关键词： 猪呼吸道综合征   细菌性病原   流行病学   胸膜肺炎放线杆菌   胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗  

摘要： 猪呼吸道疾病是规模化猪场常见的疾病之一,随着养猪业集约化、规模化的提升,养殖密度的进一步加大,呼吸道疾病在生猪养殖中造成的影响也愈显突出。猪的呼吸道疾病受多种因素影响,包括病原微生物、饲养管理、环境卫生等,且各阶段猪群均易受到呼吸道疾病的影响,导致养殖成本升高、生产效率低下、疾病损失增大。猪呼吸道疾病综合征(Porcine Respiratory Disease Complex,PRDC)的概念自1998年提出以来,已成为养猪行业研究的热点课题。 首先,本研究调查了我国华中地区(湖北、河南、湖南)规模化养猪场的呼吸道主要细菌性病原胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)、猪链球菌(Streptococcussuis,SS)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)感染情况,分离鉴定了优势血清型,并对其耐药性进行初步研究。主要研究内容如下: 1.华中地区规模化猪场呼吸道细菌性病原感染情况调查 本研究采集2019-2022年华中地区部分规模化猪场鼻拭子样品1725份及组织样本170份,针对呼吸道四种常见细菌性病原APP、HPS、Pm、SS进行检测。结果表明:APP、HPS、Pm、SS 四种细菌的检出率分别为 14.35%、6.65%、7.39%、20.11%。阳性样品中,APP、HPS、Pm、SS四种细菌的单一感染占比75.66%,;双重感染占比23.80%,以SS、HPS混合感染为主。其中保育猪、生长育肥猪阶段的呼吸道细菌性病原检出率最高,分别为44.01%、56.56%,提示着猪场保育、生长育肥阶段猪易发生呼吸道感染。 2.呼吸道细菌性原菌的分离鉴定及耐药性实验 收集的样品共分离菌株218株,其中SS菌株157株:血清1型13株,血清2型76株,血清7型29株,血清9型24株;未能出现鉴定目的条带的共计15株;APP菌株26株:血清1型14株,血清2型1株,血清3型3株,血清4型1株,血清5型4株,血清7型1株,血清12型1株,血清15型2株;Pm菌株15株:荚膜血清A型8株,荚膜血清D型7株;HPS菌株20株:血清4型7株,血清5型11株,血清12型2株。 药敏试验结果显示,其中SS对头孢噻呋、氟苯尼考、阿莫西林、恩诺沙星敏感;APP对替米考星、头孢噻呋敏感;Pm对恩诺沙星、头孢噻呋敏感;HPS对头孢噻呋、氟苯尼考敏感。耐药性结果表明:华中地区猪群中SS、APP、Pm、HPS四种细菌均存在不同程度的耐药性。 其次,针对生长育肥群体、生产母猪群体中APP感染率较高的情况,尤其生长育肥猪的APP阳性率达31.69%,在本实验室前期APP六基因缺失的基础上,进一步构建了七基因缺失突变株CZ07,并对其生长特性、毒力、安全性和免疫效果进行了初步评估。主要研究内容如下: ***突变株CZ07的构建 本研究以APP血清1型野生菌株为模版,扩增ApxIVA上游同源臂;以血清7型标准菌株为模板,扩增ApxIVA下游同源臂;以APP血清3型标准菌株为模版,扩增ApxⅢA片段,利用同源重组的方式,将apxⅢA片段插入至apxIVA片段,在六基因缺失株 WBY06(△apxⅠC/△apxⅡC/△apxⅣ-orf1/△cpxAR/△arcA/△ureA)的基础上进一步成功构建七基因突变株CZ07。试验结果表明,七基因突变株CZ07具有很好的遗传稳定性,其生长速度与野生株(SLW01)、六基因缺失株(WBY06)相比无明显差异。 ***突变株CZ07的安全性及免疫效果评估 小鼠的毒力试验结果表明,突变株CZ07的LD50值为4.47×109 CFU,略低于WBY06的值5.47× 108 CFU,远低于APP血清1型野生菌株SLW01 LD50值8.62×105 CFU。断奶仔猪致病力试验结果表明,血清1型亲本菌株SLW01、六基因缺失株WBY06、突变株CZ07以3×108 CFU接种断奶仔猪后,SLW01组3天内断奶仔猪全部死亡,WBY06组、CZ07组无仔猪死亡;但CZ07组接种后的临床症状轻于WYB06组。剖检肺部组织制作石蜡切片,HE染色镜检,CZ07组均未见明显肺部组织病变。说明突变株CZ07具有良好的安全性,其毒力较WBY06组进一步降低。 将WBY06、CZ07菌株进行仔猪免疫效力试验,显示攻毒后TSB对照组体温高于WBY06、CZ07免疫组,WBY组死亡1头,CZ07免疫组无猪只死亡。免疫后日增重、抗体水平、细胞因子检测结果均表明CZ07菌株可以作为APP弱毒疫苗的候选菌株。

关键词： 手足口病   流行病学   病原学  

摘要： 目的 了解2014—2022年河池市手足口病流行特征及病原学变化情况，为科学防控手足口病提供依据。方法 对河池市2014—2022年手足口病疫情数据和病原学监测结果进行流行病学分析。结果 2014—2022年河池市共报告手足口病病例132 285例，年均发病率为422.12/10万，病死率为1.66/万，发病率呈下降趋势（趋势χ2=14.849,P<0.01），不同年份发病率差异有统计学意义（χ2=863045.749,P<0.01），不同年份病死率差异有统计学意义（χ2=21.307,P<0.01）；年均发病率最高为金城江区（676.80/10万），最低为天峨县（197.90/10万），不同地区间年均发病率差异有统计学意义（χ2=1092.831,P<0.01）；报告发病高峰期为4、5月，男女性别比为1.50∶1，男女年均发病率差异有统计学意义（χ2=4120.781,P<0.01）;3岁及以下年龄组婴幼儿占85.53%；职业以散居儿童为主（占81.49%）；病原学监测以其他肠道病毒为主（占60.85%），不同年份间EV71、CA16、其他肠道病毒构成比差异有统计学意义（χ2=1 638.373,P<0.01）。结论 河池市手足口病疫情虽呈下降趋势，但仍有波动，地区间发病率差异较大，防控形势依然严峻。应继续做好健康教育、重点场所消杀、病原学监测和EV71疫苗接种等各项防控工作。

关键词： CYP27A1   27-OHC   血脂   胆固醇   肺腺癌  

摘要： 背景:肺癌是癌症相关死亡的主要原因,肺癌相关死亡人数已经超过了乳腺癌、前列腺癌和结直肠癌的总和。低剂量计算机断层扫描为核心的肺癌筛查方案在临床实践中的广泛使用,使得在早期阶段筛查出大比例的肺癌患者成为可能,这也为肺癌的临床诊疗带来了新的挑战。针对病因采取更加精准的预防和治疗策略或许能够有效改善肺癌的发生和临床预后。虽然吸烟仍然是肺癌发生的主要危险因素,但近年来脂代谢等营养相关因素与肺癌的病因学联系越来越受到学界的关注。尽管组织胆固醇蓄积的促癌作用已经得到共识,但高血胆固醇水平保护肺癌发生的临床悖论提示了肺癌组织胆固醇代谢的特殊性。因此,明确肺组织微环境的胆固醇代谢稳态,找出胆固醇代谢影响肺癌发生发展的关键机制,对于拓展代谢调控药物在肺癌治疗中的新用途有着重要价值。 组织胆固醇代谢稳态由细胞胆固醇从头生物合成、摄取、外排和酯化储存之间的相互作用所决定。细胞色素P450家族27亚家族A成员1（Cytochrome P450 Family 27 Subfamily A Member 1,CYP27A1）是细胞色素P450酶超家族成员,其编码的蛋白属于单加氧酶,又称甾醇27-羟化酶,可催化参与药物代谢和胆固醇、类固醇和其他脂质代谢反应,在胆固醇清除机制中发挥着尤其重要的作用。CYP27A1既参与胆汁酸合成的经典途径,又作为旁路途径的起始酶,氧化胆固醇生成代谢中间产物27-羟基胆固醇（27-Hydroxycholesterol,27-OHC）,促使胆固醇转化为胆汁酸,是清除体内多余胆固醇的关键调控酶。最近的研究发现,CYP27A1的功能失调可能会影响肿瘤进展,但在不同肿瘤中的生物学效应各不相同。而CYP27A1介导的胆固醇代谢调控机制在肺癌中的作用和意义更未得到充分探讨。 目的:明确CYP27A1基因在不同肿瘤中的差异表达及预后价值。重点探讨CYP27A1及其酶促产生的胆固醇代谢中间产物27-OHC介导的胆固醇清除机制在维持肺组织胆固醇稳态中的重要性和特殊性。 方法: （1）第一部分人群流行病学研究:分析血脂水平与肺腺癌临床特征及肺癌标志物的关联性。采用横断面研究方法,结合病案系统的电子病历和自行设计的结构式问卷,对患者进行面对面床旁访问,收集确诊肺癌患者的人群基本特征、健康相关行为、家族史、既往病史、临床生化指标和组织病理检测结果;同时收集患者的配对癌旁肺组织和肺癌组织以及血样用于后续检测。Wilcoxon秩和检验分析不同临床病理特征的肺腺癌患者血脂水平差异。采用Logistic回归分析血脂与肺腺癌不同病理特征之间的风险比（Hazard Ratio,HR）和95%置信区间（Confidence interval,CI）。绘制限制性四次立方样图描述血脂与不同肺癌标志物之间的相关性。根据绝经状态分层,分析绝经女性肺腺癌患者的血脂与肺腺癌临床病理特征和肺癌标志物之间的相关性。最后,对未服用过降脂药物的肺腺癌患者进行敏感性分析。 （2）第二部分生物信息学分析:探讨CYP27A1的泛癌表达特征和预后价值。人类蛋白质图谱（Human Protein Atlas,HPA）数据库获取人体正常组织中CYP27A1的基础表达量。UCSC XENA公共数据库获取CYP27A1基因在正常样本和泛癌样本中的RNA-seq表达数据,组间差异分析比较在正常和肿瘤样本,以及在不同病理阶段肿瘤样本中CYP27A1的m RNA表达差异。临床蛋白质组学分析（Clinical Proteomic Tumor Analysis Consortium,CPTAC）数据库用于比较CYP27A1在不同肿瘤和和正常样本中的蛋白表达差异。利用Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险回归模型评估CYP27A1在不同肿瘤中的预后价值。“Deseq2”函数包分析癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库CYP27A1高表达肺腺癌样本中相较低表达样本的显著差异表达基因,并进行基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）探讨其可能调控的信号通路。Linked Omics网站综合TCGA和CPTAC数据库分析肺腺癌样本中CYP27A1的共表达基因。取两数据库分析结果的交集基因,使用京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）对交集基因进行富集分析,探索CYP27A1在肺腺癌中可能调控的分子机制。此外,根据TCGA数据库肺腺癌样本的基因转录组表达矩阵,描述人群肺腺癌组织中胆固醇代谢经典调控基因的表达谱,并综合基因表达数据库（Gene Expression Omnibus database,GEO）的不同GSE数据集进行胆固醇代谢调控基

关键词： 肉鸽   肺炎克雷伯菌   khe基因   毒力基因   耐药基因  

摘要： 肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)是一种常见的致病菌,肉鸽感染KP会出现萎靡不振、被毛凌乱、呼吸急促、腹泻以及产蛋异常等症状。本研究通过采集新疆南疆16个肉鸽场肉鸽的呼吸道和消化道的棉签拭子(采样时间是2023年4～12月)共933份样本,通过PCR方法扩增肺炎克雷伯菌特异性溶血酵素(khe)基因筛选出阳性样本,之后对阳性样本进行肺炎克雷伯菌分离鉴定、荚膜血清型检测、毒力基因检测以及分离株对19种抗菌药物的耐药性研究,为新疆南疆肉鸽肺炎克雷伯菌的预防和治疗提供数据参考,研究结果如下: 通过对新疆南疆16个肉鸽场肉鸽的933份样本进行阳性样本筛选,共筛选出359份阳性样本,通过对阳性样本进行细菌分离鉴定共获得129株肺炎克雷伯菌。 根据采样地点、肉鸽月龄等资料选取60株肺炎克雷伯菌分离株进行毒力基因与荚膜血清型PCR检测,共成功检测出8种毒力基因。其中wab G基因的检出率最高,为23.33%,iut A和ure A基因检出率最低,为5.00%;K57型荚膜血清型检出率最高,为46.67%,有4株不是常见的7种血清型。 根据采样地点、肉鸽月龄等资料选取36株分离株进行药敏试验与耐药基因检测,发现本研究中所有的分离株均对四环素、多西环素、亚胺培南和美罗培南这4种不同抗菌药物敏感,27株分离株对其它15种抗菌药物呈现不同程度的耐药性。 对36株分离株进行耐药基因检测,共检测出9种耐药基因。36株分离株中均检测到了SHV、TEM和Acr AB基因;统计分离株携带耐药基因情况发现分离株最多携带9种耐药基因。 肺炎克雷伯菌在新疆南疆肉鸽咽拭子样本中的检出率为27.11%(122/450);肛拭子样本中的检出率为49.07%(237/483)。 结论:新疆南疆肉鸽场中肉鸽消化道样本的KP检出率为49.07%(237/483),高于呼吸道检出率27.11%(122/450),该地区肉鸽场中的肺炎克雷伯菌至少存在4种荚膜血清型及8种毒力基因。药敏试验及耐药基因检测发现分离株中存在多重耐药的现象。本研究的结果为新疆南疆肉鸽养殖场中肺炎克雷伯菌病的临床用药提供了数据参考。

关键词： 水痘   百度指数   ARIMA   ARIMAX   模型预测  

摘要： 目的 分析2015—2023年乌鲁木齐市水痘的流行分布特征，结合百度搜索关键词构建预测模型，探讨百度指数在水痘防治监测中的补充应用。方法 采用描述性流行病学方法分析2015—2023年乌鲁木齐市水痘病例三间分布特征。确定水痘关键词，构建综合百度搜索指数。选出ARIMA和ARIMAX的最优模型，通过平均绝对误差（MAE）、平均绝对百分比误差（MAPE）、均方根误差（RMSE）评价两种模型的预测效果。结果 乌鲁木齐市水痘年均报告发病率为80.85/10万，男性发病率高于女性（χ2=1.136,P=0.287）,各年龄组发病率差异具有统计学意义（χ2=7 582.372,P<0.001）,七区一县年均发病率不同（χ2=21.496,P<0.001）,其中头屯河区最高（100.54/10万）。筛选出的ARIMAX（1,1,0）(1,0,0)52为最佳预测模型（预测集MAE为12.04%,RMSE为13.80%,MASE为1.18%）,拟合效果较好。结论 需加强学龄期儿童和头屯河区、达坂城区等重点人群及重点地区的疫情监测。基于搜索词百度指数建立的ARIMAX模型可用于预测乌鲁木齐市水痘的流行趋势，进一步扩展传统监测预警系统的技术支撑。

关键词： 一氧化碳中毒   非职业性   流行病学特征  

摘要： 目的 了解北京市非职业性一氧化碳中毒事件的流行病学特征，探讨针对性防控措施。方法 数据来源于国家突发公共卫生事件报告管理信息系统，采用描述性流行病学方法对北京市2018—2022年非职业一氧化碳中毒事件进行统计分析。结果 2018—2022年，北京市共报告非职业一氧化碳中毒事件1 841起，中毒2 729例，死亡31例。年均发病率和死亡率分别为25.14例/百万和0.29例/百万。存在春季和冬季两个发病高峰，分别占病例总数的49.98%和24.00%。发病最高峰出现在8～11时之间，占22.83%。近郊、远郊和市区的非职业一氧化碳发病率分别为0.96例/10万、1.27例/10万和18.79例/10万，死亡率分别是0.02例/10万、0.02例/10万和0.11例/10万。中毒事件主要发生在居民家庭1 633起，占88.70%;其次是餐馆118起，占6.41%。发生在家庭的中毒事件占比从2018年的92.10%逐年下降到2022年的84.13%;餐馆的中毒事件占比从2018年的4.23%逐年上升到2022年的10.05%。发生在家庭的中毒病例占比从2018年的86.39%整体逐年下降到2022年的71.84%;餐馆的中毒病例占比从2018年的9.88%整体逐年上升到2022年的20.57%。结论 北京市非职业性一氧化碳中毒发病和死亡风险的地区间不均衡现象较为严重，餐馆中毒事件占比逐年升高，应采取针对性措施加强远郊区和重点餐馆的防控工作。

关键词： 产毒艰难梭菌   流行病学   耐药性   替加环素   tet(P)  

摘要： 目的:艰难梭菌（Clostridioides difficile,CD）是许多国家医疗保健相关感染和腹泻的主要来源之一。目前,重庆地区缺乏对产毒艰难梭菌耐药性、耐药机制和流行病学的研究数据。因此,我们对重庆医科大学附属第一医院收集的产毒艰难梭菌进行了临床常见抗生素敏感性及流行特征的研究。并通过全基因组测序技术和分子克隆技术探索了耐药基因传播的原因和替加环素敏感性降低的耐药机制,为临床控制和治疗艰难梭菌感染提供新的理论依据。 方法:本研究纳入重庆医科大学附属第一医院2016年6月至2017年12月收集的非重复艰难梭菌。（1）应用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）对临床菌株进行毒素基因检测,以排除毒素基因阴性的菌株。采用琼脂稀释法对产毒菌株进行抗生素敏感性评估,并进行多位点序列分型（Multilocus Sequence Typing,MLST）。通过审查电子病例完成临床数据的收集。此外,通过PCR检测耐药菌株的相关耐药基因erm B、tet M、tet W、tet O、tet K、tet40、tet A（P）、tet B（P）,以及gyr A/gyr B和Rpo B基因突变。（2）对于对替加环素敏感性降低的菌株CD16338,进行了全基因组测序和生物信息学分析。并且通过构建重组质粒和外排泵抑制实验等手段,深入研究了CD16338携带的tet A（P）和tet B（P）基因对四环素类药物的作用差异。 结果:（1）收集到86株非重复艰难梭菌,总共检测到67株产毒菌株,其中包括56株A+B+CDT-型（83.58%）,9株A-B+CDT-型（13.43%）和2株A+B+CDT+型（2.99%）。67株产毒菌株都对甲硝唑和万古霉素表现出敏感,而对替加环素、四环素、克林霉素、红霉素、莫西沙星和利福平的耐药率分别为8.95%、16.42%、56.72%、56.72%、31.34%和5.97%。四环素耐药和替加环素敏感性降低菌株中未检测到tet W、tet O、tet K和tet40基因。四环素耐药菌株中都检测到tet M基因,红霉素和克林霉素耐药菌株中都检测到erm B基因。21株莫西沙星耐药菌株中观察到gyr A中有一种氨基酸（Thr82Ile）的替代,而gyr B中出现了5种不同的替代（Ser366Ala、Asp426Val、Dsp426Ala、Arg447Lys、Asp426Asn）。利福平耐药菌株中,共检测到4种不同的rpo B替代（His502Asn、Arg505Lys、Ile548Met和Asp492Asn）。在分子流行病学方面,一共检测到21个序列型（sequence type,ST）,主要流行的是ST2（n=10）、ST3（n=8）和ST54（n=7）。6株对替加环素敏感性降低的菌株均为毒素基因型A+B+CDT-,属于ST3,并且都检测到tet A（P）和tet B（P）基因。这提示替加环素敏感性降低可能与核糖体保护和外排有关。 （2）全基因组测序结果显示,CD16338基因组全长4141040bp,G+C含量为28.67%。只预测到1条染色体,没有质粒。CD16338菌株中检测到的tet（P）基因(包括tet A（P）和tet B（P）)及其侧翼序列插入在染色体rlm H基因的3’末端,并且没有预测到任何移动遗传元件（mobile genetic element,MGE）。但在这段插入序列的前后存在一个重复序列（5’-GAACCGTATCA-3’）与rlm H基因的3’末端序列相似,这个重复序列可能是tet（P）基因的移动遗传元件。进化树分析表明,tet（P）基因与艰难梭菌AZE和Turicibacter sp.H121同源性最高。CD16338与*** SSCC18392和SSCC32135的tet（P）基因序列编码的氨基酸完全相同,P3和T1序列也相同,最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration,MIC）也相近。CD16338与艰难梭菌MCD43和MCD46的tet（P）基因序列完全相同,但MCD43和MCD46都存在P3和T1的缺失,MIC也稍低。 （3）重组质粒的耐药表型显示,菌株DH5α+p UC19＿tet A（P）对四环素的MIC=32 mg/L,对米诺环素表现出稍低的MIC（8 mg/L）。菌株DH5α+p UC19＿tet B（P）对米诺环素的MIC=32 mg/L,而四环素表现出稍低MIC（8 mg/L）。菌株DH5α+p UC19＿tet（P）+2000bp对米诺环素的MIC=16 mg/L,对四环素的MIC=8 mg/L。携带不同重组质粒的三种菌株对替加环素都表现出了低水平的抗性（MIC=0.5 m

关键词： 牛   羊   副结核病   病理诊断   流行病学调查  

摘要： 副结核病是由鸟分枝杆菌亚种副结核分枝杆菌引起的以持续性腹泻和渐进性消瘦为主要特征的一种慢性肠道感染疾病。该病主要发生于回肠,病理上以肠黏膜增厚并形成皱襞为特征。通过粪口途径感染,严重危害牛羊等反刍动物健康。近年来,副结核病在内蒙地区呈现蔓延趋势,严重影响了内蒙规模养殖业的持续健康发展,因此掌握本地区副结核病的病理诊断、基因分型以及流行病学调查对防控该病具有现实的重要意义。 本实验在2023年3月-2023年11月期间,对内蒙古自治区呼市周边地区三个大型集约化牛场以及鄂尔多斯地区八个羊场在临床上疑似副结核症状的病牛和病羊进行放血致死剖检、通过病理组织学观察及病原体抗原检测确诊为感染MAP的基础上,分批次采集MAP污染畜群560份牛羊的粪便和血液成对样本共计1120份样品进行了检测MAP抗原流行病学调查。为使调查结果精确,设计巢式PCR程序,使用特异性引物对粪便、血液样品进行IS900基因检测以及DMC分型检测,挑选粪便与血液IS900、DMC基因扩增出的产物(Map1、Map2)测序,将测序得到序列在NCBI数据库BLAST对比,对测序正确的核苷酸序列应用Mega7.0和DNAstar软件进行遗传进化分析,构建进化树。 病理组织学观察结果显示病畜肠黏膜上皮出现变性、坏死,肠系膜淋巴结出现肿大、增生。黏膜有大量的细胞浸润性增生,以上皮样细胞和淋巴样细胞为主。流行病学调查结果显示阳性样品出现298bp条带,符合预期大小。呼市周边地区三个牛场MAP阳性率达41.38%。鄂尔多斯地区八个羊场MAP阳性率达74%。使用DMC引物对样品进行分型检测,出现310bp条带,经比对结果显示呼和浩特周边牛场与鄂尔多斯羊场样品副结核病感染型号均为B型(牛型)。测序分析Map1、Map2与MAP参考菌株的序列同源性为100%。 该实验揭示了内蒙古部分地区副结核病感染的实际状况,为今后在该地区副结核分枝杆菌感染的诊断与防控策略提供了参考依据。