关键词： 犬副流感病毒   分离鉴定   遗传进化分析   致病力   免疫原性   流行病学调查  

摘要： 犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus,CPIV)能够引起犬的急性呼吸道感染,引起咳嗽、流鼻液等呼吸道症状。CPIV常与其他病原混合感染,如犬支气管败血波氏杆菌(Bb),犬腺病毒2型(CAV-2)、犬瘟热病毒(CDV)等,这种混合感染引起犬传染性呼吸道疾病称为CIRD(俗称“犬窝咳”),能加重病犬的病情,增加犬只死亡率,对养犬业带来了巨大的经济损失。目前无市售犬窝咳的联苗,CPIV作为CIRD主要病原之一,其病毒分离、鉴定、生物学特性分析等研究将为CIRD疫苗的研发奠定基础。因此,本研究在采集的临床样品中分离了2株CPIV,并对其进行遗传进化分析、致病力和免疫原性研究,主要取得以下结果: 1、从2440份样品中分离和鉴定出2株CPIV 本研究于2022～2023年,从湖北、湖南、辽宁、广西、山东等省份的犬场、宠物医院、流浪犬基地共收集样本2440份,通过RT-PCR进行CPIV的检测,共检出CPIV阳性样本139份,阳性率为5.70%。将阳性样本接种MDBK细胞进行病毒分离,通过RT-PCR、IFA鉴定以及电镜观察,成功分离出2株CPIV,分别命名为WH103、WH2301。我们进一步对WH103、WH2301进行HN、F基因扩增及遗传进化分析,两个分离株的核苷酸和氨基酸同源性与参考毒株相比均在94%以上。通过HN基因序列分析发现WH103、WH2301与美国株CPI-亲缘关系较近,处于同一分支,而F基因的序列分析表明WH2301与美国株CPI+处于同一分支,WH103与美国株CPI-处于同一分支。 2、分离的2株CPIV对犬致病力弱 为进一步探究CPIV分离株WH103和WH2301的致病力,我们将WH103和WH2301分别感染犬只,发现感染的犬只精神、食欲、体温均正常,血常规出现淋巴细胞数的短暂上升及中性粒细胞的短暂下降,但并未出现淋巴细胞下降的现象。在攻毒后7 d,WH103、WH2301组鼻咽拭子检测出CPIV,表明感染犬只在攻毒后7 d呼吸道向外排毒。在感染后第7 d将犬只进行剖检后,发现WH103、WH2301感染组的犬只的气管、肺脏等器官均未见明显病变,HE染色未见明显异常,免疫组化见CPIV阳性信号。以上结果表明,本研究中分离的CPIV对犬致病力较弱,其作为疫苗的安全性良好。 3、分离的2株CPIV具有良好的免疫原性 我们进一步探究了2株CPIV的分离株的免疫原性,分别将WH103、WH2301以及商品化疫苗4M8灭活后分别免疫了小鼠和犬只,并对其免疫原性进行了比较分析。中和试验结果表明,WH103、WH2301与4M8免疫小鼠后的中和抗体效价无显著差异,而在犬只免疫模型中,二免后WH103、WH2301组的中和抗体效价高于商品化疫苗4M8,且在二免后第一周WH2301的中和抗体效价最高,为1:182.8。以上结果表明,WH103和WH2301在犬只上具有较好的免疫原性,可以作为疫苗候选株。 综上,本研究在收集的2440份样本中分离了2株CPIV,2株分离株对犬只基本无致病力,安全性良好,且在犬只中具有良好的免疫原性,可以作为疫苗的候选株,为犬窝咳疫苗的研究奠定基础。

关键词： 流行性腮腺炎   流行病学特征   预测   分析  

摘要： 目的 分析南宁经济技术开发区2012年1月—2022年12月流行性腮腺炎月发病率时间序列趋势的特征，使用ARIMA模型预测发病趋势，为科学合理制订防控对策提供依据。方法 使用SPSS 23.0软件建立ARIMA模型，将2023年1～7月发病率与预测发病率进行比较，并预测2023年8～12月的发病率。结果 2012—2022年南宁经济技术开发区流行性腮腺炎共报告1 155例，年平均发病率为5.91/10万，主要集中在15岁以下青少年，占总病例数的88.31%，含腮腺炎成分疫苗（MuCV）的接种率有所上升。模型构建结果显示，ARIMA(1,0,0)(0,0,0)12为最佳模型。模型预测结果显示，2023年1～7月预测值与实际值整体趋势变化一致，误差平均值为0.22。结论 建立ARIMA(1,0,0)(0,0,0)12模型，利用2012—2022年南宁经济技术开发区流行性腮腺炎月发病率数据预测该地区2023年的流行性腮腺炎月发病率具有重大意义。

关键词： 内蒙古自治区   流感病毒   流行病学   病原学   基因特性  

摘要： 目的: 通过对内蒙古自治区2018～2023年流行性感冒哨点监测的流行病学和病原学数据进行统计分析,同时结合流感病毒抗原性、耐药性、血凝素（haemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）的基因序列特性研究,掌握内蒙古自治区流感流行特征、优势流行病毒株的抗原性变化、耐药性变化情况和HA、NA基因变异情况,为内蒙古自治区今后流感流行趋势预测、防控策略制定和流感疫苗接种指导提供科学依据。 方法: 利用“中国流感监测信息系统”下载收集内蒙古自治区2018～2023年流感样病例（Influenza-like illness,ILI）监测资料,用Excel 2019构建数据库绘制统计图表,通过描述性统计分析不同时间、不同人群、不同地区ILI分布特征;监测实验室采用Real-time RT-PCR方法对内蒙古自治区哨点监测ILI样本进行流感病毒核酸检测和分型或分系的鉴定并录入结果,从“中国流感监测信息系统”收集2018～2023年ILI病原学数据。用Excel 2019构建数据库绘制统计图表,用Arc GIS 10.6绘制各年春季和冬季地区阳性率和病原学分型地图,描述和统计分析不同时间、不同人群、不同地区的流感病毒的病原学流行特征;对2018～2023年内蒙古自治区各年各盟市网络实验室所有分离培养得到的流行病毒株使用流感病毒HA滴度测定和红细胞凝集抑制试验复核鉴定,并从鉴定结果一致且HA滴度≥1:8的毒株中根据年份、盟市、分离方式,挑选20%进行抗原性检测,计算病毒株中疫苗类似株占比以了解流感病毒抗原性变化情况;每年从进行抗原性检测的病毒株中选取30株运用表型测定法中荧光发光法进行耐药检测,数据用Graph Pad Prism 5绘制曲线计算IC50值,了解神经氨酸酶抑制剂药物对神经氨酸酶活性的抑制程度,掌握流感病毒耐药性情况;每年从完成抗原性检测和耐药性检测的病毒株中选取30株进行流感病毒HA和NA基因序列测定,运用MEGA 10.2.6软件进行序列比对,以Neighbor-Joining（NJ）法构建HA和NA基因系统进化树,分析流感病毒基因遗传进化特征。 结果: 1.内蒙古自治区流感监测2018～2023年各年ILI%分别为2.47%、2.81%、2.41%、2.23%、1.64%和2.71%,不同年份ILI%差异具有统计学意义（χ2=20887.90,P<0.05）。按周分析ILI监测数据,除2020年冬季和2021年春季外,每年春季（第1～12周）和冬季（第42～52周）ILI%较夏秋季高,具有明显的季节性特点。各年报告ILI中,0～岁组ILI占比最高（41.05%～59.56%）,其次是5～岁组（15.99%～28.43%）。内蒙古自治区东部、中部、西部2018～2023年报告ILI%均出现春季和冬季高峰,中部地区报告ILI%高于同期东部和西部。 2.2018～2023年各年流感监测阳性率分别为11.26%、21.35%、5.34%、3.30%、13.56%、12.51%,不同年份差异有统计学意义（χ2=2717.35,P<0.05）,2019年最高（21.35%）,2021年最低（3.30%）。2018～2023年各年内蒙古自治区流感监测阳性率呈现春季和冬季高峰,主要流行甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒、乙型Victoria系流感病毒,但不同年份、不同季节流行的优势毒株型别存在差异。男性和女性流感监测阳性率接近,差异无统计学意义（χ2=0.56,P>0.05）;各年龄组监测阳性率差异具有统计学意义（χ2=412.59,P<0.05）,15～岁组阳性率最高（21.56%）。流感病毒阳性样本来源以幼托儿童、学生和散居儿童为主。内蒙古自治区东部、中部和西部同一时期流行的流感病毒型别构成一致。 3.抗原性分析结果显示,2018～2023年210株甲型H1N1流感病毒中203株为疫苗类似株（占比96.67%）,167株乙型Victoria系流感病毒中160株为疫苗类似株（占比95.80%）,177株甲型H3N2流感病毒中82株为疫苗类似株（占比46.32%）。2018～2023年甲型H1N1流感病毒和乙型Victoria系流感病毒疫苗类似株占比高,甲型H3N2流感病毒疫苗类似株占比低。 4.耐药性分析结果显示,2018～2023年甲型H1N1流感病毒株、甲型H3N2流感病毒株和乙型Victoria系流感病毒株对Oseltamivir敏感性分别为96.88%、100%和100%,对Zanamivir敏感性分别为100%、100%、95.08%。 5.流感病毒遗传进化分析结果显示,2018～2023年内蒙古自治区流行的甲型H1N1流感病毒株HA基因和NA基因进化树均位于6B.

关键词： 日光性皮肤病   影响因素   横断面研究   预测模型   紫外线损伤防护   仿生纳米黑色素   聚多巴胺  

摘要： 【背景】 长期过度的紫外线辐射可导致多种日光性皮肤病,由于瘙痒明显且病情迁延反复,严重影响患者身心健康。长期日光照射还会诱发皮肤肿瘤,危及患者生命。高原地区官兵是强日光暴露群体,日光性皮肤病患病率高,然而目前尚缺乏我军高原地区日光性皮肤病流行病学特点和规律的相关数据。因此,明确日光性皮肤病在高原官兵中的发病特点,制定相关防护策略,研发具有高效光保护作用的军用高原防晒剂,对于维护高原官兵皮肤健康、提升部队战斗力、保障打赢具有重要意义,也是我军后勤装备发展中亟待解决的重要问题之一。 人体皮肤中黑素细胞分泌的黑素小体,可有效保护皮肤免受紫外线损伤,是人体天然的防晒屏障,以其为原料的防晒剂是未来仿生防晒品的研发方向。然而,其存在含量有限、获取困难等问题。仿生纳米黑色素聚多巴胺(Polydopamine,PDA)作为一种棕黑色的不溶性的高分子聚合物,通过多巴胺在弱碱性环境中氧化后自聚集而成,可模拟人类黑素发挥包括光保护、抗氧化、抗炎以及免疫抑制等作用,是一种具有潜力的新型防晒剂。因此,我们拟探索PDA在紫外线防护方面的作用及机制,并在此基础上针对强紫外线等恶劣环境,研制出军用新型日光防护剂小样,评估其防晒效能,以期解决困扰一线官兵的日光性皮肤病问题,有效提升我军高原地区卫勤保障能力。 【目的】 1.明确海拔4000米以上极高原地区官兵皮肤病流行病学谱,分析该地区官兵发生日光性皮肤病的患病风险因素,建立日光性皮肤病的风险预测模型,为海拔4000米以上的极高原地区官兵皮肤损伤防护提供指导意见,为上级卫生部门制定防治措施提供参考依据。 2.探索仿生纳米黑色素防晒剂在皮肤紫外线损伤防护中的作用及机制,为日后研制高效日光防护剂用于保障高原地区官兵皮肤健康提供依据。 【方法】 1.第一部分,采用横断面研究设计: 1.1通过文献回顾、专家咨询、预调查三个过程,编制并形成了高原地区日光性皮肤病影响因素调查问卷; 1.2 2022年8月至2023年8月,在高原地区某部,以建制连队为单位,收集官兵的调查问卷的信息,利用Excel建立数据库; 1.3利用SPSS和R语言这两款专业的统计学软件,对收集到的数据进行了深入的分析处理。根据纳入和排除标准,确定日光性皮肤病组和非日光性皮肤病组。通过多因素logistic回归分析中,通过Wald逐步分析法建立预测模型,使用R语言软件绘制列线图。 1.4进一步收集2023年10月至2024年1月高原地区某部官兵调查问卷信息,对模型进行验证,通过曲线下面积(area under curve,AUC)值评价模型的准确性。绘制校准曲线评估模型的校准度,并进行了Hosmer-Lemeshow(H-L)拟合优度检验。运用决策曲线分析(decision curve analysis,DCA)评估了模型的临床有效性。以P<0.05作为所有统计分析中差异具有统计学意义的阈值。 2.第二部分,紫外线损伤防护研究: 2.1通过多巴胺的氧化聚合反应制备PDA,使用透射电镜对粒子观察粒子形貌; 2.2将PDA与Ha Ca T细胞共培养,评估细胞毒性、生物相容性、自由基清除率; 2.3 UV辐照与PDA预处理的Ha Ca T细胞,流式细胞术检测Ha Ca T细胞活性,DCFH-DA检测Ha Ca T细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,彗星实验检测DNA的损伤,Western blotting检测p53表达,以明确PDA的光保护作用; 2.4利用PDA处理Ha Ca T细胞,UV辐照后,通过RT-PCR、Elisa、Western blotting检测细胞炎性因子及光老化分子表达,以明确PDA的抗炎、抗光老化的作用; 2.5模拟日光中紫外线特点构建紫外线损伤Balb/c小鼠模型,制备PDA防晒剂,涂抹于小鼠背部皮肤,UV处理3个月后,通过皮肤损伤评价、免疫组化/荧光观察胶原纤维排列及弹力纤维破坏情况、RT-PCR、Elisa、Western blotting检测光老化及炎症相关分子的表达,明确PDA对小鼠紫外线损伤的防护作用。 【结果】 1.第一部分研究 纳入3083例研究对象,其中日光性皮肤病1859例,非日光性皮肤病1224例。通过多因素logistic回归分析发现,海拔4000米以上高原地区日光性皮肤病的危险因素有年龄增加,BMI、进入高原时间、睡眠质量、是否熬夜、饮水种类、饮酒史、心理状态、人员类别、日间户外活动时间、认为防晒是否必要、皮肤分型、高原护肤霜的使用、入伍前日光性皮肤病患病史及家族史、所在单位是否有相关卫生教育。 利用多因素logistic回归分析成功构建了针对海拔4000米以上高原地区日光性皮肤病患病风险的预测模型。为验证模型的准确性,纳入了87

关键词： 社区获得性肺炎   肺泡灌洗液   病原谱   合并感染  

摘要： 目的 分析社区获得性肺炎（CAP）的流行规律，掌握CAP病原谱，为疾病精准防控和CAP患者的临床治疗提供理论依据。方法 收集2021年8月—2022年8月南宁市第二人民医院和柳州市工人医院CAP患者的病例资料，采集肺泡灌洗液标本，分析CAP病原谱及流行规律，采用多因素logistic回归模型分析患者死亡的影响因素。结果 共纳入999例CAP患者，平均年龄68.2岁。病原检出阳性率为48.3%，其中病毒检出率最高的是EB病毒（20.8%），细菌中检出率最高的为肺炎克雷伯菌（11.1%）。EB病毒、肺炎克雷伯菌和流感嗜血杆菌全年均有发现，冬季检出率较高。182例（18.2%）患者出现合并感染的情况，肺炎克雷伯菌-EB病毒合并感染检出率最高（4.1%）。多因素logistic回归模型显示，高血压（OR=2.409,95%CI:1.371-4.231）、糖尿病（OR=2.361,95%CI:1.268-4.397）、恶性肿瘤（OR=4.861,95%CI:1.526-15.489）和卡他莫拉菌检测阳性（OR=8.823,95%CI:2.007-38.786）会增加CAP患者死亡发生的风险。结论 病毒-细菌合并感染是最常见的共感染模式，需要引起临床医生的重视，警惕合并感染，及时改变用药策略，必要时同时考虑抗病毒治疗和抗生素治疗。

关键词： 风险因素   SSI   创伤性骨折   药物敏感性   病原菌  

摘要： 研究背景: 四肢骨折常发生在车祸、自然灾害和战争等背景下,及时合理的外科手术有助于恢复患者的四肢功能。但在外科手术中,少数患者受多因素的影响,可能引起手术部位感染(surgical site infection,SSI),轻者引起骨髓炎,重者发生感染性休克、截肢等严重后果,给患者带来巨大的经济和心理双重压力。目前国内外很多学者针对SSI及相关因素做了大量的实验室和临床调查研究,然而关于导致SSI发生的危险因素和SSI的预防治疗手段等关键问题还未很好解决,且大多数研究都是单一机构的,或只关注特定的患者群体,如老年人或糖尿病患者,甚至在一些回顾性研究中由于纳入的样本量不足或统计方法不丰富等原因,导致很多SSI相关影响因素存在矛盾和争议,对临床预防SSI的指导意义有限。因此在本研究中,我们纳入了超过100例的SSI阳性患者作为病例组,超过3000例的阴性患者作为对照组,且采用单因素和多因素分析统计学方法,探索和分析了影响SSI发生的多种临床相关风险因素、病原体分布和病原体的耐药性特征,以期为降低创伤性骨折术后SSI发生率提供可行性指导意见和帮助。 方法: 本研究是一项回顾性分析研究,根据统一标准纳入了从2015年1月至2019年12月在我院接受外科骨折手术的3978位成年患者。我们收集并分析了这些患者的基础数据、人口学特征、生活方式、手术相关变量和病原体培养等因素,并且利用单因素分析和多因素logistic回归分析的方法,揭示了SSI的独立风险因素。我们通过绘制了细菌分布直方图和药物敏感性热图描述细菌学分布和特征。 结果: 在3978例成年患者中,有138例患者在术后发展为SSI,占比3.47%。通过logistic回归分析发现,以下因素均是SSI的独立风险因素,包括性别(OR 2.012,95%CI:1.235～3.278,P<0.001)、糖尿病(OR 5.848,95%CI:3.513～9.736,P<0.001)、低蛋白血症(OR 3.400,95%CI:1.280～9.031,P<0.001)、基础疾病(OR 5.398,95%CI:2.343～12.438,P<0.001)、激素治疗(OR 11.718,95%CI:6.269～21.903,P<0.001)、开放性骨折(OR29.377,95%CI:9.944～86.784,P<0.001)和术中输血OR 2.664,95%CI:1.572～4.515,P<0.001)。同时我们也发现,年龄>59岁(OR 0.132,95%CI:0.059～0.296,P<0.001)、预防性使用抗生素(OR 0.082,95%CI:0.042～0.164,P<0.001)和负压封闭引流(vacuum sealing drainage,VSD)(OR 0.036,95%CI:0.010～0.129,P<0.001)是保护因素。本研究病原学结果显示38种301株细菌,革兰氏阳性细菌178株,占59.1%,革兰氏阴性细菌123株,占40.9%,在革兰氏阳性菌中占比最大的是金黄色葡萄球菌(108例,占60.7%);在革兰氏阴性杆菌中占比最大的是阴沟肠杆菌(38例,占30.9%)。革兰氏阳性菌几乎100%对万古霉素和利奈唑胺敏感,而革兰氏阴性菌中有超过73%的菌株对亚胺培南、阿米卡星和美罗培南敏感。 结论: 在本研究中,我们发现传统因素,诸如糖尿病、VSD应用等因素和SSI的发生直接相关,这与之前的文献报道相一致,而肥胖、饮酒、吸烟等生活方式对于SSI的发生在统计学上无差异。而当我们采用多元logistic回归分析发现外固定支架的使用、手术时长、手术切口类型等不再是SSI发生的影响因素。我们还发现年龄大于59岁是预防SSI发生的保护因素,这一点与我们传统的认识相悖。因此,在临床实践中对于行骨折手术的患者,骨科医生在术前应该评估术后发生SSI的风险因素和保护因素,并且制定适合患者的最优手术方案,以期降低SSI的发生率。同时。在临床实践中,骨科医生应该加强早期骨折患者的血糖管理,科学谨慎选择抗生素治疗方案,提高抗生素的治疗效率,降低细菌耐药性的发生率。