关键词： 衣原体   人畜共患   PCR   流行病学调查   遗传进化  

摘要： 禽衣原体病(Avian chlamydiosis,AC)是一种能够感染人和禽类的人畜共患疾病。该病主要是由鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)家禽衣原体(Chlamydia gallinacea)、鸟衣原体(Chlamydia avium)和朱鹭衣原体(Chlamydia ibidis)引起。禽类感染该病后通常表现呼吸道和消化道症状,严重时出现全身性感染。目前,该疾病在家禽、宠物鸟类和野生鸟类当中广泛流行,给家禽业和宠物鸟贸易造成了重大的经济损失。此外,许多研究表明人类可以通过接触携带该病原的动物或者传播媒介而感染,表现为类似流感样症状,严重者可能出现为心肌炎、脑炎、多器官衰竭,甚至死亡。因此,该疾病严重危害人和禽类的健康,既有重大的公共卫生意义。然而,目前该病在广西的家禽、宠物鸟类和野生鸟类的流行情况尚不清楚。因此,本研究通过建立该病原快速、准确的临床诊断方法以及开展2021～2023年间广西部分地区禽类衣原体的流行病学调查和遗传演化分析,为今后防控该疾病提供技术支持和科学依据。 为了建立禽衣原体病快速、准确的临床诊断方法,本研究针对鹦鹉热衣原体、家禽衣原体、鸟衣原体和朱鹭衣原体的主要外膜蛋白A(outer membrane protein A,omp A)基因的保守区域设计特异性引物,分别建立了常规PCR、巢氏PCR和荧光定量PCR三种检测方法,通过对比三种检测方法的特异性、灵敏性和重复性,发现三种PCR检测方法的特异性较强,与其它常见家禽病原体无交叉反应;重复性均良好,组内与组间变异系数低;而建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性最高,最低检测限度为1.20×101拷贝/μL,分别比巢氏PCR和常规PCR的灵敏性高10倍和100倍;通过对187份临床样品进行平行检测,发现常规PCR、巢氏PCR和荧光定量PCR的阳性样品检出率分别为4.81%(9/187)、44.92%(84/187)和58.82%(110/187)。结果表明,三种PCR检测方法中荧光定量PCR检测方法更适用于禽衣原体病的临床快速准确诊断和流行病学调查。 为了了解禽类衣原体在广西禽类当中的流行情况,本研究于2021～2023年间在广西9个地市共采集了1744份禽类拭子样品(家禽1495份、宠物鸟228份、野生鸟类21份),通过本研究建立的荧光定量PCR方法进行检测,发现禽类衣原体的总阳性率为28.21%(492/1744)。家禽样品中,鸽子样品的阳性率最高,达到62.30%(152/244),其次为鸡样品的25.05%(128/511),鹅样品的18.13%(29/160),鸭样品的14.14%(82/580)。宠物鸟样品中,雀形目鸟类样品的阳性率最高,达到76.19%(16/21),其次为鹦鹉目鸟类样品的61.40%(35/57),鸡形目样品的36.99%(27/73),鹈形目样品的33.33%(1/3),鹤形目样品的22.22%(2/9),雁形目样品的19.61%(10/51),鹳形目样品的7.14%(1/14)。野生鸟类样品中,鸽形目样品阳性率最高,达到58.33%(7/12),其次为鹰形目样品的50%(1/2),隼形目样品的33.33%(1/3),夜鹰目、鸮形目、鹈形目样品中未检测到禽类衣原体阳性。以上结果表明禽类衣原体在广西的禽类中广泛流行。 为了研究广西禽类中流行的禽类衣原体种类,选取部分荧光定量PCR检测结果为阳性的样品(其中家禽43份、宠物鸟样品30份、野鸟样品5份)进行omp A基因扩增,将获得的序列与Genbank中发表的衣原体参考株的omp A基因序列进行系统发育分析,结果显示:家禽样品的序列中,鸡源样品属于*** A基因型和***;鸭源样品属于*** A、B基因型和***;鹅源样品属于*** A基因型;鸽源样品属于*** B基因型。宠物鸟样品的序列中,鹦鹉目鸟类属于*** A和B基因型;雀形目鸟类样品属于*** A基因型和***;鸡形目鸟类样品属于*** A基因型和***;雁形目鸟类样品属于*** A基因型和***;鹈形目鸟类样品属于***;然而,1条来源于珍珠鸟样品(雀形目)的序列未能进行基因型分型。野生鸟类样品的序列中,隼形目鸟类样品属于*** A基因型;鸽形目鸟类样品属于*** A和B基因型。以上结果表明,广西禽类中主要流行*** A、B基因型和***。 综上所述,本研究建立了一种特异性较强、稳定性好、灵敏性较高的荧光定量PCR检测

关键词： 瘢痕疙瘩   SCL-90   HADS   流行病学   心理学  

摘要： 【目的】本研究收集2017年1月至2023年5月附院皮肤科初诊瘢痕疙瘩患者的流行病学数据及心理评估和瘢痕疙瘩手术患者的手术记录及术前后心理健康评估。旨在了解瘢痕疙瘩的地区特点及不同治疗方法对患者心理健康影响情况,以有方向性地改善其生活质量,针对性指导瘢痕疙瘩患者个体化综合治疗。 【方法】本项研究对符合纳入标准的508名初诊瘢痕疙瘩患者和105名术后患者进行了统计,由接诊的医生收集信息,具体包括:1.病人的基础资料,包括年龄、性别、文化程度、家族史、发病时间、治愈途径、病变伴随情况等;2.发病情况,包括:初诊患者的瘢痕情况、瘢痕位置、瘢痕颜色、瘢痕高度、瘢痕边界、瘢痕性质等进行评估,同时了解疾病的影响、患者治疗预期、对相关预防知识的掌握情况等;手术患者的发病时间、手术部位、手术范围、手术方式、术后恢复情况等;3.心理健康评估:辅助初诊患者自行主观评估心理健康,以及术后患者心理抑郁、焦虑评估,后利用软件对问题答案进行统计并计算统计学意义及差异。 【结果】全部的508例有效调查中,男性占178例(35.03%),女性占330例(65.1%),男女之间的比例为1:1.85。汉族的患者占绝大多数共有431(84.84%),但其中也有布依族、哈尼族等少数民族。本次研究患者的平均发病年龄为30.88±11.76岁,较多数患者处于20-30岁年龄段,有285人,占据55.96%,其中最小看诊患者16岁,最大患者67岁。患者中以接受高中、大学(大专)文化程度为主,仅有4人是文盲。瘢痕疙瘩是一种慢性疾病,病程时间长短不一,有48.15%的患者发病时间在1-5年之间,10年以上就诊的患者有75例(14.76%)。瘢痕疙瘩病因较集中,继发于炎症的瘢痕疙瘩患者有228例(44.88%),因手术而形成的有84例(16.54%),创伤所致瘢痕疙瘩患者56(11.02%)人,另外有自发出现的患者107例(21.06%)。皮损的牵拉会产生瘙痒、周围皮肤炎症会导致疼痛以及发红或者饮食辣的食物后加重,统计的患者中有75.93%的患者感觉到瘙痒,有44.44%的患者感受到疼痛,自觉发红者或饮食辣的食物后发红的患者有174次(34.26%),其他症状包括挤压痛、渗液、发热的患者有12.04%。瘢痕疙瘩有家族遗传,在所统计的患者中共计有120人出现三代亲属关系中出现相同疾病的现象,并在此发现同一家族中父亲、爷爷发病的倾向更多。瘢痕疙瘩多生长在前胸177例(34.86%)、后背130例(25.69%)等高张力部位以及耳垂处。若出现在暴露的部位即颜面部后,引起患者对于美观的关注,极易出现心理问题。患者中有332人(65.13%)已进行过治疗,其中有67.61%的患者进行过局部封闭治疗,有19.72%的患者进行过手术治疗,其余患者采用放射、激光以及同位素治疗。皮损发生部位我们以夏日穿着可以显露定义为暴露,患者中皮损位于暴露部位的有149例(29.36%),这类人群中对于迫切希望治疗的人数达到71.4%,而非暴露部位瘢痕疙瘩的患者中迫切希望治疗的比例达到50.6%。随着文化程度的升高,患者对于瘢痕疙瘩的治疗预期逐渐增高,对于受过本科/大专、研究生教育的患者而言,他们更渴望治疗,期望比例高达76.95%,因此他们对治疗的成功寄予厚望,对于治疗也抱有希望。本研究纳入的患者中暂未发现生活压力与疾病复发的相关关系,有表示没压力的患者中,复发率也较低,仅占12%,生活、工作压力大的146例患者中,有125例(85.6%)患者诉瘢痕疙瘩有复发。 手术治疗的105例患者中,男性32例(30.4%),女性占半数以上,共计73例(69.6%),性别比例1:2.43。手术年龄均值为27.4±8.5岁。其中20-30岁时手术的患者72例(66%),30-40岁时手术的患者20例(18%),30岁以上手术的患者10例(9.5%)。手术位置位于较多集中于颜面部,其中耳部的例数共计50例(38.76%),位于下颌部33例(25.58%),躯干部较多集中于肩背部(27.13%),少数患者皮损位于鼻部、眉间、腹部以及手部。手术面积差距较大,最大面积可至4*7cm大小,最小面积可以为0.2*0.2cm。前胸、后背处皮损差异较大,最小处可达1*1.5cm。在105例手术病人中,仅有13例(12.38%)出现术后出血情况,但后续恢复良好。在42例术后一年的患者中复发率仅为3人(7.1%),其余患者复诊良好。30例术后两年的患者中复发有7人(23.33%),且术后未及时复诊。 SCL-90症状自我评估量表的结果显示,瘢痕疙瘩病人的评估结果相较于全国标准模型,其在抑郁、焦虑和偏执等指标上的得分较高,并存在一定的统计学差距,这些心理问题与疾病的反复瘙痒、疼痛以及皮损的难看程度都有密切关系。在3个开放性问题当中,患

关键词： 发热伴血小板减少综合征   AST/ALT比值   De Ritis比值   预后  

摘要： 目的 发热伴血小板减少综合征(SFTS)是由新型布尼亚病毒(SFTSV)感染引起的一种传染性疾病,具有很高的致死率,已成为威胁人类健康的公共卫生问题。本研究旨在探讨SFTSV感染患者的流行病学和临床特征,并寻找新的SFTS预后危险因素。 方法 本研究采用回顾性横断面研究方法,选取2019年9月至2020年12月在安徽医科大学第一附属医院就诊并确诊为SFTS的住院患者,对纳入病例进行流行病学、人口统计学、临床特征和实验室数据分析。采用逻辑回归模型(Logistic Regression Models)评估预测因子与结果变量之间的相关性。采用限制性立方样条模型(Restricted cubic spline,RCS)来探索天冬氨酸氨基转移酶(AST)/丙氨酸氨基转移酶(ALT)比值(AST/ALT-ratio,又称为De Ritis ratio)与死亡率之间的潜在非线性关系。应用广义加性混合模型(GAMM)分析利巴韦林治疗后SFTS患者AST/ALT比值和血小板(PLT)的变化趋势。 结果 回顾分析107例感染SFTSV住院患者的流行病学、临床特征和实验室检查数据。结果显示患者平均发病年龄为60.38±11.29岁,男女比例为1:1.2,多数患者为农民;发热和血小板减少是SFTS显著的临床特征;此外,多例患者还出现了中枢神经系统并发症、胃肠道症状、骨骼肌症状以及其他非特异性临床表现;实验室检查结果显示常规血细胞数量、血液凝血功能和生化指标出现了异常。 根据患者的临床结局将107例SFTS患者分为两组(幸存者和非幸存者),SFTS幸存者组的血小板计数、总蛋白(TP)和估算的肾小球滤过率(eGFR)水平较高,而非幸存者组的活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、AST/ALT比值、肌酐(Cr)、肌酸激酶(CK)和降钙素原(PCT)水平较高。 单因素COX回归分析结果显示FDP、TT、AST/ALT比值、PCT水平升高,eGFR水平下降和伴有中枢神经系统症状(CNS)是SFTS患者不良预后的危险因素。三种校正模型的多因素Logistic回归分析结果显示AST/ALT比值和PCT是SFTS患者不良预后的独立危险因素。限制性立方样条模型(Restricted cubic spline,RCS)结果显示AST/ALT比值与总体死亡率呈正向的线性回归关系。分层分析结果显示年龄、性别、是否有吸烟、饮酒及手术史与AST/ALT比值之间未观察到显著的交互作用(交互作用p>0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,AST/ALT比值>2.683的SFTS患者生存时间较短,预后较差。使用利巴韦林治疗可增加血小板计数,同时降低SFTS患者的AST/ALT比值。 结论 发热伴血小板减少综合征是一种高致死率的传染性疾病,可导致多器官损伤。结果表明,AST/ALT比值是影响SFTS患者预后的独立危险因素,且在临床用药上有一定的指导意义,为了进一步了解SFTS并指导临床治疗,仍需开展更多深入的调查研究。

关键词： 猪链球菌   血清型   MLST   致病型   耐药性   喹诺酮   三重荧光定量PCR  

摘要： 猪链球菌病是由猪链球菌(Streptococcus suis,***)引起的一种重要的人畜共患病,不仅影响养猪业的经济效益和动物福利,而且潜在威胁着人类公共卫生安全。快速诊断及精准治疗是疫病防控的主要措施,但是由于缺乏系统的流行病学调查和病原学分析,我国猪链球菌病的本底仍然不清楚。此外,由于现有商品化疫苗无法对猪链球菌病提供完全保护,临床上该病的治疗仍然依赖抗菌药物,这会造成细菌的耐药性问题,潜在造成了环境污染和药物残留问题。研究猪链球菌病的病原和流行状况,疾病的发病、流行及耐药规律是疫苗研制和对症治疗的重要基础。 1.猪链球菌2、7、9型荧光定量PCR分型方法的建立 基于cps基因簇中血清型特异性基因,本研究建立了猪链球菌2型、7型、9型三重荧光定量PCR分型方法,该方法最低检出限为2.62 copies/μL-26.2copies/μL,灵敏性较好;无血清型交叉反应,特异性较好;3次重复检测结果均一致,重复性较好;与商品化试剂盒的符合率为100%。 2.猪链球菌分离株的鉴定、血清型及MLST分型 本研究从华中及周边地区(湖北省、河南省、安徽省)多个规模化猪场共分离到猪链球菌125株,检出率分别为28.7%(98/341)、22.9%(8/35)和55.9%(19/34);采用PCR方法进行了血清型分型,共鉴定血清型16种,主要为2型、3型、9型和7型等;通过MLST方法分析了遗传多样性,共鉴定STs 31种,主要是T7、ST117、ST243等,其中17种STs为首次发现,主要属于ST2600-ST2616;利用e BURST软件进行了MLST CC分型,共确定CC 5种(CC1、CC28、CC54、CC94、CC725),无法确定型(NF)3株。 3.猪链球菌分离株血清型、MLST分型和致病型的相关性分析 采用比例法和OR法分析猪链球菌分离株血清型、STs型、致病型之间关系,结果显示,80%-100%被归类为致病性菌株的为血清2型、4型、14型、15型和16型,被归类为可能致病性菌株的为血清7型、9型、10型、25型和28型,被归类为共生性菌株的为血清13型和18型。60%以上被归类为致病性菌株的STs和NF类别有8种,即ST1、ST7、ST94、ST353等;80%以上被归类为可能致病性菌株的STs类别有14种,即ST243、ST1175、ST2056、ST2345、ST2366等;被归类为共生性菌株的STs类别有3种,即ST1290、ST2615和ST2616。 4.猪链球菌分离株的耐药性分析 使用肉汤微量稀释法测定了猪链球菌分离株的13种抗生素的MIC值。结果表明,耐药率最高是克林霉素,达99.2%;其次是四环素,为96%;红霉素耐药率为80%。多重耐药(三重及三重以上)菌株(MDR)达87.2%。通过PCR方法对耐药基因进行了扩增,结果表明,大环内酯类耐药基因检出率较高【erm(B),80%;mef(A),24.8%】,其次是四环素类【tet(O),79.20%;tet(M),24.8%;tet(L),6.4%】。 5.猪链球菌分离株的耐药性与毒力基因相关性分析 通过计算Cramer’s V值分析猪链球菌分离株耐药性与毒力基因的相关性。结果发现存在中度相关的有氟苯尼考与基因rgg(0.383)、dlt A(0.367)、mrp(0.308)、sly(0.304);加替沙星与基因dlt A(0.358)、ofs(0.333)、luc(0.301)等;发现抗生素耐药性与毒力基因有关。6.猪链球菌的喹诺酮耐药机制研究 通过对猪链球菌分离株进行DNA促旋酶(Gyr A、Gyr B)和拓扑异构酶Ⅳ(Par C、Par E)扩增及测序,新鉴定到耐药突变位点22个,发现喹诺酮耐药性增加是由耐药突变位点导致的。使用棋盘法联合抑菌试验,发现茶多酚与抗生素有良好的联合抑菌效果。通过分子对接预测发现,EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯)、加替沙星和恩诺沙星通过氢键、π-π堆积、氢键受体分别与Gyr A/Gyr B/Par C/Par E的氨基酸位点发生相互作用。