关键词： 猫疱疹病毒   流行病学调查   灭活疫苗   保护效果  

摘要： 猫病毒性鼻气管炎（Feline viral rhinotracheitis,FVR）,简称猫鼻支,在宠物临床医学领域,被视为一种高风险的接触性传染病,致病原为猫疱疹病毒1型（Feline herpesvirus type 1,FHV-1）。本病在成年猫和幼龄猫中均有可能发生,患病猫是FVR的主要传染源,临床常见症状为流涎、打喷嚏、咳嗽、眼鼻分泌物增多、结膜炎、严重时出现口腔溃疡、角膜腐骨、病毒性肺炎、甚至呼吸困难。FHV-1的病毒特性导致其能以基因组的形式存在于猫的神经系统,尤其是三叉神经中,表现为终生带毒、排毒,对猫群体的健康造成极大的潜在威胁。同时,由于目前该病没有特效治疗药物,最重要的预防方式是给易感猫按时接种疫苗。目前,我国基本采用的是进口灭活疫苗,进口疫苗所用的毒株是非国内流行株,不能提供完全的保护,故FHV-1感染率仍然很高,所以掌握其在猫群体中的流行病学数据,对于临床上制定针对性的诊断,治疗及预防策略十分重要。同时,应尽快研发出免疫原性好、效价高、保护力强的疫苗来预防该病,以减少该病的流行。本研究首先通过对西北农林科大西安动物医院2020年6月-2023年6月三年期间来院就诊和送检的病例进行流行病学调查统计,分析其抗体水平及流行情况,得到该病在西安地区的流行数据。随后利用本实验室分离得到的FHV-1国内临床毒株,进行攻毒试验,再以实验室方法制备了一批灭活疫苗,初步评估其保护效果。主要结果研究如下: 1.调查时间为2020年6月-2023年6月,通过查阅病例处方信息,与主治医生和动物主人沟通,对来院进行抗体检测和抗原检测的猫进行统计调查,对FHV-1的抗体水平、检出率、分布时间、年龄、性别和品种等进行分析。结果显示,在来院进行的112例抗体检测猫中,抗体水平低、中、高分别占比52.68%、33.04%和14.29%,说明在西安地区猫群中FHV-1抗体水平普遍偏低。在112例抗体检测猫中免疫完全的有70例,占总数的62.5%,其中抗体水平低、中、高分别占比37.14%、42.86%和20%,而42例免疫不完全猫抗体水平低、中、高分别占比78.57%、16.67%和4.77%,说明免疫完全的猫产生的抗体水平优于免疫不完全的猫。在本次抗原调查中,FHV-1检出率为20.38%,其发病无明显季节性,阳性病例集中在1岁以内未成年猫,雄性病例多于雌性病例,但二者无显著性差异,发病数量最多的品种是中华田园猫和英国短毛猫,调查的总品种与总病例数存在一定的相关性。 2.利用本实验室分离鉴定的FHV-1毒株,测定其TCID50为10-7.11/m L。对1只试验猫进行攻毒预试验,攻毒部位为眼、鼻、口,计量分别为眼0.2 m L/眼、鼻0.2 m L/孔、口0.2 m L,共计为1 m L。结果显示,攻毒猫出现疱疹病毒典型的上呼吸道症状,以及发热、精神食欲减退等一般症状,阴性对照未出现相关临床症状,故认为其具有良好的致病性。同时筛选合适的灭活剂及灭活时间,最终选择0.1%β-丙内酯灭活48 h作为灭活条件,37℃水浴2 h终止灭活,通过实验室方法制备一批灭活疫苗。疫苗外观呈均一稳定的淡黄色透明液体,性状稳定,安全性良好。随后选取12只抗原抗体双阴性的美国短毛猫,按照设定的免疫程序进行接种,在免疫期间各组猫体温、体重并未出现疫苗造成的不良影响。经过抗体检测,疫苗组试验猫产生的抗体水平良好。在免疫程序完成后,根据实验分组进行攻毒,通过对各组试验猫的体温、体重、临床症状评分及排毒监测,证明该灭活疫苗能给猫提供一定的保护效果,可用于进一步研究。

关键词： 食管癌   癌前病变   危险因素   代谢标志物  

摘要： 目的: 1.基于中国食管癌高发地区前瞻性人群队列,建立以流行病学危险因素为基础的食管鳞状上皮细胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)发病风险预测评分模型。 2.基于以医院为基础的病例对照研究,使用液相色谱串联质谱平台(Liquid Chromatography with Tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)检测 ESCC 患者、食管鳞状上皮异型增生(Esophageal Squamous Dysplasia,ESD)患者(即食管癌前病变)及正常对照(Normal Control,NC)人群的血浆代谢物,探索可用于识别食管癌及其癌前病变的潜在血浆代谢标志物。 3.基于第二部分病例对照人群的流行病学危险因素信息和血浆代谢物检测结果,评估危险因素评分和代谢标志物联合检测在食管癌和癌前病变识别中的准确性。 方法： 1.第一部分研究所使用队列为林县营养干预队列。该队列于1986年纳入29,584名40～69岁健康参与者,对其进行基线流行病学危险因素调查及前瞻性随访,以确定ESCC发病结局。将食管癌常见流行病学危险因素纳入Cox比例风险回归模型以建立基准模型,使用基准模型的系数计算不同危险因素的评分,并将每个参与者的危险因素评分相加得到总分数。评价基准模型及评分预测3年、5年和10年随访期内的ESCC发病风险。采用参与者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC)和校准曲线检验模型的区分度和校准度。使用5折交叉验证对模型进行内部验证。通过比较不同评分截断值预测ESCC发病的灵敏度、特异度和约登指数来确定评分的最佳截断值。 2.第二部分研究选取2018～2019年曾在河南林州食管癌医院就诊或治疗的正常体检人群(NC)、ESD患者和ESCC患者作为研究对象。收集研究对象的流行病学危险因素信息以及血浆标本,基于LC-MS/MS平台对血浆标本进行非靶向代谢组学检测。以Student's T检验的P值<0.05和特征变量投影重要度(Variable Influence on Projection,VIP)>1为标准,筛选NC组与ESCC组、NC组与ESD组间的差异性代谢物,通过支持向量机(Support Vector Machine,SVM)模型探索潜在生物标志物组合,并确定代谢标志物组合识别ESCC与ESD的预测概率最佳截断值。利用通路分析及富集分析探索食管癌变的代谢波动。 3.第三部分研究对第二部分病例对照人群中计算的危险因素评分和代谢标志物检测数据进行分析。分别以是否存在ESCC和ESD为因变量,将参与者的危险因素评分以及已鉴定出的代谢标志物组合预测值作为自变量纳入Logistic回归,以计算危险因素评分和代谢标志物组合与ESCC和ESD发生的比值比(Odd Ratio,OR)及95%可信区间(Confidence Interval,CI)。按照评分和代谢标志物组合预测概率的最佳截断值对其进行各自分类,比较“危险因素评分+代谢标志物”的串联和并联检测对ESCC和ESD识别的准确性。 结果: 1.在排除缺失基线流行病学危险因素的参与者后,共计29,408名参与者纳入了最终分析。在10年随访期间,共发现1,386例ESCC新发病例。根据单因素和多因素Cox回归筛选,最终将年龄增加、吸烟、食管癌家族史、吞咽困难、新鲜蔬菜摄入幻次/天、BMI<18.5kg/m2、不饮用自来水、牙齿脱落作为ESCC危险因素纳入基准模型,其预测3年、5年、10年随访期内ESCC发病的ROC曲线下面积(Area Under Curve,AUC)分别为 0.71(95%CI:0.68-0.73)、0.68(95%CI:0.66-0.70)、0.64(95%CI:0.63-0.66)。根据基准模型回归系数计算评分,最终评分范围从0到59分不等。以3年内的ESCC发病风险为例,与评分为20分以下的参与者相比,20～39分组人群发生ESCC的调整HR为3.43(95%CI:2.75-4.28),39分以上的人群的HR值为8.37(95%CI:5.09-13.77)。评分每增加1分,3年内ESCC发病风险即增加8%(HR=1.08,95%CI:1.08-1.09,Ptrend<0.001)。评分预测3年、5年和10年内ESCC的AUC值分别为 0.70(95%CI:0.67-0.72)、0.68(95%CI:0.66-0.69)和 0.64(95%CI:0.63-0.66)。评分识别ESCC的最佳截断值为20分,对应灵敏度、特异度、约登指数分别为78.0%、53.7%、0.32。 2.本部分研究最终纳入NC人群、ESD患者和E

关键词： 鲍曼不动杆菌   替加环素不敏感   RND外排泵   多位点序列分型  

摘要： 目的 本实验旨在探讨中国重庆某三甲医院分离的替加环素非敏感型鲍曼不动杆菌（Tigecycline-Non-Susceptible ***,TNAB）的分子流行病学和替加环素耐药机制。 方法 收集了2019年7月至2022年6月重庆某大型三甲医院经VITEK-2系统鉴定全部非重复的TNAB菌株。经过质谱（MALDI-TOF MS）和bla-OXA-51基因测序筛选,微量肉汤稀释法复核替加环素的最低抑菌浓度。通过多位点序列分型方法获得菌株序列型（Sequence type,ST）并使用goe BURST软件分析菌株间亲缘关系。利用PCR（Polymerase Chain Reaction）扩增技术对部分替加环素耐药相关基因进行筛查。通过外排泵表型抑制试验评估RND（Resistance Nodulation cell Division）家族外排泵的活性,利用q-PCR（Real-time Quantitative PCR）检测RND家族外排泵基因的相对表达水平。 结果 1.34株TNAB标本来源以痰为主（55.9%）,所属病区主要为ICU（Intensive Care Unit）(73.5%)。其感染的患者年龄平均为64岁,以男性居多（61.8%）,住院时长8-531天不等,23.5%的患者结局为死亡。 2.本次研究的菌株对除了粘菌素外的常用抗生素（米诺环素,妥布霉素,头孢哌酮/舒巴坦,多西环素,替卡西林/克拉维酸,哌拉西林/他唑巴坦,亚胺培南,美罗培南,头孢他啶,头孢吡肟,环丙沙星,左氧氟沙星）普遍耐药,耐药率为73.5%-100%。 ***结果示:34株TNAB共鉴定出8种均属于CC92（Clonal Complex 92）的ST型,其中ST195（35.29%）和ST208（17.7%）是最主要的ST型。CC92在我院TNAB的流行中起了主要的作用。 4.所有菌株均检出ade R、ade S、ade L、rrf、rps J和trm基因。ade N的检出率为（73.5%）,而未检出tet（X）基因。其中trm基因第240位核苷酸都存在缺失突变。 5.58.82%的菌株在加入外排泵抑制剂CCCP（Carbonyl cyanide3-chlorophenylhydrazon）后替加环素最低抑菌浓度有所下降。34株TNAB的外排泵基因ade B、ade G、ade J平均表达水平分别是标准菌株ATCC19606的3.8,6.5和4.0倍。 结论 ***主要分离自ICU患者、老年人等免疫力低下人群,感染后常导致患者住院时长增加以及预后不良。 2.本次研究的TNAB以ST195为起源基因型,具有较高的亲缘性和耐药性。它们的流行主要归因于CC92的传播,应加强耐药性的监测以预防TNAB菌株的暴发。 3.本次研究尚未发现替加环素高水平耐药菌株的流行播散,RND外排泵表达上调是本院鲍曼不动杆菌对替加环素低水平耐药的主要机制

关键词： 人腺病毒   儿童   重症肺炎   新型冠状病毒   流行病学  

摘要： 背景 新型冠状病毒疫情(COVID-19)的全球大流行不仅对人们的生命安全和健康造成了严重威胁,也对全球公共卫生体系造成了前所未有的冲击。作为一种主要通过呼吸道传播的病毒,其在传播的过程中,不仅直接导致了大量人群感染,而且由于人们普遍采取戴口罩、保持社交距离等措施,一定程度上也影响了腺病毒的传播。因此,探讨新冠疫情对广州地区腺病毒肺炎发病率的影响,分析其临床特点,有助于我们更深入地了解HAdV的流行趋势、提高对HAdV肺炎的认识及诊治能力。 目的 1、了解CAP住院患儿中人腺病毒(human adenovirus,HAdV)感染的流行病学特点。 2、比较轻、重症HAdV肺炎患儿的临床特点,探讨HAdV感染导致重症肺炎的相关危险因素。 将2016～2023全年于广州医科大学附属第一医院(以下简称为广医一院)儿科住院的8339例肺炎患儿作为研究对象,分析HAdV在CAP住院患儿中的检出情况,并对HAdV肺炎的流行特征及临床特点包括年龄、性别、发病季节(或月份)、住院天数、住院费用、临床表现、实验室检查、影像学检查、治疗方案等资料进行数据分析。若数据呈正态分布,将用均值±标准差的方式描述计量资料的分布情况,而t检验则用于组间比较。若数据呈非正态分布以中位数(M)和四分位数间距(P25,P75)表示,采用Kruskal-Wallis秩和检验。计数资料用百分率描述,卡方检验或者Bonfereoni分割法用来组间比较。连续变量用单因素方差分析评估组间差异。危险因素评估采用二元Logistic回归与ROC曲线分析。P值<0.05,差异具统计意义。 结果 1、2016～2023年CAP住院患儿共8339例,其中HAdV阳性355例,检出率为4.26%,其中2019年为流行高峰,2022年检出率最低(0%),且2020及其以后的检出率明显低于2019年及其之前,即新冠疫情后HAdV的检出率较新冠疫情前明显降低。HAdV感染夏季多发,检出率最高的月份为7月(6.03%),其次为5月(5.40%)、8月(5.32%),最低为3月(1.53%);且3～6岁患儿检出率最高5.98%。所有CAP住院患儿中,重症有1393例(16.70%,1393/8339);HAdV阳性CAP病例中,重症病例有160例(45.07%),HAdV阴性CAP病例中,重症病例有1233例(15.44%,1233/7984)。HAdV肺炎中男女比例约为3:2,年龄中位数是3岁;混合感染率81.23%,其中合并肺炎支原体感染最多见(66.67%),其次为其他呼吸道病毒(29.45%)。病毒中有以呼吸道合胞病毒最多见,其次为流感病毒、鼻病毒;细菌感染中以流感嗜血杆菌最多见,其次为肺炎链球菌、嗜肺军团菌。 2、持续发热(热程>21天)、喘息、固定湿啰音、喘鸣音、淋巴细胞计数和单核细胞计数、RDW-CV、白蛋白、AST、LDH、Ig M、C3、C4、铜蓝蛋白、β-微球蛋白、T%、辅助T%、B%、IFN-γ水平与重症结局有关(P<0.05),多因素分析提示喘息、RDW-CV和Ig M、β-微球蛋白是其独立危险因素(OR均>1)。 3、对持续发热与非持续发热的相关指标进行比较,前者的LDH水平明显高于后者。 4、喘息患儿的年龄、早产史、药物/食物过敏史和既往喘息史单因素分析均为危险因素;纳入多因素logistic回归,提示年龄、早产史、药物/食物过敏史和既往喘息史均为独立预后因素(OR值分别为0.61、4.34、2.56、4.2),其中年龄为保护因素,其余为危险因素。 5、对新冠前后两组免疫八项、TBNK、细胞因子进行分析比较,发现新冠前组中Ig A水平、T淋巴细胞比例、辅助性T细胞比例、以及细胞因子IL-2和TNF-α水平较新冠后组高,而细胞因子IL-4、IL-6、IL-10水平则低于新冠后组。 结论: 1、2016～2023年CAP住院患儿HAdV检出率较既往水平低,且新冠后的检出率较新冠前明显降低;以夏季多发,多见于3～6岁儿童。 2、出现持续发热、喘息和淋巴细胞计数、单核细胞计数、红细胞分布宽度系数(RDW-CV)、白蛋白、免疫球蛋白M、补体C3、补体C4、β-微球蛋白、铜蓝蛋白、AST和LDH水平是HAdV感染重症的相关危险因素(P<0.05),且喘息、RDW-CV、免疫球蛋白M、β-微球蛋白是其独立危险因素(OR均>1),即有喘息表现以及RDW-CV和Ig M、β-微球蛋白水平越高的HAdV患儿更易发展为重症肺炎。 3、HAdV肺炎患儿中年龄越小、有早产史、药物/食物过敏史和有既往喘息史者更易出现喘息;另外LDH的水平升高与HAdV感染患儿发热时间的长短有关。

关键词： 猫   下泌尿道综合征   调查   诊疗  

摘要： 猫下泌尿道疾病(Feline Lower Urinary Tract Disease,FLUTD)是多种影响猫下泌尿道的疾病的总称,包括特发性膀胱炎、下泌尿道感染、尿石症等疾病。临床症状通常表现为尿频、尿痛、尿急、血尿、尿潴留,严重情况下可能导致急性肾损伤甚至死亡。目前,该疾病在全国处于多发态势。本研究旨在通过统计分析FLUTD病例的发病情况,探讨FLUTD的致病因素和诊疗方法,并总结分析其发病规律和临床特点,为该疾病的治疗和预防提供理论依据和数据支持。 本次研究采用了实地考察的方式对88例FLUTD病例进行了调研。其中,猫特发性膀胱炎(Feline idiopathic cystitis,FIC)病例有42例,膀胱尿道结石(Urolithiasis,UL)病例有38例,细菌性膀胱尿道炎(Urinary tract infections,UTI)病例有7例,其他病因病例有1例。从调查的情况来看,合肥地区的FLUTD存在一定的发病规律:在年龄方面,2～3岁的猫是发病率最高的年龄段,占总病例的29.5%(26/88),其次是1～2岁的猫,占25.0%(22/88)。性别方面,公猫的发病率远高于母猫,分别占87.5%(77/88)和12.5%(11/88)。绝育猫的发病率也明显高于未绝育猫,分别占90.9%(80/88)和9.1%(8/88)。在品种方面,英国短毛猫和中华田园猫是受影响最多的品种,分别占31.8%(28/88)和28.4%(25/88)。饲喂方式也是影响因素之一,干粮喂养的病例最多,占72.7%(64/88),而湿粮喂养没有出现在病例中。通过相关性分析,证实了年龄、性别、品种和饲喂食物均为影响FLUTD发病率的因素。 针对不同病症分别采用药物治疗和导尿后药物治疗两种方案治疗后血液检测指标普遍呈现显著降低的趋势,表明治疗的整体效果较好。在治疗转归方面,75.0%(18/24)病例在经过药物治疗后达到了治愈的状态,25.0%(6/24)病例达到了有效状态。没有病例在治疗后出现无效或死亡的情况。这表明治疗方案在大多数FLUTD病例中取得了良好的效果。 通过2年的调研,结合具体的病例,我们获得了合肥地区猫FLUTD的发病规律,保守治疗是处理FLUTD的主要方式,因为它相对安全且有效,同时针对尿路结石等严重病例,手术治疗的治愈率通常高于保守治疗,并且复发率较低,为合肥地区猫下泌尿道的防治提供了可靠的理论支持。

关键词： 病毒组学   精准流行病学   季节性冠状病毒   新病原体的发现   人畜共患病毒  

摘要： 研究目的 人类感染的大多数病毒性新发传染性病原体具有自然疫源性,可能起源于野生动物,并通过接触或传播媒介发生跨物种传播,进而不同程度地影响人类。根据其来源、传播范围与方式,可将这些具有自然疫源性的新发传染性病毒分为三类。第一类是来自野生动物、已在人间传播的病毒,该类病毒包括冠状家族的新成员们,包括季节性人类冠状病毒(Seasonalhumancoronavirus,HCoV),它们具有人畜共患、反复感染和全球传播的特点。这些病毒造成人间流行之前,在人、野生动物宿主、传播媒介之间的跨种传播事件难以察觉。第二类病毒是目前在动物间传播、对人构成潜在威胁的病毒,包括蝙蝠、穿山甲等野生动物相关病毒,自从在马来穿山甲(Manis javanica)中发现新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)相关冠状病毒以来,穿山甲(哺乳纲,鳞甲目)所具有的公共卫生学意义引起全球范围内的广泛关注,尤其是穿山甲在病毒溢出传播过程中所扮演的角色。第三类病毒是以重要媒介蜱虫所传播的人感染病毒为代表的,目前仅能从动物传播到人、尚未发现人与人间传播的病毒。基于“同一健康”的理念,病毒在人类与野生动物宿主之间发生跨种传播时,传播媒介可能发挥着重要作用。因此,全面了解人类、野生动物宿主、传播媒介的病毒组构成,确定影响病毒组成的因素,并研究具有溢出传播风险病毒的进化发展,对病毒跨种传播的早期预警具有重要科学意义。 因此,针对上述三类具有自然疫源性的新发传染性病毒,由于测序技术的提高,基于变“被动应对”为“主动防御”研究理念的更新,本研究拟对人群、野生动物宿主、传播媒介携带的重要溢出传播病毒开展相关流行病学调查,为新发或再发病毒性传染病的早期预警提供数据和参考。研究目的如下: 1.通过对哨点医院HCoV阳性患者进行多中心监测,阐述急性呼吸道疾病HCoV患者流行病学特征和病毒遗传进化特征,为了解冠状病毒在人群和动物中的可能进化轨迹提供参考,为揭示第一类新发传染性病毒在人群中的传播特征提供科学数据依据; 2.通过报道人类呼吸病毒病毒在马来穿山甲中的自然感染现象,识别穿山甲中呼吸道合胞病毒的基因组特征,为预防病毒在人与动物之间的相互传播提供数据支持; 3.基于病毒组学技术,以穿山甲为代表,探究穿山甲所携带重要溢出传播病毒构成与进化,揭示穿山甲作为病毒宿主在新发或再发病毒性传染病中发挥的作用; 4.通过对重要传播媒介蜱虫携带病毒的全面调查,了解蜱传病毒组构成,掌握蜱传人感染病毒流行病学特征,为探究人群、野生动物和传播媒介中病毒多样性、揭示具有溢出传播风险的病毒奠定基础。 研究方法 1.样本及信息采集 本研究基于病毒组学分析,对人群、野生动物宿主、传播媒介的重要溢出传播病毒开展相关流行病学调查。分别在急性呼吸道感染人群、免疫缺陷动物穿山甲、重要传播媒介蜱虫中收集代表性样本进行研究。 (1)急性呼吸道感染人群:2016～2019年,本研究在中国北京市36家哨点医院开展了多中心监测。纳入流感样疾病(influenza-like illness,ILI)和严重急性呼吸道感染(severe acute respiratory infection,SARI)患者,并采集呼吸道样本,通过多重实时逆转录聚合酶链反应检测筛查HCoV。 (2)免疫缺陷动物穿山甲:研究第一批采集的30只马来穿山甲冷冻样本,是由广西海关罚没的从东南亚走私而来,分别收集自在2017年8月至2018年1月、2018年5月至7月期间。第二批161只穿山甲样本是广西海关在缉私行动中截获的,样本收集时间为2018～2019年。 (3)重要传播媒介蜱虫:从2016年3月到2019年10月,本研究在中国大陆30个省、直辖市或自治区采集蜱虫,同时记录样本采集信息。 2.生物信息学分析 本研究对收集到的样本分别处理。对所有HCoV 阳性样本进行宏转录组测序,获得HCoV全基因组序列,进行流行病学特征描述、系统发育进化及遗传变异特征分析。对穿山甲和蜱虫样本进行宏转录组测序,识别病毒序列进行基因组注释,描述各研究群体的病毒组学构成;基于完整基因组对具有重要意义的病毒构建系统发育树,以确定不同病毒的基因型及遗传进化多样性;将病毒遗传多态性与流行病学调查相结合,探究野生动物穿山甲、媒介蜱虫携带重要病毒的流行病学特征与影响因素。 3.统计学分析 本研究对研究人群和动物群体的相关变量进行统计学描述分析。连续变量用中位数和范围表示,分类变量用频数和比例表示。采用Shapiro-Wilk检验数据的正态性。当Shapiro-Wilk检验的P值低于0.1时,采用Wilcoxon秩和检验来评估连续变量组间的差异。Kruskal-Wall

关键词： 社区获得性血流感染   流行病学   相关因素   大肠埃希菌   超广谱β内酰胺酶  

摘要： 目的:血流感染是一种在临床中常见的危重疾病,在引起血流感染的病原菌中,大肠埃希菌的检出率较高,因其可以产超广谱β内酰胺酶（Extended-Spectrumβ-Lactamase ESBLs）而对临床治疗造成困难。在药物选择性压力影响下,产ESBLs大肠埃希菌检出率呈逐步升高趋势。与非产ESBLs菌株相比,产ESBLs大肠埃希菌所致的血流感染预后较差。本研究通过分析大肠埃希菌所致社区获得性血流感染患者的耐药情况,调查产ESBLs大肠埃希菌株感染的流行病学及相关因素,针对性的采取相应的措施,为临床上抗菌药物的选择提供参考,控制ESBLs菌株在社区产生和传播。 方法:收集2018年10月--2023年10月中国医科大学附属盛京医院各科室收治的符合大肠埃希菌所致社区获得性血流感染诊断标准的236例患者的病例资料,包括性别、年龄、住院科室、合并基础疾病、合并感染部位、是否进行侵入性操作、近3个月是否手术史、住院史、入院前抗菌药物应用、免疫抑制剂及激素应用及大肠埃希菌的药敏结果,分析产ESBLs大肠埃希菌社区获得性血流感染的流行病学特点。采用logistic回归模型分析产ESBLs大肠埃希菌社区获得性血流感染的相关因素。 结果:236例大肠埃希菌所致社区获得性血流感染患者中以60-80老年人居多,占54.07%。普外科、泌尿外科和急诊外科为大肠埃希菌检出数前三位的科室。合并的基础疾病以2型糖尿病、泌尿系结石和胆道系统疾病多见。合并感染的部位多位于泌尿道及胆道。5年间产ESBLs大肠埃希菌的总体检出率为57.2%。产ESBLs菌株组对青霉素类氨苄西林、单环类氨曲南、二代头孢中头孢呋辛钠、三代头孢中头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶及四代头孢中头孢吡肟耐药率明显高于非产酶株组。产酶株组对复方新诺明、左氧氟沙星耐药率亦比非产酶株组明显增高,耐药率分别为73.33%、77.04%,但对酶抑制剂的复合制剂及头孢西丁、阿米卡星耐药率较低,对替加环素和碳青霉烯类药物无一耐药。对产酶株组与非产酶株组进行单因素分析,侵入性操作（X2=26.130,P<0.001）、入院前的抗菌药物应用（X2=12.661,P<0.001）和近三个月住院治疗（X2=10.349,P=0.001）差异有统计学意义（P<0.05）。将组间差异具有统计学意义的3个因素带入Logistic回归模型进行多因素分析,结果显示侵入性操作（OR=3.598,95%CI:1.994-6.491,P<0.001）和入院前的抗菌药物应用（OR=2.792,95%CI:1.255-6.2111,P=0.012）是产ESBLs大肠埃希菌社区获得性血流感染的相关因素。 结论:（1）产ESBLs大肠埃希菌所致社区获得性血流感染患者以老年人居多。合并基础疾病位居前3位分别为2型糖尿病、泌尿系结石和胆道系统疾病;合并感染部位以泌尿系感染最为常见,其次为胆系感染。（2）236例大肠埃希菌所致社区获得性血流感染患者中,产ESBLs菌株的检出率为57.2%。产ESBLs菌株组均表现为不同程度的多重耐药性,但产ESBLs菌株对含β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂、碳青霉烯、替加环素高度敏感。（3）侵入性操作和入院前应用抗菌药物是产ESBLs大肠埃希菌所致社区获得性血流感染的独立相关因素。

关键词： 渝东南   丝虫病   乳糜尿   流行病学  

摘要： 目的:丝虫病性乳糜尿是一种较为少见的泌尿外科疾病,病程较长的患者可严重影响健康和生活质量,部分甚至威胁生命。重庆市疾病预防控制中心公布了2003年该地区丝虫病流行概况与防治效果评价,发现渝东南仍有大量丝虫病性乳糜尿患者。黔江、彭水、酉阳、秀山位于重庆渝东南,地势偏远,共有131个乡镇,是丝虫病性乳糜尿患者的集中分布区域。由于该疾病给患者及其家庭带来沉重经济负担和精神压力,本研究旨在调查近5年重庆渝东南慢性丝虫病性乳糜尿患者,对比近20年的流行特征变化,并包含患者的临床特点及诊治效果,筛选出需要重点防治的人群,探讨诊治方案和防治措施,为后续的疾病诊治和预防提供依据。 方法:采用回顾性流行病学调查方法,根据我国《丝虫病诊断标准及处理原则》(GB 15985—1995)中确立的丝虫病性乳糜尿诊断标准对近5年渝东南片区的重庆市黔江中心医院、重庆市黔江中医院、彭水县医院、彭水县中医院、酉阳县医院、酉阳中医院、秀山县医院、秀山县中医院共计8家综合医院诊治的1320名丝虫病性乳糜尿患者病例资料进行回顾性调查,分析包括地理分布特征、患者性别、年龄、职业等一般情况、既往检查结果、临床症状及病情发作情况等内容对比四个区县以及重庆市近20年前的数据,分析当前渝东南片区丝虫病性乳糜尿流行特征及患病情况。 结果:近5年共对渝东南8家医院符合诊断标准的1320例患者进行调查。渝东南的患病总人口数由2003年7621人下降至1320人,患病率由0.20%下降至0.02%,患病率呈明显下降趋势,患病情况差异检验P值<0.05,差异具有统计学意义,秀山县和黔江地区患病人数较少,酉阳县和彭水县较多。男性657人(49.77%),女性663人(50.23%),男女比值是1:1.01,女生略多于男生,各区县的男女性别之间患病率无统计学差异(P>0.05)。患者职业以农民为主,共1138人(89.62%)。患者年龄最小为41岁,最大为93岁,平均年龄为(65.10±9.13)岁,60-79岁1043人(79.02%),患病人数最多。民族分布上以土家族和苗族为主,分别为749人(56.74%),苗族252人(19.09%),在不同区县的民族分布,差异检验P值<0.05,具有统计学意义,酉阳县和彭水县的土家族比例较高,黔江和秀山地区的苗族和汉族人群比例较低。文化程度分布上以小学819人(62.04%)为主,不同区县的文化程度分布,差异检验P值<0.05,具有统计学意义,酉阳县和彭水县的小学和其他人群比例较高,秀山县和黔江区初中、高中人群比例较高。总病程集中在5～10年的404人(30.86%),大于20年的有391人(29.62%),各个区县在病程的分布上,差异检验P值>0.05,无统计学意义。患病过程中有排尿异常的有411人(31.13%),主要表现为排尿困难、排尿中断、排尿剧烈疼痛。病程中产生消极悲观、忧郁自卑、焦虑恐惧等情绪的有357人(27.07%),长期乳糜尿会造成心理情绪异常。BMI(体重指数)小于18.5的有672人(50.91%),治疗过程中采用中西医和外科手术治疗取得了满意的效果,治愈率为77.88%,社区管理照料工作对患者疾病的改善也有一定的效果。 结论:渝东南近5年丝虫性乳糜尿患者数量逐步减少,较2003年明显下降,人群分布以农村为主,职业主要以农民为主,年龄分布以高龄患者为主,其原因主要是随着城镇化的发展导致丝虫病传播途径的阻断,并依托各级疾控及基层医疗单位对慢性丝虫性乳糜尿患者的关怀和照料所致。患病人群主要表现为高脂饮食和劳累后导致症状加重和不定期发作,整体的体重指数偏低,主要是疾病导致的大量蛋白丢失。治疗手段以手术根治为主,轻症患者往往以中药和饮食调节来控制症状。鉴于全球其他国家尚未消除丝虫病,使得丝虫病性乳糜尿患者依旧存在,药物、外科手术和社区关怀对疾病的诊治和后期防护意义重大。

关键词： 猫泛白细胞减少症病毒   VP2基因   遗传进化   纳米抗体   噬菌体筛选技术  

摘要： 猫泛白细胞减少症（Feline Panleukopenia,FPL）是由猫泛白细胞减少症病毒（Feline Panleukopenia Virus,FPV）引起的一种严重危害猫科动物健康的急性、高致病性传染病。主要感染处于免疫空窗期的6月龄以下幼猫,引起动物高热、呕吐、腹泻、血便和白细胞急剧下降等临床症状。FPV基因组有2个开放阅读框,分别负责编码非结构蛋白NS1和NS2,结构蛋白VP1、VP2和VP3。其中VP2蛋白是FPV的主要结构蛋白,占FPV结构蛋白90%以上,能够影响FPV的抗原性、致病性和宿主范围,并在病毒的感染和受体结合过程中发挥重要作用。近年来,随着我国宠物猫行业的发展,FPV的持续流行和变异引起了人们的广泛关注,我国FPL防控主要采取疫苗免疫为主的策略,但FPL在治疗方面,没有直接特效药。 纳米抗体（Nanobodies,Nbs）作为当下最有发展潜力的抗体制剂之一,已经在肿瘤、传染病、免疫类疾病等多领域中广受关注。纳米抗体相较于传统的单抗和多抗,具有相对分子质量小、稳定性高、特异性强、亲和力高、组织渗透性强和易于基因改造等优势。目前,纳米抗体在多种动物疫病病原中已有报道,但是在FPL方面尚未被开发。 本研究旨在对2019年～2023年华东地区猫泛白细胞减少症病毒进行分离鉴定,并对其生物学活性进行测定,分析VP2基因的遗传变异规律和分子特征,研究其对猫的致病性。利用噬菌体展示技术建立FPV VHH噬菌体文库,并对文库的库容量和多样性进行测定。并通过3轮特异性富集筛淘,筛选出FPV纳米抗体。 1.猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定及致病性分析 本研究采集了36份疑似FPL病料,并成功分离到31株FPV分离株,其中猫源28株,犬源3株。31株FPV分离株的病毒滴度和血凝滴度分别为104.33～106.33 TCID50/0.1 mL和log27.0～9.7。选取病毒滴度和血凝效价均较高的分离株FPV-169株进行攻毒试验。FPV-169株攻毒后,试验组动物从第3天开始出现眼鼻分泌物,高热,食欲减退等临床症状,第3天试验组动物出现急性发病死亡,直至第9天试验组动物全部死亡,致死率为100%。血常规检测结果表明,试验组动物在第2天白细胞数目有明显上升,随后的第4～8天显著低于空白对照组,呈下降趋势。对未耐过动物进行病理剖检,主要病灶集中于猫的小肠部位,有明显的水肿、充血、出血,伴有小肠肠壁水肿和肠道胀气等病理变化。以上结果表明,本研究共分离出了31株FPV分离株,其中FPV-169株具有较好的遗传稳定性较强的致病性。 2.猫泛白细胞减少症病毒的遗传进化分析 本研究采集了华东地区31份猫泛白细胞减少症病料,扩增VP2基因全长,进行序列分析。结果显示31株之间的同源性为98.9%～100%,与疫苗株（CU-4株）的同源性为99.02%～99.54%;系统发育分析显示31株FPV分离株均处于亚洲分支中,与亚洲FPV参考株的亲缘关系较近,而与欧美FPV参考株的亲缘关系较远;关键氨基酸位点分析显示有25株VP2蛋白的91位点存在由A到S的突变;VP2蛋白与转铁蛋白受体（Transferrin receptor,TfR）分子对接显示TfR/FPV-VP2-91S复合物形成过程中的氢键和盐桥作用明显多于TfR/FPV-VP2-91A复合物的形成过程,表明VP2蛋白第91位点突变为S后与TfR结合力增强;分子流行特征分析显示2017～2023年中国FPV VP2蛋白第91位点突变率逐年上升,除中国南部地区未出现91S突变株外,中国其他地区均存在91S突变株,且在我国华东地区最为明显,占比达71.95%,FPV VP2蛋白第91位点突变为S已经成为华东地区FPV流行毒株的重要分子特征。 3.猫泛白细胞减少症病毒纳米抗体文库的建立 用商品化妙三多疫苗免疫羊驼,待血清抗体效价达到峰值后,采集免疫后全血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA并反转录为c DNA,通过巢式PCR扩增出约400 bp的VHH片段,连接至p Comb3XSS载体,利用热激法转化至TG1感受态细胞,构建FPV VHH区文库,库容量达3×10～8 PFU/mL,阳性率达100%（94/94）,经测序多样性丰富。利用噬菌体筛选技术,建立了FPV的纳米抗体噬菌粒文库,通过3轮富集筛淘,成功筛选到5条FPV纳米抗体序列,分别为FPV-1F10,FPV-1H8,FPV-1E11,FPV-1F4,FPV-1G4,在保守区的FR2区出现了亲水性氨基酸的替换,高变区CDR区的长度也不同,其中CDR3区最长,且5条纳米抗体序列的CDR3区均不同。 综上所述,本研究分离到31株FPV毒株,其中FPV-169株具有较好的遗传稳定性和较强的致病性。分离株位于亚洲地理分支中,FPV

关键词： 牛病毒性腹泻   流行特点   牛传染性鼻气管炎   预防措施   牛副流感病毒3型  

摘要： 近年来,我国牛养殖向着规范化的方向发展,但牛呼吸道疾病综合征(Bovine Respiratory Disease Complex,BRDC)的发生,给我国牛养殖业带来重创。BRDC的主要病毒类型是牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus,IBRV)和牛副流感病毒3型(Bovine Parainfluenza Virus type 3,BPIV-3)这三类病毒,因此这三类病毒是检验牛只呼吸道疾病的重要指标。本实验在内蒙古自治区12个牛养殖场共采集4800份牛血清样品,利用荧光定量PCR技术检测三种病毒的抗原,获得牛场牛群的患病率,进一步采取琼脂糖凝胶电泳和TA克隆测序验证。抗原实验结果表明,12个牛场的BVDV抗原阳性率的范围是8.3%(33/400)～28.5%(114/400),场阳性率为100%(12/12),平均抗原阳性率为18.1%(869/4800);IBRV抗原阳性率的范围是0～2.3%(9/400),场阳性率为75%(9/12),平均抗原阳性率为0.8%(38/4800);BPIV-3抗原阳性率的范围是0～1.0%(4/400),场阳性率为42%(5/12),平均抗原阳性率为0.2%(11/4800);而12个牛场其中3个牛场中存在感染两种病毒的情况,感染血清份数分别为鄂尔多斯牛场和呼和浩特牛场各1份,满洲里牛场2份。血清学阳性率数据表明内蒙古各个地区都存在感染BVDV的状况,且牛场之间感染数量有明显的差异;而IBRV在内蒙古各地区也出现普遍感染,但其感染数量没有BVDV的感染数量多;相较前两种病毒,BPIV-3在内蒙古地区的感染分布和感染数量均较少,只有个别地区出现少数患病牛;而牛只感染两种病毒的情况数量较少,反映牛群个体正在感染或者曾经感染过这两种病毒的情况,也从侧面表明除关注单一病原的致病性外,也需关注两病毒共感染的情况。 鉴于病毒对牛只健康状况的影响,本实验采用测量牛只日增重,胴体重,活重和屠宰率来监测牛只的生产性能变化。实验再次从各牛场康复的感染牛中,随机选取10头月龄均为7月的,进行患病后为期一个月的生产性能指标测量,观察牛只患病后的生产性能的变化。结果显示12个牛场牛只日增重的范围是0.70 kg～1.27 kg,其中日增重超过0.9 kg的有8组;胴体重的范围是118.62 kg～212.61 kg;宰前活重的范围是259.23 kg～391.48 kg;屠宰率的范围是45.76%～54.31%。上述数据表明由于各牛场的饲养水平和环境条件不同,导致实验牛康复后的日增重和屠宰率存在差异性,也表明患病后对牛只的生产性能存在一定的影响,因此养殖场要有防大于治的意识,采用综合性的管理措施,减少病毒的传播,降低牛场的损失。 综上所述,内蒙古大部分地区的牛养殖场均存在普遍感染BVDV,但IBRV和BPIV-3的感染数量和地区相对于BVDV较少,且牛感染后的健康症状和生产性能等方面都会受到不同程度的影响。因此,为预防和控制这种感染,建议牛场建立一套全面而有效的预防管理模式和措施,以确保牛只的健康和生产效益。