相关毒力基因进行扩增和测序,利用生物信息学方法进行核苷酸测序分析和系统发育分析,以确定亲缘关系,评估其对人类或养殖业的潜在健康风险。针对三种重要的致病性弯曲杆菌和4种潜在的弯曲杆菌新种,建立快速、灵敏的多重q PCR方法。采用宏基因组测序方法对部分阳性样本进行病原细菌组成分析,进一步阐明不同地区候鸟携带的不同病原体的丰度及潜在风险。 结果 1.候鸟中检测到多种病原细菌。候鸟以雁形目和鸻形目为主,具有栖息地特点,候鸟种类COI鉴定结果与采样点观察记录基本一致。在总计971份候鸟样本中,进行了44种病原细菌的q PCR检测,其中10种病原细菌出现阳性结果,包括5种肠道细菌,即弯曲杆菌（57.3%,403/703）、霍乱弧菌（3.1%,18/572）、气单胞菌（13.7%,66/482）、类志贺邻单胞菌（3.1%,14/450）和非典型性肠致病性大肠杆菌（3.0%,16/536）;4种呼吸道细菌,分别为金黄色葡萄球菌（0.7%,5/683）、肺炎克雷伯菌（2.4%,19/806）、鲍曼不动杆菌（0.7%,5/762）和铜绿假单胞菌（14.8%,109/738）;以及1种可致血流感染的细菌,即立克次体（2.2%,16/731）。除上述q PCR检测到的细菌外,宏基因组分析结果中,螺杆菌属、螺旋体属、支原体、弓形杆菌属、链球菌属、李斯特菌属、鸟分枝杆菌属和鲍特菌属等有一定的分布,包括潜在的致病菌种;同时多种类型的抗生素耐药基因普遍存在。 2.弯曲杆菌的分布和基因特征。对于总检出率（57.3%）最高、并在所有10个省份的候鸟样本中均有检出的弯曲杆菌进行了较为深入的分子流行病学分析。首先,不同地区弯曲杆菌的检出率存在显著差异（P<0.001）,在地理位置和鸟类宿主上呈现出明显的特异性,在时间分布上也有一定的统计学差异。进一步的物种区分揭示了候鸟样本中弯曲杆菌种类的多样性,主要包括空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni,9.2%,37/403）、大肠弯曲杆菌（***,0.7%,3/403）、拉里弯曲杆菌（***,10.2%,41/403）、卷曲弯曲杆菌（***,1.2%,5/403）、加拿大弯曲杆菌（***,0.5%,2/403）以及一种未鉴定的弯曲杆菌（Campylobacter ***12651-like,53.8%,217/403）。其中***主要在西藏的斑头雁、云南和山东的红嘴鸥样本中检出;***主要在河北和西藏的普通鸬鹚中检出;而***从鸻形目中检出,在河北、福建、云南、山东、宁夏和西藏等地均有分布。值得一提的是,***12651弯曲杆菌最早在北美地区的雁类中有报道,而在本研究中广泛分布于黑龙江、西藏等地区。基于16S r RNA-atp A-gro EL基因的系统发育分析阐明了弯曲杆菌种遗传关系,显示了种间和种内的多样性。对已知弯曲杆菌菌种和***12651-like样本进行与毒素（cdt ABC/hly B）、运动（fla A、che Y）、粘附（cad F）和侵袭（cia B）等毒力相关的基因的检测,结果显示所有检测到的弯曲杆菌都至少携

关键词： 鸡毒支原体   流行病学调查   耐药基因   多位点序列分型   致病性  

摘要： 鸡毒支原体（Mycoplasma galliscepticum,MG）主要引起家禽的慢性呼吸道疾病,MG感染在国内外商品化家禽中非常严重。不同地区的MG菌株对抗生素耐药性及菌株之间的致病性存在很大的差异,给临床防控增加了很大的难度。本研究对福建省部分地区的鸡毒支原体感染情况进行回顾性调查,并从山东某规模化鸡场分离了9株MG,明确了这9株MG的基因分型、耐药情况以及致病力,为该MG的防控提供科学依据。本课题开展了以下研究内容: 本研究采用商品化ELISA抗体检测试剂盒,对2018-2019年来自福建省福州市、漳州市、莆田市、龙岩市和南平市的21个不同日龄的非免疫鸡群共916份血清样品进行MG抗体检测。结果显示,这21个非免疫鸡群的MG抗体总阳性率为69.43%,其中产蛋期（77.61%）的MG抗体阳性率高于育雏期（37.10%）和育成期（43.06%）的阳性率,种鸡群和蛋鸡群在产蛋期MG阳性率均较高,分别为75.82%和79.22%。 本研究从山东烟台疑似MG感染的鸡群中分离鉴定获得9株MG分离株。利用atp G、pls C、mra W、ugp A、DUF3196、lg T和dpp C共7个管家基因进行多位点序列分型（Multilocus Sequence Typing,MLST）及遗传进化分析。结果显示:本研究分离的9株MG的基因分型为ST97和ST16两种基因型,其中YTX2、YTX5.6、YTX11、YTX12、YTX13、YTX14和YTX15属于ST97型,为新发现的基因型;YTX9和YTX10属于ST16型菌株。测定这9株MG对金霉素、大观霉素、林可霉素、泰乐菌素、泰万菌素、泰妙菌素、沃尼妙林和多西环素的最小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration,MIC）,并且对相关耐药基因包括23S r RNA基因V结构域、L4以及L22蛋白基因进行测序并分析。结果显示:所有MG分离株对沃尼妙林和泰妙菌素敏感（MIC≤0.25μg/m L）,对泰万菌素和多西环素次之（MIC≤4μg/m L）,对金霉素和林可霉素有一定程度耐药（MIC≥16μg/m L）,ST97型的7个MG分离株对泰乐菌素存在中等程度耐药（MIC为4-8μg/m L）;选取具有代表性菌株YTX5.6、YTX2和YTX10,对耐药性相关的23S r RNA基因V结构域、L4和L22蛋白基因测序分析发现,YTX5.6和YTX2在23S r RNA基因V结构域发生A2069G突变;YTX5.6和YTX2的L4蛋白基因出现G693T突变,在L22蛋白基因上出现T156C、T183C、T306C、C390T和G458A突变,而抗生素敏感菌YTX10与对照菌株MG Rlow株序列一致,并未发生突变。分别将分离的YTX5.6和YTX10株通过点眼攻毒和气管攻毒两种方式感染28日龄SPF（Specific Pathogen Free）鸡,在感染后第10 d、20 d和30 d检查气囊炎发生情况,并采集上腭裂、气管、肺和气囊组织样品,进行MG载量分析以及气管黏膜病理损伤评价。结果显示:在感染后第10 d、20 d和30 d,YTX5.6气管攻毒组气囊炎发病率分别为80%、60%和80%;YTX10气管攻毒组仅在感染后第20 d和30 d出现气囊炎,发病率分别为40%和20%,其余组在整个实验过程中均未发现明显气囊炎。气管攻毒组的鸡在整个感染过程中气管黏膜增厚情况均比点眼攻毒组严重（P<0.05）,YTX5.6气管攻毒组在感染后第20d气管黏膜增厚最严重,平均厚度为300.6μm。YTX5.6和YTX10气管攻毒方式在感染后第10 d、20 d和30 d,气管中的MG载量均比YTX5.6和YTX10点眼攻毒方式高。 通过对福建省5个市的非免疫鸡群的MG抗体检测,发现MG在福建省内部分地区广泛流行,即使在种鸡群也存在较高的感染率,表明MG目前仍广泛的在鸡群中流行,该病并未得到有效控制。本研究从山东省烟台市某规模化鸡场分离到9株MG,并对部分常用抗支原体抗生素存在不同程度的耐药性。通过动物回归实验表明,MG野毒株存在较高的致病性,该结果为MG的进一步防控奠定了基础。