关键词： 重度子痫前期   子痫   三维能量定量多普勒超声   胎盘血流动力学参数   磁共振灌注分数、真实扩散系数、伪扩散系数   影像组学   中晚期妊娠   国际妊娠高血压研究协会   中华妇产科学会   回归模型   列线图   校准曲线   子痫   子痫前期   中医辨证论治   中医证候   数学模型   国际妊娠高血压研究协会   中华妇产科学会   预测   防治   列线图   决策曲线   校正曲线   流行病学史   实验室检查   临床资料模型、影像学模型、组合模型、MRI灌注分数(MRIf值)、真性扩散系数(D)、伪扩散系数(D~*)、超声血管指数(USVI)、血流指数(FI)   头颅磁共振   经颅多普勒超声   先兆子痫   子痫   妊娠合并症   可逆性后部白质脑病综合征   影响因素   围产儿   预测模型   决策曲线   列线图   校准曲线   流行病学   实验室检查   妊娠高血压   血管源性脑水肿   细胞毒性脑水肿   hellp综合征   围产儿结局   表观弥散系数(ADC)   弥散加权成像(DWI)   妊高症   子痫   超声血管指数、超声血流指数   胎盘血液流变学参数   磁共振灌注分数、真实扩散系数、伪扩散系数   放射组学   中晚期妊娠   t检验   秩和检验  

摘要： 第一部分基于临床影像资料建模预测子痫 目的:子痫(Preeclampsia,PRE)和重度子痫前期(Severe PRE,SPRE)是妊娠期高血压谱系病症的一种少见但极其危险的并发症,其主要表现为眩晕、惊厥、昏迷等;本研究的目的是基于临床资料、影像组学特征建立模型预测重度子痫前期及子痫,阐明其预测因素并开发预测工具;然后基于上述数据分析子痫围产期不良事件。 方法:这是一项对南京中医药大学附属医院、湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院、襄阳市高新区人民医院(中西结合医院)及湖北中医药大学附属襄阳市中医医院2015年-2022年间3395例妊高症谱系孕妇行回顾性队列研究的分支,初次入组的189例重度子痫前期及子痫患者的诊断标准符合国际妊娠高血压研究学会(ISSHP)及中华妇产科学会的指南,依据确切的临床诊断结果及纳排标准,纳入其中125例重度子痫前期及子痫的孕妇登记为研究组,选取同期妊高症谱系孕妇(非子痫)150例作为对照组。预测因素包括病史资料(辅助生殖技术、初产妇、高血压史、规律产检等)、实验室检查资料(红细胞、白细胞、血小板、甘油三酯计数等)、常规影像学资料(超声血管指数(USVI)、超声血流指数(FI)、磁共振灌注分数(MRIf)、真实扩散系数(D)、伪扩散系数(D*)等)和影像组学(Radscore T1/Radscore T2)等项目。以时间截断值及70:30的比例构建训练集及测试集,在训练集中,采用二元logistic回归分析建立临床资料模型(包含病史、实验室检查资料等)、影像资料模型(超声、磁共振常规参数,影像组学参数等)及组合模型(纳入以上P<0.05的因素)预测重度子痫前期及子痫,并用DeLong's test检验曲线比较及分析不同模型的预测效能,然后构建决策曲线评价模型的临床净收益,并在测试集中验证上述多种模型预测重度子痫前期及子痫的效能及临床净收益,最终建立列线图风险评分工具及校正曲线并临床应用。此外,我们对143例具有完整后续随访资料的子痫患者进行了围产期母婴不良事件Cox回归分析,并总结了其风险因素及原因。 结果:单一因素回归分析证实子痫发生的影响因素包括初产妇、规律产检、胎儿畸形或羊水过多、BMI、白细胞、血小板、甘油三酯、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、超声血管指数(USVI)、超声血流指数(FI)、磁共振灌注分数(MRIf)、RadscoreT1和RadscoreT2。在训练集中,基于上述风险因素建立临床资料模型、影像资料模型及组合模型并用DeLong's test检验比较分析,结果如下:组合模型ROC最大曲线下面积[AUC:0.905(OR 0.0224,95%CI:0.855-0.942)],明显高于临床资料模型[AUC:0.730(OR 0.0358,95%CI:0.662-0.791),P<0.0001]和影像资料模型[AUC:0.848(OR 0.0274,95%CI:0.789-0.895),P=0.0006]。基于上述三种模型建立的决策曲线也证实组合模型净收益最大化;列线图风险评分工具及校正曲线也在临床应用中获得良好的收益。在测试集中,组合模型较高的诊断性能及临床回报净收益也获得了证实。此外,子痫组胎儿早产率、死亡率及孕妇子宫切除率等不良事件发生率较高,达32.5%(66/203),单因素Cox回归分析,证实胎盘灌注不良,胎儿宫内窘迫,早产,孕妇年龄,BMI,脐动脉直径,血小板,乳酸脱氢酶,谷丙转氨酶,谷草转氨酶,radscoreT1和radscoreT2是子痫不良事件的风险因素(P均<0.05);多因素Cox回归证实孕妇BMI,血小板,谷草转氨酶,谷丙转氨酶,radscoreT1,radscoreT2是子痫围产期不良事件的独立风险因素(P均<0.05)。 结论:重度子痫前期及子痫是一种临床危急的围产期危重症侯群,母婴致残率较高。初产妇、规律产检、胎儿畸形或羊水过多、BMI、白细胞、血小板、甘油三酯、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、USVI、FI、MRIf、RadscoreT1和RadscoreT2等是其发病的影响因素;综合实验室检查、影像组学及常规影像学特征并详细询问病史应引起产科及影像科医师的共同关注。基于上述因素所建立的组合模型在训练集和测试集中净获益均较高,加之列线图风险评分工具可简化该病的评判及收治标准,值得基层临床推广。此外,BMI,血小板,谷草转氨酶,谷丙转氨酶,radscoreT1、radscoreT2是子痫不良事件的风险因素,应引起临床诊疗的重视及探索。 第二部分子痫与中医证型的相关性研究 目的:我国传统医学技术对子痫前期及子痫的治疗及预防效果较好,但其准确的中医证型辨证较困难;本研究的目的是基于临床资料及影像组学特征建立模型预测子痫前期或子痫的中医证型,阐明其预测因素并

关键词： CRISPR-Cas13a   猪流行性腹泻病毒   病毒分离鉴定   基因序列分析  

摘要： 猪流行性腹泻病毒（PEDV）主要引起仔猪腹泻和死亡,给养猪业造成了巨大的经济损失。本研究结合RT-RAA和CRISPR-Cas13a技术,成功建立了PEDV的新型分子生物学检测方法,并使用该方法和RT-qPCR技术对四川18个地区的478份猪腹泻样品进行检测。进一步从PEDV阳性样品中获得了28株PEDV S基因序列,并成功分离获得一株PEDV毒株,鉴定了该毒株的生物学特性、全基因组特征及致病性。本研究的主要内容如下: *** CRISPR-Cas13a检测方法的建立 本研究根据猪流行性腹泻病毒M基因序列设计1对RT-RAA引物、3对CrRNA序列的特异性引物,体外转录出3条CrRNA,扩增出一段PEDV M基因体外RNA模板（ssRNA）,使用Lw Cas13a质粒转入Rosetta细胞并成功表达和纯化出Cas13a蛋白,筛选出结合活性最强的CrRNA并成功建立RT-RAA结合CRISPR-Cas13a技术的PEDV检测方法,对该方法进行灵敏度和特异性试验,并应用于临床样品检测。结果显示,本研究建立的PEDV CRISPR-Cas13a检测方法对cDNA的检测灵敏度为1fg且特异性良好。在470 nm的紫外光灯下可以肉眼观察到检测荧光,应用该方法对98份临床样本进行检测,结果与PEDV SYBR GreenⅠRT-qPCR检测方法的符合率为100%。 2.四川地区PEDV流行病学调查及S基因的序列分析 使用PEDV CRISPR-Cas13a检测方法对四川省18个地区的478份仔猪腹泻样品进行PEDV检测,阳性率为47.49%。进一步设计了两条PEDV S基因的RT-PCR扩增引物,获得28株PEDV S基因序列。使用MEGA7.0软件对所获得的28株S基因序列和62株参考毒株进行了序列分析和遗传进化分析,结果显示,这些序列核苷酸同源性为93.4%～99.9%,氨基酸同源性为92.3%～99.9%,本研究所获得的28株S基因序列可以分为G1-a（经典毒株）、G1-b亚群（S-INDEL）、G2-a和G2-b（变异毒株）4个亚群。 ***四川株SCABTC-GA的分离与鉴定 将鉴定为PEDV阳性的病料接种Vero细胞连续传代,通过细胞病变观察、间接免疫荧光检测和负染透射电镜鉴定,确定成功分离一株PEDV毒株,命名为SCABTC-GA。对P20代进行一步生长曲线测定,病毒滴度在48h达到最高,为105.5TCID50/mL。将SCABTC-GA株和20株PEDV参考序列进行同源性分析,结果显示该分离株与吉林CH JLDH 2016毒株核苷酸同源性最高,为98.2%,与甘肃LZC毒株核苷酸同源性最低,为95.6%,与比利时原始毒株CV777核苷酸同源性为95.8%,遗传进化分析显示分离毒株属于G2-b基因型。将SCABTC-GA病毒液口服感染仔猪,最早在18 h出现腹泻症状,28 h引起仔猪食欲下降呕吐,剖检病变为胃肠鼓气,空肠和回肠透明,HE染色病理切片显示肠段出现不同程度的气球样变、炎性损伤、出血等。

关键词： 氧化应激暴露   结直肠癌   氧化平衡评分   性别特异性队列研究   流行病学  

摘要： 背景:促氧化剂和抗氧化剂之间的不平衡解释了氧化应激（oxidative stress,OS）在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）发生中错综复杂的作用。本研究以氧化平衡评分（oxidative balance score,OBS）为指标,旨在研究OS暴露与CRC风险之间的相关性,并在美国大型队列中探究潜在的性别特异性差异。 方法:该研究纳入了来自前列腺癌、肺癌、结直肠癌和卵巢癌（Prostate,Lung,Colorectal and Ovarian Cancer,PLCO）筛查试验的98,395例成人。为了构建OBS,对14个与OS密切相关的饮食和生活方式因素进行了量化。OBS值越高表明氧化平衡模式越有利或OS暴露越少。由于OBS的性别特异性差异,使用Cox回归模型分别分析其与男性和女性的相关性。进行亚组分析以阐明潜在的修饰因子。 结果:在867,963.4人年的随访期间,发生了1,054例CRC。平均（SD）年龄和OBS分别为65.52（5.73）岁和14.09（3.95）分。在充分校正的Cox模型中,我们观察到OBS与女性CRC发生率呈负相关(HRQ5 vs Q1:0.72;95%CI:0.52,0.99;P for trend=0.018),但与男性无关。亚组分析显示,无CRC家族史的女性与有CRC家族史的女性相比,负相关性更显著(HRQ5 vs Q1:0.66,95%CI:0.47,0.93;P for trend=0.001;P for interaction=0.001)。在几项敏感性分析后,结果仍具有稳健性。 结论:较高的OBS与较低的女性CRC风险相关,但与男性无关;在无CRC家族史的女性中,这种负相关更强。这些发现表明,暴露于OS可能会产生性别特异性CRC风险效应,尤其是对于无CRC家族史的女性。

关键词： 中国部分地区   猫病毒病   流行病学调查   猫白血病病毒   遗传演化分析  

摘要： 随着生活方式的不断转变,宠物猫逐渐融入了人类的日常,成为家庭的重要一员。猫需求量的增加直接带动了养殖业的快速扩张,而集约化养殖是实现目标的有效方式。但快速、高密度的养殖模式容易导致病毒病的高发,严重危害着养猫业的健康发展,也给人类健康带来了潜在威胁。猫获得性免疫缺陷综合症(Feline acquired immunodeficiency syndrome,FAIDS)、猫杯状病毒病(Feline calicivirus disease,FCVD)、猫传染性腹膜炎(Feline infectious peritonitis,FIP)、猫传染性鼻气管炎(Feline infectious rhinotracheitis,FVR)、猫泛白细胞减少症(Feline panleukopenia,FPL)、猫流感(Feline influenza A,FIA)和猫白血病(Feline Leukemia,Fe L)是当前严重危害猫健康的主要疫病,但大部分尚无针对性的商品化疫苗,即使FCVD、FVR和FPL的商品化疫苗已在猫群中较为普遍的接种,但仍然呈现较高的流行趋势。疫病防控效果的欠佳直接暴露了当前对病毒流行状况和遗传变异规律认识的短板。因此,广泛开展猫主要病毒病的流行病学调查,明确疫病的流行本底,探究重点病毒的遗传演化规律是研发有效疫苗和药物,制定相应的防控措施的基础。为此,本研究于2023年开展了中国部分地区猫主要病毒病的流行病学调查,并对流行率最高的猫白血病病毒(Feline leukemia virus,Fe LV)进行了遗传演化分析。 2023年从济南、日照、北京、廊坊、青岛5个地区不同规模动物医院共采集包括猫血清、口鼻拭子和粪便样品在内的525份样本,通过聚合酶链式反应(PCR)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对主要疫病病原的核酸进行了检测。结果显示,在检测样本中,主要病原均有阳性样品存在,但阳性率差别较大,其中Fe LV、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)阳性率较高,分别达到了50.3%和29.9%;猫获得性免疫缺陷症病毒(Feline immunodeficiency virus,FIV)、猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)次之,阳性率分别为17.7%、14.5%;猫流感病毒(Feline influenza A virus,FIAV)、猫冠状病毒(Feline coronavirus,FCo V)和猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus-1,FHV-1)阳性率较低,分别为5.7%、4.8%、3.8%。此外,在2023年的检测中,我们发现混合感染占比67%,远高于单纯感染的比率33%,其中,混感4种及以上病原的样本占比6.4%,混感3种病原的占比20.2%,混感2种病原的占比40.4%。对混感2种病原的样本进行分析发现,含Fe LV的样品达到了91%。不同时间和不同地域,病原的流行状况呈现不同的趋势:从时间维度来看,Fe LV的流行率始终最高,其次为FPV、FIV、FCV,而FHV-1的流行率最低。从地域情况来看,廊坊地区各病毒的检出率较低,最高的Fe LV仅为42.9%,而青岛地区的各病毒阳性率最高,Fe LV的比例高达67.3%;Fe LV在除济南外的地域检出率均最高,FPV和FCV的阳性率也都较高。 流行病学调查结果表明,在5个地区,Fe LV是当前流行最为广泛的病原,这与其传染性强、传播方式多样的特性是一致的。同时Fe LV可导致机体免疫抑制,极大增加猫感染其他病原的几率,所以有必要对其进行系统性的遗传演化分析,为疫苗和药物的研发提供数据支持。基于此,本研究接下来开展了以下工作:(1)对Fe LV检测阳性样本的pol基因和env基因进行了序列测定,共获得pol基因序列47条、env基因序列61条。(2)为筛选能够获取Fe LV全基因序列的样本,建立了基于SYBR Green的RT-q PCR检测方法,该方法能够在低成本情况下特异性扩增最低为9.648×10～0拷贝/μL的Fe LV核酸,具有较高的敏感性和特异性。基于该方法,选择核酸含量为9.648×10～4拷贝/μL以上的Fe LV阳性样本进行全基因测定。(3)经分段扩增和序列的拼接,成功获得Fe LV全基因序列4条(J1、F33、F37和F38),并对获得的全基因进行了序列分析。结果表明:J1、F33、F37和F38的基因组的同源性与Fe LV-A亚型的LC765227和LC765228最高,且在进化分析中与之进化关系最近,显示所获得的4个基因组序列均为Fe LV-A亚型。随后,分别对三个结构基因进行同源和进化分析,结果表明pol和env基因与全基因类似,在核苷酸和氨基酸水平上分别与LC765227

摘要： ~~

关键词： 手足口病   连接点回归程序模型   流行病学   病原学   地理信息系统  

摘要： 目的:本研究通过对2010—2022年广西壮族自治区手足口病流行病学、病原构成基本情况进行描述,了解其在人群、季节、地区间的流行规律及长期趋势变化,同时探索手足口病优势病原分布变迁规律,有助于手足口病的长期监测,可为手足口病的预防控制工作提供科学依据。 方法:采用Excel 2010对2010—2022年广西壮族自治区手足口病的监测数据进行整理、描述,用柱状图、折线图表示;运用SPSS 26.0软件进行正态性检验,使用joinpoint regression program(JRP)5.0.2软件分析,拟合JRP回归模型,确定检验标准为α=0.05。通过使用Arc GIS 10.6试用版软件,以病例数据为基础创建地理信息系统数据库。 结果:(1)2010—2022年广西壮族自治区手足口病报告发病率整体趋势变化不显著(P>0.05);2016年以前手足口病发病水平、重症、死亡病例为双年份高发流行趋势,2016年后发病率呈波动下降趋势,但2021年疫情有所反弹;死亡率整体快速下降,2020年后无死亡人数。(2)2010—2022年广西壮族自治区手足口病男性报告发病水平、报告重症数均高于女性,且变化趋势不显著(P>0.05),男、女性别比在1.37—1.69之间,重症病例性别比在1.36—2.30之间,重症病例比轻症病例更易发生在男童。(3)2010—2022年广西壮族自治区平均年龄报告发病率呈“上升下降后极低位长拖尾”趋势(AAPC=13.93%,P<0.001),0～至2岁以下年龄组呈小幅上升趋势(APC=17.34%,P=0.777),2～至15～岁组呈快速下降趋势(APC=42.52%,P<0.001),15岁以上组呈极低位长拖尾现象(APC=5.58%,P<0.001)。其中,2010—2022年广西壮族自治区手足口病发病年龄以60月龄以下幼儿为主,占发病人数90%以上,重症病例发病年龄主要集中在0～36月龄,2016年以后,36月龄以上幼儿发病水平、重症病例均有波动上升趋势。(4)2010—2022年广西壮族自治区手足口病以散居儿童和幼托儿童为主,占发病人数90%以上,各年度散居儿童构成比均较幼托儿童高,但2016年以后托幼儿童占比呈波动上升趋势;重症病例以散居儿童居多,构成比高达88.69%,呈波动下降趋势;2016年以前幼托儿童重症病例占比呈波动下降趋势,而2016年以后则呈波动上升趋势。(5)2010—2022年广西壮族自治区平均月发病率呈现“快升缓降”趋势,1—5月报告发病率呈上升趋势(APC=81.38%,P=0.019),5—12月呈下降趋势(APC=-14.57%,P=0.009);各年度病例数呈现较明显的双峰流行特征,即:春夏季(4—6月)和秋季(9—11月)高峰;各年度手足口病所致重症病例均为春夏季单峰流行,除2017年手足口病重症病例呈双峰分布。(6)全区14个市均有病例分布,南宁市、崇左市、柳州市、百色市、玉林市累计病例数位居前五位,重症病例分布与之相似,呈高度散发且局部具有一定聚集性。2010—2022年广西壮族自治区手足口病病例、重症病例均以农村占比居多;2016年以前农村、城市重症病例均呈双年份高发,而2016年以后农村、城市病例数呈波动下降趋势,重症病例则大幅度下降,且城市手足口病病例、重症病例及变化趋势逐渐接近农村地区。(7)2010—2022年全年均有EV-A71、CV-A16、其他肠道病毒所致病例发生。2016年以前,广西壮族自治区手足口病病例、重症病例病原构成双年份(2010、2012、2014、2016年)以EV-A71型病毒病例占比居多,其所致病例呈春夏季单峰分布;单数年份(2011、2013、2015、2017年)以其他肠道病毒感染为主,其所致病例呈春夏季和秋季双峰流行;2016年以后,均以其他肠道病毒感染为主,其所致病例呈春夏季单峰分布。EV-A71型病例及所致重症病例大幅度下降,CV-A16型、其他肠道病毒病例和所致重症病例占比呈波动上升趋势。(8)2010—2016年广西壮族自治区手足口病EV-A71型所致病例在农村和城市地区呈双年份(2010年、2012年、2014年、2016年)高发特征,而CV-A16型、其他肠道病毒所致病例则呈单年份(2011年、2013年、2015年、2017年)高发的流行特征;2017年以后,城市、农村地区手足口病所致病例均以CV-A16型和其他肠道病毒构成为主,EV-A71型病例占比较少,呈波动下降趋势,且城市地区占比低于农村地区。 结论:(1)广西壮族自治区手足口病流行病学特征发生了一定改变,2016年后打破了隔年高发的流行特征,呈下降趋势,可能受新型冠状病毒感染疫情影响,2021年疫情有所反弹;EV-A71疫苗等影响,有效降低了手足