关键词： 慢性肺部疾病   患病率   相关因素   流行病学研究  

摘要： 目的:慢性肺部疾病作为目前最常见的呼吸系统疾病,在我国乃至全球范围内都有较高的患病率,且呈现逐年上升的趋势。同时,慢性肺部疾病也呈现随着年龄增长,患病率不断上升的特点。随着社会发展,生活行为方式的转变以及我国老龄化问题进一步深化,中老年人群慢性肺部疾病患病率不断上升,严重危害我国中老年人群的生命健康和生活质量,因此中老年人慢性肺部疾病患病现状值得我们的特别关注。虽然已经有大量学者对慢性肺部疾病的相关因素研究的不断深入,但是对于相关因素的研究仍存在一些局限性,需要深入挖掘更为多元和涉及地区广的慢性肺部疾病相关因素。本研究基于中国健康与养老追踪调查（CHARLS）2015年问卷,从人口学特征、健康相关行为、一般健康状况、地区分布四个方面切入,分析慢性肺部疾病的人群特征和相关因素,并据此为中老年人慢性肺部疾病防控提出有针对性的对策和建议,有效降低患病率。 方法:本研究在梳理慢性肺部疾病相关因素的文献研究基础上,初步定义研究所使用的解释变量、被解释变量,并利用CHARLS公开的2015年数据,获取我国中老年人慢性肺部疾病患病资料;通过社会经济数据与应用中心获取2015年各地级市年均PM2.5浓度,以城市作为匹配。共同构成本次研究的变量体系。首先,描述调查对象的一般特征,用频数（n）和构成比（%）表示,再对调查人群慢性肺部疾病患病率进行计算,并使用X2检验分析不同特征人群患病率的差异。对调查人群分层分析,分析不同PM2.5暴露下中各特征人群患病率是否存在差异。最后,利用单因素logistic回归和多因素logistic回归模型（向前LR法）对慢性肺部疾病相关因素进行分析,并采用受试者工作特征（ROC）曲线评价多因素logistic回归模型。 结果:（1）通过数据整理,在CHARLS2015数据库中纳入最终分析的有效样本共4493人,其中男性人数2358人（52.5%）,女性2135人（47.5%）。调查对象主要位于华东地区1519人（33.8%）、农村地区2889人（64.3%）以及PM2.5≥35微克/立方米的地区3920人（87.2%）。60～69岁年龄组占比最高1707人（38%）,文化程度以小学1937人（43.1%）和中学及以上1563人（34.8%）为主,并且大部分调查者患有其他慢性病,共3326人（74%）。（2）2015年我国中老年人慢性肺部疾病患病率为12.70%,其中男性患病率15.5%,女性患病率为9.6%,且差异具有统计学意义（P<0.05）;不同年龄组间患病率不同,且随着年龄增长而增加（P<0.05）;不同健康相关行为（吸烟、饮酒、晚间睡眠时长）患病率不同,吸烟、饮酒、晚间睡眠时间<5h人群患病率更高（P<0.05）;不同健康状况（BMI、患其他慢性病情况、体检及血检指标）患病率不同,BMI为过轻或非常肥胖、患有其他慢性病、血检指标异常、体检指标异常人群患病率更高（P<0.05）;农村地区患病率（15.09%）高于城市地区（5.83%）,差异具有统计学意义（P<0.05）。另外,不同地区分布患病率不同（P<0.05）,其中患病率最高的为西南地区（16.90%）,且患病率呈现西部高东部低的特点。（3）分层分析结果显示,不同PM2.5暴露下仅城市地区患病率差异具有统计学意义（P>0.05）。（4）多因素Logistic回归结果显示男性、BMI分类为过轻、吸烟、做饭使用非清洁能源、患其他慢性病（肝脏疾病、胃部疾病、心脏病）、呼气峰流速、CRP与我国中老年慢性肺部疾病患病密切相关。 结论:（1）2015年我国中老年人慢性肺部疾病患病率为12.07%,处于较高水平。在不同地区分布中,西南地区患病率最高为16.90%,且呈现西部高东部低的特点。（2）分层分析发现城市地区人群更容易受PM2.5的影响。（3）男性、BMI分类为过轻、吸烟、做饭使用非清洁能源、患其他慢性病（肝脏疾病、胃部疾病、心脏病）、呼气峰流速、CRP与我国中老年慢性肺部疾病患病密切相关。

关键词： 鸡毒支原体   鸡滑液囊支原体   流行病学   荧光定量PCR   文昌鸡  

摘要： 禽支原体感染一直以来都是规模化养殖的顽疾,给家禽养殖业带来严重的经济损失。其中鸡毒支原体(MG)和鸡滑液囊支原体(MS)是危害最大、致病力最强的两类支原体,在国内广泛传播。文昌鸡产业是海南经济支柱产业之一,若受到MG、MS的侵害会对当地经济造成巨大损失,因此疫病防控重中之重。但目前对海南省文昌鸡养殖场MG和MS的感染情况知之甚少,因此,本研究将深入调查海南省文昌鸡主要养殖地区(海口、文昌、琼海、儋州)规模鸡场MG和MS的感染情况,并对部分MG、MS流行菌株进行遗传变异分析,为判断疫病的分布情况和流行趋势提供依据;同时针对感染情况建立起高速、精准的双重荧光定量PCR检测方法,为临床MG和MS的快速、精准诊断及检测提供技术支撑。主要结果如下: (1)采用ELISA和PCR的检测方法,对1 726份未经免疫的文昌鸡血样和1 510份咽喉拭子进行流行病学检测。结果显示:海南省主要养殖地区普遍存在MG、MS感染,其中MG的抗体总阳性率达到42.00%,病原总阳性率为11.79%;MS的抗体总阳性率为31.75%,病原总阳性率为25.96%。二者均在春季多发,以成年文昌鸡感染最为严重,MG的抗体阳性率分别为39.57%和74.45%,病原阳性率分别为52.26%和16.57%;MS的抗体阳性率分别为28.78%和59%;病原阳性率分别为42.58%和34.16%。中小型的养殖场感染程度普遍大于大型养殖场,其MG抗体阳性率分别达到54.07%和54.10%,病原阳性率分别达到38.33%和15.14%;MS抗体阳性率分别达到26.67%和46.45%,病原阳性分别达到96.97%和36.89%。MG在蛋鸡和肉鸡中感染最为严重,抗体阳性率分别为83.33%和38.27%,病原阳性率分别为3.23%和27.33%;MS在蛋鸡中感染最为严重,抗体阳性率和病原阳性率分别达到37.04%和42.00%。 (2)对海南省部分MG、MS流行菌株进行遗传变异分析,结果显示,海南省主要MG流行株与青海和湖南地区的分离株同源性最高,达到99%以上,且处于同一进化分支,有较近的亲缘关系;MS主要流行株与广东和福建地区分离株同源性最高,核苷酸一致性在98.6%以上,且处于同一进化分支,亲缘关系较近。 (3)成功建立起MG、MS单一荧光定量PCR检测方法,结果显示,MG的扩增效率、相关系数、斜率和最低检测限度分别为98.3%,0.998,-3.364和5.5×10～0拷贝/μL;MS的扩增效率、相关系数、斜率和最低检测限度分别为105.9%,1.000,-3.189和6.6×10～0拷贝/μL。成功建立起MG、MS双重荧光定量PCR检测方法,结果显示MG的扩增效率、相关系数和斜率分别为109.7%,0.998和-3.110;MS的扩增效率、相关系数和斜率分别为100%、0.998和-3.322;二者最低检测限度均达到4.83×10～1拷贝/μL。经验证本试验所建方法具有良好的线性关系、特异性和重复性,变异系数均在1.50%以下。 上述结果表明,海南省文昌鸡已普遍存在MG、MS感染,且主要的传染源来自国内,使用本试验建立的检测方法可为临床上的快速检测提供帮助。

关键词： 急性肺栓塞   流行病学   栓子定位   风险分层   列线图  

摘要： 目的:本文旨在探讨血压正常的急性肺栓塞栓子定位与风险分层的相关性。 方法:对2015年1月至2020年12月期间重庆医科大学附属第一医院收治的796名急性肺栓塞患者进行回顾性分析。收集了人口统计学特征、既往病史、入院时生命体征、相关实验室检查指标、CTPA相关数据。中危肺栓塞为终点事件。随机将患者分类为训练组和验证组,其中训练组使用单因素及多因素logistics回归分析患者风险程度的影响因素。根据分析结果构建列线图模型并使用训练组及验证组数据绘制ROC曲线下面积、DCA曲线、校正曲线等对模型性能进行验证。 结果:共有334名患者被纳入分析,按照8:2比例随机将患者分为训练组及验证组。其中268名患者被纳入训练组,根据是否发生中危肺栓塞将患者分为两组:其中低危组82名,中危组186名。在人口统计学方面,两组患者年龄存在统计学差异(P<0.001)。在既往史方面,两组患者高血压史、慢性阻塞性肺病史、房颤史、心力衰竭史、下肢深静脉血栓形成病史、年龄校正Charlson合并症指数均有统计学差异(P<0.05)。在入院生命体征方面,两组患者的心率、脉搏、呼吸频率有统计学差异(P<0.05)。在生化指标方面,两组患者的血小板、红细胞分布宽度、活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原、肌酸激酶同工酶、尿素、肌酐、尿酸、钙、碳酸氢盐、心肌酶谱异常均有统计学差异(P<0.05)。两组患者的栓子定位、CT下左右心室直径之比均存在统计学差异(P<0.05)。通过单因素及多因素logistics回归分析发现年龄、呼吸频率、红细胞分布宽度、栓子定位于主干与血压正常的急性肺栓塞患者风险分层独立正相关(P<0.05)。依据多因素回归分析结果,绘制出预测血压正常的急性肺栓塞患者风险分层的列线图模型,并使用验证组数据进行验证,其中训练组ROC曲线下面积为0.859(95%CI 0.814-0.904),灵敏度为74.19%,特异度为84.14%;验证组为0.860(95%CI 0.768-0.951),灵敏度为78.26%,特异度为90.00%,并分别使用DCA曲线以及校准曲线评估模型性能良好。 结论:本研究中,年龄、呼吸频率、红细胞分布宽度、栓子定位于主干与血压正常的急性肺栓塞患者为2014ESC风险分层为中危独立正相关(P<0.05)。

关键词： 严重急性呼吸道感染   病原体监测   腺病毒   流行病学   基因编辑  

摘要： 研究目的:　　近些年来，新突发传染病的出现使人们意识到以呼吸道感染为主的发热呼吸道症候群监测和即时检测技术发展的重要性。发热呼吸道症候群起病急，进展迅猛，极易引起大范围的暴发和流行。伴随着新型冠状病毒的流行，严重急性呼吸道感染(Sever acute respiratory infection,SARI)的病原谱发生了巨大改变，其中由于缺乏疫苗和快速检测的手段，腺病毒3型和7型在军队和学校等封闭环境下可引起暴发疫情，给人类的健康和卫生安全带来不可估量的伤害。因此，加强发热症状呼吸道病原体的流行病学监测，为人腺病毒(Human Adenovirus,HAdV)建立一种高灵敏、高特异、高效和便捷的新型核酸诊断工具极其重要。本研究通过分析2022～2023年广东地区SARI的病原学监测资料，探讨常见呼吸道病原体流行现状及变化趋势;同时，对HAdV阳性样本进行分离培养和全基因组基因检测，描述其流行特点和基因特征，并结合CRISPR/Cas12a检测技术，发掘CRISPR/Cas12a检测腺病毒3型和7型的潜在价值，为广东地区HAdV相关的呼吸道传染病的防治、预警和诊断提供数据支持与实验基础。　　研究方法:　　1.基于广东省SARI病例监测项目，病例样本来源于本省21个不同地级市，SARI样本采用Luminex呼吸道多病原试剂盒进行检测，描述性流行病学方法和x2检验用于分析评价2022～2023年广东省SARI呼吸道病原体流行情况和HAdV的流行情况。　　2.用Hep-2细胞对呼吸多病原检测为HAdV阳性的样本进行病毒分离培养，选取部分HAdV毒株进行二代测序(Next-generation sequencing,NGS)以获得全基因组序列，并对HAdV的遗传进化和分子特征进行分析。进一步的，通过实验研究得到了 CRISPR/Cas12a光控一管法检测技术的最优检测条件，并对HAdV 3型和7型的检测进行了效果评价。　　研究结果:　　1.2022～2023年SARI呼吸道病原体总阳性检出率为30.77％,不同年份间病原体检出率差异有统计学意义(x2=15.184,P＜0.001),混合感染率为3.50％,其中阳性检出率排名前五的病原体分别为:鼻病毒/肠道病毒6.52％、肺炎支原体6.06％、新型冠状病毒4.18％、甲型流感病毒3.43％、偏肺病毒3.40％。　　2.不同性别常见呼吸道病原体总检出率差异无统计学意义(x2=0.704,P=0.401),其中除肺炎支原体(x2=5.002，P=0.025)和人腺病毒(x2=6.864，P=0.009)外，其余病原体在不同性别间的阳性检出率无统计学差异(P＞0.05)。　　3.不同年龄组常见呼吸道病原体检出率差异有统计学意义(x2=122.350,P＜0.001)，以3～7岁年龄组检出率最高，为42.34％。除冠状病毒、肺炎衣原体和嗜肺军团菌外，其余病原体在不同年龄组间的检出率均有统计学差异(P＜0.05)。　　4.2022～2023年研究期间，不同季节的呼吸道病原体阳性检出率总体上有统计学差异(x2=22.644,P＜0.001)。其中2022期间全年出现两个检测高峰:5月份和10～12月份，而2023年2月份呼吸道病原体检出率的最低，仅有4.63％,其余月份的阳性检出率均在10％以上。　　5.本研究人腺病毒检出率为2.39％,在分离的50份人腺病毒毒株中，获得共16份全基因组序列，其中包括12条HAdV-3、1条HAdV-21、2条HAdV-1和1条HAdV-2,各亚属与参考序列同源性高达99％。　　***/Cas12a光控一管法的实验结果显示，Hexon-7的H7-2引物和NPOM-crRNA以及Hexon-3的H3-3引物和NPOM-crRNA的反应速率最优。CRISPR/Cas12a光控一管法检测含有Hexon-7实际样品的灵敏度和特异度均为100％,符合率为100％,而Hexon-3的灵敏度为96.77％,特异度为35.29％,符合率为75％。　　研究结论:　　1.广东地区2022～2023年SARI病例病原谱发生改变，以鼻病毒/肠道病毒、肺炎支原体、新型冠状病毒、甲型流感病毒和偏肺病毒为主要检出病原体，不同年份之间的病原体构成比例和检出率也有所差异，多病原混合感染率显著增高。　　2.肺炎支原体和人腺病毒检出率受性别影响，绝大部分呼吸道病原体在不同年龄组间存在流行差异，7岁以下婴幼儿和65岁以上老年人群体依然是呼吸道疾病感染的易感人群。在时间分布上，呼吸道病原体随季节的变化呈现着一定的检测高峰，不同病原体在不同时间的流行可能存在相互影响。　　3.2022～2023年SARI病例中人腺病毒的主要流行型别为B亚属的HAdV-3,同源性高，总体变异小，但未见HAdV-7流行株。

关键词： 猪圆环病毒3型   TaqMan荧光定量PCR   间接ELISA   流行病学调查  

摘要： 猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)于2016年从患有皮炎肾病母猪的流产胎儿中通过宏基因组测序被发现。随后在世界其他地区也检测到了PCV3,回溯性研究表明PCV3很可能已经在猪群中传播了几十年。PCV3与多种临床表现有关,如猪皮炎肾病综合征(Porcine dermatitis and nephritis syndrome,PDNS)、繁殖障碍、心肌炎及多系统炎症和猪呼吸道综合征(Porcine respiratory disease complex,PRDC)等,但由于该病毒分离培养异常困难,其致病性研究报告并不多且结论不太一致。因此建立相应的抗原和抗体诊断方法,对于开发有效的疫苗和治疗性药物等防控措施至关重要。围绕这一主题,开展了两方面的研究,分别是:PCV2和PCV3双重TaqMan荧光定量PCR的建立及其在流行病学的应用;PCV3间接ELISA血清抗体检测方法的建立及初步应用。 首先,本研究基于一种PCV2和PCV3双重TaqMan荧光定量PCR方法检测不同健康状态下猪的样本,明确PCV2和PCV3在不同状态下的阳性率差异,并对获得的病毒序列进行遗传进化分析。结果显示,通过条件优化,成功建立了一种PCV2和PCV3双重TaqMan荧光定量PCR方法,该方法具有较好的特异性、敏感性和重复性。运用所建立的双重定量PCR方法对我国15个省份的1385份样品进行检测,PCV3的总阳性率为34.74%,PCV2的总阳性率为57.95%,二者的共感染率为25.49%。在372份健康猪脏器中PCV3和PCV2的阳性率分别为17.13%和69.89%,二者共感染率为12.90%。在246份发病猪的脏器中PCV3和PCV2的阳性率分别为55.69%和83.33%,二者的共感染率为47.97%。PCV3阳性率和病毒载量最高的脏器均为死胎,与其他脏器相比具有显著性差异。PCV2在淋巴结中具有较高的病毒载量,且发病猪中PCV2的病毒载量显著高于健康猪。共获得18条PCV3全长序列(9条PCV3a-1,9条为PCV3b)以及64条PCV2全长序列(40条为PCV2d,16条为PCV2b,8条为PCV2a)。相比于PCV2,PCV3具有较高的遗传稳定性,PCV3 Cap蛋白的序列一致性为94.0%～100%,而PCV2 Cap蛋白的序列一致性为81.3%～100%。PCV3 Cap变异最多的氨基酸位点位于24、27、77、104和150位,而PCV2 Cap在不同基因型间具有10～13个氨基酸变异位点。 其次,本研究通过原核表达系统表达了截去核定位信号区前27个氨基酸的PCV3-r Cap蛋白,利用该蛋白建立了一种检测猪血清中PCV3抗体的间接ELISA方法。结果显示,PCV3-r Cap蛋白约为22.8 k Da,基于PCV3单抗的Western blot结果显示其具有良好的反应原性;经过一系列的条件优化,成功建立了以PCV3-r Cap蛋白为包被抗原的间接ELISA。采用该方法同时检测常见病原的阳性血清,结果显示该方法仅对PCV3阳性血清检测为阳性结果,与PRV、CSFV、PRRSV、PEDV、PCV2、PCV1的阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性;该方法对PCV3强阳性血清的敏感性为1:3200,对于阳性血清的敏感性为1:400,对于弱阳性血清的敏感性为1:200;同时该方法具有较好的重复性,批内变异系数均小于5%,批间变异系数均小于10%。利用该方法与商品化猪圆环病毒3型ELISA抗体检测试剂盒同时对100份临床样品进行检测,二者的阳性符合率、阴性符合率和总体符合率分别为90.74%、93.48%、92.00%。运用该间接ELISA方法对303份临床猪血清进行PCV3抗体检测,发现抗体总阳性率为50.66%,其中发病猪和健康猪中抗体阳性率分别为53.04%、50.53%。 综上所述,本研究建立的PCV2和PCV3双重TaqMan荧光定量PCR方法和间接ELISA方法可用于临床样品中PCV3抗原和抗体的检测,为PCV3的临床防控提供理论和技术支持。