关键词： 骨性关节炎   遗传学   流行病学  

摘要： 骨性关节炎(osteoarthritis, OA)的发病率日益增长, 已成为最常见的退行性关节疾病。由于OA的生物学复杂性, 对于病因及发病机制还没有完全理解。这篇叙述性综述的目的是重点介绍最近5年发表的OA遗传学的关键研究文章, 通过介绍出现的新技术、新方法揭示这些变异基因在OA病因及发病机制中的作用。通过全基因组关联研究(genome wide association study, GWAS)和孟德尔随机化研究(Mendelian randomization, MR)总结OA与其他疾病、常见风险因素的遗传相关性, 为OA的诊断、治疗及预防提供新方法。

关键词： mcr-9   金属-β-内酰胺酶   耐碳青霉烯阴沟肠杆菌复合群   头孢他啶/阿维巴坦   氨曲南   大蜡螟  

摘要： 目的:携带mcr-9(mobile colistin resistance,mcr)(移动粘菌素耐药基因)的肠杆菌目细菌,尤其是同时含有金属-β-内酰胺酶(Metallo-β-Lactamase,MBL)和丝氨酸-β-内酰胺酶(Serine-β-lactamases,SBL)的肠杆菌目细菌,由于存在潜在的传播风险且缺乏足够的临床应对方法,对全球公共卫生造成了重大威胁。本研究旨在明确mcr-9阳性耐碳青霉烯阴沟肠杆菌复合群(Carbapenem-resistant Enterobacter cloacae complex,CRECC)菌株的流行病学特征、耐药性及致病性,以筛选有效的联合治疗方案,从而为临床应对日益复杂的微生物抗生素耐药情况奠定坚实的理论基础。 方法:收集2018年9月至2023年4月期间重庆西部某三级教学医院临床分离的198株非重复阴沟肠杆菌复合群(Enterobacter cloacae complex,ECC)菌株,包括38株CRECC菌株和160株碳青霉烯敏感阴沟肠杆菌复合群(Carbapenem-susceptible Enterobacter cloacae complex,CSECC)菌株。通过体外药敏实验和PCR(Polymerase Chain Reaction)序列扩增分析,对ECC菌株进行已知耐药机制的筛查。对mcr-9阳性CRECC菌株进行相关毒力因子分析,明确其致病性。基于高通量测序和生物信息学工具,明确mcr-9阳性质粒的大小、并对质粒结构进行精细注释,分析携带mcr-9基因质粒的结构特征、类型及可移动元件等,主要分析mcr-9基因的水平转移情况。综合上述耐药机制及毒力特征分析,通过体外时间-杀伤实验和体内大蜡螟(Galleria mellonella,***)联合药敏实验,初步验证头孢他啶/阿维巴坦(ceftazidime-avibactam,CZA)和氨曲南(Aztreonam,ATM)联合方案对mcr-9阳性CRECC菌株的效果。 结果:本机构的CRECC菌株中mcr-9基因的流行率比在CSECC菌株中高。CRECC菌株的mcr-9阳性质粒的主要复制子类型为Inc HI2/2A。携带mcr-9基因的质粒存在水平传播和克隆传播现象。mcr-9基因的遗传结构的主要类型为rcn R-rcn Apco E-pco S-IS903B-mcr-9.1-wbu C-IS26(7/10)。10株mcr-9阳性CRECC分离株均表现出多重耐药表型,且均携带多种耐药基因与毒力因子。体外时间-杀伤曲线证明了CZA+ATM的组合对携带mcr-9,金属-β-内酰胺酶和丝氨酸-β-内酰胺酶的CRECC分离株具有显著的杀菌活性,在我们的研究中该联合方案取得了100%的协同作用率。携带mcr-9同时MBL和SBL阳性的CRECC菌株感染的大蜡螟体内生存率测定显示,与单独用药组和未治疗组相比,CZA+ATM联合方案显著提高被感染幼虫的存活率。 结论:mcr-9在CRECC菌株中的流行率可能存在地域相关性和遗传特异性。mcr-9基因可能通过rcn R-rcn A-pco E-pco S-IS903B-mcr-9.1-wbu C-IS26遗传结构在CRECC菌株之间进行传播。携带mcr-9基因的CRECC菌株存在复杂的耐药和致病机制,亟需引起我们特别的关注。体外和体内研究证实了CZA+ATM联合方案对mcr-9,MBL和SBL同时阳性的CRECC菌株具有良好疗效,从而为临床医生应对日益复杂的微生物抗生素耐药情况提供了重要的参考价值。

关键词： 对虾   传染性肌坏死病毒病   实时荧光定量聚合酶链式反应   流行病学  

摘要： 随着我国经济社会的发展和人民生活水平的提高，社会对拥有高质量蛋白质的水产品需求量越来越大。在过去30多年里我国虾类养殖业快速发展的同时，虾类传染病的频繁爆发和快速传播严重阻碍着养殖产业的高质量发展。多种新发病害的高传播性和强致病性导致了对虾的大规模死亡，给养殖户带来了巨大的经济损失。其中传染性肌坏死病毒（infectious myonecrosis virus,IMNV）是2020年前后传入我国并逐渐传播的一种新发疫病，我国对虾养殖业因此遭受了重大损害。研究发现不同生长阶段的对虾均可被IMNV感染，被IMNV感染的幼虾和成虾可以观察到体表尤其是尾节部位发红，骨骼肌纤维坏死、淋巴器官球形等特征性组织病理改变。基于组织病理、原位杂交和电镜分析的传统疫病病原检测方法检测速度慢、效率低，不适于对IMNV开展早期检测进行疫病预警。基于此，本研究开发了基于TaqMan探针的IMNV逆转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测方法，研发了 IMNV荧光定量检测试剂盒，利用RT-qPCR方法对2022-2023年我国主要对虾养殖区IMNV流行情况进行了调查，并开展了 IMNV分子变异情况进行初步分析。主要研究结果包括以下四个方面:　　第一，开发了基于TaqMan探针的IMNV RT-qPCR检测方法。首先，基于GenBank数据库中已知IMNV的全基因组序列设计了三套PCR引物和探针，通过筛选确定IMNV-IDT-F3/R3/P3用于后续实验。其次，对引物探针浓度、逆转录温度和退火温度进行优化，优化后的反应体系为One Step qRT-PCR Premix 18.4 μL、IMNV-IDT-F3/R3 各 0.6 μL、IMNV-IDT-P3 0.4 μL、模板 5 μL,优化后的反应条件为:57.2℃ 15min、95℃30s,然后进行95℃ 10s、57.6℃ 30s的40个循环。与世界动物卫生组织（WOAH）《水生动物诊断试验手册（第8版）》推荐的IMNV RT-qPCR检测方法相比，本研究新建立的方法省略了扩增程序中模板95℃加热3至5分钟的步骤，从而显著降低因模板长时间加热扩散至空气中产生气溶胶污染的风险，降低了假阳性出现的概率，提高了检测的准确性。新方法在分析特异性检测实验中与其他病原核酸均无交叉反应，表现出了优良的特异性。进行临床样本分析发现，新方法相较于WOAH推荐的IMNV RT-qPCR检测方法的诊断灵敏度（DSe）和诊断特异度（DSp）均达到100％。利用含有IMNV基因组片段的重组质粒做模板,绘制新方法的标准曲线，其荧光阈值（Ct）与Log（起始模板浓度）之间呈现出良好的线性关系，两者间的相关关系公式为y=-3.9728x+43.233,决定系数R2为0.9964。重复性实验中各个批次内、各个批次间以及各个质粒浓度的扩增中Ct值的SD值均小于0.2,CV值均小于2％,新方法的重复性表现良好。　　第二，按照兽用诊断试剂开发流程研发了 IMNV荧光定量检测试剂盒。首先，对试剂盒研发所需的敏感性质控品标定的Ct值为21.13±1.14,计算得其靶基因含量为3.66×105copies/μL,试剂盒中阳性对照标定的Ct值为26.86±0.51。其次，在敏感性实验中Log（起始模板浓度）与Ct值呈现明显的线性关系，R2均大于0.991,且在稀释倍数小于105时阳性检出率为100％,最终确定Ct值=36的时候为该试剂盒的最低检测限，其对应的病毒载量为66.17 copies/μL。再次，重复性实验结果显示所研发的试剂盒性能稳定。利用3批试剂盒检测敏感性质控品的批次内批次间SD值均小于0.2,CV值均小于1.00％。在最低检测限重复实验中，各梯度浓度样品的Ct值与敏感性实验所得结果基本相同。从次，在试剂盒保存期限实验中，本研究试制的试剂盒表现出良好的稳定性，该试剂盒至少可稳定保存18个月。最后，在临床样品检测实验中，新建立的方法与WOAH推荐的IMNV RT-qPCR检测方法的对比，诊断灵敏度(DSe)和诊断特异度(DSp)均为100％,且本研究试剂盒方法检测同样样品的Ct值普遍更低，证实其比WOAH推荐的IMNV RT-qPCR检测方法具有更高的灵敏度。　　第三，完成了 2022年-2023年间全国沿海主要虾类养殖地区IMNV流行病学调查。利用WOAH所推荐的IMNV RT-qPCR检测方法、组织病理学以及原位杂交等方法对所采集的样本进行了系统分析。2022年-2023年间，在山东、江苏、浙江、海南、天津、广西、福建、河北等地开展流行病学调查并采集样品829份，所采集的样品包括凡纳对虾、日本对虾、中国对虾与罗氏沼虾等主要养殖虾类以及饵料、其他水产经济物种和养殖用水。采用TaqMan RT-qPCR检测方法对所采集的样品进行了

关键词： 原发性肝癌   乙型肝炎病毒   危险因素   病毒进化   三级预防  

摘要： 我国原发性肝癌（PLC）的分布特点是南方高于北方，沿海高于内地，农村高于城市；男女比例3:1。近20年来，PLC一直处于我国恶性肿瘤死亡原因的第二位，在中年人群（40～65岁）中年龄标化死亡率超过老年人群（65岁以上），在居65岁以下男性人群癌症死因第一位。我国PLC中肝细胞癌（HCC）和肝内胆管癌（ICC）分别占93%和3%。任何导致慢性肝损伤的因素都是PLC的原因，是Ⅰ级预防的关键。我国HCC主要原因是乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染，占84.4%。约32%男性和9%女性HBV慢性携带者将在75岁之前死于HCC。此外，黄曲霉素暴露、肝吸虫感染、大量饮酒、代谢综合征和丙肝病毒感染等大大增加了PLC风险。乙型肝炎后HCC较其它原因导致的HCC早发10年，预后更差。界定PLC高危人群是Ⅱ级预防的关键。手术切除是早期PLC的有效治疗手段，但易术后复发，术后5年生存率约30%;ICC术后5年生存率<20%。抗HBV治疗不仅可显著降低HBV携带者HCC的发生风险，也能显著改善预后。再次手术、放疗、抗血管生成、免疫疗法、免疫和靶向联合治疗、有氧运动等均可明显提升PLC的Ⅰ～Ⅲ级预防的效果。