关键词： 鸭坦布苏病毒   分子流行病学调查   遗传进化分析   3.2亚群   致病性  

摘要： 鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu Virus,DTMUV）引起的鸭坦布苏病毒病于2011年在我国浙江省首次暴发,随后在全国范围内均有发现。近年来,DTMUV在临床上大多为非典型或与其他免疫抑制病毒及高致病性病毒混合感染,加大了DTMUV临床诊断的难度,给水禽养殖业带来严重危害。本研究通过建立鸭坦布苏病毒巢式PCR检测方法对广东部分地区进行DTMUV分子流行病学调查,并对免疫抑制相关病毒进行检测并分析其混合感染情况;通过对DTMUV全基因组扩增,进行遗传多样性分析;从鹅源DTMUV阳性样品中分离到一株3.2亚群鸭坦布苏病毒,并探究其对鸭胚、鹅胚及雏鹅的致病性。具体内容如下: 一、鸭坦布苏病毒巢式PCR检测方法的建立 本研究基于DTMUV NS5基因建立巢式PCR检测方法。结果显示,该方法具有较强的特异性和较高的灵敏性,其最低检测限度为6.05×10～1 copies/μL,分别比第一轮、第二轮的普通PCR灵敏性高1 000倍、100倍。应用该方法对本实验室保存的10份DTMUV阳性核酸进行验证,测序结果显示均为DTMUV,表明该方法具有一定的准确性和应用性。 二、广东部分地区鸭坦布苏病毒分子流行病学调查及全基因组遗传进化分析 2020～2023年从广东省佛山市、江门市、肇庆市、清远市、阳江市五个地区水禽养殖场收集水禽临床样品（肝脏、脾脏）812份,包括385份鸭源临床样品和427份鹅源临床样品。利用已建立的鸭坦布苏病毒巢式PCR检测方法对收集的临床样品进行检测。结果显示,812份鸭、鹅临床样品感染鸭坦布苏病毒的总阳性率为14.4%,其中,鸭临床样品阳性率为12.5%,鹅临床样品阳性率为16.1%。检测鸭坦布苏病毒与其他水禽源病毒的混合感染情况,117份鸭坦布苏病毒阳性样本中,水禽圆环病毒、鹅星状病毒、水禽细小病毒、禽流感病毒、水禽呼肠孤病毒的感染率分别为68.4%、65.8%、33.3%、24.8%、1.7%。其中,单一、双重、三重、四重感染率分别为11.1%、26.0%、42.5%、20.4%。结果表明,DTMUV的感染常呈混合感染,且多数为双重感染和三重感染。 本研究共获得8条DTMUV全基因组序列和32条E基因序列。全基因组遗传进化分析显示,所获得的全基因组序列分别位于2.1.1亚群、2.2亚群及3.2亚群。E基因的遗传进化关系显示,32条E基因序列分别位于2.1.1亚群、2.1.2亚群及3.2亚群。大部分E基因位于2.1.1亚群与3.2亚群,与全基因组遗传进化关系相一致。由此可知,各亚群DTMUV毒株在广东地区均有流行。 三、一株鹅源DTMUV分离、鉴定及致病性研究 本研究从DTMUV阳性样品中分离得到一株鹅源DTMUV毒株,命名为GDFS2023株。全基因组遗传进化关系显示,GDFS2023株位于3.2亚群,与近几年来在中国流行的2.1亚群、2.2亚群的DTMUV毒株有所不同。 本研究将GDFS2023株阳性组织研磨液上清接种于BHK-21细胞,盲传三代,经RT-PCR鉴定、电镜观察、IFA鉴定,证实该株鹅源鸭坦布苏病毒已被分离,经纯净度鉴定,不含其他外源病毒。GDFS2023株感染BHK-21细胞能引起典型的CPE,测定GDFS2023株TCID50为1×104.6 TCID50/0.1 m L,生长曲线显示在60 h时病毒滴度最高。GDFS2023株病毒可在鸭胚、鹅胚中增殖,并引起鸭胚、鹅胚死亡。将GDFS2023株病毒经腿部肌注途径感染5日龄健康雏鹅,结果显示,攻毒后第三天雏鹅开始出现精神沉郁、采食量减少及眼睛出现分泌物等临床症状;从攻毒后第六天开始攻毒组雏鹅体重增长缓慢,与阴性对照组差异明显;病理学观察可见,攻毒组肝脏出现严重空泡变性,肝细胞肿胀,脾脏出现淋巴细胞数量减少,可见大量细胞碎屑,脑组织出现神经细胞肿大,血管间隙增宽;通过q PCR检测,攻毒第三天后,心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸腺及脑组织中均能检测到DTMUV,在肝脏中的病毒拷贝数最高,其次是脾脏、脑组织,其余器官的病毒拷贝数较低。 综上所述,本研究建立了一种特异性强、灵敏性高的鸭坦布苏病毒巢式PCR检测方法,揭示广东省部分地区鸭坦布苏病毒的感染情况,以及与其他五种水禽源病毒混合感染情况,明确了流行毒株的序列信息及基因组演化特征,同时,探究了3.2亚群鹅源分离株的致病性。本研究结果为DTMUV的诊断及疫苗的研制提供数据支撑和技术支持,丰富了广东地区DTMUV流行病学资料,并为DTMUV的防控提供一定的理论基础。

关键词： 过敏性疾病   儿童   多病  

摘要： 目的 基于宜昌市健康大数据平台，分析宜昌市2017—2022年期间出生的儿童在医疗机构就诊的过敏性疾病特征，明确宜昌市儿童过敏性疾病的多病分布。方法 对宜昌市健康大数据云平台中2017—2022年城区综合医疗机构门诊就诊为过敏性疾病的出生儿童患者记录进行统计分析。结果 男性儿童就诊68 707人次多于女性儿童的53 292人次，2017年以来就诊人次不断增加，0～1岁医院就诊人次最多，为46 190人次(37.86%)，其中二月龄就诊人次最多，为3 331人次(13.74%)。特应性皮炎/湿疹与过敏性鼻炎的就诊人次较高，分别为46 156和14 388人次。特应性皮炎的发病年龄较早，首次就诊年龄为0.42岁,男性的发病年龄要早于女性，特应性皮炎/湿疹与过敏性鼻炎是最常见的多病。结论 对于患有特应性皮炎/湿疹和（或）过敏性鼻炎的儿童，重点关注其伴随疾病的发生，进一步阻断过敏进程，促进疾病早期发现、预防及治疗。

关键词： 儿童慢性病   死亡率   流行病学研究   回归分析   疾病负担  

摘要： 目的: 了解我国0～14岁儿童慢性病死亡的流行特征和疾病负担情况,以及对儿童慢性病死亡率进行趋势预测分析,为制定儿童慢性病防控策略和措施提供科学依据。 方法: 数据来源于全国疾病监测系统的2012-2021年《中国死因监测数据集》,利用Excel 2010对我国2012-2021年0～14岁儿童慢性病死亡资料数据汇总整理,分别计算不同性别、年龄、地区儿童慢性病的死亡率、构成比和死因顺位,率的比较采用卡方检验。采用joinpoint回归模型计算儿童慢性病死亡的年度变化百分比（Annual Percent of Changes,APC）和平均年度变化百分比（Average Annual Percent Change,AAPC）进行死亡率趋势变化分析。应用潜在减寿年数（Potential Years of Life Lost,PYLL）、平均减寿年数（Average Years of Life Lost,AYLL）、减寿率（Potential Years of Life Lost Rate,PYLLR）指标分析疾病负担现状,以及采用灰色GM（1,1）模型对我国2022-2030年0～14岁儿童慢性病死亡率进行预测分析。 结果: 1.2012-2021年我国0～14岁儿童慢性病年均死亡率为15.49/10万,占儿童死亡的33.93%,儿童慢性病标化死亡率总体呈逐年下降趋势（AAPC=-7.94%,P<0.001）。其中男童（AAPC=-8.44%,P<0.001）下降速度快于女童（AAPC=-7.05%,P<0.001）,且男童慢性病年均死亡率（16.81/10万）高于女童（13.96/10万）,差异有统计学意义（χ2=526.435,P<0.001）;城市儿童慢性病标化死亡率（AAPC=-8.423%,P<0.001）下降速度快于农村（AAPC=-6.770%,P<0.001）,但城乡总体之间儿童慢性病年均死亡率差异无统计学意义（P>0.05）。西部地区儿童慢性病年均死亡率高于东中部地区（χ2值分别为650.135、707.510,P值均<0.001）,其中东部地区城乡之间慢性病年均死亡率差异无统计学意义（P>0.05）,中部地区城市儿童慢性病年均死亡率（15.98/10万）高于农村（13.46/10万）,差异有统计学意义（χ2=117.634,P<0.001）;西部地区农村儿童慢性病年均死亡率（19.75/10万）高于城市（15.96/10万）,差异有统计学意义（χ2=190.248,P<0.001）。 2.不同年龄段儿童慢性病死亡率不同,各年龄组男童慢性病死亡率均高于女童（χ2值分别为273.430、55.529、130.541、77.400,P值均<0.001）。0～岁组中城市儿童慢性病死亡率高于农村（χ2=62.902,P<0.001）;1～4岁和10～14岁组中农村儿童慢性病死亡率均高于城市（χ2值分别为4.142和46.501,P值均<0.001）;5～9岁组儿童慢性病死亡率城乡之间差异无统计学意义（P>0.05）。0～岁组的慢性病死亡率（101.91/10万）最高,5～9岁组慢性病死亡率最低（7.27/10万）;在0～9岁组中,男女童、城乡慢性病死亡率均随着年龄增大呈下降趋势（P<0.001）,10～14岁组儿童慢性病死亡率均再次上升。 3.从死因类型来看,2012-2021年我国0～14岁儿童前5位慢性病死因顺位依次为先天异常（43.11%）、恶性肿瘤（22.20%）、神经系统和精神障碍疾病（12.66%）、心血管疾病（6.65%）和消化系统疾病（5.29%）,占全部慢性病死亡的89.91%。男女童、城乡儿童前4位慢性病死因顺位与总体一致。先天异常是0～4岁组儿童慢性病的首位死因,其中0岁组先天异常死亡率最高（72.79/10万）;恶性肿瘤是5～14岁组儿童慢性病的首位死因。除恶性肿瘤外,儿童先天异常、神经系统和精神障碍疾病、心血管疾病、消化系统疾病总体标化死亡率均呈下降趋势,AAPC分别为-11.477%、-2.915%、-7.820%、-12.508%,P值均<0.05。这十年中,男童先天异常、恶性肿瘤、神经系统和精神障碍疾病、心血管疾病、消化系统疾病年均死亡率均高于女童,差异均有统计学意义（χ2值分别为128.061、109.453、211.309、22.640、56.612,P值均<0.001）。农村儿童消化系统疾病年均死亡率高于城市（χ2=83.465,P<0.001）,城市儿童先天异常年均死亡率高于农村（χ2=8.119,P<0.001）,儿童恶性肿瘤、神经系统和精神障碍疾病、心血管疾病年均死亡率在城乡之间差异均无统计学意义（P>0.05）。 4.2012-2021年0～14岁儿童慢性病死

关键词： 急性呼吸道感染   人鼻病毒   流行病学   全基因组   重组酶聚合酶扩增技术  

摘要： 目的:人鼻病毒(Human rhinoviruses,HRV)是上呼吸道感染(upper respiratory treat infection,URI)常见病因,但在儿童和免疫力较低的人群中,可导致下呼吸道感染。HRV是普通感冒的主要病原,通常表现为轻症且自限性,但也可引起慢性肺部疾病的恶化、婴幼儿毛细支气管炎、肺炎及哮喘加重。HRV在流行过程中易发生血清型突变,导致新的型别不断涌现,截至目前共有160多个血清型。因此,对HRV进行长期监测和流行病学特征分析尤为重要。重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase polymerase amplification,RPA)是一种等温扩增技术,即在等温条件下,由重组酶与聚合酶催化,在独特设计的上下游引物引导下对靶标DNA特异片段进行扩增,具有简便、快速、精确、低成本的特点,广泛用于各种病原体的核酸检测。本研究采集2017年4月至2019年3月和2020年9月至2022年8月北京地区3470例急性呼吸道感染(Acute respiratory tract infection,ARTI)住院患儿的呼吸道样本,检测HRV的感染情况,描述流行病学特征,扩增HRV全基因组序列并分析进化特点。此外,本研究建立HRV-RPA核酸检测方法,评价其灵敏性、特异性和重复性,为适应HRV现场可视化检测,还建立了HRV-RPA的侧向流试纸条(Lateral flow strip,LFS)快速核酸检测方法,并用于临床样本检测,为HRV疾病防控提供技术支撑。 研究方法:1、HRV流行病学分析:收集了2017.4-2019.3和2020.9-2022.8北京友谊医院的ARTI住院患儿鼻咽抽吸物(Nasopharyngeal aspirates,NPA)标本共计3470份,采用RT-PCR对样本进行病毒核酸检测;结合患者的临床数据,分析HRV阳性样本的流行病学特征。扩增HRV阳性样本的VP4/VP2编码区基因,琼脂糖凝胶电泳鉴定后、阳性产物送一代测序获得编码区序列,利用生物信息学方法进行系统发育进化分析。选取HRV阳性样本进行全基因组序列测定,实验步骤主要包括:离心、核酸酶处理、核酸提取、逆转录、多重置换扩增技术(Multiple dilacement amplification,MDA)。对成功测序的样本拼接HRV全基因组序列,分析全基因组特征、核苷酸同源性、系统进化特点和时空进化趋势。 2、HRV-RPA检测方法的建立与评价:从NCBI Gene Bank上下载HRV各型别全基因序列,应用Bio Edit和Jalview软件进行序列比对,选取不同型别的基因保守区域,应用Primer Premier 6软件设计筛选特异性引物和探针,用RPA技术分别建立针对HRV-A型、HRV-B型、HRV-C型的HRV-RPA检测方法,并对其重复性、灵敏性、特异性进行评价。建立HRV-RPA-LFS快速可视化核酸检测方法,对临床样本进行检测,并与常用的巢式PCR方法检出率相比较。 结果:1、HRV流行特征分析3470份鼻咽抽吸物样本中共检出478份阳性样本,检出率为13.78%,新冠疫情后(2020.8-2022.9)HRV检出率显著下降,由疫情前(2017.4-2019.3)的14.85%降为9.8%。478份HRV阳性样本中,男性患儿为278份(57.26%),女性患儿为200份(42.74%),男女感染性别比为1.39∶1。HRV的检出率在不同年龄组有显著性差异(P=0.007),在25-36月龄组中,HRV检出率最高为17.37%,13-24月龄组和49-60月龄组检出率较高分别为15.82%和15.48%。HRV在5岁以下儿童中易感,5岁以下患儿阳性检出率占HRV总阳性率的82.66%。HRV在全年均有检出,检出率最高的月份为5月和6月,检出率分别为26.67%和23.79%。HRV常与其他呼吸道病毒混合感染,混合感染率为38.28%(183/478),其中双重感染157份占比85.79%,三重感染和四重感染占比分别为10.93%和3.28%,新冠疫情前混合感染率为34.1%,疫情后降至25%。HRV儿童感染的临床主要症状为咳嗽(82.66%),发热(57.86%),流涕(47.78%),鼻塞(24.19%)和喘息(20.36%)。 2、478份HRV阳性样本经巢式PCR方法扩增后共获得345株HRV VP2/VP4序列,基因进化分析显示其中包括199株HRV-A、45株HRV-B和101株HRV-C,表明2017-2022年间A型为北京地区HRV的主要流行型别。 3、测序拼接获得2株HRV全基因组序列,BJ1295毒株全长7116nt,为HRV-A81基因型,与其他A81基因型核苷酸同源性达到89.8%

关键词： 围生期疾病   死亡率   流行病学研究   回归分析   0岁组婴儿  

摘要： 目的 了解中国2012—2021年婴儿因围生期疾病死亡的流行特征及趋势，为相关预防措施和政策制定提供参考依据。方法 对《中国死因监测数据集》中的2012—2021年0岁组婴儿因围生期疾病死亡资料进行描述流行病学分析，采用Joinpoint回归模型分析死亡率的平均年度变化百分比（AAPC）。结果 2012—2021年中国0岁组婴儿因围生期疾病死亡率总体呈下降趋势（AAPC=-11.89,P<0.001）。男婴、女婴、城市婴儿、农村婴儿因围生期疾病死亡率总体均呈下降趋势（AAPC分别为-11.73%、-11.98%、-18.70%、-18.50%）。男婴因围生期疾病年均死亡率（1.79‰）高于女婴（1.36‰）(χ2=776.474,P<0.001),农村婴儿因围生期疾病年均死亡率（1.55‰）高于城市婴儿（0.46‰）(χ2=75.394,P≤0.001)。“出生低体重、出生产伤和窒息、其他”是因围生期疾病的主要死因构成，2012—2021年死亡率均呈下降趋势（AAPC分别为-14.10%、-11.10%、-9.60%,P<0.001）。结论 中国0岁组婴儿因围生期疾病死亡率2012—2021年总体呈下降趋势，但因围生期疾病导致的死亡情况依然严峻。城乡差距明显，应重点关注男婴和农村婴儿围生期预防保健工作。

关键词： 南疆   绵羊   优势硬蜱   蜱传疾病   流行病学  

摘要： 为掌握南疆部分地区绵羊蜱种及蜱传疾病的分布与流行情况,本研究2023年4～10月从南疆阿克苏市、温宿县、疏附县、阿克陶县、麦盖提县及巴楚县采集绵羊体表寄生硬蜱894只和162份(全血)绵羊血液。首先通过传统的形态学分类学方法对采集的蜱进行分类鉴定,提取DNA,进一步选取初步鉴定的蜱种利用线粒体16S rDNA,COI与ITS基因,应用分子生物学方法对硬蜱进行鉴定,并进行遗传进化分析。为了对该蜱携带的病原进行检测,利用聚合酶链式反应(PCR)技术,对蜱虫和血液立克次体ompA基因,绵羊无浆体Msp4基因,巴贝斯虫18S rDNA基因,泰勒虫18S rDNA基因进行检测,将PCR检测阳性产物进行测序,测序结果在NCBI/BLAST比对平台进行比对,通过MEGA 11.0软件构建遗传进化树。 (1)次试验共采集894只硬蜱进行形态学和分子生物学相结合的鉴定方法,进行鉴定所寄生蜱种包括2属2种,包括图兰扇头蜱(Rhipicephalus turanicus)和小亚璃眼蜱(Hyalomma anatolicum),其中图兰扇头蜱为624只,占总量比例的69.79%(624/894),小亚璃眼蜱为270只,占总量比例的30.20%(270/894)。经BLAST比对和物种发育进化树分析相似性分别为99.07%～100.00%,99.27%～99.42%。 (2)894只蜱虫进行病原检测,通过PCR法以提取的DNA为模版,对三种病原进行检测,三种病原分别是立克次体(Rickettsia spp.)、绵羊泰勒虫(Theileria ovis)及绵羊无浆体(Anaplasma ovis)。结果显示,蜱虫携带三种病原的感染率分别为52.68%(471/894)、20.80%(186/894)、35.57%(318/894)。162份绵羊血液,通过PCR方法进行病原检测,检测出的两种病原分别为绵羊无浆体、绵羊泰勒虫,阳性率分别为58.64%(95/162)、65.43%(106/162)。经BLAST进行比对分析,三种病原与其他国内外已发表的基因株相似性分别为绵羊无浆体MSP4基因相似性为99.50%～100.00%;立克次体Omp A基因相似性为97.45%～100.00%;基于绵羊泰勒虫18S rRNA基因相似性为99.42%～100.00%。 (3)本研究表明南疆地区的优势蜱种为图兰扇头蜱,该地区的病原体携带率近年来呈上升态势。该研究为了解南疆部分地区蜱种分布及蜱传立克次体携带情况,提供了有效的数据支持,为今后蜱及蜱传疾病的预防和治疗提供了合理参考。

关键词： 银屑病   流行病学   生活质量   影响因素  

摘要： 背景:银屑病是临床上常见的皮肤病之一,全世界大约1.25亿人口患病,发病率呈逐步上升的趋势。银屑病复杂的病因、迁延不愈的特点,使其成为学者们研究的热点。已有的研究成果虽能提供一定的参考,但受不同国家地区、种族人群、生活和人文环境等的限制,各报道结果中的银屑病流行病学特征存在差异。此外,银屑病给家庭带来巨大的经济负担,损害患者的身心健康,严重影响患者的生活质量。所以着力于分析我国银屑病流行病学特征以及有效改善患者生活质量,提升患者的幸福感意义重大。 目的:分析真实世界中银屑病的流行病学特征以及患者生活质量的影响因素,提高临床医生对银屑病的重视,为银屑病的治疗提供理论依据。 方法:本研究数据来源于国家皮肤与免疫疾病临床医学研究中心建立的银屑病诊疗真实世界大数据采集平台。数据收集时间为2020年6月～2022年9月,剔除缺失数据,共纳入4848例样本信息。从数据库中提取研究所需的人口学资料和临床资料,采用卡方检验、二元logistic回归分析对数据进行统计学分析。 结果:1.人口学特征:（1）共纳入银屑病患者4848例,其中男性3184例（65.7%）,女性1664例（34.3%）,男女比例为1.91:1;不同年龄中的男女性人数和总人数均呈双峰模式,高峰在30～39岁和50～59岁;男女性别与年龄的差异具有统计学意义（X2=20.508,P=0.009）。 （2）本研究中,已婚患者占大多数（73.3%）;文化程度上,高中及同等教育学历的人数最多（40.3%）;工作状态方面,以在职为主（64.6%）;体型以正常为主（43.0%）;大多数患者无吸烟史（72.4%）和药物过敏史（94.1%）。 2.临床特征:（1）792例（19.3%）患者有家族史;不同病程与家族史的差异无统计学意义（X2=1.610,P=0.447）;男性患者病程比女性长,差异具有统计学意义（X2=18.780,P<0.001）。 （2）银屑病的临床分型以寻常型（斑块为主）4029例（83.1%）最常见,泛发性脓疱型75例（1.5%）最少见。病情加重在冬季2149例（44.3%）人数最多,夏季325例（6.7%）人数最少。 （3）皮损常累及的特殊部位为头皮3251例（67.1%）;头皮（X2=0.846,P=0.358）、指甲（X2=3.632,P=0.057）、掌跖（X2=0.069,P=0.793）、生殖器/外阴/肛周（X2=1.674,P=0.196）部位的累及与男女性别的差异无统计学意义。 （4）在临床症状中,患者常伴有瘙痒（86.1%）;483例（10%）患者存在共病,共病主要为高血压（5.8%）、高脂血症（4.0%）和糖尿病（3.5%）;是否存在共病与吸烟史的差异无统计学意义（X2=0.203,P=0.652）。 （5）纳入的患者中,疾病严重程度为轻度789例（16.3%）、中度1684例（34.7%）、重度2375例（49.0%）。男性（X2=59.713,P<0.001）、BMI越高（X2=25.612,P<0.001）以及存在共病（X2=11.258,P=0.004）的患者严重程度更高,差异具有统计学意义。不同疾病严重程度与吸烟史的差异无统计学意义（X2=1.781,P=0.411）。 （6）既往接受过生物制剂治疗的银屑病患者有460例（9.5%）,其中以司库奇优单抗285例（5.9%）最常见。大部分患者最近一次的治疗满意度为一般（43.9%）。 3.患者生活质量的影响因素:本研究中,生活质量有影响的患者4131例（85.2%）,无影响的患者717例（14.8%）。年龄越大（X2=37.621,P<0.001）、病程越长（X2=12.443,P=0.002）、泛发性脓疱型银屑病（X2=3.988,P=0.046）、累及掌跖（X2=4.770,P=0.029）、伴有瘙痒（X2=6.910,P=0.009）、疾病严重程度更高（X2=108.574,P<0.001）的患者,生活质量更容易受影响。多因素logistic回归分析显示,10～19岁（OR=2.993,P=0.007）、20～29岁（OR=4.250,P<0.001）,30～39岁（OR=4.810,P<0.001）、40～49岁（OR=4.254,P<0.001）,50～59岁（OR=3.888,P<0.001）、60～69岁（OR=4.134,P<0.001）、70～79岁（OR=2.892,P<0.001）、伴有瘙痒（OR=1.319,P=0.013）、中度银屑病（OR=1.857,P<0.001）、重度银屑病（OR=2.786,P<0.001）是患者生活质量的影响因素。 结论:1.4848例银屑病患者中,男性多于女性,病程较女性长。年龄高峰在30～39岁和50～59岁