关键词： 脓毒症   体质指数   氧化磷酸化   SIRT3   COX6B  

摘要： 脓毒症是指严重感染引起的机体对炎症反应失衡所导致的危及生命的器官功能障碍。自2002年发起的《拯救脓毒症运动》以来,脓毒症的治疗、指南等一再更新,但脓毒症的病死率仍居高不下。肥胖可以导致糖尿病、心血管疾病等,严重威胁人类健康,但在脓毒症中,BMI升高的患者反而出现病死率降低的现象,这被称为“逆流行病学现象”或“胖瘦悖论”。我们从脓毒症患者生存获益的表型—肥胖入手:首先,通过回顾脓毒症患者临床资料,研究BMI与血脂及预后的相关性;其次,收集肥胖(BMI≥28)脓毒症与其它脓毒症患者的外周血样本,进行全转录组测序,分析其m RNA水平的表达差异及临床人群验证;最后,在细胞实验,验证差异基因的表达是否与BMI在脓毒症中的逆流行病学现象有关。 方法: 1.回顾性收集2019.1.1—2022.12.31在吉林大学第二医院ICU住院的708例危重症患者的一般临床资料,研究脓毒症患者的血脂变化特点,通过分析BMI、血脂与脓毒症病死率的相关性,探讨血脂是否可作为脓毒症的强烈生存信号。 2.临床样本外周血全转录组测序,研究对象来自于2022.8.1-2023.7.30就诊于吉林大学第二医院的18岁以上的肥胖(BMI≥28)脓毒症患者6例,脓毒症体重正常(BMI 18.5-23.9)患者6例,社会招募肥胖(BMI≥28)健康志愿者6例,社会招募体重正常(BMI 18.5-23.9)健康志愿者6例,4组患者性别、年龄、基础疾病相匹配。留取2ml新鲜全血预处理后-80℃冰箱保存。外周血m RNA测序委托北京诺禾致源科技股份有限公司进行。提取后的RNA样品通过琼脂糖凝胶电泳和Agilent 2100 bioanalyzer检测分析RNA样品是否存在DNA污染及RNA降解;去除核糖体RNA后构建链特异性文库;通过对原始测序数据的过滤、测序错误率检查及碱基分布检查,获得后续分析数据。基因表达量分析得到差异基因之后,用cluster Profiler软件对差异基因集进行GO及KEGG功能富集分析。 3.富集通路中差异表达的关键基因临床验证,验证人群来自于同时期收集的BMI≥28的脓毒症患者11例,脓毒症体重正常(BMI 18.5-23.9)患者11例。2组患者基本状况匹配。外周血取样提取m RNA,设计引物,q RT-PCR验证差异基因的表达。 4.在细胞实验中,验证高脂环境(棕榈酸)是否能够减轻LPS诱导的巨噬细胞线粒体功能障碍,其与氧化磷酸化通路中COX6B基因的相关性。我们以人巨噬细胞系为研究对象,构建SIRT3过表达载体,研究分为(1)空白组(Control)、(2)LPS组、(3)LPS+棕榈酸组(LPS+PA)、(4)棕榈酸组(PA)、(5)空质粒+棕榈酸组(OE-NC+PA)、(6)SIRT3质粒+棕榈酸组(OESIRT3+PA)、(7)空质粒+LPS组(OE-NC+LPS)、(8)SITRT3质粒+LPS组(OESIRT3+LPS)、(9)空质粒+棕榈酸+LPS组(OE-NC+PA+LPS)、(10)SIRT3质粒+棕榈酸+LPS组(OE-SIRT3+PA+LPS)。通过CCK8法检测巨噬细胞活性;用流式细胞术等检测巨噬细胞的氧化应激情况;最后通过Western Blot和q RT-PCR方法检测巨噬细胞中COX6B、SIRT3、PGC-1α、NRF1、NRF2、IL-6、IL-10、CCL2、Drp1、Mfn2、Opal蛋白表达和m RNA水平变化,明确高脂环境(棕榈酸)是否通过抑制COX6B的过表达改善线粒体功能,减轻巨噬细胞线粒体氧化应激,并探讨SIRT3对COX6B基因表达的影响。 5.调控氧化磷酸化,减轻氧化应激,改善脓毒症预后是我们研究的最终目的,但氧化磷酸化系统也广泛存在于病原体中,特别是真核生物。ROS的生成是部分药物的抗菌机制之一,我们研究了ROS形成与抗氧化剂对去氢木香内酯的抗真菌活性的影响。以白色念珠菌为研究对象,通过药敏试验、ROS检测、抗氧化剂(N-乙酰半胱氨酸)复苏实验,研究ROS形成在抗菌中的作用机制。 结果: ***≥28的脓毒症患者病死率明显降低。 2.脓毒症可导致危重病患者高密度胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A、载脂蛋白B等血脂指标明显降低,但血脂水平的变化与病死率增加的相关性很弱。 3.随着BMI的增加,脓毒症患者甘油三酯、低密度脂蛋白、总胆固醇和载脂蛋白B水平逐渐升高,但相关性较弱。 ***≥28的脓毒症患者外周血中,m RNA测序结果显示氧化磷酸化通路显著富集效应;与体重正常脓毒症患者相比,肥胖脓毒症患者氧化磷酸化通路中COX6B m RNA的表达明显降低。 5.细胞实验中,LPS能够诱导巨噬细胞COX6B基因表达增高、线粒体ATP生成减少、ROS生成增多;高脂环境(棕榈酸)可以减轻L

关键词： 布鲁氏菌病   牛结核病   犊牛腹泻   流行病学调查   耐药性  

摘要： 奶牛布鲁氏菌病(Brucellosis)和结核病(Tuberculosis),简称奶牛“两病”是危害奶牛养殖业和人类健康的重要人兽共患病,我国将其列为二类动物传染病。海南省某奶牛场为当地主要的奶源基地和奶产品生产基地。为该场申报国家“奶牛两病”净化场建设的技术需要,本研究对该场奶牛“两病”进行了连续四年的监测,同时针对该场犊牛的主要腹泻病原:产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin producing Escherichia coli,STEC)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis,PM)、沙门氏菌(Salmonella)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCV)、牛诺如病毒(Bovine Norovirus,BNOV)以及隐孢子虫(Cryptosporidium)进行了检测,并对检测到的主要病原进行了分离鉴定、药敏试验等试验。以期为该场国家级“两病”净化场的建设提供科学依据,为犊牛腹泻的综合防治措施的制定提供技术支撑。主要结果如下: 1.奶牛两病监测 1.1布鲁氏菌病:2020～2023年共采集2104份血样和相关病料,采用虎红平板凝集试验(RBT)初检,试管凝集试验(SAT)和c ELISA法进行确诊检测。初检结果为:检出RBT阳性22份(阳性率为1.05%);检出SAT阳性0份(阳性率为0)。根据初检结果,对22头RBT阳性奶牛,采用c ELISA法进行确诊检测。复检阳性头数为0(阳性率为0)。 1.2牛结核病:2020～2023年对2063头奶牛进行结核菌素皮肤试验(PPD)。结果显示,疑似PPD阳性样本共18份(阳性率为0.87%)。对疑似PPD阳性的18头奶牛60 d后进行复检,结果显示,阳性头数均为0(阳性率为0)。 2.犊牛腹泻主要病原检测 2023～2024年,共采集372份粪样和环境样品、152份血样。采用细菌分离鉴定、生化试验、药敏试验、耐药基因试验、病毒RT-PCR试验、寄生虫i ELISA试验,共检测到5种腹泻相关病原,STEC(49.46%)、PM(1.61%)、Salmonella(0.53%)、BVDV(0.27%)以及Cryptosporidium(2.95%),其中STEC检出率最高。犊牛腹泻混合感染中,以两种混合感染情况居多,STEC+Cryptosporidium混合感染检出率最高,为1.34%。 3.药敏试验及耐药基因检测 3.1使用19种药物,对检测到的3种细菌进行药敏试验。结果显示,STEC对青霉素、四环素等耐药率最高,均超过50%;PM对青霉素、苯唑西林等耐药,耐药率均超过75%;Salmonella对苯唑西林耐药,耐药率为100%;3种细菌都对阿米卡星、卡那霉素和恩诺沙星敏感,耐药率0。 3.2耐药基因试验,结果显示,STEC检出aad A基因、aac C基因等7种耐药基因,其中aad A耐药基因检出率最高为51%(95/186);PM检出aac(3')Ⅱa基因等4种耐药基因,其中aac(3')Ⅱa耐药基因检出率最高为75%(3/4);Salmonella检出aac C基因等3种耐药基因,检出率均为50%(1/2)。 4.遗传进化分析 STEC的Stx1基因、PM的Ure R的基因、Salmonella的inv A基因分别进行PCR扩增和测序,发现STEC与美国株CP050498.1处于同一分支,核苷酸相似性为100%;PM与成都株CP046048.1处于同一分支,核苷酸相似性为99.6%;Salmonella与扬州株CP145533.1处于同一分支,核苷酸相似性为100%。 综上所述,本研究通过对海南省某奶牛场布鲁氏菌病、牛结核病的四年监测,未检测出该场布鲁氏菌病和牛结核病感染情况。监测结果为该场的国家级奶牛场“两病”净化场建设奠定了坚实的科学基础。对该场引起犊牛腹泻的5个主要病原检测结果表明:STEC为该场犊牛腹泻的主要病原。存在STEC夏季检出率高、PM春冬季检出率较高、Salmonella春季检出率较高的季节差异特点。多重感染以STEC+Cryptosporidium混合感染为主。药敏实验及耐药基因测定结果为该场犊牛腹泻药物防治提供了科学合理的用药措施。

关键词： 戊型肝炎   戊型肝炎病毒   病死率   血清阳性率   时间序列分析  

摘要： 背景:戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)感染而导致的一个全球性的卫生问题,在全球范围内,戊型肝炎占肝脏疾病的很大比例。自从近40年前发现戊型肝炎病毒(HEV)以来,它是急性肝炎的一种非常常见的病因,特别是在亚洲、非洲和中美洲的中低收入地区它是多次疫情暴发的病原体。近年来我国戊型肝炎报告发病率呈上升趋势,而且发达国家的流行率也在上升。大多数病例具有自限性,有症状的患者通常表现为急性黄疸型肝炎。它有时会导致慢性肝炎,甚至肝硬化、肝功能衰竭。HEV存在几种亚型,近年来随着我国公共卫生状况不断改善,其主要流行株从基因1型逐渐转变为基因4型;且大多为散发病例。 戊型肝炎作为全球性的卫生问题,不同基因型、临床表现和血清学流行程度在不同地理区域差别很大。为实现世卫组织到2030年消除病毒性肝炎(包括戊型肝炎)这一主要公共卫生问题的目标,因此我们需关注本地区戊型肝炎的流行病学特点。 目的:本研究分析重庆地区散发性急性戊型肝炎的流行和临床特征,以及人群血清患病率。为重庆地区戊型肝炎的防控和诊治提供参考依据。 方法: 1.收集重庆医科大学附属第一医院感染科2013-2022年住院患者中127例散发性急性戊型肝炎患者的临床数据。 2.回顾性分析近十年来急性戊型肝炎患者季节分布,年龄、性别、BMI、慢性肝病基础相关病死率、肝衰竭发生率情况。 3.收集从2012-2021年在重庆市三家医院进行戊型肝炎抗体(HEV Ig M、HEV Ig G)检测的所有人,包括健康检查,门诊和住院患者都被纳入研究。所有数据均直接来源于医院信息系统。 4.回顾性分析所收集到连续10年的血清学数据的人口特征、抗HEV Ig G和Ig M阳性率的时间序列分析、健康筛查组、门诊组和住院组抗体阳性率的对比,以及与全国戊肝发病率进行比较。 结果: ***总体发病以冬春季多见,12-5月的发病例数(93例)占77.50%,显著高于6-11月(P<0.0001)。男:女比例为2.66:1,平均年龄52.34±14.43岁。 2.年龄大于60岁HE患者病死率为12.82%,显著高于年龄小于60岁人群的2.27%(P=0.016),而ALT、ALB和CHE均低于低龄组。有肝硬化基础的HE患者病死率达22.22%,显著高于无肝硬化基础患者的4.24%(P=0.023)。男性和女性,BMI大于和小于25人群,有无慢性肝病人群之间的肝衰竭发生率和病死率均无显著性差异。 3.重庆市2012-2021年HEV Ig G抗体阳性率逐渐上升,从2012年1月的1.61%上升到2021年12月的50.63%。采用自回归综合移动平均模型对其趋势进行预测,发现其在近期内将继续呈现上升趋势。 4.相比之下,HEV Ig M阳性率和戊型肝炎临床发病率呈现相对稳定的趋势。虽然抗体阳性率随年龄的增长而逐渐升高,但各年受试者的年龄分布无明显差异。 结论: 1.重庆地区散发性戊型肝炎的流行呈现季节性,年龄超过60岁和有肝硬化基础患戊型肝炎后病死率显著升高。 2.重庆市戊型肝炎累计感染人数可能在逐渐增加,但临床发病率保持不变。

关键词： 猪肺炎支原体   流行病学   遗传演化分析   耐药性  

摘要： 猪支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae of swine,MPS）俗称猪气喘病,是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）感染引起的慢性与接触性传染病,给养猪业带来严重的经济损失。本研究通过检测猪鼻拭子样品中的Mhp核酸及黏膜sIgA抗体,对我国14个省份猪场猪肺炎支原体感染情况进行调查,掌握其流行动态。其次,开展猪肺炎支原体的分离、培养与鉴定,并进行全基因组测序和抗生素敏感性检测,分析其变异特点和耐药现状,了解该病原的流行规律及特征,为猪支原体肺炎的综合防控提供理论依据。本研究主要内容如下: ***流行病学调查:本研究采用荧光定量PCR方法和Mhp黏膜sIgA抗体ELISA检测方法对我国2022～2023年14个省份3431份猪鼻拭子样品进行Mhp核酸与抗体检测并进行数据分析。结果显示,2022～2023年14个省份检测猪群中Mhp抗原阳性率为19.19%（364/1897）,Mhp黏膜sIgA抗体阳性率为44.13%（1514/3431）,猪场抗原、抗体阳性率分别为88.46%（23/26）、93.88%（46/49）,表明我国猪场普遍存在Mhp感染。对其中1334头猪的鼻拭子样品分别进行核酸和黏膜sIgA抗体检测,结果发现,对于鼻拭子样品基于黏膜sIgA抗体检测方法的检出率明显高于核酸检测,符合预期;此外,多数省份（13/14）样品抗体阳性率高于抗原阳性率,说明鼻拭子黏膜sIgA抗体检测方法更适用于猪群Mhp感染情况调查。根据猪群不同发育阶段统计结果显示:后备/母猪群黏膜sIgA抗体阳性率最高,为65.12%（519/797）,仔猪群抗体阳性率最低,为14.67%（88/600）,随着猪群日龄的增长,Mhp感染率也在逐渐增加,保育猪和育肥猪群分别达到43.99%（362/823）和45.00%（545/1211）。按照样品采集季节进行统计发现2022～2023年春季Mhp黏膜sIgA抗体阳性率最高,为72.61%（281/387）,而夏季、秋季和冬季阳性率均超过35%,说明目前我国猪群Mhp四季均易感染。而对不同免疫背景的育肥/后备猪群抗体检测结果统计发现,未免疫猪群抗体阳性率达58.39%（501/858）,而免疫灭活疫苗与活疫苗猪群抗体阳性率有所下降,分别为51.73%（493/953）和23.53%（40/170）,说明疫苗免疫有助于MPS的防控。以上调查结果提示我国猪场Mhp整体感染压力较大,猪群发育后期Mhp感染较为普遍,育肥/后备猪群整体感染率较高,通过疫苗免疫可以有效控制Mhp感染。 ***临床分离株遗传演化规律分析:为明确目前国内猪场Mhp分子流行病学规律,本研究2022～2023年分别从广西、江苏、黑龙江3个省份送检的138份猪肺脏组织中,成功分离获得7株Mhp临床菌株,并提取基因组DNA进行全基因组测序,构建Mhp遗传进化树。结果显示Mhp-JS-25-2022分离株与2010年前的分离株及Mhp168株和J株位于同一分支。而其他6株2022年后的Mhp分离株位于同一分支,与Mhp-JS-1995分离株亲源关系较近。通过分析16S r RNA氨基酸同源性发现分离株与国内外菌株同源性较高,为95.4%～100%。上述结果说明近两年我国临床流行的Mhp在已有菌株的基础上发生了一定程度的变异,加强对Mhp菌株分离与变异监测有助于Mhp的防控与疫苗研发。 ***临床分离株抗生素敏感性测定:为明确近些年临床Mhp菌株耐药性变化,本研究采用微量肉汤培养法检测本实验室2004～2023年期间从江苏、广西及浙江等省分离的33株Mhp临床分离株对临床常用的12种抗菌药的敏感性,并统计各菌株最小抑菌浓度（MIC）范围与MIC50和MIC90值。在所检测的抗菌药中,截短侧耳类药物泰妙菌素对Mhp分离株的抑制效果最好,MIC范围为≤0.001～0.031μg/m L,MIC50为0.004μg/m L,MIC90为0.016μg/m L,对测试菌株保持了良好的药物敏感性。大多数临床分离菌株对大环内酯类药物泰乐菌素和泰万菌素、氟喹诺酮类药物环丙沙星、恩诺沙星和氯霉素类药物氟苯尼考比较敏感,MIC50和MIC90值也较低。氨基糖苷类药物安普霉素和庆大霉素与林可酰胺类药物林可霉素对Mhp临床分离株的MIC范围偏高。此外,2020年分离的Mhp-GD-21株和Mhp-JS-23株表现出对大环内酯类药物替米考星和林可酰胺类林可霉素敏感性降低的现象,其MIC均大于128μg/m L。上述结果提示,目前已有部分Mhp临床菌株出现耐药性现象,需要继续对更大范围、更多猪肺炎支原体菌株开展连续性耐药监测。

关键词： 幽门螺杆菌   感染率   高危因素   二联疗法   四联疗法  

摘要： 目的:探讨海南省幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）感染现状和高危因素,比较高剂量阿莫西林二联疗法和含铋剂四联疗法根除Hp的有效性及安全性。 方法: 1.2022年8月至2023年4月期间,选取海南省具有代表性的海口市、三亚市、东方市、琼海市和五指山市5个城市的21所卫生服务站,进行流行病学调研。根据分层抽样方法抽取自然人群,共对3632名参与者行碳14尿素呼气试验(14C-UBT)和一对一的问卷调查,计算Hp感染率。采用卡方检验和多因素logistic分析该地区Hp感染的相关危险因素。 2.2022年1月至2022年12月期间,将就诊于海南医学院第二附属医院消化内科门诊行胃镜检查确诊为慢性胃炎和碳13尿素呼气试验(13C-UBT)确诊Hp的200名患者随机分为A组101例和B组99例。A组由艾普拉唑肠溶片（5.0mg,1天2次）、阿莫西林胶囊（1000mg,1天3次）组成的高剂量阿莫西林二联疗法,B组为艾普拉唑肠溶片（5.0mg,1天2次）、枸橼酸铋钾胶囊（120.0mg,1天2次）、阿莫西林胶囊（1000mg,1天2次）、呋喃唑酮片（100mg,1天2次）的含铋剂四联疗法,两组疗程均为14天,通过意向性分析（intention-to-treat,ITT）和符合研究方案（Per-protocol,PP）分析比较两组的Hp根除率、药物不良反应及依从性。 结果: 1.海南省Hp感染率为38.7%,Hp感染率随年龄增长呈上升趋势,45岁～64岁年龄组趋于平稳,65岁及以上年龄组达到高峰。 ***好发于中年人（45岁～64岁）、老年人（≥65岁）、农民、有胃癌家族史人群,饮酒、共用餐具、咀嚼槟榔、有上消化道症状与Hp感染率呈正相关;家庭人口≤3人、饭前洗手、运动、规律饮食、食用瓜果蔬菜与Hp感染率呈负相关。 3.根据ITT分析和PP分析,A组Hp根除率分别92.1%、94.9%,B组Hp根除率91.9%、93.6%,两组根除率无明显差异。两组不良反应发生率差异无统计学意义（P=0.518）,但A组的药物成本低于B组,依从性明显高于B组（P=0.031）。 结论: 1.海南省Hp感染率为38.7%,与年龄、社会经济条件、卫生状况和生活饮食习惯密切相关。 2.与含铋剂四联疗法相比,高剂量阿莫西林二联疗法疗效相似,依从性好,成本低,可作为海口地区Hp根除的一线方案。

关键词： 流行病学   发热伴血小板减少综合征   发病机制   鉴别诊断   治疗方案  

摘要： 发热伴血小板减少综合征(SFTS)是近年来新发的由大别班达病毒感染引起的新发传染病。SFTS在我国的流行区域逐渐扩大, 发病率逐年上升, 对我国公共卫生安全有较大影响。大别班达病毒感染诱发的细胞因子风暴及免疫失调是导致患者预后不良的主要因素。当前根据临床症状及部分实验室检查结果作为判断重症的依据仍有较大局限性。关于重症SFTS患者的治疗, 根据研究及最新专家共识首选法维拉韦, 但在临床实践中如何有效进行抗炎及免疫调节治疗仍有许多值得探讨之处。

关键词： 鼠疫   流行病学   疾病防控   内蒙古地区  

摘要： 鼠疫是甲类传染病，传播速度极强。它的暴发与流行往往会对社会的各个方面造成难以估量的损失。内蒙古东部地区是典型的鼠疫自然疫源地，鼠疫发生频繁，尤其自19世纪90年代以后的半个世纪中，本地区的鼠疫流行呈现出“十年为一周期”循环暴发的特点。其中三场较大规模的鼠疫分别在1910、1920、1928年从俄境传入，且以满洲里、海拉尔、通辽三地为中心暴发，在东三省等地蔓延，造成大规模的人口死亡。　　大规模疫情对人口造成破坏性影响，这与当时社会环境的变化密不可分。自十九世纪中期清朝政府调整政策后，内蒙古东部地区与周边地区的联系加强，加之毛皮贸易的兴盛，满洲里等地逐渐发展成为商业贸易的中转地。且毛皮贸易中捕猎旱獭、毛皮运输等环节，不仅使民众提高感染鼠疫的风险，疫势也趁势传播向其他区域。此外，由于俄国的觊觎和殖民政策、中东铁路修建等因素的影响，导致人口的跨国流动日益频繁，均成为鼠疫流行范围不断扩大中重要的社会因素。　　自20世纪以来，在本地区鼠疫流行的近半个世纪中，疫情对人口的影响呈现成倍递减的趋势，这与包括清政府、北洋政府在内的历届政府采取的对策和防治措施是分不开的，这也是近代防疫事业不断进步的体现。这其中，北洋政府的防治措施较之前有了很大的改变，不仅加强对关外疫势的重视，还将疫菌研究机构真正运行到实际防治工作中，从源头了解疫病。此外，俄国政府也以防疫为由趁机插手中国防疫内政，与中国政府既有合作又有竞争与对抗，俄方的歧视性防疫政策也曾招致中国人民的普遍不满。　　整体而言，近代内蒙东部地区鼠疫的流行是具有复杂性的，社会环境处于动态变化中，从大规模鼠疫成因入手，也是当时内蒙东部地区社会生活的镜像。在鼠疫的防治过程中，以政府为主体视角，防疫举措也是在不断的变化过程中，这些都是本地区近代卫生事业历史进程中值得注意的面相。